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痛风性关节炎的分子生物学基础
近年来国内外许多学者发现体内尿酸钠(MSU)晶体作用于血小板、单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、T细胞、滑膜细胞,释放多种炎症介质,如:C5a、微血管增渗酶、组织胺、前列腺素、血小板活化因子和炎性细胞因子,并且表明多种细胞因子通过自分泌和旁分泌来影响痛风性关节炎的发生[1,2]。目前越来越多的证据显示痛风性关节炎的核心是中性粒细胞(PMN)介导的炎症[3],在正常情况下组织中少见PMN,而增强的中性粒细胞-内皮细胞黏连是急性痛风产生的本质[3,4]。一般循环中PMN呈非活化状态,而组织中PMN较循环中PMN重要[5～7]。激活因子通过与PMN细胞膜表面相应受体结合,把信号传递给GTP结合蛋白,特异性磷酸脂酶激活磷脂酰肌醇,并在此酶作用下产生一系列代谢产物,激活蛋白激酶C,引起细胞内Ca浓度升高,从而激活PMN[5,8]。激活因子包括细菌、内毒素、免疫复合物、补体、氧自由基、白介素类。有报道E-选择素等黏附分子也有激活PMN的作用[9]。激活的PMN在趋化因子作用下与血管内皮细胞(VEC)黏附并进入组织中,这些趋化因子主要包括C5a、C3a、LPS及新近发现的一些小分子蛋白超基因家族趋化因子,如IL-8等[8,10]。而PMN黏附,穿越VEC向炎症部位的游走是急性炎症损伤过程的重要特征,其分子生物学基础在于PMN与VEC表面黏附分子的相互作用[10]。
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当归芍药散对血脂异常大鼠抗氧化能力及动脉壁血管细胞黏附分子-1基因表达的影响
目的:观察当归芍药散(DSS)对血脂异常大鼠抗氧化能力及动脉壁血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)mRNA表达的影响.方法:采用高脂饲料喂养法复制血脂异常大鼠模型,同时给予治疗药物DSS(汤剂)高、低剂量及阳性对照药血脂康,连续8周,检测各组大鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及氧化型低密度脂蛋白胆固醇(ox-LDL)、丙二醛(MDA)、超氢化物歧化酶(SOD)水平,并用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定大鼠主动脉VCAM-1mRNA的表达.结果:与模型组相比,DSS高、低剂量组和血脂康组均能明显降低大鼠血清TC、TG、LDL-C及ox-LDL、MDA水平(P＜0.01),均能明显升高HDL-C、SOD水平(P＜0.01).RT-PCR法显示DSS高、低剂量组和血脂康组均能显著降低大鼠主动脉组织中VCAM-1mRNA的表达(P＜0.01),其中DSS高剂量组降低趋势优于低剂量组和血脂康组.结论:DSS高、低剂量组均可较好地调节血脂异常大鼠脂质代谢,清除自由基、抗脂质过氧化损伤并下调动脉壁VCAM-1基因的表达,提示其具有保护血管内皮细胞功能的作用,可进一步阻抑动脉粥样硬化的发生发展.
关键词： 当归芍药散 血脂异常 脂质过氧化 血管细胞黏附分子-1mRNA 血管内皮细胞 -
川芎嗪抗家兔动脉粥样硬化作用
目的:研究川芎嗪抗动脉粥样硬化(AS)的药效学及作用机制.方法:随机将24只新西兰家兔分为4组,即正常饮食组、模型对照组、川芎嗪(75 mg·kg-1)组及川芎嗪(150 mg·kg-1)组.采用高脂饲料建立AS模型,12周后评价川芎嗪对主动脉斑块面积、内膜/中膜厚度比值、内膜泡沫细胞数、HE染色后主动脉形态学及血脂水平的影响.结果:川芎嗪(75,150mg·kg-1)与模型对照组比较,其斑块面积分别为(420.4±46.2) mm2,(310.2±12.3 )mm2,(663.2±38.9)mm2,P ＜0.01;内膜/中膜厚度比值(0.32±0.06),(0.24±0.15),(1.21±0.10)(P＜0.01)；降低内膜泡沫细胞数分别为(9.8±5.1)个/mm2,(5.3±1.2)个/mm2,(23.6±6.7)个/mm2 (P ＜0.01).HE染色后的光镜下,川芎嗪可减轻主动脉内膜增厚程度,降低泡沫细胞聚集,保持中膜和平滑肌结构基本完整,减少内皮细胞脱落,改善主动脉紊乱的形态结构；川芎嗪还可降低血脂水平而维持内皮细胞正常的生理功能.结论:川芎嗪靶向内皮细胞干预AS早期始动环节,抑制泡沫细胞形成产生抗AS作用.
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脑脉通对脑缺血大鼠骨髓间充质干细胞移植脑内向血管内皮细胞分化的影响
目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植大鼠脑内的存活和向血管内皮细胞的分化,以及脑脉通颗粒对其存活和分化的影响.方法:大鼠体外全骨髓贴壁筛选培养和扩增BMSCs;大鼠随机分为假手术组、模型组、移植组、联合组;线栓法制备(MCAO)模型;术后24 h将BMSCs由同侧颈内动脉移植脑内;电镜下观察BMSCs移植后脑组织微血管内皮细胞超微结构变化;检测脑组织中CD31+表达;免疫组化双标法观察Brdu/FⅧ双标细胞变化.结果:与假手术组比较(49.23 ±6.17),各模型组大鼠脑组织CD31+表达显著减弱(25.14 ±5.47,15.25 ±4.50,18.91±3.25)(P＜0.01);与模型组比较,移植组14,28 d的CD31+表达增强(30.36 ±5.74,41.12 ±6.71) (P ＜0.01);与移植组比较,各联合组CD31+表达显著增强,以28 d尤为显著(56.42 ±7.16) (P ＜0.01).移植组和联合组大鼠脑内有Brdu标记细胞存活;联合组14,28 d脑内Brdu标记细胞较移植组显著增多(P ＜0.05,P＜0.01).各移植组与联合组大鼠脑内可见Brdu/Ⅷ双标细胞存活;各联合组大鼠Brdu/Ⅷ双标细胞均较移植组增多(P ＜0.05,P＜0.01).结论:BMSCs存活的数量随移植脑内时间的延长而呈增加趋势;脑脉通可使移植脑内的BMSCs成活增多.BMSCs在脑内向血管内皮细胞的分化比率随移植后时间的延长呈先增强再减弱的变化趋势;脑脉通可使BMSCs向血管内皮细胞分化和成血管样作用增强.
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痰瘀同治方含药血清对ox-LDL损伤人脐静脉内皮细胞NF-κB和ICAM-1表达的影响
目的:观察痰瘀同治方含药血清对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)核因子-κB(NF-κB)的活化和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨痰瘀同治方抗动脉粥样硬化的分子机制.方法:SD大鼠随机分为正常组,痰瘀同治方低、中、高剂量组( 24,48,72 g·kg-1·d-1)和辛伐他汀组(18 mg·kg-1·d-1),制备含药血清.体外培养HUVECs,实验分为6组:①正常组;②模型组;③痰瘀同治方低剂量组;④痰瘀同治方中剂量组;⑤痰瘀同治方高剂量组;⑥辛伐他汀组.其中①、②组用20％正常鼠血清,③～⑥组用20％各组含药血清,除正常组外其余各组加入100 mg·L-1 ox-LDL刺激3h或24 h后进行各项指标测定.Real-time PCR法检测HUVECs NF-κB p65和ICAM-1mRNA表达,Western blotting检测ICAM-1蛋白表达,细胞免疫荧光法检测NF-κB p65核移位变化.结果:HUVECs经ox-LDL刺激后NF-κB p65和ICAM-1的表达与正常组比较均明显升高(P＜0.01).痰瘀同治方和辛伐他汀含药血清能显著降低NF-κB p65 mRNA表达及抑制其核移位(P＜0.05),降低ICAM-1 mRNA和蛋白表达(P＜0.05),其中以辛伐他汀和痰瘀同治方大剂量含药血清作用尤为显著(P＜0.01).结论:痰瘀同治方能够通过抑制血管内皮细胞NF-κB通路,降低ICAM-1表达,进而减少炎症反应,这可能是其抗动脉粥样硬化分子机制之一.
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参芎滴丸对心肌缺血大鼠血管内皮细胞及能量代谢的影响
目的:探讨参芎滴丸对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌缺血的保护作用及其机制.方法:SD大鼠随机分为正常组,模型组,复方丹参滴丸组,美托洛尔组和参芎滴丸高、中、低剂量组(11.2,5.6,2.8 g·kg-1).采用注射异丙肾上腺素(ISO)建立大鼠急性心肌缺血模型,观察参芎滴丸预给药5d后对大鼠不同时间点心电图(ECG)的影响;继续给药2d检测各组大鼠血清中一氧化氮合酶(NOS),一氧化氮(N0),内皮素-1(ET-1),血栓素B2(TXB2)和6-酮前列腺素(6-Keto-PGF1α)的水平;同时测定大鼠心肌组织中钙-镁-ATP(Ca2+-Mg2+-ATP)酶,钠-钾-ATP(Na+-K+-ATP)酶活性及ATP含量.结果:参芎滴丸能明显改善ISO引起的大鼠心电图J点下移变化;降低大鼠血清中ET-1,TXB2的水平;不同程度地升高血清中NOS,NO和6-Keto-PGFk的水平;但对心肌组织中ATP含量,ATP酶活性无明显影响.结论:参芎滴丸对大剂量异丙肾上腺素引起的大鼠急性缺血性心肌损伤有明显的保护作用,其机制可能与保护血管内皮细胞,抑制血小板聚集有关.
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当归补血汤调控缺氧血管内皮细胞增殖及其分子机制研究
目的:通过当归补血汤对缺氧血管内皮细胞增殖及分子表达的研究,探讨当归补血汤调控缺氧血管内皮细胞增殖的可能分子机制.方法:应用连二亚硫酸钠溶液建立缺氧血管内皮细胞(EA.hy926)模型(以下简称缺氧模型),不同剂量当归补血汤干预24 h后,CCK-8法观察缺氧血管内皮细胞的增殖;ELISA法检测血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR1,VEGFR2,sVEGFR1,sVEGFR2)的表达.结果:与正常血管内皮细胞比较,缺氧后血管内皮细胞增殖能力显著下降(P＜0.01);当归补血汤能够促进正常血管内皮细胞及缺氧血管内皮细胞的增殖,其中高、中剂量组促进缺氧血管内皮细胞增殖的幅度明显大于促正常血管内皮细胞增殖的幅度(P＜0.01).当归补血汤各剂量组均能促进缺氧血管内皮细胞VEGF,VEGFR1,VEGFR2的表达,且与剂量呈正相关,抑制缺氧血管内皮细胞sVEGFR1,sVEGFR2的表达.结论:当归补血汤能够促进缺氧血管内皮细胞的增殖,其机制可能与其调节VEGF与VEGFR和sVEGFR两种受体的结合有关.
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左归降糖灵提取物改善葡萄糖、胰岛素和氧化型低密度脂蛋白联合诱导血管内皮细胞损伤的研究
目的:探讨左归降糖灵改善葡萄糖、胰岛素和氧化型低密度脂蛋白联合诱导血管内皮细胞损伤的作用.方法:采用2型糖尿病血管并发症细胞研究模型,观察不同剂量左归降糖灵及达美康作用后细胞形态学、细胞生长活力及条件培养液中一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)、组织型纤溶酶原激活物(tPA)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)含量的变化.结果:模型组细胞普遍回缩变圆,细胞内出现粗糙样颗粒变化,细胞活力明显下降(P＜0.01),条件培养液中PAI和FT-1含量明显升高(P＜0.01、0.05),NO含量明显降低(P＜0.05),而tPA含量变化不明显(P＞0.05);三个剂量的左归降糖灵组及达美康组均可不同程度改善细胞形态变化,提高细胞活力,降低PAI和ET含量,升高NO含量;除达美康组能提高tPA含量外,其余各组tPA变化不显著(P＞0.05).结论:左归降糖灵对葡萄糖、胰岛素和氧化型低密度脂蛋白联合诱导的血管内皮细胞形态学异常、细胞活力下降及调节血管舒缩和纤溶功能异常有显著的改善作用.
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羟基红花黄色素A对体外培养人脐静脉内皮细胞增殖的抑制作用
红花具活血通经,散瘀止痛的功效,其主要水溶性组分为红花黄色素,红花黄色素的主要成分是羟基红花黄色素A[1].临床上红花多用于治疗冠心病、脑血栓、高血脂、肿瘤等.近年来人们对红花黄色素和羟基红花黄色素A的研究多集中在抗心肌缺血,抗血栓等心血管药理活性上[2],对它们在抗肿瘤方面的研究国内外鲜见报道.
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川芎嗪配伍黄芪多糖对血管内皮细胞的保护作用
目的:探讨川芎嗪(TMP)、黄芪多糖(APS)及其配伍对血管内皮细胞(VECs)的保护作用.方法:用浓度为10%高血压病患者血清作用于脐静脉内皮细胞株(ECV-304)24h进行造模,实验分为模型组、对照组、TMP组、APS组、TMP与APS配伍组.其中药物各组是将患者血清与药物共同培育细胞.以四甲基偶氮唑盐( MTT)法检测细胞活性,硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)浓度,非平衡法测定内皮素(ET),激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内游离钙浓度.结果:各药物组浓度依赖性增强细胞活性、增加NO释放、而抑制细胞ET释放、增加胞内游离钙浓度,且这两个中药单体配伍后比单独使用作用更显著.结论:TMP、APS及其配伍对VECs具有明显保护作用,且两者可能存在一定的协调作用.
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牛蒡根水提物对血管内皮细胞保护作用的研究
目的:探讨牛蒡根水提物对血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制.方法:用脂多糖(LPS)诱导血管内皮细胞损伤模型,随机分组为空白对照组,模型组和牛蒡根水提物低、中、高浓度组.用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞培养上清中人细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、人肿瘤坏死因子-α (TNF-d)、人基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、人超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平;用PCR检测细胞Toll样受体4(TLR4)、核因子(NF-κB)的抑制因子(I-κB)的表达水平.结果:与模型组比较,药物治疗组各组炎性因子ICAM-1、TNF-α、MMP-1及hs-CRP水平均降低(P＜0.05),TLR4 mRNA表达水平降低(P＜0.05),I-κB mRNA表达水平增高(P＜0.05).结论:牛蒡根水提物可能是通过抑制细胞TLR4、NF-κB的表达,从而抑制炎性因子ICAM-I、TNF-α、MMP-1及hs-CRP等的产生继而保护细胞的.
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羟基红花黄色素A对体外培养人胃癌细胞增殖、凋亡及周期的影响
目的:观察羟基红花黄色素A(HSYA)对人胃癌BGC803细胞培养上清液诱导的人脐静脉内皮细胞株ECV304、原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)异常增殖的抑制作用,探讨HSYA对人胃癌BGC823细胞增殖、凋亡、周期的影响.方法:建立肿瘤细胞上清液刺激下异常增殖血管内皮细胞模型,通过MTT实验筛选肿瘤上清液佳作用浓度,观察不同剂量HSYA在不同时间点对异常增殖血管内皮细胞的作用;并以人胃癌BGC823细胞为研究对象,MTT法检测不同浓度HSYA对其增殖能力的影响,流式细胞仪检测HSYA对BGC823细胞凋亡及周期的影响.结果:一定浓度HSYA能抑制血管内皮细胞的异常增殖,抑制BGC823细胞的增殖,并促进其凋亡引发周期阻滞.结论:HSYA通过抑制血管内皮细胞和肿瘤细胞的增殖、促进肿瘤细胞凋亡发挥抗肿瘤作用.
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脉络舒通颗粒对骨折后血管内皮细胞功能的保护作用
目的:探讨脉络舒通颗粒对创伤性骨折后大鼠内皮细胞功能受损后的保护作用.方法:选择Wistar大鼠90只,采用自制打击装置打击其双侧大腿近端建立骨折动物模型,随机分为实验组(给予脉络舒通颗粒)、对照组(给予低分子肝素)及空白对照组(给予纯化水),给予相应的治疗,12d切取标本,分别记录血栓形成数量,并在显微镜下观察各组血管内膜情况.结果:空白对照组、对照组、实验组血栓产生比例分别为40.0％、10.0％、13.3％,实验组与对照组比较差异无统计学意义,二者与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);显微镜下观察,实验组内膜及血管内皮损伤较轻,空白对照组内皮损伤剥脱,内皮下组织裸露,管壁炎性细胞浸溶明显.结论:脉络舒通颗粒对骨折后大鼠具有保护内皮细胞功能的作用.
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血瘀证目征与血管内皮细胞损伤的关系
目的:探讨血瘀证目征与血管内皮细胞损伤的关系.方法:将54只新西兰大白兔按随机分组法分为6组,分别为气虚血瘀组、气滞血瘀组、寒凝血瘀组、热毒血瘀组、外伤血瘀组、正常对照组.比较各组血瘀证目征积分,同时观测各组血清中vWF、ET-1水平的变化.结果:造模前各组血瘀证目征积分无显著差异:造模后各治疗组与对照组相比均有极显著差异(P<0.01):经补阳还王汤等中药2周治疗后,各治疗组与各自造模后相比均有极显著差异(P<0.01).造模前各组血清ET-1,vWF的水平无显著差异,造模后血清ET-1,vWF水平各治疗组与对照组相比均有极显著差异(P<0.01),治疗后,各治疗组与各自造模后相比均有极显著差异(P<0.01).结论:血瘀证目征是诊断血瘀证的有效方法,血瘀证目征与血管内皮细胞损伤有密切相关.
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血瘀证与血管内皮细胞损伤研究进展
血管内皮细胞损伤是血瘀证形成的重要原因,活血化瘀治法可保护内皮细胞.血瘀证与血管内皮细胞损伤相关性研究包括临床研究和实验研究.临床研究着重于内皮细胞功能变化与血瘀证的相关性及活血化瘀药物和复方对内皮细胞的保护作用,实验研究着重于内皮细胞形态和功能变化与血瘀证的相关性及活血化瘀药物和复方对内皮细胞的保护作用.下一步研究要坚持“病证结合”的研究思路,采用系统生物学的方法进行研究,并且要加强对临床常见的血瘀证兼证的个性特征的研究.
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降脂通脉方药理血清对血管内皮细胞影响的实验研究
目的:研究降脂通脉方药理血清对高脂血清所致内皮细胞(EC)损伤的影响.方法:采用给家兔灌服降脂通脉方后取其血清加至细胞培养基中进行实验(血清药理学方法),观察EC形态及功能变化.结果:中药降脂通脉方血清组,细胞形态大致正常,降脂通脉方药物血清可减少乳酸脱氢酶(LDH)释放,使6酮-前列环素F1α(6-keto-PGF1α)含量增加,降低ET的含量.结论:降脂通脉方药理血清对高脂血清所致内皮细胞损伤具有保护作用,保护EC可能是本方抗AS的作用机制之一.
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土茯苓抑制白介素-1诱导的血管内皮细胞细胞间黏附分子-1的表达
目的:探讨中药土茯苓对白介素-1(IL-1)诱导的血管内皮细胞表面的细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达升高的保护作用.方法:以原代培养的人脐静脉内皮细胞(HU-VEC)为研究对象,采用细胞培养、免疫荧光染色、中药血清药理学方法、流式细胞仪等技术,观察IL-1对培养的HUVEC ICAM-1表达的影响并研究不同时间点及不同浓度的含药血清的抑制作用.结果:IL-1使HUVEC的ICAM-1的表达明显升高,同时含药血清组的ICAM-1的表达比空白血清组低.结论:土茯苓含药血清能拮抗IL-1致内皮细胞ICAM-1表达升高.土茯苓的作用部分是多种成分作用于多个靶点的综合效应.
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艾灸对大鼠创伤皮肤组织血管内皮细胞和血管内皮生长因子表达的影响
目的:探讨艾灸干预大鼠皮肤创伤愈合的作用及作用机制.方法:将24只SD大鼠在其背部制造全层皮肤切线性创伤,以随机数字表法,随机分成治疗组和模型组,每组12只.再根据治疗时间的不同将每组随机分为1d组、3d组、7d组3个时间点小组,每个时间点小组4只大鼠.治疗组取创面局部进行艾灸治疗,每次30 min,每日1次.以HE染色法检测修复组织内毛细血管生长情况、血管内皮细胞数;以免疫组化法检测修复组织内血管内皮细胞生长因子的表达情况.结果:大鼠创面愈合指数,治疗7d组在治疗第4天与第8天时均高于模型7d组(均P＜0.05).大鼠创面修复组织毛细血管数,治疗1d组和3d组均高于相应模型组(均P＜0.05);治疗7d组毛细血管数低于模型7d组(P＜0.05).大鼠创面修复组织血管内皮细胞数,治疗3d组高于模型3d组(P＜0.05);治疗7d组低于模型7d组(P＜0.05);治疗1d组与模型1d组比较差异无统计学意义(P＞0.05).大鼠创面修复组织VEGF表达阳性细胞累计积分,治疗3d组高于模型3d组(P＜0.05);治疗7d组低于模型7d组(P＜0.05);治疗1d组与模型1d组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:艾灸能促进大鼠皮肤创伤愈合,其机制可能与调节不同时间内创面组织中血管内皮细胞和血管内皮生长因子含量有关.
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降脂通脉方对血管内皮细胞与单核细胞黏附功能的影响
我们应用以健脾消痰法拟定的降脂通脉方治疗高脂血症、动脉粥样硬化性疾病,在取得较好临床疗效的基础上,从内皮细胞入手,进一步探讨降脂通脉方对血管内皮细胞与单核细胞黏附功能的影响.
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心脉通胶囊对冠心病患者内皮素和降钙素基因相关肽的调节作用
目的：探讨心脉通胶囊对冠心病患者缺血心肌的保护作用。方法：40例冠心病心肌缺血患者在常规西药治疗基础上随机分为心脉通组(20例，加用心脉通胶囊治疗)，对照组(20例)，观察治疗前后，血浆内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)含量，心电图ST段和临床症状等变化，并与14名健康人作对比。结果：两组患者ET明显高于健康人(P＜0.001)，CGRP变化不明显(P＞0.05)。治疗后：(1)两组患者ET及症状计分明显降低(P＜0.01)，ST段明显升高(P＜0.01)，但心脉通组ET、症状计分降低及ST段上升幅度明显大于对照组(P＜0.05～0.01)；(2)常规用药者CGRP变化不明显(P＞0.05)，加用心脉通胶囊者CGRP明显提高(P＜0.01)。结论：心脉通胶囊对血管活血因子ET、CGRP起积极调节作用，其良好抗心肌缺血作用与血管内皮保护效应密切相关，为中医对“心有病，从脉起”理论提供了科学依据。
