OATP4A1、OATP2B1在妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘表达的意义

目的：探讨有机阴离子转运多肽4A1（OATP4A1）、OATP2B1在妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）胎盘中表达的意义。方法：选择2011年8月—2012年8月在湖北医药学院附属太和医院产科行剖宫产的20例ICP患者为ICP组，选取同期因社会因素行剖宫产的正常晚期妊娠妇女20例为对照组。采用实时逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）检测2组妊娠妇女胎盘组织中OATP4A1、OATP2B1的mRNA表达水平，数据结果以荧光达到循环数（threshold cycle CT值）进行统计，数据分析采用2-△CT法，其中△CT=目标基因的CT值－内参的CT值。结果：①与对照组比较，ICP组的OATP4A1 mRNA表达水平上调（P＜0.05），OATP2B1的mRNA表达水平下调（P＜0.01）。②ICP组母血、脐血甘胆酸水平较对照组均明显升高（P＜0.01）。结论：ICP胎盘中OATP4A1的mRNA表达水平上调，可能与体内胆盐淤积，尤其是牛磺酸胆盐淤积有关，推测OATP4A1的表达上调在ICP发生中具有一定作用；OATP2B1的表达水平下调，可能与ICP体内雌激素代谢异常导致母体持续高水平雌激素刺激以及敏感性改变有关。

脑胶质瘤低氧诱导因子-1α的表达及其意义

目的探讨低氧诱导因子-1α在脑胶质瘤中的表达及其意义.方法60例脑胶质瘤标本中Ⅰ级11例(毛细胞型星形细胞瘤8例、脉络丛乳头状瘤2例、黏液乳头状型室管膜瘤1例);Ⅱ级20例(弥漫型星形细胞瘤11例、少突胶质细胞瘤5例、室管膜瘤2例、多形性黄色瘤型星形细胞瘤2例);Ⅲ级21例(间变性星形细胞瘤12例、间变性少突胶质细胞瘤6例、间变性室管膜瘤3例);Ⅳ级8例(均为胶质母细胞瘤).采用免疫组织化学方法检测胶质瘤标本中低氧诱导因子-1α的表达变化,并与胶质瘤体积及患者年龄、性别进行统计学分析.结果(1)胶质瘤组织低氧诱导因子-1α表达呈阳性反应,主要位于细胞质和(或)细胞核,具有明显的异质性;肿瘤浸润边缘部的肿瘤细胞表达明显增强;而阴性对照标本和10例对照脑组织标本则无表达.胶质瘤组织中低氧诱导因子-1α阳性表达率为71.67%(43/60),其中Ⅰ级为27.27%(3/11),Ⅱ级70.00%(14/20),Ⅲ级85.71%(18/21),Ⅳ级100%(8/8).高级别胶质瘤者低氧诱导因子-1α阳性表达率明显高于低级别者,不同级别间差异有高度统计学意义(x2=15.907,P＜0.01);表达强度与病理级别间呈高度正相关(rs=0.480,P＜0.01).(2)低氧诱导因子-1α表达与患者年龄、性别及原发肿瘤体积的大小等均无相关性(均P＞0.05).结论脑胶质瘤低氧诱导因子-1α的表达强弱与肿瘤病理分级相关.

重型颅脑创伤患者早期肠内营养支持治疗的临床观察

观察颅脑创伤后早期肠内营养治疗与中心静脉置管肠外营养对重型颅脑创伤患者近期预后的影响.结果显示,早期肠内营养组患者治疗第7和14天时,血清总蛋白[(62.04±2.09)和(66.04±2.27) g/L]、白蛋白[(37.75±2.86)和(43.43±2.37) g/L]以及前白蛋白[(177.87±13.89)和(199.43±11.01) mg/L]水平高于肠外营养组(均P=0.000);治疗第7天时胃出血发生率(14.29％,4/28)低于肠外营养组(39.29％,11/28),且差异具有统计学意义(x2=4.462,P=0.035);第14天时,肠内营养组无一例发生胃出血,与肠外营养组(14.29％,4/28)差异无统计学意义(x2=2.423,P=0.120).两组患者治疗期间肺感染发生率,组间差异无统计学意义(x2=0.287,P=0.592).提示重型颅脑创伤患者应早期接受肠内营养支持治疗,提供足够的营养支持,减少胃出血发生率.

阿尔茨海默病蛋白质组学研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种临床常见的中枢神经系统变性疾病.目前,全世界约有2430万例痴呆患者,每年新发病例460万[1].

小鼠脑微血管内皮细胞在氧糖剥夺条件下的差异蛋白质组学研究

目的 对参与血-脑屏障组成的脑微血管内皮细胞在模拟缺血性脑损伤条件下的蛋白质组学变化特征进行研究,为深入理解缺血性脑损伤过程中血-脑屏障应答的分子学机制提供新的数据.方法 采用比较蛋白质组学方法,对正常培养条件和氧糖剥夺培养条件下的小鼠脑微血管内皮细胞系(bEnd.3细胞)进行研究,分析二者之间的差异蛋白质表达谱.结果 于氧糖剥夺培养条件下,小鼠脑微血管内皮细胞系中共发现52个蛋白质点的表达发生改变,通过串联飞行质谱成功鉴定45个蛋白质点,其中表达水平上调的41个,下调4个.根据基因本体论功能注释结果,这些蛋白质的功能分为糖代谢与能量产生、抗氧化损伤、细胞骨架重排、信号转导、可变剪接、蛋白折叠与降解等.其中约1/4的蛋白质与以往文献报道相似.即与缺血、缺氧损伤密切相关.结论 这些差异蛋白质的发现可促进对血-脑屏障病理生理机制的了解,为深入理解缺血性脑损伤的分子学机制提供了新的数据,并将为后续研究提供参考.

创伤性脑损伤大鼠海马蛋白质差异表达研究

目的 应用蛋白质组学方法分析研究大鼠创伤性脑损伤后海马组织差异表达蛋白质,为筛选脑损伤早期诊断的生物学标志物提供理论依据.方法 采用双向凝胶电泳分离总蛋白,硝酸银染色,PDQuest 7.0图像分析软件分析获得的差异蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对检测到的差异蛋白质点进行鉴定,获得肽质量指纹图谱,查阅蛋白质数据库得到所需蛋白质相关信息,分析大鼠创伤性脑损伤后4 h、8 h、12 h、24 h和48 h海马组织中差异表达蛋白质,每组样品电泳重复3次,每帧图谱检测到1800余个蛋白质点;选择2个背景清晰、重复性及分辨力良好、在各组表达差异明显并呈现时序性变化的蛋白质点进行质谱分析.结果 经双向凝胶电泳分离共获得18帧图,每组3帧,其中对照组及损伤后12 h组蛋白质图谱显示分离效果良好,蛋白质点清晰,点染色程度较深,数目较多.横纹和纵纹较少,图谱平均匹配率>80%.采用PDQuest 7.0图像分析软件对蛋白质图谱进行定量分析证实,相对分子质量为58.00×103的差异蛋白质为葡萄糖调节蛋白(葡萄糖调节蛋白58),在损伤后4 h、8 h和12 h表达水平上调;相对分子质量为28.40×103的差异蛋白质为蛋白酶体α亚单位3型.在损伤后4 h、8 h、12 h、24 h和48 h表达水平均上调.结论 葡萄糖调节蛋白58和蛋白酶体α亚单位3型可能与创伤性脑损伤的发生、发展密切相关,此为探讨脑损伤的发病机制提供了重要线索.

乳腺癌细胞通过PTHrP调节成骨细胞MCP-1基因表达

目的:探讨乳腺癌细胞分泌的甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)对成骨细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因表达的调节作用.方法:首先将10~(-8)mol/L剂量的PTHrP(1-34)作用于成骨细胞UMR106,同时设立对照组,半定量RT-PCR法分析对不同时间成骨细胞的MCP-1 mRNA表达;之后构建PTHrP受体(PTH1R)的shRNA重组质粒PrH1R/pRNAT,将其转染至成骨细胞UMR106,建立稳定表达的细胞系PTH1R/UMR106;将乳腺癌细胞MDA-MB231条件培养基(CM)分别作用于UMR106和PTH1R/UMR106,半定量RT-PCR法测定MCP-1的mRNA表达.结果:PTHrP可以促进成骨细胞MCP-1的表达,起始于3 h,6 h到达高峰(P＜0.05).乳腺癌细胞CM作用UMR106成骨细胞6 h后,MCP-1表达水平也较未处理组明显升高(分别为1.238 1±0.115 5和0.5984±0.0364,P＜0.05),而采用RNA干扰技术敲减PrrH1R表达后,乳腺癌细胞CM对成骨细胞MCP-1表达的作用明显减弱(降低至0.867 2±0.045 7,P＜O.05).结论:乳腺癌细胞可通过PTHrP调节成骨细胞MCP-1.

急性颅脑损伤患者脑脊液中髓鞘碱蛋白改变的临床意义

目的:探讨急性颅脑损伤患者脑脊液(CSF)中髓鞘碱蛋白(MBP)的变化及意义.方法:以同期非神经系统患者为对照,用放射免疫分析法测定62例急性颅脑损伤组患者CSF中MBP.结果:急性颅脑损伤组CSF中MBP明显高于对照组,急性弥漫性颅脑损伤(ADCI)组高于急性局灶性颅脑损伤(ALCI)组.ADCI组入院时GCS低于ALCI组,而GOS低于ALCI组.MBP与GCS、GOS均呈明显负相关.结论:急性颅脑损伤患者CSF MBP升高,测定CSF中MBP有助于判定急性颅脑损伤患者病情轻重及预后,有助于ADCI的诊断.

MTP-493基因型与2型糖尿病双下肢动脉闭塞症

目的:研究微粒体甘油三酯转移蛋白(MTP)基因多态性与2型糖尿病双下肢动脉闭塞症的关系.方法:利用PCR-RFlP方法对300例2型糖尿病患者的MTP-493位点基因型进行测定.再运用重组DNA技术对目的基因进行克隆测序,并对临床资料进行分析.结果:MTP-493T/T基因型患者的TC、TG、LDL-C和VLDL-C水平显著升高.MTP-493基因多态性与糖尿病双下肢动脉闭塞症相关.结论:MTP-493 T/T基因多态性与血脂异常密切相关,而且携带MTP-493基因型的2型糖尿病患者更易患双下肢动脉闭塞症.

2型糖尿病病人血浆瘦素水平的临床观察

瘦素(Leptin)是肥胖(ob)基因的蛋白质产物,是一种相对分子量约为16 ku的脂肪组织源激素[1].目前研究认为,瘦素可能作为脂肪-胰岛素分泌轴的一部分,参与胰岛素分泌的调节和胰岛素抵抗的形成[2].我们测定了2型糖尿病人血浆瘦素水平,并与胰岛素、血糖、体重指数等比较分析,观察2型糖尿病人血浆瘦素水平的变化特征.

Agouti基因及其相关蛋白与肥胖

衣原体噬菌体Vp2蛋白的生物临床价值分析

目的：明确衣原体噬菌体Vp2蛋白在病毒重组、筛查研究中的作用，评估Vp2的临床价值。方法以COBALT程序在线比对各株衣原体噬菌体衣壳蛋白Vp2蛋白序列；并以ProteinBlast的Distance tree功能构建种系发生树。以高保守区氨基酸序列为基础，采用Gamier-Robson法、Chou-Fasman法分析蛋白二级结构；以Karplus-Schulz法分析柔性区域；Kyte-Doolittle法、Hopp-Woods法分析亲水性；Emini法分析表面可及性；Jameson-Wolf法分析抗原指数。结果6株衣原体噬菌体Vp2蛋白序列高度保守，差异主要在Chp1与其他5株噬菌体的Vp2蛋白之间亲缘关系较远。各株噬菌体的Vp2蛋白均有α螺旋为主的二级结构，蛋白序列高保守区存在多个细胞表位。结论 Vp2蛋白性质保守，是衣原体噬菌体衣壳的重要组分。其蛋白分子结构复杂，高保守区有较强的免疫原性，在病毒重组、沙眼衣原体噬菌体野生株筛查研究中有实际研究价值。

RIP3基因重组质粒构建及其表达对MCF7细胞死亡方式的影响

目的：建立稳定过表达RIP3基因的乳腺癌细胞株，并证实融合蛋白在细胞内的表达、定位及对MCF7细胞死亡方式的影响。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测4种乳腺癌细胞及正常乳腺上皮细胞中RIP3 mRNA的表达。以正常乳腺上皮细胞MCF10A cDNA为模板，PCR扩增RIP3基因cDNA全长，将合成的RIP3编码区序列，克隆入mCherry载体的N末端，构建重组质粒mCherry-RIP3，对重组质粒进行酶切鉴定及DNA测序。钙法转染293T细胞，收集病毒感染MCF7细胞，杀稻瘟菌素(4 mg/L)维持筛选，构建稳定表达细胞株。Western blot、荧光显微镜等检测目的基因表达效率及蛋白定位。显微镜下观察肿瘤坏死因子（TNF）-α及Caspase抑制剂Z-VAD-FMK处理下mCherry-RIP3-MCF7细胞的死亡形态及比例。结果 RIP3 mRNA在乳腺癌细胞中普遍低表达。RIP3基因成功克隆入载体。过表达mCherry-RIP3基因的MCF7细胞可见红色荧光蛋白表达，定位于胞质。目的基因RIP3在转染细胞中为过表达。mCherry-RIP3转染后增强MCF7细胞对TNF-α联合Z-VAD-FMK诱导的细胞坏死的敏感性。结论成功构建RIP3基因过表达重组质粒，获得外源性RIP3稳定过表达的乳腺癌MCF7细胞株，mCherry-RIP3定位于胞质，并在TNF-α介导的程序性坏死中起作用。

补肾中药对体外蛋白非酶糖化产物的抑制作用

s的IR、相对IR与AG比较差异有统计学意义(P<0.05),肉苁蓉对非酶糖化抑制作用低于AG.结论 补肾中药怀牛膝、淫羊藿、熟地黄对体外蛋白非酶糖化产物有直接抑制作用.

高原红细胞增多症血浆纤维黏连蛋白研究

高原红细胞增多症(high altitude polycythemia,HAPC)的发病机制较复杂,我们采用固相双抗体夹心酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunologic sorbent assay,ELISA)法测定HAPC患者及西宁世居健康人群(对照组)血浆纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)浓度,初步探讨高原低氧环境人群中血浆FN的变化与HAPC之间的关系.

c-IAP2、Survivin基因在急性白血病中的表达及临床意义

凋亡抑制蛋白(IAPs)是近年来发现的一类细胞凋亡抑制蛋白家族.初是在杆状病毒中发现的,在许多物种中广泛存在.IAPs主要是通过抑制半胱氨酸蛋白酶(caspase)家族成员介导的蛋白酶级联反应过程中caspase-3、caspase-7、caspase-9及caspase前体(pro-caspase)的活性而发挥作用.其中,c-IAP2、Survivin是IAPs家族的两个重要的组成成员.在此项研究中,我们通过动态观察c-IAP2和Survivin基因在急性白血病细胞中的表达以及临床意义,从而进一步探讨凋亡调控基因的表达状态对急性白血病(AL)的发病和化疗反应的影响.

慢性肾功能衰竭患者超敏C反应蛋白水平的临床观察

目的 探讨慢性肾功能衰竭(CRF)患者超敏C反应蛋白(hs CRP)水平与肾功能、透析方式、营养状况及脂代谢之间的关系.方法 收集新华医院住院患者280例,测定血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、前白蛋白(PA)、总蛋白(TP)、白蛋白(alb)、hs CRP、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、脂蛋白(a)[Lp(a)]、载脂蛋白A(ApoA)、载脂蛋白B(ApoB)、体质量(kg)和患者入院当天的24小时尿蛋白定量;根据肾小球滤过率(GFR)将上述患者分为对照组(GFR≥90 ml/min)34例、肾功能不全组(GFR 30～89 ml/min)59例和肾功能衰竭组(GFR≤30 ml/min)187例;同时根据透析方式将肾功能衰竭患者分为非透析组78例,血透组88例和腹透组21例;比较各组间各项指标的相互关系.结果 hs-CRP与肾功能呈显著负相关(r＝-0.44,P＜0.01),与Lp(a)呈正相关(r=0.35,P＜0.01).腹透组的hs-CRP水平显著升高.在肾功能衰竭组中,hs CRP与PA、alb呈负相关(分别为r=-0.34,P＜0.01;r=-0.37,P＜0.01),而对TG、HDL-C、LDL-C、ApoA和ApoB的影响不明显.结论 CRF患者中存在hs-CRP水平升高的炎症反应;而炎症反应与CRF患者的腹膜透析方式、营养不良和高Lp(a)血症密切相关.

与炎症性肠病病情活动相关的因素

炎症性肠病(IBD)是一组病因未明的非特异性肠道炎症,包括克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC).由于IBD临床表现复杂多变,诊断缺乏特异性的指标,常因对病情活动的判断不及时而延误治疗.现将与炎症性肠病病情活动相关的因素综述如下.旨在为临床监测疾病的活动性提供依据.

肾氨基酸代谢与蛋白质的动力学控制

成人机体内肾脏蛋白质的含量和肾脏大小保持着十分恒定的状态,表明肾内蛋白质的合成与分解受到严格的调控.但有关人体肾脏蛋白质的调控机制尚未完全清楚.肾脏内蛋白质的代谢可受多种因素的影响,如肾氨基酸的来源、激素或生长因子、酸碱平衡、肾功能改变以及出现伴随进行性肾单位减少的肾损伤.氨基酸合成肾蛋白质的来源有多个方面.一方面,氨基酸可由动脉血进入肾细胞;另一方面,也可以来自经肾小球滤过和重吸收的低分子量蛋白质的降解.因此肾的质量不仅取决于从血中所获得的游离氨基酸,还取决于经肾脏滤过及降解的蛋白质.人体的肾脏具有较高的蛋白质更新率和亮氨酸氧化率.其蛋白质的代谢情况体现了蛋白质的动力学活动,肾内蛋白质的分解代谢可局部地反映人体蛋白质的更新.

尿液微量蛋白在肾损伤位置诊断中的价值

肾脏损伤后尿液常常出现蛋白质,严重损伤时大量血浆蛋白出现在尿中,常规方法即能检出.肾早期损伤有微量蛋白出现在尿中,尿微量蛋白可来自血浆,也可来自肾实质.这些微量蛋白在尿中的浓度较低,用常规方法不能检测出.目前用于肾早期损伤诊断的尿微量蛋白有许多种,为说明这些蛋白质的诊断价值,笔者把这些特殊蛋白归为血浆来源蛋白、肾小管细胞表达的蛋白(酶)和肾损伤后肾小管再生表达的蛋白3类综述如下.