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人非小细胞肺癌NCI-H1975细胞的异质性研究
目的 探讨人非小细胞肺癌NCI-H1975细胞的异质性及其与药物反应性的关系.方法 利用有限稀释法获得NCI-H1975细胞单克隆化子细胞,并对母细胞和部分单克隆化子细胞行表型、药物反应性和表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测,分析NCI-H1975细胞的克隆异质性特征及其与药物反应性的关系.结果 获得13个单克隆化的NCI-H1975子细胞,与母细胞相比,各子细胞在细胞增殖能力、吉非替尼敏感性和顺铂敏感性方面差异有统计学意义(P＜0.05),在EGFR基因突变状态方面未见差异.结论 NCI-H1975细胞存在细胞增殖能力等表型指标和药物反应性指标的异质性,并与药物治疗的反应性和耐药相关.
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生物标志物在糖尿病肾病早期检测中研究进展
虽然过去几十年在糖尿病肾病(DN)患者诊断与治疗方面取得重大进展,但是DN患者死亡率却没有显著降低.如果在DN早期阶段进行有效的药物干预,DN病理生理进展将得到显著延缓或阻碍,因此临床上急需开发与应用有效的生物标志物来诊断早期DN.本文就DN早期检测中常用以及潜在的参与DN发病与进展的生物标志物作一综述,以期为深入了解与开发早期生物检测标志物提供新的思路与方向.
关键词： 糖尿病肾病/病理生理学 早期诊断 生物学标记 综述 -
miRNA在毒理学领域的研究进展
miRNA属内源性小分子非编码RNA (small ncRNAs),在维持细胞正常功能方面发挥关键的作用:miRNA能抑制靶蛋白翻译,其过高或过低表达均可引起靶蛋白表达改变,从而改变细胞功能.毒理学研究发现,miRNA具有调节外源化合物代谢、影响外源性化合物的肝脏毒性、生殖和发育毒性等功能,并在肿瘤发生及化学致癌等方面发挥重要的作用.
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胃肠胰神经内分泌肿瘤循环生物标记物研究进展
胃肠胰神经内分泌肿瘤(GEP-NEN)是一类少见肿瘤,近年报道的发病率在不断上升.由于大多数GEP-NEN临床表现出现较晚以及常规肿瘤标记物在GEP-NEN中的局限性,约50%的患者在诊断时肿瘤已为晚期.因此,寻找能对GEP-NEN早期诊断以及准确评价肿瘤生物学行为的循环生物标记物十分重要.本文概述了用于GEP-NEN诊断及疗效评估的循环生物标记物的研究进展.传统循环生物标记物包括特异性循环生物标记物和非特异性循环生物标记物,其中非特异性循环生物标记物包括嗜铬素A(CgA)、胰抑素(PST)、嗜铬素B(CgB)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胰多肽(PP).新型生物标记物包括循环肿瘤细胞(CTC)和微小分子RNA(miRNA)等,其中NETest可能是一种具有较好临床应用前景的生物标记物.但新型生物标记物广泛应用于临床仍有较长的路要走.
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菲立磁标记兔骨髓基质细胞生物学特性的实验研究
目的 初步探索利用菲立磁(FE)和转染试剂多聚赖氨酸(PLL)体外磁性标记兔骨髓基质细胞(BMSC)这一方法的可行性,并确定其标记BMSC的佳浓度.方法 无菌条件下行股骨取髓,采用梯度密度离心法分离获取兔BMSC,体外培养、诱导分化为神经干细胞(NSC),使用不同浓度(5、12.5、25、37.5 μg/ml)的FE-PLL标记BMSC.采用普鲁士蓝染色、CCK-8法、流式细胞仪、透射电镜、免疫细胞染色等方法,检测FE-PLL标记兔BMSC的效率及其对细胞生长、分化、凋亡的影响.结果 FE可以高效率标记BMSC,被标记的细胞在显微镜下呈淡黄或深黄,颜色深浅与所加FE的剂量呈正相关.流式细胞仪结果显示:5、12.5、25 μg/ml各组FE对细胞无不良影响,而37.5 μg/ml组凋亡细胞明显增加.CCK-8测定的生长曲线表明:除37.5 μg/ml组外,其他各组细胞之间差异无统计学意义.普鲁士蓝染色显示:各组FE-pLL标记BMSC胞质内均可见到细小的蓝色铁颗粒.电镜结果显示:各组FE-PLL标记的BMSC胞质内含有许多包裹铁颗粒的囊泡,其含铁囊泡的数量依FE浓度增加而增加.结论 FE可以用来体外标记兔BMSC;其标记效率随FE浓度增加而增高,佳浓度为25 μg/ml.
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垂体腺瘤血管生成相关分子标记物
血管生成是垂体腺瘤发生、发展的基础，与肿瘤的侵袭性生长和预后密切相关。垂体腺瘤的血管生成是多种血管生成刺激因子和抑制因子互相作用的结果。未来对垂体腺瘤血管生成相关标记物的研究，有望成为垂体腺瘤治疗的新靶点。
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ALDH与恶性肿瘤干细胞相关研究进展
乙醛脱氢酶（aldehyde dehydrogenase，ALDH）是人体内重要的氧化酶之一，主要参与细胞内醛类物质的氧化代谢过程。近年的研究表明院ALDH活性可作为多种恶性肿瘤理想的肿瘤干细胞标记物，而且ALDH在肿瘤干细胞的调控机制中具有重要作用。因此，深入探究不同ALDH亚型在各种肿瘤干细胞中所扮演的重要角色，不但可以为揭示肿瘤的发病机制奠定基础，还将为肿瘤的分子诊断、预后判断及分子靶向治疗提供新的思路。本文就ALDH家族在肿瘤干细胞中的相关研究进展进行系统阐述。
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Qtracker体外标记兔成骨诱导分化后细胞的初步研究
目的 探讨Qtracker体外标记兔成骨诱导分化后细胞的特点及可行性.方法 抽取3个月龄健康新西兰大白兔骨髓,贴壁培养骨髓基质干细胞(BMSCs),传至第3代后向成骨细胞诱导,并做鉴定.Qtracker分别以1、2、4、8、16和32 nmol/10~6细胞的浓度标记成骨诱导分化后细胞,分别记为A、B、C、D、E、F组;未标记的细胞作为空白对照组(G组).分别利用荧光显微镜计数和流式细胞术两种方法枪测标记阳性率,台盼蓝拒染法检测标记后细胞存活率,甲基噻唑基四唑(MTT)法观察Qtracker染料对细胞增殖的影响.结果 兔BMSCs经诱导后能向成骨细胞诱导分化.经Qtracker标记后,荧光显微镜下胞浆呈绿色荧光.随着标记浓度的增加,A、B、C、D、E、F组细胞标记阳性率逐渐增高,于8 nmol/10~6细胞的浓度标记时,在荧光显微镜下计数,标记率可达到(93.58±2.08)%;通过流式细胞仪检测,其标记率为(95.24±1.31)%,经两种方法测定,D、E、F组间标记率差异均无统计学意义(P>0.05),且与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.05);G组各时间点标记阳性率均为0.以不同浓度标记后各组细胞存活率均在96%以上,且各组之间差异无统计学意义(P>0.05).标记Qtracker后对细胞的增殖无影响(P>0.05).结论 Qtracker可用于兔成骨诱导分化后细胞的体外标记,在浓度为8 nmol/10~6细胞下可得到佳的标记率,且其对成骨诱导分化后细胞的增殖无明显影响.
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不同浓度5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记山羊骨髓基质干细胞的体外研究
目的 利用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记山羊骨髓基质干细胞(BMSCs),检测其佳标记浓度、时间及细胞毒性,探讨作为山羊BMSCs标记及示踪方法的可行性.方法 抽取10个月龄健康中国青山千骨髓.贴壁培养并鉴定.以浓度分别为5、10、15和20 μmol/L的BrdU标记第4代细胞,分别记为A、B、C、D组;末用BrdU标记的细胞作为卒白对照组(E组).分别标记12、24、48和72 h后,免疫荧光法检测各组标记阳性率,锥虫蓝拒染法检测标记后细胞存活率.结果 原代及传代培养的山羊BMSCs态主要为梭彤,经诱导后能向成骨细胞和软骨细胞分化.标记后,荧光显微镜下胞核呈绿色荧光.随着标记时间和浓度的增加,各实验组标记阳性率逐渐增高,于15 μmol/L孵育48 h后,其标记率可达剑(93.32±3.25)%,与15 μmol/L孵育72 h和20 μmol/L孵育48,72 h筹异无统计学意义(P>0.05),与其他各绀各时间点筹异有统计学意义(P<0.05);各时间点空白对照组标记阳性率均为均为0.锥虫蓝拒染实验示各组细胞存活率均在90%以上,差异无统计学意义(P>0.05).结论 BrdU浓度为15μmol/L,标记时间为48 h时,对山羊BMSCs可得纠佳的标记效果,且安全性较高.
关键词： 山羊 免疫抗体技术 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 干细胞 生物学标记 -
2型糖尿病患者尿上清microRNA-29水平与尿白蛋白水平的相关性
目的 探讨2型糖尿病患者尿上清的microRNA-29 (miR-29)水平作为糖尿病肾病的生物标志物的可能性.方法 收集61例2型糖尿病患者的清晨首次中段尿,根据尿白蛋白水平分为糖尿病无蛋白尿组[n=25,(58.88±11.75)岁]和糖尿病有蛋白尿组[n=36,(62.19±13.11)岁].用实时荧光定量PCR法检测尿上清miR-29a、miR-29b和miR-29c的水平.等量的外源性人工合成的cel-miR-39加入等体积的尿上清中用于校正miR-29的水平.同时收集尿白蛋白排泄率、血肌酐、尿素氮、糖化血红蛋白(HbAlc)、血脂等其他生化指标.而眼底检查的结果则作为评估糖尿病小血管病变的指标.结果 2型糖尿病有、无蛋白尿两组之间HbAlc水平及糖尿病病程差异无统计学意义,而2型糖尿病有蛋白尿组估算肾小球滤过率(eGRF)水平显著低于无蛋白尿组(P=0.001),2型糖尿病有蛋白尿组尿上清miR-29a、miR-29b和miR-29c 水平高于无蛋白尿组(P=0.029、0.032、0.040).2型糖尿病尿白蛋白排泄率与尿上清miR-29a 及miR-29b水平相关(r=0.284,P=0.039;r=0.275,P=0.046),尿上清miR-29b水平与尿素氮水平相关(r=0.277,P=0.031),而miR-29水平与上述其他各项临床指标无相关.结论 2型糖尿病患者尿上清miR-29a及miR-29b水平与尿白蛋白水平相关.尿上清miR-29作为2型糖尿病患者糖尿病肾病的生物标志物的潜能有待进一步的探索和评估.
关键词： 微RNAs 糖尿病肾病 生物学标记 microRNA-29 -
尿肝型脂肪酸结合蛋白预测慢性肾小球肾炎进展的价值
目的 评估尿肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)预测慢性肾小球肾炎(CGN)病情进展的临床价值.方法 前瞻性入选2004年1月至2005年12月期间在我院行肾穿刺活检明确病理诊断的原发性CGN患者123例为对象,另选28例年龄、性别匹配的健康志愿者为对照.用酶联免疫吸附法检测肾穿刺前新鲜尿液L-FABP含量,同时常规检测各项血液及尿液指标.对所有患者进行5年随访,每3个月随访1次,在随访结束时分为疾病进展组和非进展组,评估影响CGN进展的危险因素.结果 与对照组相比,CGN患者尿L-FABP均值明显升高(P＜0.01).尿L-FABP与估计肾小球滤过率(eGFR)呈负相关(r=-0.565,P＜0.01)；与尿蛋白量(r=0.501,P＜0.01)和Scr(r=0.601,P＜0.01)呈正相关.Kaplan-Meier分析显示,尿L-FABP＞76.58 μg/g·cr的CGN患者的预后显著变差.尿L-FABP预测CGN进展的ROC曲线下面积(AUC)为0.95.尿L-FABP为119.8 μg/g·cr时,其敏感性为87.5％,特异性为90.5％.结论 尿L-FABP可作为监测慢性肾小球肾炎疾病进展的新生物学标记物.
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抑郁症心率变异性研究进展
抑郁症为全球第二大致残疾病,严重影响社会功能,甚至导致自杀[1]. 抑郁症往往伴随自主神经系统活动的异常. 作为衡量自主神经系统活动的重要指标,心率变异性(heart rate variability, HRV)因其客观、便捷、无创、敏感以及受安慰剂影响小等特点越来越受到重视.多项研究发现抑郁症HRV 降低,说明HRV 可能是抑郁症的潜在生物学标记[2]. 本文回顾近5年来抑郁症的HRV 实证研究进展,旨在加深对该领域现状的认识,并为未来的研究和临床工作提供参考.
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一种大脑皮层神经元特异性标记物的研究
目的 探讨一种新型大脑皮层神经元特异性结合物的特性及应用条件. 方法 将接有荧光素FITC的肽段Tet1通过免疫荧光技术对体外培养的大鼠大脑皮层神经元进行染色,免疫双标法检测FITC-Tet1特异性标记神经元能力,并对其应用条件进行量化.同时以HEK及C6细胞做为对照. 结果 FITC-Tet1达到一定浓度(30 μg/mL)时能特异性显示大脑皮层神经元,其几乎不与胶质细胞、HEK及C6细胞结合.过高(100 μg/mL)或过低(10 μg/mL)浓度均不利于神经元标记. 结论 Tet1能特异性结合大脑皮层神经元,该肽段可能成为一种新型的中枢神经元标记或靶向手段.
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胸腔积液蛋白质图谱差异及其临床意义初探
目的 探讨表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术 (SELDI-TOF-MS技术)对胸腔积液鉴别诊断的价值.方法 用SELDI-TOF-MS技术检测33例诊断明确的胸水标本及部分相应血清标本. 结果良恶性胸腔积液组血清标本蛋白信号无明显差别,但胸液标本有6个蛋白信号有差异;胸液中存在的M3945.52 Da、 M8944.86 Da蛋白差异对渗出性胸液的良恶性判断有鉴别价值;漏出性胸液及其相应血清标本蛋白含量和成分差异较大,无分析价值.结论 SELDI-TOF-MS技术对渗出性胸腔积液的良恶性鉴别有实用前景.
关键词： 胸腔积液 良恶性 生物学标记 质谱法 SELDI-TOF-MS技术 -
基因芯片筛选人牙周膜干细胞成骨分化生物学标记物的研究
目的：发现牙周膜干细胞（PDLSCs）骨向分化后显著高表达的环状RNA（circRNA），探索circRNA在PDLSCs骨向分化中生物学标记物的作用。方法用酶消化法体外培养牙周膜细胞，通过免疫磁珠法分选出PDLSCs。用普通培养基和成骨诱导培养基分别培养PDLSCs 21 d，茜素红染色检测矿化结节的形成，RT－qPCR检测碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OCN）和Runt相关转录因子2（Runx2）的表达。采用Arraystar公司的circRNA芯片检测PDLSCs骨向分化前后整体circRNAs的差异表达，将芯片中上调变化显著的前10位circRNAs进行PCR引物设计，RT－qPCR检测circRNA的表达情况。结果 PDLSCs骨向诱导21 d后，茜素红染色阳性，有大量矿化结节形成，ALP、OCN和Runx2表达量明显升高。 Hsa＿circ＿0008433在PDLSCs骨向诱导21 d后显著高表达。结论Hsa＿circ＿0008433将来可能是PDLSCs骨向分化新的生物学标记物。
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血液中与支气管肺发育不良相关的生物标记研究进展
支气管肺发育不良（ bronchopulmonary dysplasia，BPD）是新生儿常见的慢性肺疾病，其发生是遗传因素与环境因素相互作用导致的结果。尽管关于BPD的定义不少，但目前临床上为普遍接受和使用的是2000年6月由美国国立儿童健康与人类发展研究所（ NICHD）联席会议上对BPD制定的新定义，即生后氧依赖超过28 d。而此时，患儿的肺部往往已经出现明显的病理改变，肺功能也受到损害。而对BPD的治疗方面，目前仍缺乏特效的治疗方法。因此，寻找BPD的早期诊断指标成为BPD研究的一大方向。由于BPD的发生是一个受多因素影响的复杂的病理过程，其涉及多个分子信号通路，因此，体液中存在的各通路中众多的标记物成为了主要的研究对象。目前对体液中与BPD相关的生物学标记的研究主要集中在血液、尿液及支气管灌洗液，本文将对血液中BPD相关的生物学标记进行介绍。
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妊娠合并慢性乙型肝炎患者的相关血液指标变化及临床意义
目的 研究妊娠合并慢性乙型肝炎患者相关血液学指标变化和临床意义.方法 用比浊法、速率法、酶联免疫吸附实验、比色法、聚合酶链反应等检测妊娠期合并慢性乙型肝炎患者肝功能、凝血功能、HBVDNA、乙肝两对半等,并对结果进行统计学分析.结果 与对照组、无症状妊娠组比较,慢性乙肝妊娠组患者的肝功能损害症状表现是谷草转氨酶、直接胆红素、谷丙转氨酶、总胆红素水平上升(P＜ 0.05),清蛋白和凝血酶原活性逐渐降低(P＜0.05),病毒学特征表现:HBeAg呈现阳性,HBV DNA则是高滴度.结论 妊娠合并慢性乙型肝炎大多集中在孕妇妊娠的中期、晚期；临床上主要是以中度与重度为主；其中,HBeAg呈现阳性与HBV DNA高滴度是妊娠期慢性乙型肝炎的重要预测指标.
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肌萎缩侧索硬化症的神经传导速度研究新进展
肌萎缩侧索硬化症(ALS)是一种普遍的成人运动神经元病,1869年由Charcot首次报道,是一种快速进展的、致命的中枢神经系统恶性变性病,主要累及大脑皮质、脑干和脊髓的神经元.这种广泛的神经元退化会导致肌无力、萎缩及痉挛.ALS病程是分阶段的,病因及发展过程形式多样,目前无有效的治疗措施来缓解其进展[1],利鲁唑也只能延长2～3个月的生命,80％～90％的患者从出现症状开始平均2～3年死亡[2].尽管目前ALS有适用的诊断标准,但因其临床特征多变性及缺乏生物学标记,诊断仍很困难.神经传导的研究对于诊断ALS是一种相对精确的方法,对于早期诊断、诊断疑似ALS排外其他原因引起的疾病方面很重要[3].在此就ALS的神经传导速度的研究现状予以综述.
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超顺磁性氧化铁标记对大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响
目的:探讨超顺磁性氧化铁(SPIO)标记骨髓间充质干细胞(MSCs)的方法、效果及其对MSCs生物学特性的影响.方法:用密度梯度离心加贴壁培养法分离、扩增大鼠MSCs.取第4代MSCs,用终浓度为25μg Fe/mL的SPIO-多聚赖氨酸(PLL)复合物进行标记.标记后动态观察MSCs的形态改变,用台盼蓝染色检测细胞的活力,MTT比色法检测细胞增殖能力,普鲁士蓝铁染色证实细胞内铁,分光光度法测定细胞铁含量.结果:MSCs的SPIO-PLL标记阳性率达100%,标记后的MSCs细胞内铁含量为(18.38±2.80)pg/cell,是未标记细胞的76倍.标记细胞的形态、活力、生长增殖能力与未标记细胞相比无明显改变.结论:PLL介导SPIO标记MSCs方法简便、效率高,不影响MSCs的生物学特性,可用于MSCs的标记和示踪.
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持续静脉-静脉血液滤过对糖尿病酮症酸中毒患者的生化指标及chemerin的影响
目的 观察持续静脉-静脉血液滤过(continuous venovenous hemofiltration,CVVH)治疗糖尿病酮症酸中毒(DKA)患者的效果及其对空腹血糖、脂肪因子视黄酸受体反应蛋白2(chemerin)、乳酸、渗透压、尿素氮、离子等的影响.方法 选择的60例糖尿病酮症酸中毒患者均来自佳木斯大学第一附属医院急诊科,患者于2016年10月-2017年12月期间就诊于该院.将患者随机分组,常规治疗的30例患者设为对照组,在常规治疗基础上联合CVVH的30例患者为观察组,观察两组间和比较治疗情况.结果 治疗后,观察组的观察指标(乳酸、chemerin、空腹血糖、尿素氮、K+及Na+)水平显著低于对照组,且差异具有统计学意义(P＜0.001或P＜0.05).观察组治疗后渗透压、pH、二氧化碳结合力、碱剩余水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.001或P＜0.05).结论 持续静脉-静脉血液滤过可以提高糖尿病酮症酸中毒患者的治疗效果,尽早改善生化指标及渗透压环境,减少并发症及重要脏器系统的损伤,对DKA患者后续治疗及其预后有重要的帮助.
