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卡维地洛对体外柯萨奇病毒B3致心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax蛋白表达的影响
目的 探讨卡维地洛对体外柯萨奇病毒B3(CVB3)致心肌细胞凋亡的抑制作用及其机制.方法 采用差速贴壁法培养原代Wismr乳鼠心肌细胞.实验分为正常对照组、病毒组、卡维地洛组及美托洛尔组.正常对照组仅加入不含血清的DMEM培养液.后3组于CVB3感染心肌细胞后分别加入不含血清的DMEM培养液、无血清培养基配制的卡维地洛、美托洛尔溶液.72 h后在倒置相差显微镜下观察各组心肌细胞的形态、搏动速率;采用黄嘌呤氧化酶法测定其心肌细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定其心肌细胞培养液中丙二醛(MDA)水平,流式细胞术检测其心肌细胞凋亡率,免疫细胞化学法检测其心肌细胞内Bcl-2及Bax蛋白表达水平.结果 1.与病毒组比较,卡维地洛组心肌细胞搏动速率明显提高(P<0.05)、凋亡率明显降低(P<0.05),心肌细胞培养液中SOD活性显著升高(P<0.05)、MDA水平明显降低(P<0.05);美托洛尔组与病毒组比较,心肌细胞搏动速率、凋亡率、心肌细胞培养液中SOD活性、MDA水平均无统计学差异(Pa>0.05);2.与病毒组及美托洛尔组比较,卡维地洛组心肌细胞内Bel-2蛋白表达增多,而Bax蛋白表达减弱.结论 卡维地洛对体外CVB3感染的心肌细胞具有保护作用,作用机制可能与其具有抗氧化活性、增强心肌细胞内Bel-2蛋白表达、减弱Bax蛋白表达有关.
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大豆异黄酮对去卵巢大鼠阴道上皮Bcl-2和Bax表达的影响
目的 研究大豆异黄酮对去卵巢大鼠阴道上皮Bcl-2和Bax表达的影响.方法 选择Wistar大鼠50只,随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、大豆异黄酮高剂量组和大豆异黄酮低剂量组,每组10只,给药6周后处死大鼠,分离摘取阴道,常规石蜡包埋,切片进行HE染色及免疫组化凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果 大豆异黄酮能使去卵巢大鼠阴道的重量增加,上皮增厚,但作用弱于雌激素.模型组、阳性药物对照组、大豆异黄酮高剂量组、大豆异黄酮低剂量组Bcl-2的灰度值分别为57.692±4.49,116.847±9.95,101.345±5.87,109.56±9.11.Bax分别为168.049±11.43,106.49±9.58,121.34±15.78,119.82±20.89.结论 大豆异黄酮可促进阴道上皮Bel-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达.
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半枝莲提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响
目的 探讨半枝莲提取物(Scutellaria barbata D.Don extract,SBE)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2,Survivin和Caspase-3表达的影响.方法 体外培养SMMC-7721细胞,以2.5,5和10 mg·L-1SBE处理48h,并以2.5mg·L-1顺铂(DDP)作为阳性对照.用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,二步法免疫组化检测Bcl-2,Survivin和Caspase-3蛋白表迭.结果 与正常对照组相比,SBE各浓度组细胞抑制率显著升高(P＜0.001).细胞凋亡率明显上升(P＜0.01),Caspase-3蛋白表达显著上升(P＜0.01或P＜0.05),Bcl-2和Survivin蛋白表达明显下降(P＜0.01或P＜0.05).结论 SBE具有诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用,其分子机制可能与上调Caspaae-3蛋白表达以及下调Bcl-2和Survivin蛋白表达有关.
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Survivin基因在胆管癌组织中的表达及其与bcl-2和bax相关性
目的 探讨Survivin基因在胆管癌组织中的表达以及与bel-2和bax基因表达的相关性.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Survivin mRNA在64例胆管癌,22例癌旁组织及10例正常胆管组织中的表达,免疫组织化学方法测定胆管癌组织中bcl-2和bax蛋白的表达.结果 胆管癌组织中Survivin基因阳性表达率65.6%(42/64),显著高于其在癌旁组织(9.1%,P<0.01)和正常胆管(0%,P<0.01)中的表达;Survivin基因表达与胆管癌的性别、年龄、部位、分化程度、临床分期及淋巴结转移无明显相关(P>0.05).bcl-2和bax在胆管癌组织中的表达率分别为56.3%(36/64)N45.3%(29/64),Survivin基因表达与bcl-2表达正相关(r=0.404,P<0.01),与bax表达负相关(r=-0.373,P<0.01).结论 Survivin基因在胆管癌的发生、发展过程中可能起重要作用;Survivin有可能成为胆管癌基因治疗的新靶点;在胆管癌的发展中,Survivin与bel-2和bax分别起协同和拮抗作用.
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Fas、bcl-2和caspase8在去甲斑蝥素诱导食管癌细胞凋亡中的作用及机制
目的 探讨去甲斑蝥素诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡过程中Fas、bcl-2、caspase 8凋亡调节基因的相互关系及可能的作用机制.方法 流式细胞术分析去甲斑蝥素作用后细胞凋亡及增殖的变化,应用免疫细胞化学技术检测用药前后凋亡相关基因Fas、bcl-2、caspase8表达的变化.结果 去甲斑蝥素诱导的人食管癌Eca-109细胞发生形态改变.流式细胞仪分析结果 发现,食管癌Eca-109细胞在DNA组方图上出现典型的亚二倍体峰即凋亡峰,在细胞周期中的分布也发生了明显的变化.免疫细胞化学结果 显示.去甲斑螯素作用后食管癌Eca-109细胞Fas、caspase8蛋白表达明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05).结论 去甲斑蝥素能抑制食管癌Eca-109细胞增殖并诱导凋亡,其作用可能与上调Fas、caspase8蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达有关.
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苦参素对人前列腺癌PC-3细胞体外作用研究
目的 探讨苦参素对人前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用及可能的作用机制.方法 采用MTT法检测PC-3细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测PC-3细胞周期改变,免疫组化法检测PC-3细胞中Bcl-2和Bax的表达.结果 随着苦参素浓度的增加和作用时间的延长,PC-3细胞生长抑制率呈明显上升趋势(P＜0.05).随着苦参素浓度的增加,G0/G1期和S期PC-3细胞所占比例逐渐上升,而G2/M期所占比例逐渐下降,同时Bcl-2表达下调,而Bax表达上调.结论 苦参素能通过诱导人前列腺癌PC-3细胞周期阻滞于G0/G1和S期,下调Bcl-2表达和上调Bax的表达抑制癌细胞的生长增殖.
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白藜芦醇对宫颈癌Hela细胞凋亡的诱导作用
目的:探讨白藜芦醇对宫颈癌Hela细胞生长抑制及诱导凋亡的作用机制.方珐:以不同浓度白藜芦醇处理Hela细胞,MaT法测定细胞增殖抑制率;TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bad、Caspase-9的表达.结果:经白藜芦醇处理的Heh细胞,增殖作用呈明显时效和量效关系,细胞凋亡率明显增高并呈浓度依赖性;Bel-2、Bax、Bad表达下降,Caspase-9表达增加.结论:白藜芦醇对Hela细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制与下调Bel-2、Bax、Bad蛋白、上调Caspase-9蛋白表达有关.
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DCC基因在大肠癌中的表达及与Bcl-2,Bax关系
目的:探讨DCC(deleted in colometal carcinoma)基因在大肠癌组织中的表达情况及与Bel-2,Bax蛋白之间的关系.方法:采用免疫组织化学法结合图像分析技术观察74例大肠癌组织中DCC,Bel-2,Bax蛋白的表达情况.结果:大肠癌组织中,DCC蛋白失表达率为54.1%(40/74),其表达在不同的肿瘤分化程度(P＝0.002)及Dukes分期中有差异(P＝0.042);Bcl-2蛋白表达阳性率为60.8%(45/74),其表达与不同的大肠癌临床Dukes分期(P＝0.032)及是否有淋巴结转移(P＜0.001)中有差异;Bax蛋白表达阳性率为48.6%(36/74),在不同的大肠癌组织学类型、分化程度、Dukes分期及淋巴结是否转移中均无差异(P＞0.05).大肠癌中DCC蛋白表达与Bel-2表达水平呈负相关(r＝-0.201,P＝0.043),与Bax表达水平呈正相关(r＝0.296,P＝0.005).结论:大肠癌中DCC表达缺失频率较高,且可能通过上调Bel-2蛋白表达和下调Bax蛋白表达阻止细胞凋亡,从而促进大肠癌发生.
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脑脉泰对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和Akt,bcl-2,Bax和caspase3表达的影响
目的 研究脑脉泰对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡和Akt、bcl-2、Bax、caspase3表达的影响.方法 采用大鼠大脑中动脉栓塞再灌注动物模型,将雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、脑缺血再灌注模型组(MCAO)、脑脉泰大剂量组(MCAO+脑脉泰2.24g/kg)、脑脉泰中剂量组(MCAO+脑脉泰1.12g/kg)、脑脉泰小剂量组(MCAO+脑脉泰0.56g/kg),每组10只大鼠.脑脉泰组在MCAO前5天开始灌胃给药,连续5 d.用TUNEL法和免疫组化染色法分别检测缺血半暗带凋亡细胞和Akt、bcl-2、Bax和caspase3表达.结果 脑脉泰大剂量组和中剂量组大鼠脑缺血半暗带的凋亡细胞显著减少(P<0.01),Akt、bcl-2表达显著增加,caspase3和Bax表达减少,与MCAO模型组比较,有显著性差异(分别为P<0,05和P<0,01).结论 脑脉泰对脑缺血/再灌注损伤有保护作用,其保护作用与促进Akt和bcl-2的表达,抑制Bax和caspasse3的表达有关.
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葛根素对大鼠脊髓继发性损伤的保护作用
目的:探讨葛根素对大鼠脊髓继发性损伤的保护作用.方法:成年雄性SD大鼠,采用改良的Allen's打击法制成急性脊髓损伤模型后,比较1、6、12、24、48 h葛根素处理组与模型组的血浆超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)的差异性以及Bel-2和Bax基因蛋白表达情况.结果:葛根素能明显提高脊髓损伤大鼠血浆SOD的活性,降低血浆MDA的含量,并使大鼠脊髓Bcl-2基因表达蛋白产物增加,Bax基因表达蛋白产物减少.结论:葛根素在脊髓损伤早期可以提高SOD的活性,降低MDA的含量,并能有效上调Bel-2表达及下调Bax表达,对脊髓的继发性损伤有保护作用.
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Bcl-2、Survivin在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义
目的:探讨凋亡相关基因Survivin、Bcl-2在甲状腺乳头状癌组织中的表达与临床病理特征之间的关系.方法:应用免疫组织化学方法,检测Survivin、Bcl-2在102例甲状腺乳头状癌组织及20例结节性甲状腺肿组织中的表达.结果:102例甲状腺乳头状癌组织中Survivin、Bcl-2阳性表达率分别为66.7%(68/102)和81.0%(83/102),而良性病变组织中分别为20.0%(4/20)和95.0%(19/20)(P<0.05),结论:在甲状腺乳头状癌组织中survivin表达显著上调,Bcl-2下调.Survivin表达与Bcl-2正相关,Bcl-2表达量的高低与分化程度正相关.survivin及Bcl-2表达与淋巴结转移有关.
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bcl-2在氧化低密度脂蛋白诱导人血管内皮细胞凋亡中的作用
目的 观察氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)对人血管内皮细胞株EA.hy926凋亡的影响,并探讨bcl-2在其中的作用.方法 MTT法检测不同浓度的oxLDL(50、100、150、200 oe/m1)对细胞增殖能力的影响;流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测不同浓度的oxLDL对细胞凋亡的影响;RT-PCR、Western blot和免疫荧光细胞化学法分别检测不同浓度的oxLDL对bcl-2 mRNA、蛋白表达及在细胞内表达的影响.结果 oxLDL对EA.hy926细胞形态有明显影响,并能明显抑制EA.hy926细胞增殖能力,抑制作用随处理浓度增加而增大,半数抑制浓度(IC50)约为100ug/ml;不同浓度的oxLDL处理细胞24 h后,与对照组比较,早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡细胞百分比均显著增加(P<0.05);oxLDL能够明显抑制细胞内bel-2 mRNA、蛋白表达及在细胞内的表达水平.结论 6cl-2基因在oxLDL诱导的血管内皮细胞凋亡中发挥重要作用,oxLDL可能通过下调bcl-2的表达促进血管内皮细胞凋亡.
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麻黄碱对缺氧缺血新生大鼠海马神经细胞的保护作用
目的 观察麻黄碱(ephedrine,EPH)埘大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)海马神经细胞调亡及远期学习记忆能力的影响.方法 新生SD大鼠(7日龄)按随机数宁表法分为麻黄碱组(EPH组)、对照组(Con组)和假于术组(Sham组).分别于HIBD后6、12 h,1、3、7 d采用免疫组织化学检测符组大鼠bcl-2蚩白和bax蛋白在海马区的表达,HIBD后4周 Morris水迷宫测试其学爿记忆能力.结果 EPH组bcl-2表达较Con组显著增高,1 d时达到高峰,3 d后逐渐下降;bax蛋门表达较Con组明显降低,1 d时低;各组平均潜伏时间均逐渐缩短,EPH组3-5 d时平均潜伏时间较Con组明显缩短.EPH组穿越平台次数及在目标象限游泳距离与总距离百分比均高于Con组.结论 麻黄碱可使新牛大鼠HIBD后海马bel-2蛋白表达增加和bax蛋白表达减少,并能提高远期学习记忆能力.
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RNA干扰抑制结肠癌细胞内Bcl-2/C-Raf的表达
[目的]构建Bcl-2/C-Raf的双靶点的RNAi质粒表达载体与单靶点表达载体比较,研究RNAi对各组癌细胞增殖的抑制作用.[方法]分别构建了针对Bcl-2、C-Raf和Bcl-2/C-Raf靶基因的质粒表达载体,通过LipofectamineTM2000介导转染人结肠癌细胞系HCT-8后,检测相应转染组靶基因的mRNA和蛋白质表达量,测定各组细胞活性.[结果]分别转染3种质粒表达载体后,3组结肠癌细胞中相应靶基因的mRNA和蛋白质表达量均降低;转染双靶点干扰质粒的试验组;其细胞活性低于单靶点组;对于针对Bcl-2,C-Raf和Bcl-2/C-Raf基因的3组干扰实验,RNAi对结肠癌细胞增殖的抑制率分别为43.87%、40.64%和63.85%.[结论]Bcl-2/C-Raf双靶点的表达载体对结肠癌细胞增殖的抑制作用要明显优于单靶点表达载体.双靶点质粒表达载体在结肠癌的基因治疗中具有很大优势.
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小归芍超临界提取物对人胃癌BGC-823细胞Bcl-2、PCNA基因表达的影响
目的:研究小归芍超临界提取物对人胃癌BGC-823细胞Bcl-2、PCNA基因表达的影响.方法:通过培养人胃癌 BGC-823细胞方法,采用Western Blotting分别检测Bcl-2和PCNA基因蛋白的表达量.结果:小归芍超临界提取物单用体外作用48h能够明显抑制人胃癌细胞BGC-823细胞Bcl-2及PCNA的表达,可能是其抑制肿瘤细胞增殖的机制之一.
关键词： 小归芍超临界提取物 人胃癌BGC-823细胞 Bel-2 PCNA 免疫印迹 -
IL-13对气道上皮细胞凋亡的影响及其机制研究
目的 观察IL-13对9HTE气道上皮细胞内Egr-1、Bax、Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响,探讨IL-13在气道上皮细胞凋亡中的作用及机制.方法 将9HTE气道上皮细胞分为正常对照组、rhIL-13组及rhIL-13+mAIL-13组,用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法检测Egr-1、Bax、Bcl-2 mRNA表达水平,用免疫细胞化学(ICC)法检测Egr-1、Bax、Bcl-2蛋白表达水平.结果 rhIL-13组Egr-1、Bax mRNA及蛋白表达显著高于正常对照组(P＜0.01),Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著低于正常对照组(P＜0.01);rhIL-13+mAIL-13组Egr-1、Bax mRNA及蛋白表达显著低于rhIL-13组(P＜0.01),与正常对照组比较无显著性差异(P＞0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著高于rhIL-13组(P＜0.01),与正常对照组比较无显著性差异(P＞0.05).结论 IL-13可能通过Egr-1促进9HTE气道上皮细胞凋亡;mAIL-13可以中和IL-13所致的9HTE气道上皮细胞凋亡的作用.
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Livin、Caspase-3和Bel-2在非小细胞肺癌的表达及生存分析
目的 探讨Lvin在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,及与NSCLC病理、生物学行为指标和预后的关系.方法 采用免疫组织化学法检测87例NSCLC肿瘤组织和40例肺良性组织中Livin、Caspase-3和Bel-2蛋白的表达情况,将其表达与NSCLC病理、生物学行为等指标进行相关分析.多因素COX回归生存分析探讨Livin、Caspase-3和Bel-2蛋白表达水平与预后的关系.结果 Livin和Bel-2蛋白在肺癌组织中的表达明显高于在肺良性病变组织中的表达(72.41%比0.0%,74.71%比0.0%,P=0.000),Caspase-3蛋白表达则明显降低(67.82%比87.5%,P<0.05).Livin、Caspase-3和Bel-2表达主要位于胞浆,未见核内表达.其表达与肺癌的组织细胞类型、分化程度、淋巴结转移、TNM分期、肿瘤大小以及部位无明显相关性.在NSCLC中,Livin蛋白表达与Caspase-3和Bel-2蛋白表达有相关性(r1=-0.260,P=0.015;r12=0.351,P=0.001).Livin、Caspase-3和Bel-2不是影响肺癌手术患者预后的独立预后因素.结论 Livin蛋白、Bel-2蛋白在肺癌组织中表达上调,Livin的表达与Caspase-3、Bel-2蛋白的表达呈相关性,三者在肺癌的发生发展中可能起协同作用.Livin、Bel-2和Caspase-3蛋白表达与患者的预后无明显关系.
关键词： 非小细胞肺癌 Livin 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 Bel-2 预后 -
大鼠血管性痴呆模型动物中海马神经元凋亡和蛋白表达的研究
目的:观察不同时点分别结扎左、右颈总动脉建立大鼠血管性痴呆模型中海马CAl区神经元凋亡和Bcl-2及Bax蛋白表达的影响,探讨其在血管性痴呆发病过程中的作用.方法:采取间隔3 d分2次结扎双侧颈总动脉建立血管性痴呆模型,术后4周用TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡,用免疫组织化学法检测其Bcl-2及Bax蛋白表达.结果:模型组大鼠海马CA1区可见大量凋亡神经元;模型组Bel-2及Bax蛋白表达明显增加,与假手术组比较差异均有显著意义(P<0.05).结论:此血管性痴呆模型大鼠中海马CA1区神经元大量凋亡丢失,可能是导致血管性痴呆的病理基础.
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阿魏酸钠对低氧性肺动脉高压大鼠肺血管平滑肌细胞Caspase-3,Bcl-2表达的影响
目的:探讨阿魏酸钠(SF)对低氧性肺动脉高压大鼠肺小动脉平滑肌细胞Caspase-3,Bcl-2表达的影响.方法:将21只Wistar大鼠随机分为对照组(n=7)、低氧组(n=7)及干预组(n=7)(胃饲SF并进行低氧处理).以常压低氧复制肺动脉高压模型,右心导管插入法检测平均肺动脉压(mPAP);分别称量大鼠右心室(RV)和左心室加室间隔(LV+S)的质量,计算出右心室肥厚指数RV/(LV+S);图像分析法测量肺小动脉管壁厚度和面积,计算出肺小动脉管壁厚度指标即管壁厚度占血管外径的百分比(WT%)和管壁面积占血管总面积的百分比(WA%);进行Caspase-3,bcl-2免疫组化染色,比较各组Caspase-3和bcl-2积分光密度值(IOD).结果:①与对照组比较,低氧组大鼠平均肺动脉压(mPAP)明显升高(P<0.05)、肺小动脉WT%,WA%以及RV/(LV+S)明显增加(P<0.05).与低氧组比较,干预组大鼠平均肺动脉压(mPAP)明显降低(P<0.05)、肺小动脉WT%,WA%以及RV/(LV+S)明显减少(P<0.05).②与对照组和低氧组分别比较,干预组Caspase-3 IOD值均显著增高(P<0.05),且与对照组和低氧组分别相比,十预组bcl-2表达均处于弱势,IOD值均显著降低(P<0.05).与对照组相比,低氧组无统计学差异(P>0.05).结论:SF可造成低氧性肺动脉高压肺血管平滑肌细胞Caspase-3表达上调及Bcl-2表达下调.
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电磁场在转录水平对胚胎干细胞源性神经前体细胞凋亡相关基因的影响
目的:利用小鼠胚胎干(ES)细胞分化成神经前体细胞模型,研究极低频率电磁场(ELF-EMF)对细胞周期调节基因、凋亡相关基因以及细胞增生和凋亡的影响.方法:分离、培养和诱导ES成神经前体细胞,于诱导后第4日起,实验组予ELF-EMF干预,对照组采用假暴露,于4+4 d,4+7 d,4+11 d,4+17 d,4+23 d使用BrdU和Nestin免疫荧光染色检测细胞生长分化,RT-PCR检测bel-2,bax,GADD45基因转录产物水平.结果:对照组和实验组的BrdU和Nestin免疫荧光染色未能发现细胞生长和分化有明显改变,对照组和实验组的RT-PCR检测发现,在4+11 d时bcl-2和bax mRNA表达升高(P<0.01;P<0.05).GADD45转录水平在终末期(4+23 d)下降(P<0.01).结论:EMF能够暂时性地影响ES源性神经前体细胞凋亡和细胞周期调控相关基因的转录水平,但这些改变不足以使细胞发生可检测到的细胞生理上改变.
