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氧应激在TNF-α诱导人内皮细胞PDGF-B链基因表达中的作用
探讨氧应激在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导血管内皮细胞血小板衍生生长因子-B(PDGF-B)链基因表达中的作用.培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)以TNF-α处理或预先以小分子抗氧化剂N-已酰半胱氨酸(NAC)处理,用ELISA和RT-PCR法分别检测PDGF-B的蛋白和mRNA表达,用氧化-还原敏感的荧光探针2,7-Dichlorofluorescein(DCF)检测细胞内的氧化-还原水平.结果显示,TNF-α(200U/mL)作用24h后,HUVECs中PDGF-B的蛋白含量和mRNA表达均明显增加,分别较对照组增加50%和129%(P＜0.05),但小分子抗氧化剂N-已酰半胱氨酸(NAC,20mmol/L)能明显阻断TNF-α对PDGF-B蛋白和mRNA表达的诱导作用.TNF-α处理后4h HUVEC的氧应激水平明显升高,至24h时仍维持在较高水平,但可被NAC完全抑制.这些结果提示TNF-α诱导血管内皮细胞PDGF-B表达可能主要通过氧应激介导.
关键词： 氧应激 肿瘤坏死因子-α 血管内皮细胞 血小板衍生的生长因子-B链 -
不同有害因素对培养血管内皮细胞粘附分子及NFκB的影响
探讨引起动脉粥样硬化(AS)的一些有害因素作用脐静脉内皮细胞后,对单核细胞粘附率、VEC的白细胞粘附分子VCAM-1、ICAM-1及转录因子NFκB活化的影响,为阐明不同有害因素在AS早期发病机制中作用与机理提供依据.本文采用细胞计数法测粘附率,细胞免疫组化及ELISA法检测粘附分子表达及NFκB活化,原位杂交法测VCAM-1m-RNA;结果显示,mmLDL、rTNFα均能明显增加U937细胞的粘附,粘附百分率分别为对照组的7倍和9.2倍,rTNFα可使内皮细胞的VCAM-1、ICAM-1和P-selectin表达显著上调,但mmLDL没有相似的作用;VEC在流体低剪切振荡流的作用下,明显上调VCAM-1mRNA及VCAM-1的表达,mmLDL、rTNFα和低剪切振荡流作用后,均可增加内皮细胞NFκB亚单位P65的核转位.
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CD44促进HUVECs增殖和黏附
目的 研究CD44在血管内皮细胞增殖和黏附中的作用及机制.方法 采用pcDNA3.1载体上调入脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)中CD44的表达.使用siRNA分别沉默HUVEC中Akt和血小板内皮细胞黏附因子(PECAM1)基因.MTT法测定细胞增殖,细胞计数法测定细胞黏附率,RT-PCR分析PECAM1的mRNA水平,West-em blot分析蛋白Ki67、PECAM1以及Akt磷酸化水平.结果 CD44过表达显著促进了HUVEC的增殖(P＜0.05),上调Ki67的表达并促进Akt的磷酸化(P＜0.05);AktsiRNA显著降低了CD44诱导的细胞增殖(P＜0.05).CD44促进HUVEC细胞间黏附(P＜0.05),上调PECAM1的mRNA和蛋白水平(P ＜0.05);PECAM1 siRNA降低CD44诱导的细胞黏附(P＜0.05).结论 CD44能够促进HUVEC的增殖和黏附,部分作用可能与上调PECAM1有关.
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肾上腺髓质素对兔血管内皮细胞cAMP、cGMP及Ca2+水平的影响
目的观察肾上腺髓质素(ADM)对兔血管内皮细胞内信号转导途径的影响.方法用原代培养的兔血管内皮细胞,给予肾上腺髓质素、cAMP激动剂forskolin(10-7mol/L)、NO供体L-精氨酸(1 mmol/L)、NO合酶抑制剂L-NMMA(10-5mol/L)、异丙肾上腺素(10-6mol/L)、8-bromo-AMP(10-7mol/L)及cGMP抑制剂L-NAME(10-4mol/L),观察细胞内cAMP、cGMP水平及Ca2+荧光强度的变化.用酶联免疫法测定cAMP及cGMP.用Fluo-3AM荧光负载兔血管内皮细胞测定细胞内钙浓度.结果肾上腺髓质素呈浓度依赖性升高兔血管内皮细胞内cAMP,而降低cGMP水平.肾上腺髓质素可使钙离子(Ca2+)水平下降(P＜0.001),L-NMMA预处理组无明显作用,当加入L-精氨酸后荧光强度急剧下降.结论肾上腺髓质素能够影响兔血管内皮细胞的cAMP、cGMP及细胞内钙水平,从而实现其对细胞的多种生物学效应.
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氧化低密度脂蛋白新基因OLRG-1的克隆及组织分布
用改进的差异显示反转录-PCR技术,从血管内皮细胞中获得了一个氧化低密度脂蛋白诱导差异表达的cDNA片段.以此片段为探针,从人主动脉cDNA文库中筛选了一个新的全长cDNA.其核苷酸总长4137bp,编码642个氨基酸的蛋白质.Northern印迹分析证实氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞后,该基因表达减低了3倍,基因定名为OLRG-1.OLRG-1为一多组织表达的基因,与人NS1-BP基因高度同源.氧化低密度脂蛋白可能通过降低OLRG-1的表达,影响mRNA前体的剪接成熟,调控基因的表达.
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氧化低密度脂蛋白下调血管内皮细胞表达Rictor
目的 探讨氧化低密度脂蛋白对培养血管内皮细胞表达基因Rictor的影响.方法 分离并培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度(10、20、40和80 mg/L)氧化低密度脂蛋白作用24 h后,用RT-PCR及Western blot检测Rictor的表达情况,并检测转染Rictor后,蛋白激酶Akt及eNOS磷酸化的变化,用硝酸还原酶还原法测定NO释放量.结果 氧化低密度脂蛋白显著降低Rictor的mRNA及蛋白的表达量(P＜0.01),使Rictor-mTOR复合物形成减少.转染Rictor后,不仅Rictor表达增加而且使蛋白激酶Akt及eNOS磷酸化增加；内皮细胞NO释放量增多(P＜0.05).结论 影响内皮细胞表达Rictor,是氧化低密度脂蛋白诱发血管内皮细胞功能不良的重要机制之一.
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高密度脂蛋白与血管内皮功能保护
高密度脂蛋白(HDL)由一系列结构和功能不同的脂蛋白家族组成,它通过与清道夫受体-BI(sR-BI)结合促进NO的生成,从而对血管内皮细胞依赖的血管活性具有直接的保护作用.SR-BI受体与内皮脂酶(EL)共同调节HDL的代谢而影响血管内皮功能.HDL的间接血管内皮功能保护作用-抗氧化作用与其携带的酶和转运的一些酶有关,如HDL抑制内皮细胞表达黏附分子而减轻炎症反应对内皮细胞的损伤;HDL包含的可溶性鞘内脂质调节血管内皮细胞的凋亡,抑制血管内皮细胞增殖.因此升高HDL有希望成为改善血管内皮细胞功能的临床治疗目标.
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血管P2受体的功能及其与某些血管疾病的关系
P2受体分为配体门控离子通道型P2X受体和G蛋白偶联型P2Y受体.血管内皮细胞及平滑肌细胞有多种P2X和P2Y受体亚型表达.嘌呤信号与动脉粥样硬化、脑血管老化及血管重塑等血管疾病有关,并可能为治疗与血管有关疾病提供新的治疗靶点.
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血管新生在肿瘤侵袭和器官纤维化中作用的新认识
微血管密度与肿瘤侵袭力以及器官纤维化程度密不可分,血管新生是这两类疾病的共同靶点.然而,传统抗血管新生疗法由于肿瘤耐药性等原因而疗效有限,而以促血管新生的目标的抗纤维化疗法也因为伴随炎性反应、血管通透性改变等原因陷入瓶颈.本文探讨肿瘤和器官纤维化的在血管新生方面的内在关联.
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平衡超滤和改良超滤减少体外循环患儿体内的炎性因子
在体外循环中,由于血液与人工管道的接触、缺血再灌注的损伤等因素激活了补体、中性粒细胞、血小板和血管内皮细胞,可引起全身炎症反应、肺功能损伤等并发症[1].本文研究平衡超滤联合改良超滤对婴幼儿体外循环术后炎性因子的影响.
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强力霉素降低哮喘小鼠肺血管通透性
支气管哮喘是常伴有血管通透性和血浆渗漏增加的慢性气道炎症性疾病.血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)是一种促进血管形成和引起强烈炎症反应的、多功能的细胞因子,可暂时性增加血管的通透性和血管内皮细胞的移行.近年来实验研究表明,VEGF对支气管炎症形成和支气管壁重塑有着非常重要的作用,对哮喘的治疗有重要的研究价值[1].本研究主要探讨在小鼠哮喘模型中强力霉素对VEGF水平和肺血管通透性的影响.
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肝癌组织浸液尿激酶型和组织型纤溶酶原激活物的检测
一些研究表明体液中的尿激酶型纤溶酶原激活物 (urokinase type plasminogen activator,u-PA)和尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uokinase type plasminogen activator receptor,u-PAR )浓度与癌细胞自身分泌和释放的水平及其浸润转移有关,而组织型纤溶酶原激活物(tissue plasminogen activator,t-PA)则与癌组织血管内皮细胞的释放和血管新生有关,组织型纤溶酶原激活物抑制剂(Tissue plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1)则对t-PA和u-PA起调控作用,同时参与癌细胞的转移等过程[1,2].
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人脂肪组织源性间充质干细胞分离与体外培养
各种疾病所导致的器官衰竭严重地危害着人类的健康,降低了患者的生活质量.干细胞所具有的自我复制和多向分化能力使它成为挽救器官衰竭、进行组织修复的理想种子细胞.在特定的条件下它可以分化为中胚层起源的多种组织细胞,如成骨细胞、软骨细胞、肌腱、脂肪细胞、血管内皮细胞、肌细胞及神经星状细胞等.目前干细胞主要来源于骨骼肌卫星细胞、骨髓干细胞、胚胎干细胞等,近几年国外有研究显示脂肪组织中也含有大量具有多向分化潜能的干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells, ADMSCs),而目前国内应用脂肪组织分离及培养干细胞的报道极少.本研究拟将对ADMSCs进行分离和体外培养,并对其生长方式进行观察.
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间充质干细胞分化潜力与免疫调节的研究
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是存在于成体间质组织中的一类多能干细胞群体,早是从骨髓组织中分离得到的,随后的研究发现从其他多种组织中也能分离得到,例如脂肪组织、脐带、胎盘等.它具有两个重要的生物学特征,即多能性和免疫调节能力.多年的研究显示,间充质干细胞在体外适当条件下可以大量扩增,并保持它向多种组织类型细胞分化的潜能,例如成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、血管内皮细胞、肝细胞、肠道上皮细胞、以及神经组织细胞.对间充质干细胞免疫调节能力的研究显示,间充质干细胞可以对免疫系统的多种类型功能细胞的增殖、功能等产生影响,研究多的是对免疫系统的核心抗原提呈细胞树突状细胞和淋巴细胞产生影响.
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阻断神经生长因子信号部分抑制雌二醇对恒河猴视网膜血管内皮细胞的作用
目的研究神经生长因子(NGF)信号系统在雌激素调控视网膜血管内皮细胞中的作用.方法选用恒河猴视网膜-脉络膜血管内皮细胞系RF/6A,RT-PCR检测雌激素受体(estrogen receptor,ER)、NGF及其受体在视网膜血管内皮细胞中的表达.分别观察雌二醇(estradiol,E2)、NGF及VEGF、EGF、BDNF等对血管内皮细胞活力(MTT法)的作用.用流式细胞术-细胞周期法检测E2、NCF及E2与K252a共同处理组的凋亡率.NGF抗体和选择性TrkA拮抗剂K252a研究对上述作用的阻断效应.同样的分组进行细胞划痕修复实验.96孔板AngioMatrix胶上观察E2及NGF对RF/6A内皮细胞管腔形成能力的影响. 结果RF/6A在细胞外基质胶上可形成管腔样结构.RT-PCR检测到ER-α、NGF及NGF受体TrkA的mRNA.1nmol/L～100nmol/L E2可以剂量依赖性的增强细胞活力及单层细胞的划痕修复能力,其增强作用可部分被NGF抗体及100nmol/L的K252a选择性阻断.凋亡率检测显示各组凋亡率相近.E2可促进RF/6A形成管腔,但不能被NGF抗体、TrkA阻断.结论除VEGF外,E2还可通过NGF信号系统对视网膜血管内皮细胞活力、划痕修复起促进作用.但结果提示,阻断NGF信号系统不影响E2促RF/6A形成管腔的作用.
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胶质瘤血瘤屏障体外模型的形态学观察
目的探讨胶质瘤血瘤屏障体外模型的形态学特征. 方法利用电镜技术观察血管内皮细胞ECV304和C6胶质瘤细胞共培养(混合共培养、Transwell共培养、Transwell膜两面共培养)后的内皮细胞的孔窗、内皮细胞之间的连接及内皮细胞与肿瘤细胞的相互关系、瘤细胞的"血管周足"等的形态学特征;并与4例人脑胶质瘤组织标本的血瘤屏障进行比较.结果电镜下发现ECV304细胞经与C6细胞按3种不同方式共培养汇合后均为无孔窗型内皮细胞,细胞间出现紧密连接;Transwell共培养的膜上C6细胞未见伸出伪足突向膜的微孔;经膜两面共培养的瘤细胞则可通过Transwell的微孔突向内皮细胞侧,但瘤细胞未伸出伪足包绕内皮细胞或突入内皮细胞间隙,瘤细胞的"血管周足"不完整,后两者与脑胶质瘤组织标本的血瘤屏障的形态特征相类似. 结论在体外经Transwell膜两面共培养的ECV304和C6胶质瘤细胞的系统可在一定程度模拟体内的血瘤屏障的形态学特征.
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人脑胶质瘤中LN、FN及p53基因蛋白的免疫组织化学与其侵袭微生态系统的相关性探讨
目的探讨人脑胶质瘤中层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)及突变型p53基因蛋白的免疫组织化学与肿瘤侵袭微生态系统(tumorous invasion microecosystem,TIMES)的相关性. 方法利用透射电镜观察TIMES中微血管特征和免疫组织化学SP法评价LN、FN、p53的表达情况,并作比较分析. 结果 1.脑胶质瘤微血管基底膜(base membrane,BM)连续,多数呈局限性或广泛性增厚,并与LN、FN染色结果相一致,也与p53染色与否有关,p53阳性染色者BM增厚较p53阴性者明显.2.LN、FN在所有胶质瘤微血管BM及内皮细胞上呈阳性染色,恶性程度越高,BM上LN、FN染色阳性越强,血管管壁越厚(P<0.01和P<0.05),而瘤细胞未见染色.LN在脑内转移瘤BM和内皮细胞上却未见染色,但可见散在瘤细胞浆膜染色;FN在脑内转移瘤上的染色则与脑胶质瘤相类似.3. 45例胶质瘤中p53阳性染色21例,其p53阳性染色与否也与BM上LN、FN染色结果存在密切正相关(P<0.01).p53阳性染色率在脑内转移瘤和恶性胶质瘤中无统计学差别(P>0.05). 结论脑微血管内皮细胞上LN、FN的过分表达可能是脑胶质瘤TIMES中BM形态学增厚的原因之一,p53对TIMES的影响也与微血管的内皮细胞功能状态有关.血管内皮细胞可能是TIMES的调控者之一.
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基质细胞衍生因子-1α和白细胞介素-1β诱导淋巴管内皮表型的作用
目的：探讨基质细胞衍生因子-1α（ SDF-1α）及白细胞介素-1β（ IL-1β）诱导内皮细胞表达淋巴管表型的作用。方法 SDF-1α和IL-1β分别诱导内皮细胞株CRL-1730，用Real-time PCR、Western blotting 及免疫细胞化学等方法检测其内皮及淋巴管标志物，的表达情况。结果 SDF-1α诱导培养之后，CRL-1730细胞株的内皮细胞标志物血管性血友病因子（vWF）、血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin）、血管内皮生长因子受体（VEGFR）2随其浓度增高而表达降低，淋巴管标志物平足蛋白（ podoplanin ）、同源异形盒蛋白-1（ Prox-1）和淋巴管内皮透明质酸受体-1（LYVE-1）随其浓度增高而表达增高。 IL-1β诱导之后，CRL-1730细胞株的vWF、VEGFR2和podoplanin、prox-1、LYVE-1的变化趋势同SDF-1α，而VE-cadherin的表达量基本不变。结论 SDF-1α和IL-1β都能够诱导血管内皮细胞表达淋巴管标志物。
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血管内皮细胞在肿瘤侵袭微生态系统中作用的研究进展
目的介绍血管内皮细胞在肿瘤侵袭微生态系统中的作用及研究进展.方法系统复习肿瘤侵袭微生态系统研究的背景、组成要素、与肿瘤微环境的区别及血管内皮细胞对其影响的相关文献,并予以归纳总结.结果肿瘤侵袭微生态系统是指肿瘤侵袭过程的细胞群落与其栖息宿主环境所构成的一个自然的整体功能系统,属于细胞和分子水平的生态系统,它包括肿瘤细胞本身在内,具有生态系统的规律;而肿瘤的微环境则与肿瘤侵袭微生态系统不同,它是肿瘤细胞赖以生存的所有外界条件的总称,是一种结构体系,不包括肿瘤细胞本身,不具有生态系统的规律.肿瘤侵袭微生态系统组成要素包括肿瘤细胞群落和宿主细胞群落以及它们的栖息环境(基质成分),而血管内皮细胞群落是主要的宿主细胞群落,其对肿瘤侵袭微生态系统的作用主要表现在肿瘤细胞群落和内皮细胞群落之间的营养联系上,这种营养联系形成了肿瘤微生态系统的物质循环,包括营养循环和细胞基质循环.肿瘤侵袭转移是肿瘤细胞群落和血管内皮细胞群落不断重建营养联系的结果.结论血管内皮细胞通过和肿瘤细胞之间的营养联系对肿瘤侵袭微生态系统进行调控,切断肿瘤细胞群落和血管内皮细胞群落之间的营养联系是肿瘤治疗的关键.
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层粘连蛋白受体在滋养层细胞肿瘤和正常绒毛血管内皮的定位意义
在滋养层细胞转化为滋养层肿瘤和良性肿瘤转化为恶性肿瘤的过程中,新生血管内皮细胞的变化是研究肿瘤发生的重要方面.出于这些考虑,我们对正常人胚胎不同发育时期、不明原因流产、增殖型和侵蚀型葡萄胎内皮细胞,用免疫组织化学方法观察层粘连蛋白受体(LNR)在血管内皮细胞的定位,比较不同定位与滋养上皮增殖、生长、分化、凋亡、迁移和浸润的关系.
