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眼镜蛇(Naja naja atra)神经毒素与心脏毒素分离纯化研究进展
眼镜蛇神经毒素与心脏毒素分别具有显著的镇痛活性和抗肿瘤活性.这两种毒素同源性高,等电点,分子质量以及蛋白结构都很相似,给分离纯化造成一定难度.获得单一成分的神经毒素和心脏毒素是理化性质分析、药理活性研究和临床应用的前提,文章综述了多年来舟山眼镜蛇蛇毒中神经毒素与心脏毒素的分离纯化研究进展.
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江西眼镜蛇毒神经毒素的提纯及部分性质鉴定
采用CM-SephadexG50和SP-Sephadex G50两次柱层析,从江西眼镜蛇毒中分离提纯得到电泳纯的神经毒素,它对大鼠膈神经膈肌标本及清醒家兔具有典型的箭毒样作用,小鼠sc的LD50为53μg/kg,等电点为pH8.8,相对分子质量为6 800～7 000,氨基酸组成与台湾眼镜蛇毒神经毒素Cobrotoxin非常相似.
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壳聚糖修饰的神经毒素纳米粒的制备及体外释放研究
目的:制备粒径小、形态均匀、包封率较高、带稳定正电荷的神经毒素纳米粒并研究其体外释放行为.方法:选用聚乳酸为载体,壳聚糖为修饰物,采用复乳法制备神经毒素纳米粒,在单因素试验的基础上结合正交试验优化纳米粒的制备工艺,并对其体外释药特性进行研究.结果:采用优化方法制备的纳米粒粒径较小(140.5 nm),形态规则,大小均匀,包封率高(83.5%),Zeta电位为+30.5 mV;体外释药行为符合Weibull方程.结论:建立的制备工艺可行,所得纳米粒包封率高,大小均匀,体外释药具有明显的缓释特征.
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神经毒素纳米粒大鼠鼻腔给药的脑药物动力学研究
目的:考察神经毒素(NT-1)纳米粒经大鼠鼻腔给药后的脑药物动力学特征.方法:采用125I同位素标记法,以清醒自由活动大鼠为实验模型,运用脑微透析取样技术,连续测定NT-1纳米粒和NT-1经大鼠鼻腔给药后右侧嗅球组织间液的放射性计数(min-1),再折算成相应的NT-1浓度,并利用药动学软件计算各个参数.结果:NT-1鼻腔给药后无法进入脑内,而NT-1纳米粒可进入脑内,其药动学符合开放性二室模型,tmax、cmax、AUC0→∞、t1/2(β)分别为(46.38±5.12)min、(3.98±0.51)ng/mL、(876.24±55.32)ng·min/mL和(132.45±24.26)h-1.结论:单纯NT-1鼻腔给药后无法进入脑内,而以纳米粒为载体,可显著增加其鼻腔吸收入脑,且能较快达到峰浓度,消除缓慢.
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神经毒素不同给药途径镇痛作用的比较研究
目的:探讨神经毒素(α-cobrotoxin,Nt)不同给药途径对镇痛作用的差异,寻找神经毒素佳给药途径.方法:神经毒素经腹腔注射、肌肉注射和鼻粘膜给药后,用小鼠热板法和扭体法对其镇痛作用进行评价.结果:神经毒素经上述三种途径给药后都具有镇痛作用.结论:神经毒素在吸收促进剂作用下经鼻粘膜给药的镇痛作用强.
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神经毒素与鼻腔给药入脑途径的相关研究
蛇毒素通常分为作用于神经系统的神经毒素和作用于血液与循环系统的出血毒素（或称血循毒素）。前者又分为选择地阻遏神经肌肉接头前或后传递的β- 型或α-型神经毒素［1］。神经毒素（Cobratoxin，NT）是从云南眼镜蛇（Najanajaatra）毒液中分离得到的多肽类药物，具有良好的中枢镇痛作用，是一种新型的替代性镇痛药物［2，3］。蛇毒突触前磷脂酶A2神经毒素（Snake presynaptic phospholipase A2 neurotoxins，SPANs）是蛇毒中毒性大的成分之一，通过阻断神经递质乙酰胆碱的释放致使动物肌肉麻痹、呼吸衰竭直至死亡［4］。研究表明，NT的中枢作用部位为下丘脑、尾状核、第三脑室、中脑导水管周围灰质（PAG）、海马和皮质等脑区，主要是通过影响脑中枢内乙酰胆碱（Ach）能系统的活动而产生的［5］。但由于NT分子量较大，注射给药方式不易透过血脑屏障（blood brain barrier，BBB）进入脑靶部位，而口服给药因为存在首关效应以及会受到胃肠酶的破坏而失效，因此如何使药物有效透过BBB进入脑内发挥作用成为近年来的研究重点，为了克服BBB，目前主要通过改变给药途径及利用相关载体帮助药物运载入脑等方法。鼻腔给药是目前一种极具发展潜力的药物转运系统，可促使药物直接有效进入脑靶部位，并且还可能增加药物向脑内的递释［6］。因此，本文主要从NT鼻腔给药直接入脑途径的机制，中药透黏膜吸收促进剂在鼻腔给药研究中的作用以及鼻腔给药对NT药效的影响等三个方面作简要综述，为NT的研究及临床应用提供参考。
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谷氨酸介导中枢系统损伤神经毒性的分子机制概述
谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统(CNS)中主要的兴奋性神经递质.谷氨酸释放到突触后能够激活离子型和代谢型受体.多数谷氨酸受体家族成员都会参与介导兴奋性毒性作用,但为关键的是离子型受体[1,2].1957年,Lucas和Newhouse[3]发现注射L-glutamate可以破坏小鼠的视网膜内层,推断谷氨酸可以作为一种神经毒素.
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Angiopep-2修饰载神经毒素介孔二氧化硅脂质囊纳米粒的制备及其体内外评价
目的 制备Angiopep-2(ANG)修饰的载神经毒素(neurotoxin, NT)介孔二氧化硅脂质囊纳米粒(mesoporous silica nanoparticles, MSN)(ANG-LP-MSN-NT),并进行体内外评价.方法 利用改进的Stober法制备介孔二氧化硅纳米粒,然后运用薄膜水化法制备ANG-LP-MSN-NT.考察其形态、粒径、Zeta电位、载药量和包封率;通过小角粉末衍射、氮气吸-脱附法等技术对其进行表征;透析袋法考察其体外释药特性;热板法和醋酸扭体法考察其镇痛效果.结果 制备的 MSN比表面积为557 m·g-1,孔径和孔容积(Vp)分别为2.94 nm和0.58 cm3·g-1.ANG-LP-MSN-NT分布均一,无团聚现象,粒径为(123.37士3.76) nm (PDI 0.20±0.02), Zeta 电位为(-16.57±1.59)mV,载药量与包封率分别为(10.75±0.54)％与 (91,82±3.12)％.ANG-LP-MSN-NT较MSN-NT体外突释降低,缓释特性明显;药效学实验结果表明ANG-LP-MSN-NT起效快、大镇痛效应优于其他组别.结论 ANG-LP-MSN-NT解决了二氧化硅易团聚、易突释的问题,且更有利于NT在脑部富集,发挥更好的镇痛效果,该纳米递药系统作为神经毒素载体在镇痛方面具有较好的应用前景.
关键词： 神经毒素 angiopep-2 介孔二氧化硅脂质囊纳米粒 体内外评价 -
广东眼镜蛇毒低分子量多肽的分离纯化与性质鉴定
目的 从广东眼镜蛇粗毒中分离纯化出色谱纯的低分子量多肽并对其部分性质进行鉴定.方法 采用化学沉淀法对蛇粗毒进行预处理,经 Sephadex G-50 凝胶过滤和 UND Sphere S 阳离子交换层析得到高纯度低分子量多肽,用SDS-PAGE及HPLC对产物纯度进行鉴定,并用SDS-PAGE和质谱法测定分子量,采用蛙心灌流法考察产物是否具有心脏毒性.结果 结果表明,经分离纯化后得到两种低分子量多肽GI2和GI3,均为单一组分,可达到色谱纯,SDS-PAGE法测得GI2分子量为14 300 Da,质谱法测得GI3分子量为6 725.8 Da,仅GI2具有心脏毒性,收率分别为9.5%和10.1%.结论 通过化学沉淀预处理,并经2次柱色谱可从广东眼镜蛇毒中分离得到两种色谱纯的低分子量多肽,且收率较高.
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眼镜蛇神经毒素鼻黏膜透过性的研究
目的探讨眼镜蛇神经毒素(α-cobrotoxin,或Nt)对不同动物鼻黏膜透过性及冰片的促渗作用.方法采用体外渗透鼻黏膜实验、在体渗透鼻黏膜重循环实验等方法,将125I-Nt对几种不同动物鼻黏膜的透过性进行了比较,考察不同动物鼻黏膜的透过性及冰片对其透过性的影响.结果Nt能透过鼻黏膜而吸收,且在冰片作用下吸收明显增加.结论冰片能促进Nt的吸收,Nt可用于鼻腔给药.
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立止血致过敏反应1例
患者女，29岁，体重55kg。因患慢性肾小球肾炎、急性尿路感染于2000年5月19日入院治疗。经体格检查，体温36.5℃、心率70次/min，呼吸19次/min，血压120/80mmHg，无药物过敏史。5月24日肾穿后发现包膜下一血肿，予以立止血1ku(瑞士素高药厂，批号089401)+生理盐水20ml静推后突感胸闷、心悸、气促、出汗，四肢冰凉，神情紧张。查双肺听诊阴性，心率80次/min，心律齐。予鼻塞吸氧后5min后缓解，血压115/80mmHg，心率84次/min。 讨论：立止血是由巴西蛇毒液经分离和提纯制备得到的血凝酶，绝对不含神经毒素及其他毒素，不良反应发生率极低，偶见过敏样反应，特报道供临床用药参考。
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神经毒素PLGA纳米粒的制备及鼻黏膜给药的药动学研究
[目的]探索可生物降解乳酸/羟基乙酸共聚物[poly(1actic-co-glycolic acid),PLGA]纳米粒(nanoparticle,NP)作为大分子蛋白质药物的载体经鼻黏膜给药的可能性.[方法]用复乳化-溶剂挥发法制备了神经毒素(α-cobro neurotoxin,CNT)PLGA纳米粒(CNT PLGA-NP);光子相关光谱法测定了Zeta电位和平均粒径;放射性计数法测定了CNT的包封率;考察了CNT-PL-GA-NP的体外释放特性;评价了CNT-PLGA-NP经鼻黏膜给药后的体内药动学过程.[结果]复乳化-溶剂挥发法制备的CNT-PLGA-NP大小均匀,表面光滑圆整,Zeta电位为-13.4mV,平均粒径为320.2nm,包封率为45%;CNT-PGA-NP的体外释放分为两相,即突释释药相和缓释平台相;CNT、CNT-PLGA-NP和CNT-PLGA-NP-(B+T)的AUC及t1/2(β)分别为1.14、7.12、8.37μg·h/m1和20.06、44.14、34.82h,可见吐温-80和冰片有明显的促吸收作用.[结论]PLGA-NP可能成为神经毒素鼻黏膜给药的新型载体;吐温-80(T)和冰片(Borneol,B)可作为CN-PLGA-NP鼻黏膜给药良好的吸收促进剂.
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标记嗜酸性粒细胞的组化染色方法
嗜酸性粒细胞是炎性病变中较常见的炎性细胞成分之一,一般认为其在变态反应性疾病的发病机制中发挥重要作用.但是嗜酸性粒细胞发挥作用的机制以及与其它炎性细胞作用的相互关系,近来出现争论.嗜酸性粒细胞胞质中含次级颗粒,颗粒中主要有4种碱性蛋白:①嗜酸性粒细胞阳离子蛋白,②主要碱性蛋白,③嗜酸性粒细胞衍生神经毒素和④嗜酸性粒细胞过氧化物酶.嗜酸性粒细胞一方面受其他细胞的影响,同时又对其它细胞产生影响.由于在某些疾病的发病机制中有着重要的作用,因而嗜酸性粒细胞成为当今在某些领域里的研究热点之一.
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不同粒径神经毒素-Ⅰ纳米粒大鼠鼻腔给药脑药动学研究
目的 制备不同粒径甲基化聚乙二醇(methylated-polyethyleneglycol,Me-PEG)修饰的神经毒素-Ⅰ(neurotoxin,NT-Ⅰ)聚乳酸(polylactic acid,PLA)纳米粒(NT-Ⅰ-MePEG-PLA-NP,NT-Ⅰ-NP),并考察不同粒径NT-Ⅰ-NP大鼠鼻腔给药后脑药动学特征.方法 以聚乙二醇单甲醚聚乳酸共聚物(MePEG-PLA)为纳米材料,采用复乳-溶剂挥发法制备NT-Ⅰ-NP.以尾静脉注射NT-Ⅰ-NP为对照组,4组不同粒径NT-Ⅰ-NP大鼠鼻腔给药,运用脑微透析取样技术分析NT-Ⅰ在大鼠中脑导水管周围灰质(periaqueductal gray,PAG)部位浓度的经时变化.结果 不同粒径的NT-Ⅰ-NP呈圆形或类圆形,大小均匀.大鼠鼻腔给药后小于100 nm的NT-Ⅰ-NP的AUC(0-t)分别是100～200、200～300和大于300 nm NT-Ⅰ-NP的1.22、1.34、1.60倍(P<0.05),表明粒径小于100 nm时NT-Ⅰ在脑靶部位的浓度明显高于其他粒径的纳米粒.结论 纳米粒的粒径对NT-Ⅰ的脑内递送有着较为明显的影响,粒径小于100 nm的NT-Ⅰ-NP可以明显增加NT-Ⅰ的脑内浓度,这一结果为研究适宜粒径的NP用于蛋白多肽类大分子药物入脑奠定了基础.
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A型肉毒杆菌毒素在神经科疾病的临床应用
肉毒杆菌毒素(botulinium toxin,BTX)是由肉毒梭状芽孢杆菌在无氧条件下产生的外毒素,它是神经毒素、血凝素和(或)非血凝素蛋白的复合体.神经毒素根据其抗原性的不同,分为A、B、C1、D、E、F、G等血清型,目前临床上经常使用的BTX基本是指A型肉毒杆菌毒素(BTX-A).其药理作用是由于BTX-A与胆碱能神经元有高度的亲和性,BTX-A可通过阻断神经递质(乙酰胆碱)在周围神经肌肉接头的释放,造成肌肉暂时的化学性失神经支配,使肌肉收缩减弱,直接在选择的肌肉注射极小量的毒素就可产生肌肉麻痹效应,从而消除症状性肌肉痉挛.
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眼镜蛇毒神经毒素的125I标记及其在大鼠体内的分布
目的 用氯胺T法标记眼镜蛇神经毒素(Neurotoxin, NTX),观察其在大鼠体内的分布. 方法 实验组和对照组的大鼠分别单次静脉注射125I-NTX 50μg·kg-1和相同剂量的Na125I与NTX的临时混合液,于给药后30min和2h分两批处死,取各脏器组织样本称重并计算每g组织的cpm.用组织与血液的脉冲比值作为放射性相对掺入量的标准,用实验组(e)和对照组(c)相对放射性掺入量的比值(e/c)作为判断125I-NTX在大鼠各脏器组织分布多少的依据.结果 大鼠静脉给125I-NTX 50μg·kg-1后30min,分布多的是肾脏,每g组织放射性达44cpm,为对照组的11倍.膀胱及尿、肺、肠及内容物、肾上腺亦有较高分布.给药后2h,分布多的仍是肾脏,但比0.5h时减少一半左右.结论 NTX主要分布在肾脏,肾脏以外的实质性脏器分布均较少,脑中分布低.
关键词： 眼镜蛇毒 神经毒素 125I放射性同位素 组织分布 大鼠 -
舟山眼镜蛇毒神经毒素的分离纯化及镇痛作用研究
目的 从舟山眼镜蛇毒中分离纯化神经毒素,并测定其部分理化性质及镇痛活性.方法 应用SP-Sephadex C-50离子交换色谱法分离眼镜蛇毒粗毒,用Sephadex G-50凝胶过滤色谱、CM-Sephadex C-25离子交换色谱纯化神经毒素;SDS-PAGE(Tris-Tricine系统)鉴定纯度;用Meier方法测定毒性;用热板法观察神经毒素的镇痛作用.结果 应用SP-Sephadex C-50离子交换柱层析,从舟山眼镜蛇毒中分离得到14个蛋白峰,其中6个组分(NNAV-Ⅶ～Ⅻ)经鉴定为含有神经毒素组分,将神经毒活性强的组分Ⅺ经Sephadex G-50、CM-Sephadex C-25纯化得神经毒素纯品NTXT.该纯品分子量12.3kD,小白鼠静脉注射和腹腔注射的LD50分别为1.9875、2.2217 mg·kg-1.NTXI能显著提高小鼠对热板刺激的痛阈.腹腔注射0.2mg·kg-1 NTXI可使小鼠的热板痛阈提高84.35%.NTXI的镇痛作用具有时效性,给药后2h起效,4h作用达峰值.结论 舟山眼镜蛇毒中分离得到一个神经毒素纯品NTXI,具有镇痛作用.
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蛇毒的神经毒素及其对神经传递的影响
蛇毒中含有200种以上的神经毒素,对神经递质的传递环节有高度特异的亲和力,能激活或阻断不同神经受体和离子通道,影响递质的释放和代谢,因此可用于受体和离子通道的研究,作为受体和离子通道鉴定和分类的科学依据,并可开发为治疗某些疾病的特效药.
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中华眼镜蛇神经毒素的活性研究
目的：研究中华眼镜蛇神经毒素（ NT）的镇痛活性和对离体蛙腹直肌N2-AChR的拮抗作用。方法采用三种模型（电刺激-嘶叫法，热板法，醋酸扭体法）观察NT的镇痛活性，并观察NT对ACh所致蛙离体腹直肌收缩的影响。结果 NT能提高电刺激-嘶叫法，热板法的痛阈，抑制醋酸引起的扭体次数。NT镇痛具有剂量-效应关系，给药后2 h起效，5 h达峰。NT能使ACh引起的蛙腹直肌收缩的量效曲线平行右移。结论 NT对三种致痛模型均有确切的镇痛活性，NT对N2-AChR的拮抗作用为竞争性拮抗。
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革兰氏阳性杆菌性食物中毒的快速诊断
革兰氏阳性杆菌性食物中毒,在传统的食物中毒中很少发现,多是革兰氏阴性杆菌性食物中毒和葡萄球菌性食物中毒为主.近年来有个别处偶有发现,革兰氏阳性杆菌分泌外毒素,毒力强的神经毒素,可侵范病人的神经系统,使病人出现神经症状,以致昏迷死亡.其食物中毒常大批出现,如不能及时准确的诊断,将会耽误抢救时间,以致病人留下后遗症或者造成死亡.
