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醉鱼草苷Ⅳ对大鼠肝星状细胞增殖、活化的影响
目的:观察醉鱼草苷Ⅳ对大鼠贮脂细胞株(HSC-T6)增殖及活化的影响.方法:用不同质量浓度的醉鱼草苷Ⅳ处理HSC-T6,采用噻唑蓝(MTT)法测定醉鱼草苷Ⅳ对HSC-T6增殖的影响.采用20,14,9.8,6.86 mg·L-1醉鱼草苷Ⅳ干预细胞24 h,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ),Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)mRNA的表达；Annexin V/PI双染色法结合流式细胞术检测醉鱼草苷Ⅳ对HSC-T6凋亡的影响.结果:醉鱼草苷Ⅳ可显著抑制HSC-T6的增殖,且呈明显的量效关系.醉鱼草苷Ⅳ(6.86 mg·L-1)对HSC-T6 Col-ⅢmRNA表达具有显著的抑制作用(P＜0.05)；醉鱼草苷Ⅳ(9.8 mg·L-1)对细胞分泌羟脯氨酸(Hyp)和HSC-T6 Col-Ⅰ mRNA表达具有显著的抑制作用(P＜0.05,P＜0.01)及对HSC-T6具有显著的诱导凋亡作用(P＜0.01),从而达到抗肝纤维化的作用.结论:醉鱼草苷Ⅳ可体外抑制HSC-T6的增殖和活化,对肝纤维化有潜在的干预作用,其机制可能与抑制贮脂细胞增殖及细胞外基质的合成有关.
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抗纤复方影响大鼠肝贮脂细胞生成Ⅰ、Ⅲ型胶原的比较研究
用免疫细胞化学染色法观察抗纤复方药物血清对大鼠正常肝传代贮脂细胞和纤维肝原代贮脂细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响,并对Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达量进行比较分析.结果:传代贮脂细胞Ⅲ型胶原增加显著,而纤维肝贮脂细胞Ⅰ型胶原增加明显,抗纤复方能显著抑制贮脂细胞表达胶原,且对传代贮脂细胞Ⅲ型胶原和纤维肝原代贮脂细胞Ⅰ型胶原抑制作用更明显.
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肝胆舒康胶囊防治大鼠免疫性肝纤维化的病理组织及超微结构的研究
用人血清白蛋白建立大鼠肝纤维化动物模型,通过光镜与电镜观察,肝胆舒康胶囊可使大鼠肝细胞变性坏死明显减轻,贮脂细胞明显减少,贮脂细胞胞浆、线粒体、液泡明显减少,降低胶原的合成,防治肝维化的形成与发展,与实验空白对照组比P＜0.01,证明肝胆舒康胶囊具有防治肝纤维化的作用.
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贮脂细胞Smad4反义基因转移及对细胞外基质合成的抑制作用
目的:探讨通过反义Smad4基因转移阻断TGF-β1的信号传导后对贮脂细胞激活和细胞外基质产生的影响.方法:将Smad4的基因序列反向插入腺病毒表达质粒pAdv5SR(+),构建反义Smad4的表达质粒pAdAT Smad4.该表达载体再与重组质粒pJM17同源重组,共转染入293细胞,通过PCR法筛选、鉴定,得到含反义Smad4基因的复制缺陷型重组腺病毒AdAT Smad4.将AdATSmad4扩增纯化,再转入贮脂细胞株CFSC内,应用RT-PCR检测反义基因的表达,用原位杂交和免疫组织化学等方法检测Smad4和细胞外基质的产生.结果:转基因的CFSC细胞内有反义Smad4表达,且其合成分泌Smad4和细胞外基质降低.结论:反义Smad4 RNA可以抑制贮脂细胞的激活和内源性Smad4和细胞外基质的产生,为抗纤维化基因治疗提供理论依据.
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阿魏酸钠对大鼠肝贮脂细胞株HSC-T6的体外调控作用
目的研究阿魏酸钠对腹腔巨噬细胞条件培养基诱导大鼠贮脂细胞株HSC-T6增殖及合成ECM的影响.方法: 采用肝贮脂细胞株HSC-T6,以细胞增殖抑制率为指标,用噻唑蓝(MTT)法测定药物对腹腔巨噬细胞条件培养基诱导HSC-T6增殖的影响;通过3H-脯氨酸掺入法测定药物对腹腔巨噬细胞条件培养基诱导HSC-T6合成胶原的影响;放射免疫分析法测定药物对腹腔巨噬细胞条件培养基诱导HSC-T6合成透明质酸(HA)的影响.结果阿魏酸钠对腹腔巨噬细胞条件培养基诱导大鼠贮脂细胞株HSC-T6增殖及ECM合成的抑制率随药物浓度增加而升高,呈药物浓度依赖关系.结论阿魏酸钠在体外对腹腔巨噬细胞条件培养基诱导大鼠贮脂细胞株HSC-T6增殖及ECM合成具有较明显的抑制作用,提示阿魏酸钠可通过间接途径调控HSC-T6.
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益气活血方药理血清对大鼠贮脂细胞增殖作用研究
研究益气活血方药理血清对大鼠贮脂细胞增殖作用机制.通过制备3周、5周、7周的肝纤维化模型大鼠血清、正常大鼠血清和益气活血复方药物血清,培养肝星形细胞HSC(Hepatic stellate cells)和肝Bel7402瘤株,采用MTT法观察和分析HSC的增殖作用.结果表明:①益气活血方剂血清能抑制5周、7周模型血清培养的继代HSC的增殖,P<0.05.②益气活血方剂血清可促进3周模型血清培养的继代HSC和模型血清培养的原代HSC的增殖,P<0.05.③益气活血方剂血清和3周模型血清共同作用促进培养的Bel7402的增殖,P<0.05.提示益气活血方剂能够对HSC和Bel7402细胞的增殖产生影响.HSC的生活状态,即HSC发育时相是决定益气活血方剂具有抑制或促进增殖作用的关键事件.
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柴胡皂甙对FSC激活及合成细胞外基质的实验研究
观察柴胡有效成分柴胡皂甙对原代培养贮脂细胞(FSC)激活及合成细胞外基质(ECM)的作用.结果:治疗组库普弗细胞条件培养基(TKCncm)、治疗CCl4损伤库普弗细胞条件培养基(TKCtcm)、TKCncm加肝细胞条件培养基(PCncm)组FSC内结蛋白阳性反应明显减弱,对细胞表型转化的形态学特征有一定改善,各治疗组FSC的DNA合成及3H-脯氨酸掺入量均呈不同程度降低,FSC内Ⅰ型胶原含量明显减少.说明柴胡皂甙对肝细胞具有保护作用,直接抑制FSC内DNA的合成,还可抑制FSC的激活,从而抑制FSC合成ECM的能力.
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细胞因子与肝纤维化
肝纤维化是各种原因引起的慢性肝损伤所共有的病理过程.肝星状细胞(HSC,也称贮脂细胞,lipocytes,fat-storing cells)的激活,增殖及细胞外基质的沉积是肝纤维化的重要环节[1].近年研究显示细胞因子在肝纤维化的发生、发展中发挥了重要的作用,尤其是在HSC激活,调节细胞外基质(ECM)生成方面.现将研究近况简要综述如下.
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贮脂细胞对肝纤维化影响的研究进展
肝纤维化是各种慢性肝病后产生的一种共同反应.其主要特征是:细胞外基质异常增生,形成瘢痕.贮脂细胞是产生基质的主要基地,在肝纤维化的形成中起关键作用.干预贮脂细胞增殖及胶原等细胞外基质的合成,已成为肝纤维化基础研究的热点,并已取得了很大的进展,现就贮脂细胞影响因素,综述如下.
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脂肪性肝病诊疗进展
1 概述脂质是人体内的一类重要物质,主要分为脂肪和类脂两大类.脂肪主要指三酰甘油(甘油三酯,TG),类脂主要指磷脂、胆固醇酯、类固醇及糖脂.正常人每100g肝脏湿重约含4～5g脂质,主要用于构成生物膜的脂质双层结构,其中磷脂占50%以上,甘油三酯占20%,非酯化脂肪酸(游离脂肪酸)占20%,胆固醇占7%,其余为胆固醇酯等.肝脏是人体内物质代谢为活跃的器官,肝细胞在体内脂质的摄取、转运、代谢及排泄中起重要作用.在正常肝组织内,仅储存维生素A的贮脂细胞(又称肝星状细胞)细胞质内含有少量脂滴,而肝细胞由于其脂质的合成与排泄保持动态平衡,一般无脂质堆积,但营养良好者肝小叶肝细胞内可见散在脂滴存在.
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反义Smad4基因对贮脂细胞系CFSC生物学特性的影响
目的探讨通过反义Smad4基因转移阻断转化生长因子β1(TGF-β1)的信号传导后对贮脂细胞部分生物学特性的影响.方法分别构建、重组了含有反义Smad4基因序列的复制缺陷型腺病毒表达载体AdvATSmad4和空病毒表达载体Adv0.将两种复制缺陷型腺病毒扩增纯化,再分别转入贮脂细胞系CFSC内,测定它们生长曲线、3H掺入率(3H-TdR)、脯氨酸掺入等部分生物学特性的变化,并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western 印迹和免疫组织化学等方法检测转基因细胞Smad4和细胞外基质的表达.结果与正常对照组CFSC和转染Adv0的CFSC细胞相比较,转染AdvATSmad4的CFSC细胞内有反义Smad4表达,其生长曲线、3H-TdR、脯氨酸掺入等均有不同程度的降低,且其合成分泌Smad4和细胞外基质减少.结论反义Smad4 基因可以抑制贮脂细胞内源性Smad4的表达,抑制贮脂细胞的生长、繁殖和细胞外基质的产生,可作为抗肝纤维化基因治疗的选择之一.
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肝脏贮脂细胞体外研究概况
论述近20年来对离体肝贮脂细胞生命活动的研究,着重论述了贮脂细胞的分离、鉴定和培养,以及中药对活化贮脂细胞功能的影响,并对今后的研究进行了展望.
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实验化学性与酒精性肝纤维化大鼠动物模型的比较
目的:比较实验化学性与酒精性肝纤维化大鼠动物模型的病理改变的不同.方法:选取Wistar纯系大白鼠皮下多点反复注射四氯化碳复制化学性肝纤维化动物模型.通过递增乙醇浓度,日3次胃内灌注乙醇来复制酒精性肝纤维化动物模型.分别于第4周,第8周,第12周末进行肝脏重量,肝脏病理学以及电镜下贮脂细胞的检测.结果:化学性肝纤维化组,4周末肝脏呈点状坏死,贮脂细胞开始活化;8周末肝脏呈大片状坏死,贮脂细胞活化明显;12周末,形成较完整的纤维间隔,贮脂细胞成为肌成纤维样细胞,并分泌大量胶原.酒精性肝纤维化组,4周末肝细胞中度脂肪变性,贮脂细胞无明显活化;8周末肝细胞变性坏死,贮脂细胞开始活化;12周末,形成轻度纤维化改变,贮脂细胞活化明显并分泌大量胶原.结论:化学性及酒精性肝纤维化发展过程存在不同的发病机制.
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维甲酸对贮脂细胞增殖和细胞内核酸含量的影响
为探讨维甲酸(Retinoic acid,RA)对贮脂细胞的增殖和DNA、RNA含量影响,筛选抗肝纤维化有效药物.用原代培养的大鼠贮脂细胞,采用3H-TdR掺入实验,图象分析技术检测贮脂细胞增殖活性和DNA、RNA含量.结果维甲酸在10[5～10-4mol/L可抑制贮脂细胞3H-TdR掺入;在10-4mol/L可降低原代培养贮脂细胞的DNA、RNA含量,与对照组比较有显著性差异(P＜0.05).表明维甲酸可抑制贮脂细胞3H-TdR掺入及降低原代培养贮脂细胞的DNA、RNA含量.RA可望成为有效的抗纤维化药物.
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三氟拉嗪对贮脂细胞增殖的影响
为探讨三氟拉嗪抗肝纤维化作用的机制,采用链酶蛋白酶、胶原酶及密度梯度离心的方法,分离大鼠肝脏贮脂细胞,用MTT方法,观察了三氟拉嗪对贮脂细胞增殖的调控.结果显示低浓度三氟拉嗪的抑制作用不明显(P＞0.05),当药物浓度上升为10～20μmol.L-1时,抑制作用增强,呈明显药物浓度依赖关系.三氟拉嗪抗肝纤维化的作用是抑制了贮脂细胞的增殖.
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贮脂细胞影响因素研究进展
贮脂细胞在肝纤维化的形成中起关键作用,干预贮脂细胞增殖、胶原等细胞外基质的合成,已成为肝纤维化基础研究的热点问题,有关研究相当活跃,并已取得了很大进展,现综述如下.
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近年来肝纤维化主要新进展(上) --发病机理研究
近年来肝纤维化研究已有较大进展,业已公认,肝纤维化是一切慢性肝病的共同病理学基础,虽不同肝病致病机理不完全相同,但各种不同病因肝纤维化发生终共同途径是肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC;旧称贮脂细胞)的激活,转化为肌成纤维细胞,现认为,HSC的激活是关键.肝纤维化分子生物学研究的进展,人们已能从基因水平来认识,似乎可认为肝纤维化是一种继发性基因调控失调肝病[1].许多酒精性肝病患者虽已戒酒,肝纤维化和肝硬化继续发展[2],迄今已有资料证明,祛除原来引起肝细胞损伤的致病因子,肝纤维化进程仍可自行延续,这些更引起人们对肝纤维化研究的重视,本文就近年来肝纤维化研究主要进展作扼要介绍,供参考.
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中药肝复乐治疗大鼠肝纤维化模型的效应研究
目的:探讨肝复乐防治免疫性肝纤维化的效果及机制.方法:猪血清腹腔内注射复制SD大鼠肝纤维化模型,肝复乐混悬液经口灌胃干预.行病理及生化监测.结果:(1)12周,肝复乐组与模型组比较,血清ALT、γ-GT降低、ALB升高,肝组织MDA、HYP降低,GSH上升.肝贮脂细胞数目减少,纤维化分级减轻.(2)肝复乐组16周与12周比较,除贮脂细胞数目无明显变化外,余改变同以上指标.结论:肝复乐可参与抑制贮脂细胞激活,促进细胞外基质降解等多个环节而减轻肝纤维化,但不能阻断肝纤维化发展.
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肝纤维化的基因治疗研究进展
肝纤维化的形成是多种因素参与并长期相互作用的过程,因此肝纤维化的基因治疗也应采取综合措施[1].肝纤维化基因治疗的具体策略包括慢性病毒性肝炎的防治、抑制或减少肝脏贮脂细胞的激活、转化和增生以及细胞外基质的降解等.
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小鼠血吸虫病肝纤维化的超微结构动态观察
目的研究血吸虫病小鼠肝纤维化过程中几种相关细胞和肝组织超微结构动态变化,以探讨血吸虫病肝纤维化的可能机制.方法日本血吸虫尾蚴经皮肤感染小鼠建立血吸虫病肝纤维化模型.常规方法制作肝组织透射电镜标本并观察.常规HE染色观察其病理变化.结果HE染色显示小鼠血吸虫病肝纤维化模型建立成功.电镜观察显示小鼠感染后6 wk,急性肉芽肿周围的肝细胞发生坏死,肝窦内皮细胞窗孔减少,贮脂细胞(FSC)脂滴减少,枯否细胞胞浆出现大吞噬体和粗面内质网.8 wk时部分肝细胞发生脂肪变性,少数肝细胞间隙增宽,间面出现微绒毛.肝窦周隙内充满大量胶原纤维,并形成肝窦毛细血管化.FSC胞浆出现含胶原原纤维的分泌泡,周围见大量胶原纤维.枯否细胞粗面内质网增加.10 wk时FSC转变为肌成纤维细胞.12 wk时肌成纤维细胞减少,成纤维细胞和纤维细胞增加.结论FSC被激活转化为肌成纤维细胞是血吸虫病肝纤维化发生的关键环节,激活的枯否细胞、损伤的肝细胞和肝窦内皮细胞与FSC的活化密切相关,肝窦毛细血管化可能加速肝纤维化的发展.
