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异甘草素的抗哮喘活性及其机制
目的 观察异甘草素(ISL)对豚鼠离体和在体气管平滑肌的松弛作用,并对其作用机制进行探讨.方法 采用豚鼠离体气管螺旋条法、喷雾致喘法和改良肺溢流法观察ISL对豚鼠气管平滑肌的舒张作用.结果 ISL对乙酰胆碱、氯化钾、组胺诱发的气管收缩有明显的舒张作用;ChTX和ODQ预孵育明显减少了ISL对离体气管平滑肌的舒张作用;ISL可显著延长豚鼠引喘潜伏期和对抗组胺所致豚鼠肺溢流量的增加.结论 ISL对豚鼠气道平滑肌具有明显的舒张作用,其机制很可能通过激活鸟苷酸环化酶,提高细胞中cGMP水平,开放Ca2+激活的钾通道.
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异甘草素通过增强BKCa电流舒张自发性高血压大鼠脑基底动脉:可溶性鸟苷酸环化酶/环磷酸鸟苷的作用
本文旨在研究异甘草素(isoliquiritigenin,ISL)对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)脑基底动脉的影响.在给予ISL干预前后,用尾动脉测压仪观察收缩压的变化,分离和制备脑基底动脉血管段,对SHR脑基底动脉依次给予1×10-5mol/L苯肾上腺素(phenylephrine,PE)、1×10-5mol/LPE+1×10-4mol/LISL和1×10-5 mol/L PE灌流后,用压力型小动脉仪测量脑基底动脉的直径,制备SHR脑基底动脉单个血管平滑肌细胞,用全细胞膜片钳记录技术观察大电导钙激活钾通道(large-conductance calcium-activated potassium channels,BKCa)电流的变化,并用ELISA技术检测SHR脑基底动脉内cGMP水平的变化.结果表明:给予ISL干预14天后,SHR收缩压由(218.3±1.6) mmHg降低至(119.2±1.9) mmHg (P＜ 0.01,n=6),与Wistar-Kyoto (WKY)大鼠相比没有显著差异;1×l0-4mol/L ISL舒张SHR脑基底动脉(P＜ 0.01,n=6);ISL可显著增加SHR脑基底动脉平滑肌细胞外向电流密度(P＜ 0.01,n=6),该增强作用可被1 × l0-3mol/L四乙胺(BKCa通道阻断剂)所阻断,而3×10-4 mol/L 4-氨基吡啶(Kv通道阻断剂)对ISL增强的平滑肌细胞外向电流密度无明显影响;1×10-5mol/L亚甲蓝(可溶性鸟苷酸环化酶阻断剂)可以抑制ISL增强的平滑肌细胞外向电流密度(P＜ 0.05,n=6);ISL可明显增加SHR脑基底动脉内cGMP水平(P＜ 0.05,n=6).以上结果提示:ISL可能通过增加脑基底动脉平滑肌细胞cGMP含量,增强BKCa通道介导的外向电流,从而发挥舒张SHR脑基底动脉的作用.
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异甘草素对创伤性脑损伤大鼠神经保护作用的实验研究
目的 观察异甘草素对创伤性脑损伤大鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化物(MDA)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和脑含水量的影响,初步观察异甘草素在TBI中的作用,探讨其在创伤性脑损伤(TBI)后促进脑组织康复的作用机制.方法 参照Feeney法建立大鼠脑外伤模型,将动物随机分为假手术组、脑外伤组、异甘草素治疗组,每组15只.术后2h异甘草素治疗组给予异甘草素30mg/kg药物腹腔注射治疗1次/d,脑外伤组和假手术组等量的生理腹腔注射治1次/d,5d后处死,采用终点法测定SOD和MDA,采用ELISA法检测脑组织、IL-6和TNF-α含量,干湿重法测量脑水含量,HE染色光镜下观察脑皮层及损伤灶组织形态变化.结果 与脑外伤组相比,异甘草素治疗后SOD活性明显升高(P＜0.05),MDA、IL-6、TNF-α及脑水含量减低(P＜0.05),损伤侧脑皮层及损伤灶组织病理学明显改善.结论 异甘草素可以促进创伤性脑损伤大鼠的脑组织具有神经保护作用,其机制可能与降低氧化应激和调节脑组织细胞因子有关.
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异甘草素固体脂质纳米粒中低分子肝素钠包封率的测定
目的 测定异甘草素固体脂质纳米粒中低分子肝素钠( LMWH)的包封率.方法 在Britton-Robinson(B-R)缓冲溶液中,天青A与LMWH相互作用,在662 nm处测定吸光度差值(△A),用△A对LMWH浓度进行线性回归.样品同法操作,测定LMWH的包封率.结果 LMWH的回收率在90.0％～102.5％之间,线性范围为100～1 000 μg/mL(r =0.999 1),异甘草素固体脂质纳米粒中LMWH的平均包封率为35％(n=5).结论 此法操作简单、准确,适用于试制剂的质量评价.
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异甘草素抑制胰腺癌SW1990细胞增殖及对survivin表达的影响
目的:研究异甘草素对人胰腺癌SW1990细胞增殖及细胞内survivin表达的影响.方法:体外培养SW1990细胞,给予不同浓度的异甘草素处理,MTT法检测异甘草素对SW 1990细胞增殖的影响,实时定量PCR技术检测肿瘤细胞survivin基因mRNA的表达,蛋白免疫印迹法检测survivin蛋白的表达.结果:在一定浓度范围内,异甘草素能显著抑制人胰腺癌SW1990细胞的增殖,并呈时间与剂量依赖性,且异甘草素能显著抑制人胰腺癌SW1990细胞内survivin基因mRNA及蛋白的表达.结论:异甘草素对人胰腺癌SW1990细胞增殖有明显的抑制作用,且可能与下调survivin基因mRNA及蛋白的表达有关.
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异甘草素诱导 NCI-H 157细胞凋亡及对 ERS 相关基因表达的影响
目的：研究异甘草素对人非小细胞肺癌 NCI-H157细胞增殖、凋亡及细胞内质网应激相关基因 ATF4、DDIT3和 TN-FRSF10B 表达的影响。方法体外培养 NCI-H157细胞,给予异甘草素处理,MTT 法检测不同浓度的异甘草素对 NCI-H157细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测不同浓度异甘草素对肿瘤细胞的凋亡发生率,实时定量 PCR 检测 NCI-H157细胞在不同浓度异甘草素处理后 ATF4、DDIT3和 TNFRSF10B 基因 mRNA 的表达。结果在一定浓度范围内,异甘草素能显著抑制人肺癌 NCI-H157细胞的增殖,并呈时间与剂量依赖性。异甘草素能显著诱导 NCI-H157细胞凋亡的发生,并上调 ATF4、DDIT3和 TNFRSF10B 基因在细胞内的表达(P <0.05~0.01)。结论异甘草素能够抑制人肺癌 NCI-H157细胞的增殖,诱导凋亡发生,且与激活内质网应激反应有关。
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HPLC测定逍遥丸中甘草苷、异甘草素和甘草酸的含量
目的 建立测定逍遥丸中甘草苷、异甘草素和甘草酸含量的方法.方法 色谱柱:Shim-packVP-ODS(150 mm× 4.6 mm,5.0 μm).流动相:甲醇-0.5％冰醋酸梯度洗脱；流速1 mL·min-1；检测波长0～7 min为276 nm,7～18 min为370 nm,18 min以后为254 nm.结果 甘草苷的线性范围是0.018 40～0.368 0 μg(r=0.999 8,平均回收率为97.96％,RSD为0.60％)；异甘草素的线性范围是0.015 2～0.304 0 μg(r=0.999 9,平均回收率为97.17％,RSD为1.02％)；甘草酸的线性范围是0.441 8～8.835 0μg (r=0.999 9,平均回收率为97.52％,RSD为1.06％).结论 所建立的方法简便可行、重复性好,可用于逍遥丸的质量控制.
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双波长切换HPLC同时测定桂枝甘草汤中4种成分的含量
目的 建立桂枝甘草汤中4种成分同时含量测定的方法.方法 采用高效液相色谱法,Kromasil C_18柱(4.6 mm×250 mm,5 gm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速:1.0 mLmin~1,双波长切换时间序列采样:0~29.5min为276 nm;29.5~32.0 min为370 nm.结果 甘草苷、肉桂酸、桂皮醛、异甘草素分别在10.0~160,2.50~40.0,16.0~256,0.050~0.8 μgmL~-1内,线性关系良好.结论 该方法准确、简便、专属性好,可用于桂枝甘草汤中甘草苷、肉桂酸、桂皮醛和异甘草素4种成分的含量测定,为桂枝甘草汤的质量控制提供依据.
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异甘草素的制备方法和药理作用研究进展
异甘草素是甘草中的黄酮类成分,属于羟基查耳酮类化合物.目前异甘草素主要从甘草中提取分离及人工合成方法 制备.它具有较强的生物活性,如抗癌、抗艾滋病、抗糖尿痛并发症等,因而成为富有研究开发潜力的化合物.笔者结合自己的部分研究结果 ,对异甘草素的制备方法 和药理作用研究进展作简要介绍,并对异甘草素的研究开发前景进行探讨.
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异甘草素通过下调基质金属蛋白酶抑制人脑胶质瘤干细胞迁移和侵袭
目的:探讨异甘草素对人脑胶质瘤干细胞迁移和侵袭能力的影响及相关机制.方法:免疫荧光法检测SHG44人脑胶质瘤干细胞的干性特征;transwell实验观察SHG44人脑胶质瘤干细胞的迁移和侵袭能力;实时定量RT-PCR法和蛋白质印迹法分别检测SHG44人脑胶质瘤干细胞中基质金属蛋白酶(MMP)2和MMP-9的mRNA和蛋白表达量.结果:SHG44细胞中干细胞标志物CD133和Nestin呈阳性表达.20μmol/L和80μmol/L的异甘草素作用于胶质瘤干细胞48 h后,迁移细胞数分别为76士5和42士4,与阴性对照组(85士6)差异有统计学意义(均P<0.01),且80μmol/L异甘草素组迁移细胞数少于20μmol/L异甘草素组(P<0.01);穿透滤膜至小室背面的细胞数分别为190士13和130士9,与阴性对照组(230士14)差异有统计学意义(均P<0.01),且80μmol/L异甘草素组穿透滤膜至小室背面的细胞数少于20μmol/L异甘草素组(P<0.01);MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达量均较阴性对照组下调(P<0.05或P<0.01),且80μmol/L异甘草素组MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达量低于20μmol/L异甘草素组(P<0.05或P<0.01).结论:异甘草素可通过下调MMP-2和MMP-9的表达抑制胶质瘤干细胞迁移和侵袭.
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异甘草素对醋氨酚诱导的急性肝细胞损伤的保护作用
目的:研究异甘草素(isoliquiritigenin,ISL)对醋氨酚(AAP)诱导的肝细胞损伤的保护作用及机制.方法:以AAP 20 mmol/L 培养原代肝细胞12 h造成急性化学性肝损伤模型.肝细胞随机分为正常组,AAP损伤组,ISL预处理组和ISL加N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)预处理组.酶学测定培养液ALT、AST活性,肝细胞CYP2E1活性和谷胱甘肽(GSH)含量,RT-PCR测定肝细胞CYP2E1 mRNA表达水平,放射免疫分析测定肝细胞cAMP和 cGMP含量,三明治ELISA方法测定核转录调节因子(NF-κB等)活性.结果:ISL浓度(5～20 μmol/L)依赖性抑制AAP引起的ALT和AST升高;下调肝细胞CYP2E1活性和mRNA表达, 大抑制率分别可达 75.7%和 78.7%,同时明显抑制AAP引起的肝细胞GSH含量下降;加入L-NAME 2.0 mmol/L 可阻断ISL 20 μmol/L 对肝细胞的保护作用;ISL不能逆转AAP引起的肝细胞cAMP含量下降,但可浓度依赖性提高cGMP含量(高可达 4.75 倍);ISL浓度依赖性抑制AAP所致NF-κB活性的提高,抑制率分别为 24.8%、37.3%和 64.1%.结论:ISL对CYP2E1介导的AAP肝细胞损伤具有保护作用,可能与通过NO-cGMP通路,抑制NF-κB激活和下调CYP2E1表达有关.
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异甘草素抗肿瘤活性及初步机制研究
目的：探讨异甘草素( isoliquiritigenin, ISL)抗肿瘤活性及初步机制。方法采用 SRB 法检测 ISL 对 A549、SW620和HMEC-1细胞增殖的抑制作用；Transwell小室检测ISL对HMEC-1细胞迁移能力的影响；明胶酶谱法检测ISL对HMEC-1细胞MMP-2和MMP-9的表达；管样结构形成实验测定ISL对HMEC-1细胞管样结构形成能力；细胞内活性氧( ROS)通过荧光探针DCFH-DA进行测定；流式细胞术检测ISL对HMEC-1的细胞周期。鸡胚绒毛尿囊膜血管生成实验检测ISL体内抗血管生成作用。结果 ISL可明显抑制A549、SW620和HMEC-1细胞的增殖、HMEC-1细胞的迁移、管样结构形成以及细胞内MMP-2和MMP-9的表达,且均呈现浓度依赖关系。同时, ISL 还可抑制 HMEC-1细胞内由VEGF诱导产生的ROS量,且存在浓度依赖关系。流式细胞术检测发现高浓度ISL可将HMEC-1细胞阻滞于S期,而低浓度ISL通过诱导细胞凋亡来抑制 HMEC-1细胞的增殖。ISL能明显抑制鸡胚尿囊膜新生毛细血管的生成。结论ISL具有明显的抗肿瘤活性,能抑制血管生成,其机制可能与清除HMEC-1细胞内ROS生成,诱导细胞凋亡有关。
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异甘草素诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡研究
目的：研究异甘草素诱导人黑色素瘤( A375)细胞凋亡及其初步机制。方法采用硫氰酸盐B ( SRB)法测定异甘草素对 A375细胞生长的抑制效应, AO/EB 和 Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡形态,流式细胞技术检测A375细胞凋亡率；荧光染料二乙酸-2’,7’-二氯荧光素(DCFH-DA)测定A375细胞内活性氧的变化。5,5′,6,6′-四氯-1,1′,3,3′-四乙基苯并咪唑羰花青碘化物(JC-1)测定线粒体膜电势的变化,利用试剂盒检测异甘草素处理后的A375细胞内ATP和培养液中的乳酸、葡萄糖含量。结果异甘草素能抑制A375细胞的增殖,并呈浓度依赖性；在荧光显微镜下发现,异甘草素处理后的A375细胞出现明显的凋亡形态；细胞凋亡率随异甘草素浓度的增加而升高；异甘草素处理后的细胞内活性氧有明显上升趋势,细胞线粒体膜电位明显下降；异甘草素作用后胞内ATP含量下降( P<0．05或P<0．01),培养液中的乳酸含量下降,葡萄糖含量上升(P <0．05或P<0．01)。结论异甘草素能够抑制A375细胞的恶性增殖,终诱导细胞凋亡。推测异甘草素通过活性氧升高,引起线粒体膜电势下降,从而影响A375细胞的糖酵解途径而导致细胞凋亡。
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异甘草素对脑缺血再灌注小鼠认知功能障碍及能量代谢的影响
目的研究异甘草素(ISL)对脑缺血再灌注小鼠认知功能障碍及能量代谢的影响.方法采用双侧颈总动脉反复夹闭再灌注造成小鼠学习记忆功能障碍模型.采用跳台实验和Y型迷宫实验测试小鼠学习记忆能力,采用反相高效液相色谱法检测脑组织ATP含量、腺苷酸池(TAN)水平和能量负荷值(EC).结果 ISL(10、20、40 mg·kg-1)延长跳台实验中潜伏期,减少错误次数;减少Y型迷宫实验中累计电击次数,增加正确反应次数;剂量依赖性提高脑组织中ATP含量、TAN水平和EC值.结论 ISL能改善反复脑缺血再灌注小鼠认知功能障碍,其作用机制可能与改善脑能量代谢有关.
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异甘草素和3-甲氧基异甘草素对人肝癌Bel-7402细胞的抗癌活性
肝癌多药耐药( MDR)不仅限制了化疗效果,也是导致肝癌复发转移的重要原因,如何逆转多药耐药性已是肿瘤药物干预研究的热点。人肝癌Bel-7402细胞株作为一种体外模型,在新型抗癌候选药物研究中较为常用。国内学者利用此种模型从天然药物中筛选出了对肝癌Bel-7402细胞具有明显抑制活性的黄芩苷、虫草素、蜂毒素、蛇葡萄素、川芎嗪等天然活性成分,并探讨其在肝癌的辅助治疗、逆转耐药性等方面的应用价值[1-4]。本课题组研究发现,甘草查耳酮成分异甘草素( isoliquiritigenin, ILG)对人宫颈癌SiHa细胞具有明显的抑制增殖和促进凋亡活性,并对正常细胞的毒性低,从而显示较好的先导化合物的潜力[5]。本研究参照前期研究方法[6]对天然化合物ILG及其衍生物3-甲氧基异甘草素(3-OM-ILG)进行人工合成制备,并应用人肝癌 Bel-7402细胞为体外模型,用MTT法和流式细胞仪法对两种化合物的抗肝癌活性及促进癌细胞凋亡作用进行对比研究。
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异甘草素对豚鼠离体气管平滑肌收缩功能的影响
异甘草素(isoliquiritigenin,ISL)是从甘草中提取出的一种黄酮类化合物.本文观察了ISL对豚鼠离体气管条张力的影响,旨在为其治疗支气管哮喘等呼吸道疾病提供实验依据.
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异甘草素对大鼠 C6胶质瘤细胞增殖和分化的影响
目的：研究异甘草素对大鼠 C6胶质瘤细胞增殖和分化的影响。方法采用磺酰罗丹明 B（SRB）比色法和克隆形成实验考察异甘草素对 C6胶质瘤细胞增殖抑制作用；Giemsa染色观察细胞形态学变化；半定量 RT-PCR、Western blot 鉴定细胞分化相关基因及蛋白表达水平。结果大鼠 C6胶质瘤细胞经异甘草素诱导后，以浓度依赖性抑制细胞增殖（P ＜0.01）；光镜观察到异甘草素诱导前的 C6胶质瘤细胞呈两极长梭形或多角形，胞质多，胞突短；而诱导后细胞突起数目不同程度增多，细胞形态变细变长。诱导前克隆形成出现早，数量多，直径大，克隆形成率高；异甘草素处理组克隆形成率降低，与对照组相比差异有统计学意义（P ＜0.01）。RT-PCR、Western blot 结果显示，异甘草素诱导后 C6细胞 GFAP mRNA和蛋白表达均明显上升（P ＜0.01）。结论异甘草素能抑制大鼠 C6胶质瘤细胞的增殖，并能诱导 C6细胞分化。
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异甘草素羟丙基-β-环糊精包合物的透皮吸收研究
目的 研究羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)包合异甘草素后对异甘草素透皮吸收的影响.方法 采用Franz扩散装置,观察异甘草素HP-β-CD包合前后制成软膏中异甘草素的累积透过量和透皮稳态流量(Jss),以此为指标评价羟丙基-β-环糊精包合对异甘草素透皮吸收的影响.结果 异甘草素HP-β-CD包合物的累积透过量和透皮稳态流量均高于异甘草素单体.结论 HP-β-CD能促进异甘草素经皮吸收.
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异甘草素对氧化偶氮甲烷和右旋葡聚糖苷钠诱导小鼠炎症相关结肠癌的预防作用及其机制
目的 探讨异甘草素(isoliquiritigenin, ISL)对结肠炎相关结肠癌的预防作用及其机制.方法 50只雄性BALB/c 小鼠随机分为5组,每组10只: 正常对照组;模型对照组;低、中、高剂量组.每天观察小鼠一般情况,每周测体质量1次,12周后处死小鼠,观察结肠癌发生率及结肠长度的变化,美蓝染色法观察异常隐窝灶(aberrant crypt foci, ACF)数量,病理形态学观察小鼠结肠组织形态学改变,免疫组化法检测组织中巨噬细胞甘露糖受体(CD206)、环氧合酶(COX)-2 和一氧化氮合酶(iNOS)的表达水平.结果 模型对照组小鼠在实验过程中均出现消瘦、厌食、脱毛、血便等表现.三个剂量给药组一般情况均明显优于模型对照组.在实验第12周,模型对照组小鼠体质量显著低于正常对照组,而中、高剂量给药组小鼠体质量显著高于模型对照组;模型对照组小鼠结肠长度显著低于正常对照组,而中、高剂量给药组小鼠结肠长度较模型对照组显著增加.三个剂量给药组与模型对照组比,肿瘤发生率呈浓度依赖性减少;三个剂量给药组ACF数量与模型对照组比较显著降低;与模型对照组相比,三个剂量给药组随着ISL浓度的增加,肠黏膜愈来愈完整,隐窝形态逐渐恢复,炎性细胞浸润愈来愈少;三个剂量给药组CD206、COX-2 和iNOS 表达水平与模型对照组相比,呈剂量依赖性降低.结论 ISL对AOM/DSS 诱导的小鼠结肠炎相关结肠癌发生具有明显预防作用,其作用机制可能与其能抑制巨噬细胞向M2型转化及下调COX-2 和 iNOS表达有关.
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异甘草素对低氧环境下人肺动脉内皮细胞促炎性因子和HIF-1α表达的影响
目的 研究异甘草素对低氧诱导的人肺动脉内皮细胞分泌促炎性细胞因子和缺氧诱导因子1α表达的影响.方法 细胞分组:常氧组;低氧组;低氧+20μmol·L-1异甘草素组;低氧+40μmol·L-1异甘草素组;低氧+80μmol·L-1异甘草素组.酶联免疫吸附实验法检测各组细胞培养上清液中的肿瘤坏死因子-α和白介素-6的含量.实时荧光定量即时聚合酶链锁反应检测异甘草素对低氧诱导的人肺动脉内皮细胞缺氧诱导因子1αmRNA表达的影响.结果 低氧组肿瘤坏死因子-α和白介素-6的含量显著高于常氧组(P<0.05),3个低氧+异甘草素组肿瘤坏死因子-α和白介素-6的含量较低氧组显著降低(P<0.05);实时荧光定量即时聚合酶链锁反应结果显示,异甘草素有效抑制了低氧诱导的人肺动脉内皮细胞缺氧诱导因子1αmR-NA的高表达(P<0.05).结论 异甘草素能够有效抑制低氧诱导的人肺动脉内皮细胞促炎性细胞因子的分泌,以及抑制缺氧诱导因子1αmRNA的高表达.
