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溶血磷脂酸对心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响
目的:观察溶血磷脂酸(LPA)对体外培养心脏成纤维细胞(CF)的细胞增殖和胶原合成的影响. 方法:用消化法培养新生SD大鼠的CF,实验分为四组.对照组(加含5%小牛血清的DMEM培养液),实验组根据不同浓度的LPA又分为10-6 μmol/L组、10-7 μmol/L组和10-8 μmol/L组.用单四唑(MTT)比色法测定细胞增殖,羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成,分别观察不同浓度LPA对CF增殖和胶原合成的影响. 结果:①随着LPA浓度的升高,MTT比色法吸光度(A490)值呈上升趋势.在药物作用48 h后, 仅有10-6 μmol/L组A490值较对照组有显著升高(P＜0.05);作用至72 h后,10-8 μmol/L组、10-7 μmol/L组、10-6 μmol/L 组A490值均较对照组显著升高(P＜0.05);作用至96 h后,各实验组A490值较对照组均有显著升高(P＜0.05和P＜0.01).②随着LPA浓度和作用时间的增加,CF分泌的胶原呈递增趋势.LPA作用48 h仅10-6 μmol/L组胶原浓度较对照组显著升高(P＜0.01);作用至72 h后, 10-7 μmol/L组、10-6 μmol/L 组胶原含量较对照组有显著升高(P＜0.05和P＜0.01);作用至96 h,各实验组胶原含量均较对照组有显著升高,10-6 μmol/L 组与10-7 μmol/L组、10-8 μmol/L 组之间差异亦有显著性意义(P＜0.05). 结论:LPA具有促进SD新生大鼠CF增殖和胶原合成的作用.
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钙调神经磷酸酶调控血管升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的作用
目的:探讨钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路对血管升压素(AVP)诱导新生大鼠心脏成纤维细胞(CF)胶原合成的调控作用.方法:采用胰酶消化法培养新生SD大鼠CF,应用羟基脯氨酸比色法测定细胞培养上清中羟基脯氨酸含量,CaN活性通过分光光度计测定.结果:①CF培养上清中羟基脯氨酸含量随着AVP浓度的升高而增加,其中10-7mol/L AVP和10-6mol/L AVP组羟基脯氨酸含量与空白对照组比较有显著性差异(均P＜0.01);在0.5μg/ml CaN的特异性抑制剂环孢素共同干预下,羟基脯氨酸含量明显减少,并有统计学意义(P＜0.01).②随着AVP浓度的升高,CF内CaN活性亦随之增高,与空白对照组比较,10-7和10-6mol/L AVP组细胞内CaN活性显著增高(P＜0.01).③在10-7mol/L AVP作用下,随着细胞内CaN活性的升高,CF培养上清中羟基脯氨酸含量随之增加,两者之间呈显著正相关(r=0.91,P＜0.05).④在10-7mol/L V1受体拮抗剂[d(CH2)5-Tyr2(Me)]AVP和10-7mol/L AVP共同作用下,CF中CaN活性和培养上清中羟基脯氨酸含量与单独10-7mol/LAVP作用组比较均显著降低,并有统计学意义(均P＜0.01).结论:CaN信号通路在AVP诱导CF胶原合成过程中起到了重要的调控作用,该通路的激活可能是通过V1受体介导的.
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ADAMTS-2结构功能和抗肝纤维化作用研究进展
ADAMTS-2 是ADAMTSs(含I 型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶)家族成员之一,它和ADAMTS-3 及-14 共同被称为前胶原N 端蛋白酶.ADAMTS-2 主要负责对I-III 型前胶原N 端前肽进行剪切,除此之外,它还参与血管发生、生长发育、生殖过程和肿瘤等各种生理和病理过程.现对ADAMTS-2 的结构、功能和调控方面的研究现状和进展作一综述,并探讨它与胶原合成之间的关系以及与肝纤维化的联系.
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细胞生长因子和维拉帕米在肝细胞胶原合成和前胶原基因表达中的作用
目的:探索肝细胞在肝纤维化形成中的可能作用.方法:用核酸原位分子杂交方法和3H-脯氨酸掺入法,观察原代培养大鼠肝细胞在血小板衍生生长因子(PDGF)刺激前后胶原合成和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达及钙拮抗剂维拉帕米对此作用的影响.结果:肝细胞培养一定时间后能够合成胶原,能够表达Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因.PDGF能促进肝细胞的胶原合成和前胶原基因表达.但此刺激作用为维拉帕米所抑制.结论:这些研究为肝细胞参与肝纤维化形成提供了实验依据.
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钩藤提取物抑制血管紧张素Ⅱ诱导血管成纤维细胞增殖及胶原合成的研究
目的 探讨钩藤碱和异钩藤碱对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管成纤维细胞(VAF)增殖及胶原沉积的抑制效应及相关机制.方法 建立AngⅡ诱导VAF增殖模型,通过四甲基偶氮唑盐比色法、扫描电镜技术、流式细胞术、天狼猩红染色法和逆转录聚合酶链反应等观察钩藤碱和异钩藤碱对其增殖活性、细胞形态、细胞周期、细胞凋亡率、细胞c-myc蛋白表达、细胞培养液中羟脯氨酸含量、细胞间胶原蛋白含量、细胞ColⅠmRNA和Col Ⅲ mRNA的影响.结果 Ang Ⅱ刺激VAF增殖,钩藤碱和异钩藤碱抑制Ang Ⅱ诱导VAF增殖;在钩藤碱和异钩藤碱作用下VAF处于G0/G1期的细胞数增多、S期的细胞数减少、细胞凋亡率增加、细胞c-myc蛋白表达降低、细胞培养液中羟脯氨酸含量降低、细胞间胶原表达降低、细胞ColⅠmRNA和Col Ⅲ mRNA转录也降低.结论 钩藤碱和异钩藤碱对Ang Ⅱ诱导VAF增殖和胶原沉积有抑制效应,部分机制与其阻滞VAF G0/G1期向S期转化、诱导细胞凋亡、下调细胞c-myc蛋白表达和细胞ColⅠmRNA和Col Ⅲ mRNA转录有关.
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黄芪总苷对血吸虫卵抗原活化的肝星状细胞增殖与胶原合成的影响
目的观察黄芪总苷对血吸虫卵抗原活化的肝星状细胞增殖与胶原合成的影响.方法小鼠腹腔注射日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Soluble egg antigen, SEA),制备SEA活化的腹腔巨噬细胞条件培养基(Soluble egg antigen induced macrophage conditioned medium, SEA-MCM).采用肝星状细胞株HSC-T6细胞,以细胞增殖抑制率为指标,用噻唑蓝(MTT)测定黄芪总苷对SEA-MCM诱导的HSC-T6细胞增殖的影响;通过3H-脯氨酸参入法测定黄芪总苷对SEA-MCM诱导的HSC-T6细胞胶原合成的影响.结果 SEA-MCM能明显促进HSC-T6细胞的增殖和胶原合成.黄芪总苷(32.5、65和130 mg·L-1)对SEA-MCM诱导的HSC-T6细胞增殖及胶原合成有明显的抑制作用,且呈药物浓度依赖性关系.结论黄芪总苷对SEA-MCM诱导的肝星状细胞增殖及胶原合成有明显的抑制作用.
关键词： 黄芪总苷 血吸虫可溶性虫卵抗原 肝星状细胞 增殖 胶原合成 -
血源与基因工程α-干扰素抑制贮脂细胞增殖及胶原合成的比较研究
目的研究血源α-干扰素与基因工程α-干扰素对大鼠肝脏贮脂细胞增殖和胶原合成的影响,为临床应用基因工程α-干扰素抗纤维化提供参考.方法分离、培养大鼠贮脂细胞,采用MTT法和3H-脯氨酸参入法分别测定细胞增殖和胶原合成.结果血源α-干扰素与基因工程α-干扰素在1×106～1×107 U*L-1浓度范围内均能显著抑制大鼠肝脏贮脂细胞增殖和胶原合成,二者间相比差异无显著性.结论血源α-干扰素与基因工程α-干扰素均有良好的体外抗肝纤维化作用,且作用相似.
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一氧化氮对成纤维细胞增殖及胶原合成的影响
在参与肝纤维化形成的细胞中,成纤维细胞能大量合成和分泌胶原蛋白.其质和量决定了组织器官的纤维化过程.我们研究发现,一氧化氮(nitric oxide, NO)具有抗肝纤维化作用.本文在此基础上,观察NO对体外培养的成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,进一步阐明NO的抗肝纤维化作用.
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日本血吸虫可溶性虫卵抗原对体外培养大鼠腹腔巨噬细胞活化及TNF-α表达的影响
目的：观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）对体外培养的大鼠腹腔巨噬细胞（PMCs）中TNF-α活化及表达的影响。方法：体外培养大鼠PMCs，利用苏木素-伊红染色（ HE染色）、免疫细胞化学染色（ IHC）、RT-PCR以及放免法，对SEA作用后的大鼠PMCs形态变化和TNF-α表达进行观察；同时，制备SEA活化腹腔巨噬细胞条件培养基（ SEA-MCM），利用MTT比色法和3H-脯氨酸掺入法，对经过SEA-MCM作用后的HSC-T6细胞增殖及胶原合成结果进行检测。结果：①大鼠PMCs在LPS（10 mg／L）和SEA（10 mg／L）分别作用3 h、6 h和9 h后，可以使PMCs活化增加，并促进大鼠PMCs TNF-α蛋白表达（ P＜0．05）；②LPS（10 mg／L）和SEA（10 mg／L）分别作用6 h，大鼠PMCs TNF-αmRNA表达增加（ P＜0．05）；③LPS（10 mg／L）和SEA（10 mg／L）分别作用3 h、6 h和9 h，培养上清中TNF-α含量高于阴性对照组（P＜0．05）；6 h和9 h组均高于3 h组（P＜0．05），6 h和9 h组间无明显差别（P＞0．05）；④SEA-MCM促进HSC-T6细胞增殖和胶原合成（P＜0．05）。结论：体外实验证实SEA与LPS在活化大鼠PMCs、促进TNF-α表达和分泌中有相似的作用，这可能与SEA活化大鼠PMCs能明显促进HSC-T6细胞增殖和胶原合成有关。
关键词： 腹腔巨噬细胞 肿瘤坏死因子-α 血吸虫可溶性虫卵抗原 增殖 胶原合成 -
川芎嗪对心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响
目的 观察川芎嗪(TMP)对体外培养心脏成纤维细胞(CF)的增殖与胶原合成的影响.方法 用消化法培养新生SD大鼠的CF,用四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖,羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成,观察不同浓度TMP对CF增殖和胶原合成的影响.结果 随着TMP浓度的升高.MTT比色法A490值呈下降趋势:CF分泌的胶原随着TMP作用浓度和时间的增加呈递降趋势.结论 TMP具有抑制SD新生大鼠CF增殖和胶原合成的作用.
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PDTC对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响
目的:评价核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的作用.方法:体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别应用MTT比色法和羟脯氨酸比色法检测PDTC作用后细胞增殖及胶原合成的变化.结果:和对照组相比,PDTC能显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原合成(P＜0.01).结论:PDTC具有体外抗瘢痕疙瘩的作用,有可能成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物.
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热休克蛋白47与硬皮病
热休克蛋白47(HSP47)是一种胶原特异性分子伴侣蛋白,参与原胶原加工、折叠、聚合和分泌的过程,并对胶原的产生进行质量控制,与多种纤维化疾病有关.本文综述了HSP47的分子结构、功能等生物学特征及其在硬皮病发病机制中的作用.
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BQ123对左向右分流肺动脉高压大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响
目的:研究内皮素-1(ET-1)受体拮抗剂BQ123对左向右分流肺动脉高压大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响,并探讨左向右分流肺动脉高压的发生机理.方法:选择Wistar大鼠34只,随机分为实验Ⅰ组(n=15),实验Ⅱ组(n=9),对照组(n=10).实验组大鼠采用套管连接法建立颈部左向右分流肺动脉高压模型,实验Ⅱ组大鼠术后4周开始给予BQ123,每次50μg/kg,每周3次,连用12周,术后16周测取大鼠肺动脉收缩压.放射免疫法测定大鼠肺组织ET-1含量变化.RT-PCR检测BQ123对大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响.免疫组化法检测BQ123对大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原表达及相对含量的影响.结果:左向右分流大鼠肺动脉收缩压及肺组织ET-1含量升高,肺组织Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达增强,胶原蛋白相对含量增加;应用BQ123后大鼠肺动脉压力及肺组织ET-1含量降低,Ⅰ、Ⅲ型前胶原mR-NA的表达及胶原相对含量降低.结论:BQ123可降低肺组织ET-1含量,抑制胶原合成,ET-1和胶原合成增加均参与了肺动脉高压的形成过程.
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尾加压素Ⅱ对大鼠肺动脉平滑肌细胞胶原合成的影响
目的 研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体拮抗剂Urantide (UR)对培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响.方法 以组织贴块法培养的大鼠PASMCs为研究对象,采用BrdU掺入实验观察不同浓度UⅡ(1×10-10～1×10-7 mol/L)及Urantide对PASMCs增殖的影响；采用Western blotting及Real-timePCR法,分别在蛋白和基因水平检测不同浓度UⅡ及Urantide对Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响.结果 UⅡ(1×10-9～1×10-7mol/L)浓度依赖性地促进PASMCs增殖(P＜0.05,P＜0.001,P＜0.001),增加PASMCs中Ⅰ、Ⅲ型胶原基因及蛋白表达(P＜0.01,P＜0.001),而1×10-10 mol/L UⅡ对PASMCs增殖及Ⅰ、Ⅲ胶原基因和蛋白表达无明显作用(P＞0.05)；UⅡ受体拮抗剂Urantide可拮抗UⅡ的上述作用(P＜0.01).结论 UⅡ通过与大鼠PASMCs的UⅡ受体UT结合而发生一系列诱导作用,终引起PASMCs增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成增加,Urantide通过竞争性结合UT而阻断UⅡ与UT的结合,使UⅡ无法发挥诱导作用.
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糖尿病患者手术后应用胰岛素微量泵的护理体会
由于糖尿病患者多存在周围血管病变,外周供血减少,局部抵抗力低,成纤维细胞成熟和胶原合成受抑制,肉芽组织生成减少,故手术后切口易感染.2000年3月～2003年4月,我们对49例糖尿病患者手术后应用微量泵输注小剂量胰岛素,效果满意,现将护理体会报告如下.
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氧化苦参碱与国产α1 b-和α 2b-干扰素对大鼠肝星状细胞增殖和胶原合成的抑制作用
目的研究氧化苦参碱与国产α 1b-和α 2b-干扰素对大鼠肝星状细胞增殖和胶原合成的影响,为应用氧化苦参碱防治肝纤维化提供理论依据.方法分离、培养大鼠肝星状细胞,采用MTT法和3H-脯氨酸掺人法分别测定细胞增殖和胶原合成.结果氧化苦参碱在55ug～500ug/mL,两种α-干扰素在500U-10 000U/mL浓度范围内能呈剂量依赖性抑制星状细胞的增殖和胶原合成,提高药物浓度则形成作用平台.结论氧化苦参碱与α-干扰素在体外均具有抑制大鼠肝星状细胞增殖和胶原合成的作用,这对防治肝纤维化可能有一定的临床应用价值.
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去整合素Echistatin对糖尿病兔后发性白内障模型中晶状体上皮细胞间质转分化及胶原合成的影响
目的 观察去整合素Echistatin对糖尿病兔晶状体摘出术后后囊膜混浊(posterior capsular opacification,PCO)的影响,探讨Echistatin对晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)间质转分化及胶原合成的抑制作用.方法 应用四氧嘧啶耳缘静脉注射建立糖尿病兔模型,随机分组并行晶状体摘出术,术毕前房分别注入0.2 mL高压灭菌蒸馏水(对照组),7.5 mg·L-1Echistatin(7.5 mg·L-1组)、10.0 mg·L-1Echistatin(10.0 mg·L-1组),每组又分为10d和6周2个时间点(n=4).裂隙灯显微镜观察各组糖尿病兔术后10 d和6周PCO分级情况,同时摘取术眼应用RT-PCR法检测晶状体后囊膜上α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Ⅳ型胶原mRNA表达情况.结果 术后10 d,各组间α-SMA mRNA和Ⅳ型胶原mRNA表达差异均无统计学意义(均为P＞0.05).术后6周,Echistatin干预组PCO分级均明显低于对照组(P=0.024);7.5 mg·L-1Echistation组α-SMA mRNA表达为3.97±0.76,对照组为9.06±3.40,10.0 mg·L-1组为6.80±3.15,7.5 mg·L-1组明显低于其余两组(P =0.002、0.024);Ⅳ型胶原mRNA表达对照组为30.88±20.13,7.5 mg·L-1组为8.62±6.99,10.0 mg·L-1组为5.76±6.73,Echistatin干预组Ⅳ型胶原mRNA表达均低于对照组(P =0.005、0.002).结论 去整合素Echistatin对糖尿病兔晶状体摘出术后PCO的发生和发展有一定的抑制作用,可能与其抑制晶状体后囊膜上α-SMA和Ⅳ型胶原的mRNA表达有关.
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胶原相关整合素对人巩膜成纤维细胞增殖和胶原合成的影响
目的 观察胶原相关整合素对人巩膜成纤维细胞增殖和胶原合成的影响.方法 首先进行人巩膜成纤维细胞原代培养与鉴定,RT-PCR检测胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位mRNA表达,Western blot法检测胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位蛋白表达,CCK-8检测胶原相关整合素α1β1和α2β1对人巩膜成纤维细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR检测胶原相关整合素α1β1和α2β1对人巩膜成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达水平的影响.结果 成功进行了人巩膜成纤维细胞的原代培养.人巩膜成纤维细胞存在胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位mRNA及蛋白水平的表达.胶原相关整合素α1β1 1 mg·L-1和4 mg·L-1抗体组细胞存活率分别为(86.3±4.5)％和(74.3±6.8)％,与对照组的100％相比,细胞存活率均显著下降,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),且呈浓度依赖性的抑制作用.胶原相关整合素α2β1抗体在1mg ·L-1时有抑制作用,细胞存活率为(89.3±12.1)％,但与对照组的100％相比差异无统计学意义(P＞0.05),4mg· L-1抗体组细胞存活率下降为(74.5±6.6)％,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).胶原相关整合素α1β1(4 mg·L-1)抗体组Ⅰ型胶原mRNA表达明显减低,是对照组的0.48倍(P＜0.05).胶原相关整合素α2β1抗体1 mg·L-1组和4 mg· L-1组Ⅰ型胶原mRNA表达分别是对照组的0.94倍和0.87倍,与对照组相比差异均无统计学意义(均为P ＞0.05).结论 人巩膜成纤维细胞存在胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位的表达.胶原相关整合素α1β1和α2β1影响人巩膜成纤维细胞的增殖.胶原相关整合素α1β1参与人巩膜成纤维细胞胶原的合成.
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红景天苷对血管紧张素Ⅱ诱导的血管外皮成纤维细胞增殖及胶原合成的影响
目的：观察红景天苷对血管紧张素Ⅱ（ AngiotensinⅡ，ANG-Ⅱ）诱导的大鼠血管成纤维细胞（ vascular adventitial fibro- blasts，VAF）的增殖及胶原蛋白合成的影响。方法：采用细胞贴壁法培养 SD 大鼠胸主动脉 AF，分为对照组，终浓度0.1μmol·L-1 ANG-Ⅱ组，浓度为10μmol·L-1红景天苷组，浓度为20μmol·L-1红景天苷组，ANG-Ⅱ联用浓度为40μmol·L-1红景天苷组，浓度为80μmol·L-1红景天苷组，均作用24 h。MTT法检测细胞增殖活性，ELISA法测定细胞培养上清液中Ⅰ型胶原蛋白含量。结果：①与对照组比较，ANG-Ⅱ组能显著刺激VAF增殖（P﹤0.01）；40μmol·L-1和80μmol·L-1的红景天苷组与ANG-Ⅱ组比较，能够显著抑制VAF 增殖（P﹤0.05）。②与对照组比较，ANG-Ⅱ组能显著升高VAF培养上清液OD值（P﹤0.01）；浓度为80μmol·L-1的红景天苷组与ANG-Ⅱ组比较，能显著降低VAF培养上清液中OD值（P﹤0.05）。结论：红景天苷能够通过抑制VAF增殖和Ⅰ型胶原蛋白表达，发挥抗血管重塑作用。
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α-2b干扰素对慢性乙型肝炎肝纤维化血清指标影响比较
干扰素(IFN)具有抗病毒、免疫调节及对某些细胞有抑制作用等多种生物效应,近年又发现其有一定程度抑制成纤维细胞胶原合成,具有一定的抗纤维化作用.我们对23例慢性乙型肝炎患者应用IFN-α-2b抗病毒治疗的同时又观察了肝纤维化血清酶学指标治疗前后的变化,现报告如下.
