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基因释放剂对痰中耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变检出率的影响
结核分支杆菌DNA依赖性RNA聚合酶β亚单位编码基因(rpoB)是单拷贝基因,提高其检测灵敏度对直接检出痰中耐利福平结核分支杆菌具有重要意义.我们在聚合酶链反应-单链构象多态性分析中(PCR-SSCP)采用基因释放剂和套式PCR,提高痰标本中结核杆菌rpoB基因突变检出率,以快速确定是否为耐药菌感染.
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MDA-7/IL-24蛋白的功能研究进展
mda-7/IL-24基因初被命名为黑色素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7),是1995年Jiang等[1]利用减数杂交技术从β干扰素和蛋白激酶C活化剂mezerin诱导的人黑色素瘤细胞HO-1中鉴定并克隆出来的.基于结构、序列同源性、基因定位等方面的考虑,MDA-7蛋白被归为IL-10家族,并被命名为MDA-7/IL-24蛋白.mda-7/IL-24基因在进化过程中比较保守,在酵母、猴子、牛、狗和猫的基因组DNA中都发现了mda-7/IL-24基因的同源基因[2].人mda-7/IL-24基因是单拷贝基因,定位于1号染色体(1q32.2-q41),由7个外显子和6个内含子组成,其mRNA长约2 kb,编码由206个氨基酸组成、相对分子质量约为23 800的蛋白质.
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海洋弧菌鉴定方法学评价
近年来，由海洋细菌导致的感染越来越常见，弧菌是海洋细菌中常见的类群之一，可引起人类腹泻、菌血症及外伤感染，严重时可导致死亡。目前，对海洋弧菌尚缺乏快速可靠的鉴定方法。16S rRNA 序列分析目前被公认为细菌鉴定的金标准。然而由于海洋细菌进化缓慢，且基因具有高同源性，16S rRNA 测序并不能对海洋弧菌进行可靠鉴定。编码 RNA 聚合酶β亚基的基因 rpoB 为序列较长的单拷贝基因，可以克服16S rRNA 的高度保守性。至今为止，许多研究已经证明 rpoB 基因可用于各种细菌的分类，包括芽孢杆菌、军团菌、分枝杆菌、葡萄球菌等［1］。基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（ matrix-assisted laser desorption / ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF/ TOF MS）技术是近年发展起来的一种全新的用于微生物快速鉴定的技术，具有快速、稳定、准确、重复性好的特点。为促进海洋弧菌的快速可靠鉴定，本研究利用16S rRNA 测序、rpoB 测序和MALDI- TOF/ TOF MS 3种技术对128株海洋弧菌同时进行鉴定，对比分析检测结果并进行方法学评估。
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两种PCR技术在GDNF基因克隆中的应用
聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)自1985年问世以来在分子生物学领域得到了极其广泛的应用,包括从基因组中大量地扩增单拷贝基因[1,2],扩增mRNA的RT-PCR[3],PCR测序,PCR标记探针,定量PCR[4],反向PCR及临床基因诊断等许多方面.本文报道在GDNF基因克隆过程中2种新的PCR技术在直接基因克隆和重组体方向鉴定方面的应用.
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血清降钙素原在肺部感染中的临床应用
降钙素原(procalcitonin,PCT)是20世纪90年代首先在脓毒血症病人的血清中检测到的蛋白.PCT是降钙素的前体物质,由116个氨基酸残基组成,相对分子量为13 kD的糖蛋白,由第1l号染色体上的单拷贝基因转录后经特定剪辑产生PCTmRNA,再翻译成降钙素原前体,经一系列水解酶作用终形成大量片段,统称为PCT,包括降钙素(calcitonin,CT)、降钙蛋白( katacalcin)和N2末端残基.
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神经营养因子研究进展(3)
1.2睫状神经营养因子(CNTF) 1984年从鸡眼球组织中提纯,因具有支持鸡胚睫状体神经节内付交感神经元的存活而得名.其在成熟的周围神经中表达水平较高,在脑、骨骼肌和胚胎中表达较低.以后,又从牛心及大鼠、兔、鸡的坐骨神经中获得.CNTF由星形胶质细胞和雪旺细胞产生,为酸性蛋白,200个氨基酸残基组成,分子量22.8KD,人、大鼠、兔的CNTF同源性达85%,人CNTF基因为单拷贝基因,长约2kb,定位于11g12,对生后1d,1月、2月大鼠坐骨神经中CNTF免疫组化研究显示:随年龄增长CNTF阳性反应渐减弱,示生长的不同时期对CNTF的需求也不一样,同时也证明不同年龄组鼠坐骨神经中CNTF相对含量存在差异[1].
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联合检测降钙素原与C反应蛋白水平的临床意义
降钙素原(PCT)是由116个氨基酸组成的无激素活性的降钙素(calcitonin, CT)前体物.正常情况下PCT mRNA在甲状腺滤泡旁细胞粗面内质网内翻译成含141个氨基酸的前PCT进入内质网膜, 经糖基化和特异酶的作用, 生成PCT.产生PCT的主要部位在肝脏, 其他如单核细胞、脾、肺或小肠的神经内分泌细胞也可以产生.内毒素可刺激降钙素原的释放[1].PCT来自定位于第11号染色体上(11P15,4)的单拷贝基因,该基因由2800个碱基对组成,含6个外显子和5个内含子,基因全长Mr约7600.转录后在甲状腺滤泡旁细胞粗面内质网内翻译成降钙素原前体(proprocalcitonin),包括N端84个氨基酸、活性降钙素(CT,32肽)和降钙蛋白(katacalcin,21肽)三部分,分别由2肽(2Lys2A rg2)及4肽(2Gly2Lys2Lys2A rg2)连接.降钙素原前体在内源多肽酶作用下剪掉nPro2CT端单一序列,生成116个氨基酸的PCT.PCT在血液中的半衰期为25～30 h,体内外稳定性较好,易于检测.在全身感染后4 h即可检测到,6 h急剧上升,并在6～24 h维持在该水平[2].C -反应蛋白(CRP)是由肝细胞所合成的一种急性时相蛋白[3].
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基因组印迹与Wilms瘤
基因组印迹(genomic imprinting)是指亲代来源依赖性基因表达.除性染色体上的基因外,子代从亲代获得全部双拷贝基因.但是不是所有的基因都表达,有些基因仅来源于父系或母系一方的单等位基因表达,而来源于另一方的等位基因失活.这种亲代来源依赖性单等位基因表达现象称为基因组印迹.印迹基因是否表达取决于其在上一代是位于雄性还是雌性细胞染色体上.基因组印迹不遵循孟德尔遗传规律,是一种非遗传性基因调控方式.这一现象的发现揭示了非孟德尔遗传现象的机制,使我们进一步地认识嵌合、非随机失活、母系遗传等现象,有助于我们了解遗传病,为基因治疗开辟一条崭新的途径.
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用巢式PCR扩增ZFY基因产前诊断胎儿性别
近年来的研究表明,Y染色体上锌指结构基因(zinc-finger-Y gene,ZFY)是继SRY之后又一与性分化有关的单拷贝基因,并与精子的发生有关[1,2].为此,我们利用巢式PCR技术,以ZFY作为检测指标,参考有关文献自行设计内外两侧两对巢式PCR引物[3],对绒毛、羊水和孕妇外周血标本进行ZFY基因的特异扩增,初步建立了一种用PCR技术产前检测胎儿性别的方法.
