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复方灯盏花滴丸对谷氨酸致原代培养大鼠海马神经元凋亡的保护作用
目的:探讨复方灯盏花滴丸对谷氨酸致大鼠原代海马神经了亡凋亡的保护作用及其作用机制.方法:采用中药血清药理学方法,制备含药血清;实验分为空白对照组、模型组、尼莫地平组(0.05 g·kg~(-1)),复方灯盏花滴丸高、低剂量组(5.00,1.25 g·kg~(-1)).原代培养大鼠乳鼠大腑海马神经元,以谷氨酸(终浓度为500μmol·L~(-1))作用20 min复制损伤模型,以5%含药皿清干预,MTT法测定细胞存活率,榆测细胞内Ca~(2+)浓度,Hoechst33342和PI双染法荧光显微镜观察神经细胞形态学变化和细胞坏死和凋亡百分率,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:谷氨酸对原代培养的海马神经元有损伤作用,荧光显微镜观察到细胞核皱缩、碎裂及凋亡小体,海马神经元的存活率下降,坏死、凋亡明显高于对照组,复方灯盏花滴丸高、低剂量组和尼奠地平组能明显对抗谷氨酸引起的神经细胞形态改变,海马神经元存活率明显提高;复方灯盏花滴丸含药血清组细胞凋亡率较谷氨酸损伤组显著降低,细胞内钙超载明显减轻.结论:复方灯盏花滴丸对谷氨酸致大鼠海马神经元的凋亡具有保护作用,其作用机制可能与其能降低细胞内Ca超载有关.
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同病异治对戊四氮点燃大鼠海马区谷氨酸代谢通路的影响
目的 观察并比较癫痫"从肝论治" 复方柴胡疏肝汤和"从痰论治"定痫丸对戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)点燃大鼠海马区谷氨酸代谢通路的影响,探讨同病异治理论的分子机制.方法 以亚惊厥剂量PTZ腹腔注射大鼠建立慢性点燃癫痫模型.完全点燃大鼠24只,随机分为4组,分别为模型组、丙戊酸钠组、定痫丸组和柴胡疏肝汤组,并分别给予生理盐水、丙戊酸钠、定痫丸和柴胡疏肝汤灌胃干预;对照组大鼠给予生理盐水腹腔注射和灌胃干预.连续灌胃4周后,应用HPLC荧光法检测大鼠海马谷氨酸(glutamate,Glu)含量;Western blot技术观察谷氨酸转运体-1(glutamate transporter-1,GLT-1)蛋白表达水平;谷氨酰胺合成酶检测试剂盒检测谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)活性.结果 与对照组比较,模型组大鼠海马区Glu含量显著升高、GLT-1蛋白表达及GS活性显著降低(P <0.01);与模型组比较,各用药组大鼠海马区Glu含量均显著降低,GLT-1蛋白表达及GS活性均显著升高(P <0.01);两中药复方组比较,柴胡疏肝汤组大鼠海马区Glu含量降低及GS活性升高较定痫丸组更显著(P <0.01),而两组GLT-1蛋白表达,差异无统计学意义(P >0.05).结论 "从肝论治"复方柴胡疏肝汤和"从痰论治"定痫丸均能降低PTZ点燃大鼠海马区Glu含量,提高GLT-1蛋白表达及GS活性,说明两复方均能通过调节Glu代谢通路影响脑内Glu水平;而柴胡疏肝汤降低癫痫大鼠海马区Glu含量、上调GS活性效果优于定痫丸,提示柴胡疏肝汤和定痫丸对Glu代谢通路的调节存在不同作用靶点,这可能是癫痫同病异治理论的分子机制之一.
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黄芩甙对百日咳菌液致离体大鼠脑组织损害的保护作用及量效关系的研究
目的:了解黄芩甙对百日咳菌液致离体大鼠脑组织损害的保护作用、量效关系及可能的机制.方法:大鼠脑组织切片分为7组:(1)正常脑组织切片培养组(正常组);(2)10%百日咳菌液脑组织切片培养组(模型组);(3)黄芩甙预处理后10%百日咳菌液脑组织切片培养组(黄芩甙组),根据预处理黄芩甙的不同剂量又将本组分为5个亚组;(4)谷氨酸脑组织切片培养组(谷氨酸组);(5)黄芩甙预处理后谷氨酸脑组织切片培养组(黄芩甙加谷氨酸组);(6)过氧化氢(H2O2)脑组织切片培养组(过氧化氢组);(7)黄芩甙预处理后过氧化氢脑组织切片培养组(黄芩甙加过氧化氢组).收集各组脑组织切片培养上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)含量.脑切片组织作蛋白质(pro)定量检测.结果:模型组、谷氨酸组和过氧化氢组的LDH释放量明显升高,分别依次为(15.10±4.89)、(15.49±5.66)、(16.54±5.47)u/g.pro,与正常组(6.10±2.87)u/g.pro比较差异有显著性(P＜0.01);0.25mmol/L黄芩甙预处理后,LDH释放量[(8.65±2.43)u/g.pro]明显降低,与模型组比较差异有显著性(P＜0.01).同时黄芩甙加谷氨酸组[(9.93±2.89)u/g.pro]和黄芩甙加过氧化氢组[(9.54±2.82)u/g.pro]培养液中的LDH释放量明显降低,与谷氨酸组和过氧化氢组比较差异均有显著性(P＜0.01).结论:黄芩甙预处理后对百日咳菌所致的神经细胞损害具有保护作用,其保护作用可能与黄芩甙能减少谷氨酸和过氧化氢对离体神经细胞的损害作用有关.
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头痛宁胶囊对紧张性头痛模型大鼠神经递质的影响
目的 探讨头痛宁胶囊治疗紧张性头痛的可能作用机制. 方法 将80只SD大鼠随机分为模型组、对照组及头痛宁高、中、低剂量组,每组16只.采用颈部肌肉注射三磷酸腺苷诱发紧张性头痛.头痛宁高、中、低剂量组分别给予头痛宁胶囊悬液(760、380、190 mg/kg),模型组、对照组给予等量生理盐水,各组均连续灌胃7天.观察大鼠给药前后张颌反射的阈值及潜伏期,并检测脑组织及血清中一氧化氮合酶(NOS)、5-羟色胺(5-HT)及谷氨酸含量.结果 头痛宁各剂量组给药后张颌反射潜伏期明显延长(P＜0.05),且随头痛宁剂量增加改善更加显著(P＜0.05).与模型组比较,头痛宁各剂量组张颌反射阈值均明显升高(P＜0.05),各剂量组之间差异无统计学意义(P＞0.05).头痛宁各剂量组较模型组血浆中NOS活性、5-HT含量明显下降,谷氨酸含量升高(P＜0.05),且随药物剂量增加,各指标改善均更加显著(P＜0.05). 结论 头痛宁胶囊可通过影响头区肌肉和皮肤的张颌反射阈值,改变头区肌筋膜痛敏感性来影响紧张性头痛的发作,其机制可能与下调NOS活性,降低5-HT和上调谷氨酸含量有关.
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1型糖尿病患者甲状腺自身抗体检测的临床意义
1型糖尿病为器官特异性自身免疫性疾病,常合并自身免疫性甲状腺疾病[1],本研究检测血清谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、胰岛素自身抗体(IAA)和胰岛细胞抗体(ICA)、血清甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺微粒体抗体(TMAb)及甲状腺功能,并探讨其临床意义.
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缩胆囊素和谷氨酸对大鼠大脑皮质细胞内游离钙浓度的影响
为探讨胆囊收缩素八肽(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)及中毒剂量谷氨酸(glutamate,Glu)对大鼠大脑皮质细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的影响及相互关系,以10-10、10-8、10-6mol/L等浓度CCK-8和1mmol/L Glu分别或共同作用于大鼠大脑皮质细胞,以流式细胞仪(Flow cytometer,FCM)检测[Ca2+]i,并探讨其变化机制.①10-10 mol/L CCK-8可增加[Ca2+]i(P<0.05),10-8、10-6mol/L CCK-8无此作用;②10-10mol/L CCK-8与1mmol/L Glu共同作用可增加[Ca2+]i(P<0.05),而10-6mol/L CCK-8不引起[Ca2+]i增加;③当抑制细胞内钙库释放时,10-10mol/L CCK-8加1mmol/L Glu不能增加[ Ca2+]i.结果提示CCK-8生理浓度时可增加[Ca2+]i,而高浓度时无此作用;CCK-8在增加[Ca2+]i的同时有拮抗Glu引起的细胞外钙内流作用.
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谷氨酸转运抑制剂对大鼠培养脑片皮层锥体细胞的影响
目的观察谷氨酸转运抑制剂苏-羟天冬氨酸(THA)对大鼠培养脑片中大锥体细胞的影响,探讨谷氨酸在皮层运动神经元损伤中的作用.方法取出生后1 d SD乳鼠的运动区大脑切片培养,用含有不同浓度THA的培养液进行干预,培养后的脑片用神经元特异性免疫组化染色剂SMI-32(抗非磷酸化神经丝抗体)染色,对皮层大锥体细胞进行鉴定、计数,透射电镜观察超微结构,并测定不同时点培养液中谷氨酸(Glu)的含量.结果对照组脑片大锥体细胞数目稳定,而THA可以引起剂量依赖性培养液中Glu含量的升高及大锥体细胞数目减少,空泡变性.结论细胞外谷氨酸增高对大锥体细胞造成慢性损伤.
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海马NDMA受体与胃肌间神经丛NOS阳性神经元在慢性应激性胃运动变化中的关系
目的 探讨慢性应激对大鼠胃功能和胃肠神经系统的影响,并分析其海马谷氨酸(Glu)离子型受体机制.方法 通过建造慢性应激性抑郁模型大鼠,结合脑立体定位及微量注射Glu和N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体阻断剂MK-801,对实验鼠进行糖水偏爱等行为学检测、胃内压记录及胃内在神经丛的一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元表达的组织化学检测.结果 慢性不可预见性温和应激(CUMS)动物表现出抑郁样行为,且胃运动减弱；海马注射NMDA受体阻断剂MK-801,可以反转CUMS的效应；海马注射Glu,能增加游泳不动时间,但对胃运动无影响.CUMS使胃肌间神经丛NOS阳性神经元数量减少[(73.74±16.38 )/LPF,P＜0.05],神经节数量减少[(4.25±1.34)/LPF,P＜0.05],但每个神经节内神经元数量明显增加(6.55±2.37,P＜0.05)；海马注射MK-801能改善CUMS引起的神经节数量减少的现象.结论 慢性应激诱发的抑郁样行为与海马Glu及其NMDA受体有关,而胃活动的减弱可能与海马NMDA受体变化影响胃肌间神经丛NOS神经元分布格局有关.
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谷氨酸诱导的大鼠海马神经元兴奋毒性损伤中SNK/SPAR表达水平的变化
目的 观察谷氨酸诱导的兴奋毒性损伤中血清诱导激酶(SNK)/树突棘相关的Rap特异性GTPase活化蛋白(SPAR)分子表达水平的变化.方法 建立谷氨酸介导的大鼠海马神经元兴奋毒性损伤模型,RT-PCR方法检测SNK/SPAR mRNA的表达;Western blot方法观察SNK/SPAR在蛋白质水平的表达;双重免疫荧光标记方法观察SNK/SPAR在神经元上的分布.结果 100 μmol/L谷氨酸刺激神经元10 min后,1 h内即可出现SNK mRNA表达水平升高,6 h达高峰,随后逐渐下降,12 h左右回到基线水平;3 h可检测到SNK蛋白表达水平升高,36 h达高峰,随后回降.SPAR表达水平的变化趋势与SNK相反.SNK与SPAR分布的变化主要体现在神经元的胞质和突起.结论 SNK-SPAR途径可能参与了谷氨酸诱导的神经元兴奋毒性损伤过程.
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大量谷氨酸钠摄入对小鼠血糖及胰岛素水平的影响
谷氨酸(L-Glutamate,Glu)经胰岛β细胞表面Glu受体(AMPA亚型)加强葡萄糖的促胰岛素分泌作用已为实验证实［1］。由于高剂量Glu摄入经由Glu受体可以破坏中枢神经细胞，那么，过量Glu摄入是否会损伤胰岛β细胞，未见任何报道。籍此，本文探讨了Glu对小鼠胰岛的可能毒性作用。1 材料和方法 雄性昆明种小鼠，体重24～25g(购自首都医科大学动物中心)，普通饲料饲养，随机分为3组：对照组、低(LDG)及高(HDG)剂量组，饮水中含Glu.Na 2g/L及20g/L，饲养7周。停止Glu.Na摄入2周后，空腹(14h)断头采血。不抗凝，4℃放置4h后2000r/min离心10min制备血清。同时测定血清葡萄浓度、血清胰岛素和C肽水平。 葡萄糖测定采用葡萄糖氧化酶法，试剂盒北京化工厂生产。胰岛素和C肽放射免疫试剂盒北京北方生物技术研究所生产。 数据分析：各实验数据均以x—±s表示，选用t检验和方差分析作显著性检验。2 结果 在高剂量组，血糖异常者占75%。血糖水平显著高于对照组(P＜0.05)。同时，这些小鼠血浆胰岛素、C肽水平也降低。低剂量组上述指标无明显变化，详见表1。
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APP17肽对SAM鼠脑内Bcl-2和Caspase-3凋亡相关因子的影响
APP17肽是产生老年斑的主要成分β-淀粉样前体蛋白中具有促进神经轴突生长、突触形成作用的一个肽段.本课题组曾将APP17肽作用于D-半乳糖脑老化模型,结果发现其具有防止或逆转处于凋亡过程中的神经元恢复或接近正常状态的功能[1],对Aβ25-35诱导的神经细胞凋亡也有保护作用[2];将APP17肽直接作用于糖尿病大鼠,发现其可以改善末梢神经的脱髓鞘,抑制神经元胞质内钙离子浓度的升高,从而保护神经细胞免受钙离子中介谷氨酸的毒性[3].
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MRS测定新西兰兔活体肌肉组织内谷氨酸、谷氨酰胺总浓度的方法探讨
目的 应用磁共振频谱(Magnetic Resonance Spectroscopy,MRS)对新西兰兔活体肌肉总谷氨酸(Glx)浓度水平进行测定.方法 取20只新西兰兔,用SS-PRESS序列进行MRS采集,记录Glx/总肌酸(TCr)信号比;采集后立即取血并对采集部位进行肌活检,用生化方法测定新西兰兔的血肌酐(Cm)、肌肉Glx和TCr浓度,对上述指标进行相关性分析,并选用MRS采集Glx/TCr信号比和血Cm浓度来预测肌肉Glx浓度.结果 MRS采集Glx/TCr峰高比与肌活检Glx/血 Crn浓度比相关系数为0.681.得到线性回归公式:肌肉Glx浓度预测值(μmol/g肌肉)=[MRS采集Glx/TCr峰高比]×[血Crn浓度(mg/dL)]×28.754-0.631.结论 应用线性回归公式来预测新西兰兔肌肉组织内Glx浓度,结果能反映实际水平;其精确度尚难以胜任定量分析,但本方法避免了肌活检.
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1.11胃肠平滑肌细胞的离子通道及其调制
膜片箝技术的问世促进了离子通道研究的飞速发展.但是消化道平滑肌细胞离子通道的研究相对滞后于神经和心肌等其它可兴奋细胞.1离子通道的分类胃肠平滑肌细胞的离子通道有三种类型:①电压门控通道:电压门控的钠通道、钾通道、钙通道等;②配体门控通道:乙酰胆碱受体通道、毒蕈碱受体通道、谷氨酸受体通道等;③机械门控通道:牵张敏感通道和容积敏感通道等.
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灌流液镁浓度对测定谷氨酸引起的培养神经细胞内钙浓度的影响
Mg2+对谷氨酸(glu)受体亚型N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体通道的阻断作用,早在80年代就已由电生理实验证实,此后通过荧光测定细胞内游离钙浓度[Ca2+]i 得到进一步证实.令人困惑的是,在研究glu对离体神经细胞作用的文献中, 所用缓冲液的Mg2+浓度却是0、0.6、0.9、1.3、2.4mmol/L不等.因此,我们在研究glu对培养神经细胞[Ca2+]i影响的工作中,首先须了解应如何确定细胞外缓冲液中Mg2+的浓度.
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光照对哺乳类动物生物钟的调节机制
人体结构不仅存在于空间,而且存在于时间中.由于地球每24 h自转一周,因此生物体内的各种功能都有明显的24 h昼夜节律.在长期生物进化过程中,生物机体内发育分化出一个特殊的器官--生物钟来协调各种不同组织与器官的昼夜节律.人体的生物钟位于下丘脑的视交叉上核.由于体内生物钟是在地球昼夜环境周期性的变化中进化形成的,因此光照是影响生物钟节律重要的因素.外界环境的光照信息是由一条独特的神经通路,从视网膜直接投射到视交叉上核,称为视网膜-下丘脑束. 这条神经通路不同于经典的视觉成像通路,它不参与视觉成像功能.视锥细胞与视杆细胞全都退化的盲人或动物毫无光感, 但他们的生物节律仍然受光照调节. 这一现象有很重要的临床意义.本文主要讨论光照对哺乳类动物生物钟调节的神经生物学机制.
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人参银杏复方制剂对缺氧复氧后大鼠海马CA1区GABA、Glu表达的影响
目的:探讨人参银杏复方制剂对缺氧复氧后海马CA1区神经元的保护作用机制.方法:应用低压氧舱仿海拔8000米高空缺氧模型,采用免疫组织化学及免疫荧光方法并结合图像分析等技术,观察预防性应用人参银杏复方制剂对缺氧24h复氧0h、24h时段海马CA1区GABA、Glu表达的影响.结果:缺氧24h复氧0h组海马CA1区GABA免疫反应阳性神经元数量、Glu免疫反应阳性神经元荧光强度分别较常氧对照组减少和减弱,复氧24h后上述变化更加明显.预防性应用人参银杏复方制剂后海马CA1区GABA免疫反应阳性神经元数量在复氧0h和24h时较常氧对照组多,以复氧0h时增加明显;Glu免疫反应阳性神经元荧光强度在复氧0h、24h时段也较缺氧复氧实验组相应时段增加.结论:人参银杏复方制剂可增加缺氧复氧后海马CA1区GABA表达及防止Glu过度释放,对缺氧复氧性脑损伤具有保护作用.
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大鼠大脑运动皮质与脑干面口部运动前神经元的突触联系
目的观察大脑运动皮质发出的下行投射终末或谷氨酸能终末与脑干面口部运动核内运动神经元的间接突触联系. 方法顺行与逆行追踪相结合及免疫组织化学染色与逆行追踪相结合的双重标记技术. 结果将PHA-L电泳入大鼠额叶1区和/或2区和将HRP分别注入三叉神经运动核(Vm)、面神经核(Ⅶ)或舌下神经核(ⅩⅡ),PHA-L顺标终末和HRP逆标神经元的重叠分布区主要见于臂旁核簇、三叉上核、Vm内侧的脑桥网状结构、延髓中缝核簇和延髓网状结构外侧部,而在脑干面口运动核内则很少见到PHA-L顺标终末.上述区域内也有较密集的谷氨酸样阳性终末.在电镜下观察到除Vm、Ⅶ和ⅩⅡ以外的结构内PHA-L顺标终末或谷氨酸样阳性终末与HRP逆标神经元的胞体和树突形成以非对称性为主的轴-体和轴-树突触. 结论本研究的结果为皮质脑干束的终止部位和运动皮质对脑干运动核的间接调控提供了直接的形态学依据.来自大脑运动皮质并呈谷氨酸样阳性锥体细胞的下行投射对脑干运动前神经元主要发挥兴奋性作用.
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白细胞介素-1β对谷氨酸钠致痫大鼠海马Gs蛋白表达的影响
目的探讨白细胞介素-1β(Interleukin-1,IL-1β)在谷氨酸钠致痫大鼠中对海马兴奋性G-蛋白α亚基(stimulated G-protein α subunit,Gsα)蛋白表达的影响,为阐明IL-1 β在致痫中的作用机制提供线索. 方法免疫组织化学方法结合行为观察(SD大鼠随机分为对照组、GluNa组、IL-1β+GluNa组、rhIL-lra+IL1β+GluNa组和D-AP-5+IL-1β+GluNa组). 结果行为观察显示,IL-1β+GluNa组大鼠痫性发作潜伏期(平均2 min)较其他组(平均6 min)明显缩短,且发作程度(Ⅲ～Ⅳ级)较其他组(Ⅰ～Ⅲ级)严重;对照组无痫性发作.免疫组织化学染色显示,Gsα蛋白在海马各区均有表达,IL-1β+GluNa组大鼠在齿状回、CA1区和CA3区Gsα表达较其他组明显增强. 结论 IL-1β参与致痫,且在谷氨酸致痫中可能通过Gs蛋白介导发挥作用.
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谷氨酸与代谢型谷氨酸受体1亚型、2/3亚型、4亚型在参环毛蚓的分布--免疫细胞化学研究
目的探讨谷氨酸与其代谢型谷氨酸受体在参环毛蚓 (P.aspergillum)的存在与否及分布情况.方法用免疫细胞化学染色技术,在光学显微镜下观察谷氨酸与代谢型谷氨酸受体1亚型、2/3亚型、4亚型阳性细胞的形态与分布. 结果发现谷氨酸存在于参环毛蚓的脑、咽下神经节、腹部神经节的神经细胞、肌间神经细胞,以及肠上皮和体表上皮的非神经细胞.在围咽神经环与腹神经链及腹神经链所发出侧支的切面可见深染的细密的阳性神经纤维束.代谢型谷氨酸受体1亚型、4 亚型仅存在于参环毛蚓的脑.未观察到代谢型谷氨酸受体2/3亚型阳性细胞的存在. 结论参环毛蚓中枢神经系统谷氨酸阳性神经细胞的部分细胞突起显著 ,形态成熟,围咽神经环与腹神经链及腹神经链所发出侧支的阳性神经纤维是它们的投射纤维;部分细胞无突起,形态幼稚,谷氨酸在此不是作为神经递质作用于其受体阳性神经细胞 .
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TNFα激活的星形胶质细胞在慢性癫痫复发中的作用
目的研究TNFα激活的星形胶质细胞在慢性癫痫复发中的作用.方法分别用反相高效液相色谱法和免疫组织化学反应检则细胞释放谷氨酸(Glu)和NF-κ Bp65表达的变化.将TNFα激活的星形胶质细胞条件培养液(ACM)注射入慢性马桑内酯致痫发作间期大鼠之侧脑室,观察动物行为和脑电图的变化,并用免疫组织化学反应观察海马NF-κ Bp65和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化. 结果1.TNFα可明显促进星形胶质细胞释放Glu,并快速诱导星形胶质细胞核内NF-κ Bp65的表达;2.侧脑室注射ACM可引起大鼠4级癫痫行为及典型的痫样脑电图表现;注射ACM后0.5h即可观察到海马回特别是CA1区细胞核内p65的表达,2～4 h达高峰,8 h恢复至对照水平;注射ACM后1h海马GFAP免疫反应阳性细胞数开始高于对照组,4 h达高峰,8 h仍明显高于对照组.结论TNFα激活的星形胶质细胞可通过释放可溶性的神经活性物质引起慢性癫痫的复发.
