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MiRNA-21与5-弗尿嘧啶对人结肠癌细胞HCT-116耐药性的关联分析
目的:探讨miRNA-21与5-弗尿嘧啶对人结肠癌细胞HCT-116耐药性的关联性.方法:采用CCK-8法检测HCT-116细胞5-FU半数抑制量,在此浓度下,利用Stem-loop引物反转录miRNA-21,构建T-miRNA-21载体,采用Real time PCR绝对定量检测miRNA-21在5-FU作用下的表达.结果:HCT-116细胞对5-FU的IC50值为(6.56±0.08)μg/μl,定量结果显示5-FU作用的细胞中miR-21表达显著上调(P＜0.01).结论:miR-21在5-FU的化疗过程中对出现的耐药性可能发挥着重要的作用.
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黄芪总黄酮对特发性肺纤维化miRNA-21、let-7d及TGF-β/smad信号干预作用
目的:研究黄芪总黄酮对BLM诱导的肺纤维化模型miRNA-21、let-7 d表达水平和TGF-β1/smad信号干预作用.方法:C57 BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪总黄酮组.模型组及药物处理组小鼠气管内一次性滴注博莱霉素(10 mg/kg),假手术组予等量生理盐水,造模后治疗组予黄芪总黄酮(43 mg/kg)灌胃,假手术组和模型组与等量生理盐水灌胃.第28天取材,进行HE、Masson染色分析肺组织形态及胶原蛋白表达水平,羟脯氨酸含量测定胶原蛋白含量,realtime-PCR分析miRNA-21、let-7 d表达变化,Western-Bloting检测TGF-β/smad信号及EMT相关蛋白表达.结果:BLM诱导肺纤维化miRNA-21明显上调,而let-7 d下调,在此过程中信号蛋白smad7表达增强mad3磷酸化水平减弱,EMT标记蛋白α-SMA表达增高而E-cadherin减少,黄芪总黄酮对上述改变具有逆转作用,但对let-7 d表达无影响.结论:黄芪总黄酮可通过抑制miRNA-21,增加smad7表达,使TGF-β1/smad激活能力下降,抑制肺纤维化EMT作用.
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miRNA-21在支气管哮喘患儿血清及哮喘小鼠模型肺组织中表达上调
目的 探讨miRNA-21在支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞及支气管哮喘小鼠模型肺组织中的表达,观察其靶基因PTEN在哮喘小鼠模型肺组织中的表达变化.方法 应用real-time PCR方法检测支气管哮喘患儿与正常儿童外周血淋巴细胞miRNA-21的表达,卵蛋白致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型,肺泡灌洗液(BALF)细胞计数,HE染色观察气道炎症.应用real-time PCR法检测哮喘组小鼠与对照组小鼠肺组织miRNA-21及其靶基因PTEN的表达,Western blot方法检测哮喘小鼠与对照组小鼠肺组织PTEN蛋白的表达.结果 支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞miRNA-21表达水平显著高于正常儿童(P＜0.01).哮喘小鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞数及肺组织炎症细胞浸润显著高于正常对照组,哮喘组小鼠肺组织miRNA-21mRNA表达水平显著高于正常对照,PTEN mRNA与蛋白水平明显低于正常对照组(P＜0.01).结论 miRNA-21在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中高表达,表明其可能参与支气管哮喘的发病机制.
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膀胱癌miRNA-21对PTEN调控作用研究
目的 研究miRNA-21在膀胱癌中对PTEN的调控作用.方法 采用双荧光素酶报告基因实验与Western Blot实验检测miRNA-21对膀胱癌HTB-9细胞中PTEN表达的影响.结果 miRNA-21可负向调控PTEN的表达;转染miRNA-21反义核苷酸、沉默miRNA-21后,膀胱癌HTB-9细胞中PTEN的表达增加.结论 miRNA-21可通过调控膀胱癌中PTEN的表达影响膀胱癌的发生与进展.
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miRNA-21调控胃癌细胞增殖及侵袭的机制
目的 探讨靶向沉默miRNA-21表达对胃癌细胞增殖及侵袭的影响和机制.方法 将人胃癌SGC-7901细胞分为正常对照组、转染siRNA Control的阴性对照组和转染siRNA miRNA-21基因的沉默组,按照Invitrogen公司的脂质体LipofectamineTM 2000方法进行转染,48 h后,CCK8实验检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞侵袭能力;Western印迹检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达.结果 转染siRNA miRNA-21后能显著降低miRNA-21的表达(P<0.01);与正常对照组及转染阴性组比较,沉默组细胞存活率、细胞侵袭数显著降低,MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达显著下调(P<0.01).结论靶向沉默miRNA-21表达能显著降低胃癌细胞的增殖及侵袭能力,其机制与抑制Notch1信号通路有关.
关键词： miRNA-21 胃癌 增殖 侵袭 Notch1信号通路 -
胃癌患者血浆miRNA-21的表达水平及意义
目的 探讨胃癌患者血浆miRNA-21水平及其临床意义.方法 用荧光实时定量PCR 检测miRNA-21在59例胃癌患者与44例健康对照者血浆中的表达水平,分析miRNA-21表达水平与胃癌患者临床病理特征间的相关性及血浆miRNA-21的表达水平诊断胃癌的准确度.结果 miRNA-21在胃癌患者血浆中的相对表达量为30. 041±4. 214,在健康对照者血浆中的相对表达量为27. 993±4. 488,差异有统计学意义(P=0. 014);miRNA-21 在血浆中的表达水平与胃癌患者的性别(P=0. 437)、年龄(P=0. 982)、分化程度(P=0. 082)、TNM分期(P=0. 402)、浸润深度(P=0. 658)及肿瘤大小(P=0. 255)无明显的相关性;而与胃癌患者淋巴结转移(P=0. 010)有明显的相关性;血浆中miRNA-21的表达水平诊断胃癌的敏感度为52. 5% ,特异度为75% ,曲线下的面积(AUC)=0. 641(95% CI:0. 531~0. 751).结论 miRNA-21在胃癌患者血浆中表达上调,可能与胃癌的发生发展密切相关.
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miRNA-21和磷酸酶-张力蛋白基因的表达在老年结直肠癌浸润转移中的作用及机制
目的 探讨miRNA-21和磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)在老年结直肠癌浸润转移中的作用机制.方法 行大肠癌根治术的老年患者70例,术中取癌组织标本和距癌组织20 cm以上的切缘大肠正常组织.采用实时荧光定量RT-PCR检测标本中miRNA-21和PTEN 的mRNA表达水平;免疫组化和Western印迹分析PTEN蛋白表达水平.结果 结直肠癌组织中miRNA-21表达水平明显高于正常切缘组织(P<0.05),其中伴淋巴结转移的结直肠癌患者miRNA-21表达水平明显高于不伴淋巴结转移者;随着结直肠癌浸润深度增加,miRNA-21表达水平明显提升(P<0.05).结直肠癌组织中PTEN mRNA表达水平明显低于正常切缘组织(P<0.05);结直肠癌组织中PTEN蛋白中阳性细胞数比例明显低于正常切缘组织(P<0.05),PTEN蛋白表达水平明显低于正常切缘组织(P<0.05).伴淋巴结转移的结直肠癌患者PTEN mRNA及蛋白表达水平明显低于不伴淋巴结转移者;随着结直肠癌浸润深度和Dukes分期增加,PTEN mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05).Pearson相关性分析显示,结直肠癌组织中miRNA-21转录水平与PTEN mRNA和蛋白表达水平之间呈明显负相关.结论 老年结直肠癌组织中miRNA-21过表达会下调PTEN的表达,导致结直肠癌的浸润转移.
关键词： 结直肠癌 miRNA-21 磷酸酶-张力蛋白基因 -
C-myc与肺鳞癌中miRNA-21表达的关系
目的:检测肺鳞癌组织中miRNA-21和癌基因C-myc的表达,探讨两者的相关性及其临床意义.方法:采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)和免疫印迹检测25例肺鳞癌组织及其相应癌旁正常组织中miRNA-21及C-myc蛋白的表达水平,分析两者与临床病理指标的关系.结果:肺鳞癌组织中miRNA-21的表达及C-myc的表达均高于癌旁正常组织,在低分化肺鳞癌组织中的表达水平与高分化肺鳞癌组织相比,差异无统计学意义.miRNA-21及C-myc在转移癌组织中表达水平显著高于非转移癌组织.肺鳞癌组织中miRNA-21表达量与C-myc阳性表达存在正相关.结论:miRNA-21和C-myc在肺鳞癌中表达上调,可能与肺癌的发生与演进相关.
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下调miRNA-21表达对人结肠癌HCT116细胞体外生长的影响
研究下调miRNA-21表达对人结肠癌HCT116细胞体外生长的影响.利用反义核酸技术设计针对miRNA-21成熟体的ASO序列,构建pcDNA-6.2-miRNA-21-ASO真核表达载体(命名为p-miR-21-ASO);将重组载体p-miR-21-ASO)体外瞬时转染HCT116细胞,real-time PCR检测细胞中miRNA-21的表达变化;CCK-8法及克隆形成实验检测HCT116细胞的增殖及克隆形成能力改变;划痕法观察HCT116细胞的体外迁移能力变化;western blot检测细胞中VEGF蛋白的表达变化.结果显示,p-miR-21-ASO载体能下调miRNA-21的表达(P＜0.05); CCK-8及克隆形成实验结果显示HCT116细胞的增殖及克隆形成能力明显下降(P＜0.05);划痕实验结果发现细胞的体外迁移能力削弱(P＜0.05); western blot检测结果表明转染组细胞VEGF表达下调(P＜0.05).结果表明,下调miRNA-21能明显抑制HCT116细胞的体外生长,这可能与VEGF的表达降低有关.
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miRNA-21调节PTEN表达影响宫颈癌HeLa细胞的生物学行为
目的;探讨抑制miRNA-21表达对宫颈癌HeLa细胞中PTEN的表达及细胞增殖、侵袭能力的影响.方法:以脂质体介导anti-miRNA-21(anti-miRNA-21转染组)、anti-miRNA-21-neg(阴性对照组)转染HeLa细胞,同时设空白对照组(未转染组).应用Real-time PCR技术检测3组细胞中miRNA-21的表达,Western blotting检测3组细胞中PTEN的表达,MTT法检测3组细胞的增殖能力,Transwell实验检测3组细胞的侵袭能力.结果:Anti-miR-21转染组与阴性对照组相比,HeLa细胞中miRNA-21的表达量明显降低[(0.187±0.027)vs(0.861±0.144),P＜0.01].转染anti-miRNA-21 96 h后,HeLa细胞增殖抑制率明显升高[(49.44±1.97)％vs(4.36±0.64)％,P＜0.01].Anti-miR-21转染组与阴性、空白对照相比,Hela细胞的侵袭细胞数明显减少[(29.4±2.1)vs (40.4±2.9)、(41.2±2.6)个,均P＜0.01];PTEN蛋白的表达则明显增加[(1766.00±35.56) vs(726.00±5.48)、(729.25±17.73),均P＜0.01].结论:抑制miRNA-21的表达后,宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭能力明显下降,其机制可能与上调PTEN的表达有一定关系.
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miRNA-21在口腔鳞癌患者唾液中的表达及意义
目的:探讨miRNA-21在口腔鳞癌患者唾液上清中的表达及其临床意义.方法:以2012-01—2015-06期间,新余市人民医院口腔科收治的64例口腔鳞癌患者及25例健康对照人群为研究对象,收集唾液标本,采用实时定量聚合酶链反应技术,检测唾液标本中miRNA-21表达情况,并分析其与口腔鳞癌临床病理学特征之间的联系.结果:口腔鳞癌患者唾液上清液中miRNA-21的表达水平(2.75±0.94)显著高于健康对照组(0.78±0.45,P<0.01).相关性分析结果显示,唾液上清液中miRNA-21表达水平与口腔鳞癌细胞分化程度(P<0.01)及淋巴结转移状态(P<0.05)显著相关.受试者工作特征曲线分析结果显示,唾液上清液中miRNA-21表达水平,评价口腔鳞癌细胞分化程度的敏感性和特异性为89.5%和66.7%.结论:口腔鳞癌患者唾液上清液中miRNA-21的表达上调,可能与口腔鳞癌的发生发展有关,唾液中miRNA-21可作为评价口腔鳞癌细胞分化的辅助指标.
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肝细胞癌患者TACE术前后血清miR-21表达变化及临床意义
目的：探讨HCC患者经皮肝动脉化疗栓塞（TACE）术前、后血清miR-21表达变化及临床意义。方法以反转录定量PCR（RT-PCR）法检测HCC患者TACE术前、后及正常者血清miR-21水平，以酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清AFP水平。结果 HCC患者血清miR-21水平为正常人的（12.9±3.5）倍（t =19.4307，P <0.01），TACE 术后1个月为正常参考值的（7.2±1.7）倍，较术前显著降低（t =9.4937，P<0.01）。血清 miR-21水平与肿瘤大小、癌栓及HBV感染相关。TACE术后1个月血清miR-21水平在部分缓解、稳定和进展组中分别为正常人的（4.0±0.3）、（6.0±1.5）和（8.6±1.5）倍，各组间差异有统计学意义（F=38.168，P=0.000）。 miR-21诊断HCC的ROC-AUC值为0.910±0.041，显著高于AFP的0.860±0.037（t=6.3042，P<0.01）。 miR-21检测HCC的特异度（88.1%）显著高于AFP（69.0%，χ2=4.5253，P=0.033）。结论 TACE 术后miR-21水平明显降低，能较好预测TACE 术疗效，是HCC的潜在分子标记物。
关键词： 肝细胞癌 经导管动脉化疗栓塞术 miRNA-21 血清 -
甘草次酸对银屑病患者角质形成细胞增殖、凋亡及miR-21表达的影响
目的 初步探讨甘草次酸对银屑病患者角质形成细胞增殖、凋亡的影响以及可能的作用机制.方法 体外原代培养银屑病患者角质形成细胞,将传代2～3次后的角质形成细胞分为对照组和药物处理组,药物处理组加入甘草次酸,使其终浓度分别为1、2、4、8和10 mg/L,对照组不加甘草次酸.作用24～ 72 h后,MTS法检测甘草次酸对角质形成细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同浓度甘草次酸处理24 h后,角质形成细胞凋亡的变化;实时荧光定量PCR检测甘草次酸对银屑病患者角质形成细胞miR-21表达的影响.结果 1～10 mg/L甘草次酸作用角质形成细胞24～ 72 h后,随着甘草次酸作用时间延长和浓度增加,细胞增殖率逐渐下降.1、2、4、8和10 mg/L甘草次酸作用24 h后,角质形成细胞凋亡率分别上升至(9.64±0.86)％、(25.24±2.93)％、(27.68±3.70)％、(35.55±4.23)％、(38.89±2.31)％;两两比较显示,除l mg/L甘草次酸组外,其他各组与对照组(10.09±0.69)％相比,差异均有统计学意义(均P＜ 0.01).1、2、4mg/L甘草次酸处理角质形成细胞24 h后,miR-21表达水平(2-△△Ct)分别为0.24±0.04、0.22±0.07、0.17±0.05,与对照组0.92±0.12相比,差异有统计学意义(F=213.10,P＜ 0.05).2mg/L甘草次酸作用18、24、48 h后,miR-21基因表达水平分别为0.55±0.02、0.22±0.06、0.15±0.06,总体呈下降趋势,与对照组(0.98±0.02)相比,差异有统计学意义(F=238.10,P＜0.05).结论 甘草次酸可抑制银屑病患者角质形成细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与下调miR-21表达有关.
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miR-21、miR-494对黑素瘤A375细胞凋亡和细胞周期的影响
目的 探讨miR-21抑制物和miR-494模拟物转染A375细胞的佳有效转染浓度及其对黑素瘤A375细胞增殖的影响.方法 取6个浓度梯度的miR-21抑制物和miR-494模拟物转染A375细胞,实时荧光定量PCR法检测相应的miRNA.继而用Cy5标记的miRNA模拟物阴性对照转染A375细胞,荧光显微镜下观察转染效率.用流式细胞仪检测转染后细胞增殖的变化.结果 从A375细胞中成功提出miRNA.定量PCR结果显示,当转染物miR-21抑制物浓度为120 nmol/L时,转染细胞内有miR-21模拟物大程度的下调表达,2-△△Ct值为0.80(0.65 ～ 0.92),低于对照组；当miR-494模拟物浓度为250 nmol/L时,转染细胞内有miR-494模拟物大程度的上调,2-△△Ct值为126.82(111.52～144.22),明显高于对照组；miR-21抑制物转染组与miR-494模拟物转染组G1期细胞比率分别为(61.61±3.25)％、(61.05±3.17)％,高于对照组(P＜0.05)；增殖指数分别为(38.39±3.25)％、(38.95±3.17)％,低于对照组(P＜0.05)；细胞凋亡率分别为(27.74±1.39)％、(34.30±2.35)％,高于对照组(P＜0.01),细胞转染效率达90％以上.结论 miR-21抑制物和miR-494模拟物促使肿瘤细胞的G1期阻滞和促进凋亡作用,miR-21可增强A375细胞增殖,有原癌基因样功能；miR-494可抑制A375细胞增殖,有抑癌基因样作用.
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血浆miRNA-21和miRNA-29c水平对非小细胞肺癌的诊断意义
目的:探讨血浆miRNA-21、miRNA-29c水平对非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断意义.方法:采用实时荧光定量PCR法检测56例NSCLC患者和47例良性肺病患者血浆miRNA-21和miRNA-29c的相对表达水平.建立受试者工作特征(ROC)曲线,根据ROC曲线下面积判断它们诊断NSCLC的效能.依据ROC曲线分析设定的临界值计算血浆miRNA-21和miRNA-29c诊断NSCLC的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性.并将这些结果与NSCLC患者血清癌胚抗原检测结果进行比较.结果:NSCLC患者血浆miRNA-21水平显著高于良性肺病患者(P<0.001),而血浆miRNA-29c水平明显低于良性肺病患者(P<0.001).NSCLC患者血浆miRNA-21和miRNA-29c水平与肿瘤的临床(TNM)分期显著相关(P=0.008和P=0.011),血浆miRNA-21水平与肿瘤的分化程度也明显相关(P=0.001).根据ROC曲线分析取miRNA-21和miRNA-29c诊断NSCLC的临界值分别为4.026和0.985,血浆miRNA-21诊断NSCLC的敏感性和特异性分别为76.8%和76.6%,血浆miRNA-29c诊断NSCLC的敏感性和特异性分别为78.6%和72.3%.血清癌胚抗原诊断NSCLC的敏感性明显低于miRNA-21和miRNA-29c,特异性相似.结论:血浆miRNA-21和miRNA-29c诊断肺癌的效能优于血清癌胚抗原,有可能成为诊断NSCLC的血液标志物.
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miRNA-21与器官损伤和纤维化的关系及研究进展
miRNAs是由一类进化上高度保守的内源性非编码小分子RNA组成,参与生长发育、细胞增殖分化、肿瘤发生发展等一系列病理生理过程.近年来研究发现miRNA-21不仅在多种类型恶性肿瘤中呈高表达并起到促进癌细胞侵袭转移的作用,也参与调控脏器损伤和纤维化.随着技术进步,miRNA-21的检测手段也不断更新.作者就近年来miRNA-21与生物体重要器官损伤和纤维化的关系,以及miRNA-21检测方法的研究进展作一综述.
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miRNA-21在激素非依赖前列腺癌细胞系PC3中的表达及对其增殖和侵袭性影响
目的：探讨miRNA-21在激素非依赖前列腺癌细胞系PC3中的表达及对其细胞增殖和侵袭性的影响。方法：应用RT-PCR检查激素非依赖前列腺癌细胞系PC3在转染miRNA-21抑制剂后miRNA-21的表达情况；用CCK-8和Transwell小室分别检测转染miRNA-21抑制剂后PC3细胞的增殖与侵袭能力。结果：RT-PCR显示，转染组miRNA-21的表达低于空白转染对照组（ P＜0．05）；CCK-8和Transwell小室检测结果显示，转染组PC3细胞体外增殖及侵袭力明显降低（ P＜0．01）。结论：降低miRNA-21在激素非依赖前列腺癌细胞系PC3中的表达可抑制其增殖及侵袭力，这个发现为临床治疗非依赖性前列腺癌增殖及侵袭提供了新思路和方法。
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当归补血微囊促血管新生中 JAK2/STAT3通路的作用研究
目的：探讨 JAK2/STAT3信号传导通路在当归补血微囊促血管新生中的作用。方法建立人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)模型,分别采用 CCK-8和流式细胞术检测 HUVEC 细胞活力和细胞凋亡情况；采用 Western blot 检测各组中 p-STAT3、VEGF 的表达情况；采用荧光定量 PCR,检测各组中 VEGF 基因和 miRNA-21的表达情况。结果20μg/mL 当归补血微囊作用于 HUVEC 24 h,可有效促进 HUVEC 的增殖,并上调 p-STAT3、VEGF 及 miRNA-21的表达；AG490能有效抑制当归补血微囊对 HUVEC 的促增殖作用,并减少 p-STAT3、VEGF 及 miRNA-21的表达。结论当归补血微囊促进血管生成的作用确实与 JAK2/STAT3信号途径有关。
关键词： 当归补血微囊 血管新生 JAK2/STAT3 通路 VEGF miRNA-21 -
超声联合血清miR-21检测对原发性肝癌的诊断价值
目的：探讨超声联合血清miR-21检测对原发性肝癌（ primary hepatic carcinoma，PHC）的诊断价值。方法：对62例PHC患者进行肝脏超声常规检查，逆转录定量PCR法检测血清miR-21水平，以62例正常人为对照。结果：PHC患者血清miR-21表达水平是正常对照人群13.7倍，差异有统计学意义（ P<0.001）。病灶直径≥5cm的PHC患者血清miR-21表达水平明显高于病灶直径＜5cm的HCC患者，差异有统计学意义（ P<0.001）。 miR-21诊断PHC的受试者工作特征曲线下面积（ ROC-AUC）为0.916±0.026，约登指数为0.758，诊断临界值为6.26倍。超声诊断PHC敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为80.6%、87.1%、86.2%和81.8%，血清miR-21分别为91.9%、83.9%、85.1%和91.2%。两者联合诊断PHC的敏感性为95.2%，阴性预测值为94.1%，均高于超声检查，差异有统计学意义（ P<0.05）。结论：超声联合血清miR-21检测可以提高PHC诊断的敏感性，降低误诊率。
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微RNA-21在胃癌中的表达研究
目的 探讨微RNA(miRNA)-21在胃癌中的表达及其与临床病理特征的关系.方法 采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测胃癌组织和配对的正常胃黏膜组织中miRNA-21的表达,并分析miRNA-21表达水平与淋巴结转移及胃癌临床分期(TNM)之间的关系.结果 68例胃癌组织标本中56例(82.35％)miRNA-21高表达,高于正常配对组织13例(19.11％),差异有统计学意义(x2=54.37,P＜0.05)；在淋巴结转移阳性的胃癌组织中,miR-NA-21高表达(高于正常对照2倍)的发生率明显大于淋巴结转移阴性的胃癌组织,差异有统计学意义(x2=7.16,P＜0.05)；且T3～T4期miRNA-21高表达的发生率越高明显大于T1～T2期,差异有统计学意义(x2=4.64,P＜ 0.05).结论 miRNA-21在胃癌组织表达增高,与淋巴结转移及TNM分期有关,可能是胃癌诊断及治疗的分子靶标.
