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结肠癌组织中 Ku70和 Sp1的表达变化及其意义
目的：探讨Ku70和Sp1在结肠癌组织中的表达变化及其意义。方法选取2013年8月至2015年7月经病理检查确诊为结肠癌的患者79例，比较高、中、低分化结肠癌中Ku70蛋白和Sp1蛋白阳性表达率以及 Ku70mRNA 和 Sp1mRNA 相对表达量与癌旁组织的差异；统计分析用SPSS13．0软件进行，Ku70mRNA与Sp1mRNA相对表达量用均数±标准差表示， t检验进行两组比较；Ku70蛋白和Sp1蛋白阳性表达率用百分率（％）表示，χ2检验进行比较；Spearman相关和Pearson直线相关分别用于Ku70mRNA与Sp1mRNA相对表达量和Ku70蛋白和Sp1蛋白阳性表达率相关性分析；P＜0．05表示差异具有统计学意义。结果高、中、低分化结肠癌组织中Ku70阳性表达率分别为47．37％、61．54％、79．41％； Sp1蛋白阳性表达率分别为52．63％、76．92％、85．29％；结肠癌组织中Ku70、Sp1蛋白阳性表达率及mRNA水平均高于癌旁组织（χ2＝29．792、50．009；P＜0．001）；低分化结肠癌的Ku70、Sp1蛋白阳性表达率及mRNA水平显著的高于高分化结肠癌（ F＝29．084、39．167；P＜0．001）差异均有统计学意义；经过Spearman相关分析发现，Ku70蛋白与Sp1蛋白阳性表达率呈正相关，且差异具有统计学意义（ r ＝0．307， P ＝0．006）。经过 Pearson 相关分析发现， Ku70mRNA相对表达量与Sp1mRNA相对表达量呈正相关，且差异具有统计学意义（ r＝0．458， P＜0．001）。结论结肠癌组织中Ku70和Sp1蛋白阳性表达率高于正常组织，且Ku70蛋白与Sp1蛋白阳性表达率以及Ku70mRNA与Sp1mRNA相对表达量呈正相关。
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青少年特发性脊柱侧凸患者血浆matrilin-1蛋白水平及其临床意义
目的 探讨青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者外周血中matrilin-1蛋白水平的变化及其在AIS发病机制中的作用.方法 将2006年6月至2007年3月诊治的25例AIS患者作为AIS组,25名性别、年龄相匹配的健康体检青少年作为对照组.所有入选对象符合以下标准:无骨骼疾病、代谢疾病、生长发育异常;无影响骨代谢的系统疾病及其他情况;近期未服用激素;无先天性心脏病手术史.AIS组记录末次随访或术前大Cobb角、侧凸弯型,并分为进展型及非进展型两组.进展型侧凸(侧凸进展成为严重脊柱侧凸)定义为骨骼发育未成熟时,Cobb角＞40°或骨骼发育成熟时,Cobb角＞50°.采用PCR-RFLP基因分型方法 对所有对象进行基因分型,运用酶联免疫吸附(ELISA)法检测AIS组与对照组外周血浆中matrilin-1蛋白浓度并比较其差异,并对不同基因型之间matrilin-1蛋白的表达进行比较.分析血浆matrilin-1蛋白浓度与脊柱侧凸进展的关系.结果 AIS组血浆matrilin-1蛋白浓度显著低于对照组(P=0.002).AIS组及对照组的基因型GG个体血浆matrilin-1蛋白浓度均低于基因型AA或AG个体,而对于相同基因型的个体AIS组血浆matrilin-1蛋白水平更低.进展型AIS患者血浆matrilin-1蛋白水平明显较非进展型AIS患者低.结论 AIS患者外周血matrilin-1蛋白水平与脊柱侧凸的进展相关.对外周血matrilin-1蛋白浓度的检测,有助于AIS的早期筛查及诊断,可作为预测脊柱侧凸进展的一个独立指标.
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妊娠和阴道分娩对肛提肌形态学及阴道黏膜神经分布的影响
目的 探讨妊娠和阴道分娩对肛提肌形态学及阴道黏膜神经分布的影响.方法 选取2006年6月至12月在北京协和医院妇产科阴道分娩的正常初产妇64例为阴道分娩组,选择同期行阴式手术的非妊娠期未产妇8例为对照组,取两组患者阴道前、后壁黏膜组织和肛提肌组织.对肛提肌组织进行组织学染色,观察肌肉形态学变化、测量肌纤维直径并进行分型.分别对阴道黏膜组织中蛋白基因产物9.5(PGP9.5)、血管活性肠肽(VIP)和神经肽Y(NPY)3种神经纤维进行免疫组化染色,分别计数阴道黏膜上皮层和固有层内每高倍视野(HPF)下3种抗体阳性神经纤维末梢的数量.结果 阴道分娩组产妇肛提肌中Ⅰ型肌纤维占79%.Ⅰ型肌纤维平均直径(86±9)μm,Ⅱ型肌纤维平均直径(79±15)μm.两组阴道黏膜标本中神经纤维数量比较,阴道分娩组阴道前壁黏膜上皮层内PGP 9.5、VIP和NPY染色阳性的神经纤维数量分别为(5.9±3.3)、(7.6±3.1)和(8.2±3.2)条/HPF,均高于同组阴道后壁黏膜上皮层[分别为(3.8±2.9)、(5.9±3.1)和(6.0±3.0)条/HPF],差异均有统计学意义(P<0.05);阴道分娩组阴道前壁黏膜固有层内PGP 9.5和VIP染色阳性的神经纤维的数量[分别为(6.9±3.2)和(4.9±2.1)条/HPF]均高于正常对照组阴道前壁黏膜固有层[分别为(3.9±3.6)和(3.1±1.2)条/HPF],差异也均有统计学意义(P<0.05).结论 妊娠和阴道分娩会对肛提肌和盆底神经造成病理损伤.肛提肌适应妊娠期生理变化,肌纤维肥大.阴道前壁固有层内PGP 9.5和VIP能神经纤维较丰富,有利于阴道壁内血管和平滑肌的扩张,为分娩做准备.
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卵巢上皮性肿瘤组织中KiSS-1、基质金属蛋白酶9和核因子κBp65蛋白的表达及其相关性
目的 探讨KiSS-1、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、核因子κB(NF-κB)p65蛋白3者在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及其相关性.方法 采用免疫组化方法检测50份卵巢上皮性癌(卵巢癌)、20份卵巢交界性肿瘤、20份卵巢良性肿瘤和10份正常卵巢组织中KiSS-1、MMP-9、NF-κBp65蛋白的表达,并分析其临床意义及3者间的相关性.结果 KiSS-1蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率(80%)明显高于良性肿瘤组织及正常卵巢组织(分别为35%、10%;P＜0.05);在卵巢交界性肿瘤组织中阳性表达率(65%)明显高于正常卵巢组织(P＜0.05).在卵巢癌组织中,KiSS-1蛋白阳性表达率与淋巴结转移有关(P＜0.05),与手术病理分期、病理类型及病理分级均无关(P＞0.05);MMP-9蛋白阳性表达率与手术病理分期及淋巴结转移有关(P＜0.05),而与病理类型及病理分级均无关(P＞0.05);NF-κBp65蛋白阳性表达率与手术病理分期、病理分级及淋巴结转移有关(P＜0.05),而与病理类型无关(P＞0.05).在卵巢癌组织中,KiSS-1与MMP-9、NF-κBp65蛋白表达呈显著负相关关系(rs=-0.547,P＜0.05;rs=-0.414,P＜0.05);MMP-9与NF-κBp65蛋白表达呈显著正相关关系(rs=0.695,P＜0.05).结论 KiSS-1基因可能对卵巢癌的转移起一定的抑制作用;KiSS-1基因可能通过抑制MMP-9、NF-κB基因,从而发挥抑制卵巢癌转移的作用.
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子宫主韧带弹性蛋白、赖氨酰氧化酶和弹性蛋白酶抑制剂基因表达与盆腔器官脱垂发生的关系
目的 探讨子宫主韧带中弹性蛋白、赖氨酰氧化酶和弹性蛋白酶抑制剂基因表达变化与盆腔器官脱垂(POP)发生、发展的关系.方法 选择因子宫脱垂而行子宫全切除术的患者60例(POP组),其中绝经前27例,绝经后33例;选择同期因妇科良性疾病、无压力性尿失禁或POP而行子宫全切除术的患者60例为对照组,其中绝经前42例,绝经后18例.于手术中取子宫主韧带,采用RT-PCR技术检测弹性蛋白、赖氨酰氧化酶和弹性蛋白酶抑制剂mRNA的表达,免疫组化蛋白印迹法检测3种基因的蛋白表达.结果 (1)弹性蛋白mRNA及蛋白表达:POP组患者绝经前、后子宫主韧带弹性蛋白mRNA的表达分别为0.42±0.22、0.26±0.20,子宫主韧带弹性蛋白的蛋白表达分别为0.44±0.32、0.20±0.19;对照组患者绝经前、后子宫主韧带弹性蛋白mRNA的表达分别为0.79±0.30、0.63±0.23,子宫主韧带弹性蛋白的蛋白表达分别为0.89±0.27、0.78±0.25,两组绝经前及绝经后患者子宫主韧带弹性蛋白mRNA及蛋白表达分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)赖氨酰氧化酶mRNA及蛋白表达:POP组患者绝经前、后赖氨酰氧化酶mRI~A的表达分别为0.37±0.18、0.20±0.14,赖氨酰氧化酶的蛋白表达分别为0.45±0.27、0.26±0.21,对照组患者绝经前、后子宫主韧带赖氨酰氧化酶mRNA表达分别为0.65±0.22、0.53±0.20,子宫主韧带赖氨酰氧化酶的蛋白表达分别为0.85±0.39、0.69±0.31,两组绝经前及绝经后患者子宫主韧带赖氨酰氧化酶mRNA及蛋白表达分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).POP组患者绝经后子宫主韧带弹性蛋白、赖氨酰氧化酶mRNA及蛋白表达均明显低于绝经前患者(P＜0.05).(3)弹性蛋白酶抑制剂mRNA及蛋白表达:POP组患者绝经前、后子宫主韧带弹性蛋白酶抑制剂mRNA表达分别为1.33±0.35、1.47±0.37,子宫主韧带弹性蛋白酶抑制剂的蛋白表达分别为0.85±0.30、0.76±0.35,对照组患者绝经前、后子宫主韧带弹性蛋白酶抑制剂mRNA表达分别为0.62±0.25、0.55±0.24,子宫主韧带弹性蛋白酶抑制剂的蛋白表达分别为0.21±0.15、0.29±0.22,两组绝经前及绝经后患者子宫主韧带弹性蛋白酶抑制剂mRNA及蛋白表达分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);POP组患者绝经前、后弹性蛋白酶抑制剂mRNA及蛋白表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05).POP患者子宫主韧带弹性蛋白与赖氨酰氧化酶mRNA及蛋白表达量呈明显的直线正相关关系(r=0.9959、0.9708,P＜0.05),而弹性蛋白与弹性蛋白酶抑制剂mRNA及蛋白表达量无直线相关性(r=-0.0402、-0.0365,P＞0.05).结论 POP患者子宫主韧带弹性蛋白、赖氨酰氧化酶表达下调及弹性蛋白酶抑制剂表达上调,可能与POP发生有关.
关键词： 子宫脱垂 弹性蛋白 蛋白赖氨酸6-氧化酶 蛋白质类 -
卵巢上皮性癌组织中KiSS-1基因及其受体GPR54 mRNA的表达及其意义
目的探讨肿瘤转移抑制基因KiSS-1及其受体GPR54 mRNA在卵巢上皮性癌组织中的表达及其意义. 方法采用RT-PCR技术检测37例卵巢上皮性癌、15例卵巢交界性上皮性肿瘤、15例卵巢良性上皮性肿瘤及11例正常卵巢组织中KiSS-1基因及其受体GPR54 mRNA的表达,并分析其与各临床病理指标的相关性.结果 KiSS-1 mRNA在卵巢上皮性癌及卵巢交界性上皮性肿瘤组织中的阳性表达率(分别为68%、60%)及表达水平(分别为0.82±0.09、0.80±0.10)均显著高于卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织(分别为20%、18%和0.65±0.10、0.66±0.06;P均<0.05);且KiSS-1 mRNA在卵巢上皮性癌组织中的阳性表达率和表达水平均与手术病理分期和淋巴结转移有明显相关性(P<0.05).GPR54 mRNA在卵巢上皮性癌、卵巢交界性上皮性肿瘤、卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织中的阳性表达率(分别为70%、67%、60%和45%)及表达水平(分别为0.79±0.07、0.76±0.10、0.73±0.07和0.78±0.08)分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05);GPR54 mRNA在卵巢上皮性癌组织中的阳性表达率和表达水平与手术病理分期、病理分级、病理类型、淋巴结转移及腹水生成均无相关性(P>0.05).结论 KiSS-1基因及其受体GPR54可能在抑制卵巢上皮性癌浸润和转移的过程中起重要作用.
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SLP-2 mRNA在子宫内膜癌中的表达及其意义
目的探讨SLP-2 mRNA在子宫内膜癌中的表达,及其在子宫内膜癌发生、发展中的作用.方法采用半定量RT-PCR技术检测32例子宫内膜癌组织和28例正常子宫内膜组织中SLP-2 mRNA的表达情况;并用表达SLP-2基因的正义和反义质粒,分别转染子宫内膜癌细胞系HEC-1B细胞,RT-PCR技术检测转染前、后HEC-1B细胞中SLP-2 mRNA的表达情况,观察转染前、后细胞的形态变化;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况,并绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果子宫内膜癌组织中SLP-2 mRNA的表达水平为1.6±0.7,正常子宫内膜组织为0.7±0.3,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).表达SLP-2基因的正义和反义质粒成功转入HEC-1B细胞中,正义质粒转染后SLP-2 mRNA表达水平增加约2.4倍,细胞生长变快,其中G1期减少12.5%,S期增高8.0%;反义质粒转染后SLP-2 mRNA表达水平减少50%,细胞生长变慢,其中G1期增高10.5%,S期减少9.8%. 结论子宫内膜癌中SLP-2 mRNA的高表达与子宫内膜癌发生、发展有一定关系.
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瘦素对人卵巢黄素化颗粒细胞雌、孕激素分泌的体外实验研究
目的探讨瘦素在体外对人卵巢颗粒细胞雌激素和孕激素生成的影响。方法将来自体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的卵巢黄素化颗粒细胞纯化后，在不同浓度瘦素(0、10、30、100、300 ng/ml) 和人绝经期促性腺激素（hMG，0、0.1、0.2、0.5、1、2、5、10 IU/ml）单独或联合作用下进行体外培养，收集培养液，采用放射免疫方法测定颗粒细胞产生雌二醇及孕酮的量。结果不同浓度的瘦素对雌二醇、孕酮的生成无影响；hMG为5 IU/ml时，雌二醇水平平均为2.36×10-11 mol/L，加入不同浓度瘦素（10、30、100、300 ng/ml），雌二醇的生成均受到明显的抑制，随瘦素浓度增加，雌二醇水平逐渐降低（P<0.05），孕酮水平无明显变化；hMG浓度小于0.5 IU/ml时，瘦素对雌二醇生成无影响；hMG浓度大于0.5 IU/ml、瘦素为100 ng/ml时，雌二醇水平低于不加瘦素的对照（P<0.05）。结论瘦素参与卵巢颗粒细胞激素生成的调节，在卵泡发育和黄体形成中有一定的作用。
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子痫前期患者滋养细胞中KiSS-1基因及基质金属蛋白酶9表达的临床意义
目的探讨胎盘滋养细胞中KiSS-1基因及基质金属蛋白酶(MMP)9在子痫前期发病中的作用及其与新生儿预后的相关性.方法采用RT- PCR和western blot(蛋白印迹法)检测40例子痫前期患者(其中轻度15例、重度25例,子痫前期组)和20例正常足月正常妊娠妇女(正常妊娠组)胎盘滋养细胞中KiSS-1 mRNA和MMP-9 mRNA 及其蛋白的表达,并与其临床症状及其新生儿围产结局进行相关性分析.结果 (1)子痫前期组滋养细胞中KiSS-1mRNA及其蛋白表达水平分别为1.73±0.24和(78.4±8.0) μg /100 μg总蛋白,其中轻度患者为1.50±0.15和(72.4±6.9) μg/100 μg总蛋白, 重度患者为1.87±0.20和(83.5±3.6) μg /100 μg总蛋白;均显著高于正常妊娠组的1.24±0.25和(63.4±2.7) μg /100 μg总蛋白(P<0.01).(2)子痫前期组MMP-9 mRNA及其蛋白表达水平分别为0.09±0.06和(9.6±4.3) μg /100 μg总蛋白,其中轻度患者为0.11±0.08和(10.0±3.2) μg /100 μg总蛋白, 重度患者为0.07±0.05和(7.8±2.0) μg /100 μg总蛋白;均显著低于正常妊娠组的0.17±0.10和(17.9±7.3) μg /100 μg总蛋白(P<0.01).(3)子痫前期组KiSS-1 mRNA及其蛋白表达水平与中心动脉压(MAP)和24 h尿蛋白定量呈正相关,r分别为0.610(P=0.023)、 0.713(P=0.011)和0.397( P=0.003)、0.638(P=0.002);与有、无眼底动脉痉挛呈显著正相关,r分别为0.499( P=0.000)和0.511(P=0.000).子痫前期组MMP-9 mRNA及其蛋白表达水平则与MAP、24 h尿蛋白定量及有、无眼底动脉痉挛呈显著负相关,r分别为0.561(P=0.042)、 0.571(P=0.022)、0.275(P=0.039)、 0.375 (P=0.048)、0.346(P=0.001)、 0.543(P=0.000).(4)子痫前期组MMP-9 mRNA及其蛋白表达水平与新生儿体重呈显著正相关,r分别为 0.651( P=0.000)和0.544(P=0.004);KiSS-1mRNA及其蛋白表达水平与其呈显著负相关,r分别为0.759( P=0.000)和0.865(P=0.000).(5)随着新生儿窒息程度加重,MMP-9 mRNA及其蛋白表达水平呈降低趋势,KiSS-1mRNA及其蛋白表达水平呈升高趋势(P均<0.05).结论 MMP-9和 KiSS-1表达失衡在子痫前期发病中起重要作用,且与新生儿预后密切相关.
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异常出生体重胎儿父系表达基因1和3的表达与启动子区甲基化及其意义
目的 研究印记基因父系表达基因1(paternally expressed gene 1,PEG1)与父系表达基因3(paternally expressed gene 3,PEG3)在无妊娠并发症孕妇分娩的异常出生体重儿胎盘组织中的mRNA表达和启动子区甲基化及其意义.方法 应用实时定量PCR技术和基因组DNA亚硫酸氢钠处理后直接测序法检测高出生体重组(出生体重≥4000 g,22例)、低出生体重组(出生体重≤2500 g,14例)和正常出生体重组(出生体重>2500 g且<4000 g,24例)胎盘组织中PEG1与PEG3的mRNA表达和启动子区甲基化,并分析其与出生体重的关系.结果 (1)PEG1与PEG3 mRNA表达水平:高出生体重组分别为11.66±9.01与16.45±10.13,低出生体重组0.84±0.49与0.85±0.67,正常出生体重组1.10±0.77与1.11±0.60.两基因高出生体重组与正常出生体重组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),低出生体重组与正常出生体重组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);(2)PEG1启动子区甲基化水平:高出生体重组为(49.7±2.3)%,低出生体重组为(50.2±2.1)%,正常出生体重组为(50.3±1.9)%(P>0.05);PEG3启动子区甲基化水平,高出生体重组为(13.1±2.7)%,低出生体重组为(16.7±3.5)%,正常出生体重组为(16.2±1.8)%,仅高出生体重组与正常出生体重组之间差异有统计学意义(P<0.05),但正常出生体重组与低出生体重组之间差异无统计学意义(P>0.05);(3)PEG3 mRNA的表达与启动子区甲基化水平呈负相关(r=-0.963,P<0.01).结论 PEG1和PEG3的表达上调可能是发生高出生体重儿的原因之一,PEG3的启动子区甲基化水平的降低可能参与其表达上调,并且可能与高出生体重的产生相关.
关键词： 出生体重 甲基化 蛋白质类 Kruppe1样转录因子类 胎盘 -
脐血瘦素水平与胎儿宫内生长发育相关性研究
目的 探讨脐血瘦素来源及其在胎儿宫内发育成熟中作用.方法 采用放免检测孕母外周静脉血与新生儿脐血瘦素水平,采用Ponderal指数[PI=100×体重(g)/身长(cm)3]估测新生儿营养状态,采用weststrate公式[F%=0.8848×SFT4+0.022]估测新生儿体脂含量.结果 65例新生儿脐血瘦素水平(±s)为(11±4) ng/ml,30例孕母外周血瘦素水平为(20±7) ng/ml;脐血瘦素水平与孕母外周血瘦素水平无显著相关(r=0.11,P＞0.05),与胎盘重量、新生儿体脂含量(%)显著相关(分别为0.71、0 .28,P＜0.05 ).大于胎龄儿(LGA)脐血瘦素水平显著高于适于胎龄儿 (P=0.014) ;小于胎龄儿(SGA)脐血瘦素水平显著低于适于胎龄儿(P=0.0072);脐血瘦素水平与新生儿Ponderal 指数(PI)显著相关(r=0.624,P＜0.01 ).结论 脐血瘦素反映胎儿宫内生长状况;胎盘可能是脐血瘦素重要来源,胎盘瘦素可能对胎儿宫内生长发育有促进作用.
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子(癎)前期患者与正常妊娠孕妇羊水差异蛋白质谱分析
目的 探讨并初步筛选子(癎)前期患者的特异性羊水标志物.方法 利用CMlO蛋白芯片和表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI TOF MS)技术,检测8例重度子(癎)前期患者(研究组)和8例晚孕期正常孕妇(对照组)羊水中差异蛋白质的相对含量.并在8例中孕期(孕20±周)正常孕妇(中孕组)羊水中寻找有无这些差异蛋白的存在及其含量变化情况. 结果 (1)研究组与对照组羊水蛋白质在相对分子质量/电荷比值(质/荷比)2000～50 000范围内,有4种不同质荷比蛋白质的相对含量有明显差异.(2)研究组质荷比为4653的蛋白质相对含量[(1.52±0.71)%]明显低于对照组[(3.16±1.64)%](P＜0.05),而质荷比为384.1、8520、8579的蛋白质相对含量分别为(7.02±4.37)%、(3.74±1.96)%、(5.09±1.93)%,均高于对照组[(2.58±1.09)%、(1.83±0.67)%、(3.06±1.57)%,P均＜0.05].(3)中孕组羊水中可以找到这四种差异蛋白质.结论 子(癎)前期患者与正常孕妇羊水蛋白质质谱存在明显差异.有4种不同质荷比相对应的蛋白质可能是子(癎)前期患者羊水特异性的生物标志物.
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缺氧诱导丝裂原因子对胎肺形态发育及表面活性蛋白表达的影响
目的 探讨缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF)对胎肺形态发育及表面活性蛋白B(surfactant protein B,SP-B)、表面活性蛋白C(snrfactant protein C,SP-C)表达的调控作用.方法 体外分离、培养小鼠第13.5天胎肺组织,分为HIMF处理组:在培养基中添加重组HIMF蛋白,终浓度为100 nmol/L;对照组培养基中不加任何处理.分别在培养0、48、72 h后,每组每时间点选取20例胎肺采用倒置显微镜和HE染色观察胎肺形态学和组织学的改变,采用Western印迹、免疫组化、实时逆转录-聚合酶链反应技术检测胎肺组织中SP-B和SP-C的蛋白、mRNA表达水平变化.结果 HIMF处理组培养48、72 h后,肺泡数目分别为(14.37±0.85)和(18.41±1.24)个/高倍视野,肺泡分支的数目分别为(2.51±0.35)和(3.28±0.51)个/高倍视野,均较对照组相应时间点[分别为(8.09±0.92)、(9.54±0.78)、(1.45±0.32)和(1.69±O.43)个/高倍视野]增加,差异有统计学意义(P<0.05).对照组胎肺体外培养72 h后,SP-B、SP-C蛋白表达较少,染色强度弱,主要定位于Ⅱ肺泡上皮细胞;HIMF处理组可见Ⅱ型肺泡上皮细胞内SP-B、SP-C弥漫表达,以靠近肺组织边缘为甚.HIMF处理组培养48和72 h后,胎肺组织中SP-B、SP-C蛋白和mRNA水平均较对照组相应时间点增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 HIMF可能通过上调胚胎组织中SP-B和SP-C的表达,促进胎肺形态发育,为进一步研究HIMF在胚胎肺泡发育和成熟中的作用奠定了基础.
关键词： 蛋白质类 神经生长因子 肺 胚胎发育 肺表面活性物质相关蛋白质类 -
辅助生殖子代胎盘PEG10基因表达及其甲基化情况
目的 探讨辅助生殖子代胎盘中印记基因PEG10的表达及启动子区甲基化状态,并分析两者的关系. 方法 运用实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术、免疫组织化学、蛋白质印迹法及甲基化特异性PCR技术检测2010年12月至2012年5月在郑州大学第三附属医院行剖宫产分娩的30例通过辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)妊娠(ART组)和30例行剖宫产分娩的自然妊娠子代(对照组)胎盘中PEG10的表达及其启动子区甲基化状态,并分析两者的关系.采用两独立样本t检验、x2检验和2×2配对资料的关联性分析方法对数据进行统计学分析. 结果 ART组PEG10 mRNA的相对表达量高于对照组(0.99±0.51与0.70±0.44),差异有统计学意义(t=2.504,P=0.015).ART组PEG10蛋白质表达阳性率和表达水平均高于对照组[分别为66.7％(20/30)与25.0％(12/30),x2=4.286;0.70±0.08与0.33±0.04,t=3.646],差异有统计学意义(P值均＜0.05).ART组甲基化阳性率低于对照组[分别为30.0％(9/30)与56.7％(17/30)],差异有统计学意义(x2=4.344,P=0.037).ART组甲基化部分的PEG10相对表达量低于非甲基化部分(0.66±0.31与1.14±0.44,t=2.947,P=0.006).PEG10甲基化状态与表达相关(r=0.420,P=0.035). 结论 ART子代胎盘中PEG10表达上调,可能导致ART孕妇发生子痫前期和胎儿生长受限及其子代发生低出生体重儿的风险增加.PEG10表达与其甲基化状态有负相关倾向,启动子区甲基化可能是其表达调节方式之一.
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不同母乳处理方法及泌乳时间对母乳宏量营养素的影响
目的 探讨巴氏消毒、冷冻温度及时间、泵奶时长及泵奶管道类型对母乳宏量营养素的影响,及一天中不同时间段分泌的母乳的宏量营养素和能量是否存在差异. 方法 收集2016年4月至12月在南京医科大学附属妇产医院新生儿科住院治疗的1 88例患儿母亲(健康志愿者)的202份母乳样本,检测巴氏消毒、冷冻温度及时间、泵奶时长及泵奶管道类型对母乳宏量营养素的影响以及一天中不同时间段分泌母乳的宏量营养素是否存在差异.在进行相应处理前后各抽取5 ml母乳,使用母乳分析仪检测其中的宏量营养素和能量,并采用配对f检验、重复测量的方差分析、单因素方差分析及LSD-t检验进行统计学分析. 结果 巴氏消毒后较消毒前,母乳中脂肪、蛋白质含量及能量下降[分别为(3.69±0.98)与(4.22±1.00) g/dl,t=9.405;(2.12±0.34)与(2.21±0.34) g/dl,t=4.785;(69.77±9.35)与(74.94±9.53) kcal/dl (1 kcal-4.184 kJ),t=9.470],碳水化合物含量上升[分别为(6.66±0.17)与(6.62±0.17) g/dl,t=-3.442],差异均有统计学意义(P值均＜ 0.01).-80℃较-20℃冷冻母乳的蛋白质含量高,差异有统计学意义(F温度=4.990,P温度-0.027).-20℃储存的母乳,在冷冻7、15、30、60和90 d时脂肪、蛋白质含量和能量较新鲜母乳均下降,冷冻90 d时下降为明显;而碳水化合物含量在冷冻15、30和60 d时较新鲜母乳升高,冷冻90 d时较30和60 d时下降;-80℃储存的母乳脂肪、蛋白质含量和能量在冷冻60和90 d时较新鲜母乳下降,碳水化合物含量在冷冻60 d时高(LSD检验,P值均＜0.05).无论是通过6、8、10号胃管还是输液连接管,泵奶1、2和3h时的母乳脂肪含量较未进行处理的新鲜母乳降低(LSD检验,P值均＜0.05);通过6号胃管的母乳在泵奶2和3h时,以及通过8、10号胃管及输液连接管的母乳在泵奶1、2和3h时的能量较未进行处理的新鲜母乳降低(LSD检验,P值均＜ 0.05).母乳脂肪含量和能量在12:01～15:00时间段分别为(5.16±0.93) g/dl和(86.96±9.35) kcal/dl,高于00:01～03:00[分别为(4.54±0.75) g/dl和(80.77±7.75) kcal/dl]、03:01～06:00[分别为(4.6l±0.75) g/dl和(81.44±7.69) kcal/dl]和2l:01～24:00[分别为(4.71±0.88) g/dl和(82.44±8.82) kcal/dl],在09:01～12:00时间段[(5.01±0.94)g/dl和(85.31±9.62) kcal/dl]高于00:01～03:00,母乳脂肪含量在09:01～12:00时间段高于03:00～06:00(LSD检验,P值均＜ 0.05). 结论 为满足婴儿生长发育需求,条件允许的情况下尽可能选择亲喂,减少母乳处理操作.
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获得性肾小球疾病肾组织中nephrin的表达
目的探讨nephrin在蛋白尿发生中的可能作用.方法用免疫组化及图象分析的方法,分别对临床表现为大量蛋白尿,单纯性血尿患儿及对照组肾组织切片上nephrin的表达进行检测.结果 (1) 大量蛋白尿组的nephrin表达量为0.62±0.24,与单纯性血尿组(0.67±0.23)及对照组(0.82±0.17)比较三者之间差异无显著意义(P＞0.05).(2)大量蛋白尿伴弥漫性足突融合组nephrin表达量为0.61±0.25,与大量蛋白尿不伴弥漫足突融合组(0.62±0.25)及对照组比较三者间差异无显著意义(P＞0.05).(3)弥漫足突融合微小病变组nephrin表达量为0.50±0.15,与非微小病变(0.65±0.27)及对照组比较差异无显著意义(P＞0.05).结论在获得性肾小球疾病中,用免疫组化的方法未能检测到肾小球nephrin的表达变化.
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极低/超低出生体重儿出生早期蛋白质摄入及能量供给状况的研究
目的 探讨极低/超低出生体重儿出生早期蛋白质摄入、能量供给状态及其与体格发育的关系.方法 回顾性调查2006年1月1日至2011年9月30日,北京大学第一医院新生儿重症监护病房出生体重＜1500 g、住院时间2周、体重达1800 g出院的早产儿资料.按胎龄分为＜32周组和≥32周组,比较两组早产儿体重增长情况,分析蛋白质摄入及能量供给与体重增长的关系,并探讨血清尿素氮(BUN)浓度在蛋白质摄入量评估中的作用.结果 符合纳入标准的早产儿共93例,胎龄＜32周组69例,≥32周组24例.胎龄＜ 32周早产儿生后体重比胎龄≥32周早产儿下降程度(％)严重,[(9.2±4.4)比(5.0±3.1),P=0.000];恢复出生体重时闾慢,(10.6 ±3.8)d比(7.1±2.6)d(P =0.000);第1、4、5周的体重增长速度[g/(kg·d)]慢,[分别为(-4.5±9.3)比(3.4±6.9),P =0.000,(13.5±7.3)比(19.2±4.9),P=0.001,(14.6±5.6)比(18.2 ±4.5),P =0.031];第1～5周能量供给(P分别为0.000,0.000,0.025,0.001,0.008)及第1、4、5周蛋白质摄入低(P分别为0.009,0.006,0.032).胎龄＜32周及胎龄≥32周早产儿出院时生长迟缓比例均很高,分别为47.8％及95.8％ (P =0.000);与出生时胎龄-体重比较,胎龄＜32周者比≥32周增加明显(43.5％比20.8％,P=0.000).恢复到出生体重的时间、机械通气治疗与体重增长呈负相关(分别为β=-0.591,P=0.000和β=-0.281,P=0.005),平均能量摄入量、达足量喂养时间与体重增长正相关(分别为β=0.202,P =0.021和β=0.354,P =0.000).出生后BUN呈逐周下降趋势,第3周蛋白质摄入量与第3周末BUN浓度正相关(r=0.420,P=0.000).生后3、4周末时血清BUN水平分别为1.44、1.49 mmol/L提示相应阶段蛋白质摄入量低于3 g/(kg·d)其诊断敏感度及特异度分别为0.653、0.833及0.60、0.80.结论 极低/超低出生体重儿,特别是胎龄＜32周早产儿,生后早期蛋白质供给、能量摄入均不足,住院期闾生长迟缓的问题较突出.早期严重合并症影响体格发育,适当延长肠道外营养时间有利于体重增长.3周后低血清BUN浓度可提示蛋白质摄入量低.
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重组人类肥胖抑素抗血清的研究
目的研究重组人类肥胖抑素抗血清的制备及应用.方法以高度纯化的体外重组肥胖抑素免疫兔子,获得兔抗人类肥胖抑素抗血清,应用双向免疫扩散电泳、免疫沉淀法、蛋白质印迹法及放射免疫法鉴定其滴度并研究应用其检测重组肥胖抑素的特异性和灵敏度,建立标准曲线并应用免疫沉淀法和蛋白质印迹法进行临床样本的初步检测.结果双向免疫扩散电泳测定抗血清滴度为1∶16.应用放射免疫法确定抗血清工作稀释度为1∶2 000,并建立检测范围在0.78～100μg/L的标准曲线.应用免疫沉淀法结合蛋白质印迹法进行检测,可见抗血清与重组人类肥胖抑素特异性结合,检测灵敏度可达1 μg/L;抗血清与儿童血浆中肥胖抑素特异性结合,吸光度扫描定量为10μg/L.同时以具有生物活性的重组人类肥胖抑素作为免疫原所获得的抗体与变性及非变性重组蛋白均可特异性结合.结论获得特异性兔抗人类肥胖抑素抗血清,并可用于临床检测生物样品中的肥胖抑素水平.应用该抗血清检测重组及天然人类肥胖抑素的特异性及灵敏性较高.
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两种新型Wiskott-Aldrich综合征蛋白基因突变的鉴定
目的明确3例Wiskott-Aldrich综合征(WAS)患儿WAS蛋白(WASP)基因突变的类型.方法根据典型临床表现(血小板减少、湿疹、反复感染),及淋巴细胞和血小板扫描电镜改变,采用PCR直接测序法,对3例疑为WAS的患儿及其母亲的WASP基因进行序列分析.结果以正义、反义引物扩增的PCR产物分别测序,发现两种新型WASP基因突变:2例WAS孪生兄弟WASP基因第10外显子,第984位核苷酸C缺失突变(984delC),导致317位密码子后移码突变,于444位密码子提前出现终止密码(H317fsX444);其母亲为此突变WASP基因携带者.另1例WAS患儿WASP基因第11外显子,第1388位核苷酸由G替换为T(1388G→T),为无义突变,使第452位密码子提前变为终止密码(E452X).其母亲无此突变WASP基因.结论鉴定出两种新型WASP基因突变,WASP基因序列分析对于不典型和散发WAS的诊断及WASP突变基因携带者的检出有重要作用.
关键词： Wiskott-Aldrich综合征 蛋白质类 突变 杂合子 外显子 -
多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统在胃癌诊断和病情监测中的价值
目的:探讨多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统在胃癌诊断和病情监测中的价值.方法:采用蛋白芯片技术测定153例胃癌患者血清的肿瘤标志物表达水平.结果:CA119、CEA、CA125、C-42、Fer、AFP、CA153、HCG、PSA、NSE和HGH 11项血清肿瘤标志物在胃癌患者中的阳性检出率分别为37.9%(58/153)、24.2%(37/153)、20.2%( 31/153 )、20.2%(31/153)、19.6%(30/153)、15.0%(23/153)、13.1%(20/153)、4.6%(7/153)、4.6%(7/153)、1.3%( 2/153 )和1.3%(2/153);以任意2项标志物同时阳性为判断标准,则阳性检出率为47.1%,高于任何单项检测阳性率,但是特异性为90.9%;采用3项以上组合判断则敏感性明显下降.肿瘤标志物与胃癌分期关系中,CA199、CEA、C-42、Fer、CA153对Ⅲ和Ⅳ期胃癌均比较敏感;CA125和AFP仅对Ⅳ期胃癌敏感性高;而分型结果表明,管状腺癌CA199阳性率高(45.2%),黏液腺癌CA125高(38.7%),低分化腺癌CEA高(39.0%).结论:多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统的应用,提高了胃癌诊断的敏感性和特异性;为胃癌的病情监测提供了一系列较为敏感的指标,并对胃癌病理类型的辅助诊断有一定的应用价值.
