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应用肝细胞生长因子凝胶修复慢性声带瘢痕
慢性声带瘢痕(chronic vocal fold scar)一般继发于喉部创伤、炎症或者手术之后,由于声带固有层组织结构破坏而使声带生物力学功能发生改变,可导致声门功能障碍和严重的发声困难.以往组织学研究发现,声带瘢痕存在细胞外组织结构的改变,如:Ⅰ型胶原沉积物密集或者紊乱,弹性蛋白和核心蛋白多糖减少,纤连蛋白增加以及透明质酸(hyaluronic acid,HA)降低等.这些组织学变化说明慢性声带瘢痕中成纤维细胞的表型合成异常,从而导致声带组织僵硬,因此,若使声带瘢痕恢复振动功能,改变纤维母细胞的表型以及修复细胞外基质结构是必需的.
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TGF-β1和Elastin在女性PFD患者阴道前壁结缔组织中的表达及对弹性纤维的影响
目的 研究盆底功能障碍性疾病(PFD)患者阴道前壁结缔组织的病理特征,探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和弹性蛋白(Elastin)在PFD患者阴道前壁结缔组织中的表达及其对弹性纤维的影响.方法 选择资料完整的59例PFD患者[其中压力性尿失禁(SUI)合并盆腔脏器脱垂(POP)30例,单纯POP 29例]阴道前壁结缔组织标本为研究组;同期45例非SUI、非POP患者标本为对照组.常规石蜡切片、苏木精-伊红(HE)染色、Masson染色、弹性纤维染色,免疫组化法和Western blot法检测两组TGF-β1和Elastin的蛋白表达.结果 弹性纤维染色显示研究组的弹性纤维较对照组明显稀疏变细.Western blot检测与免疫组化染色结果类似,两组阴道前壁结缔组织均见TGF-β1和Elastin的表达,但研究组较对照组明显减弱,差异有统计学意义(均P＜0.01);相关性分析表明,TGF-β1和Elastin表达呈正相关.结论 盆底结缔组织弹性纤维的破坏和缺失可能与PFD的发生密切相关,Elastin和TGF-β1的减少可能共同参与了PFD的发生、发展.TGF-β1可能是盆底弹性纤维Elastin表达的重要调控因子.
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马凡综合征与高血压合并的主动脉夹层临床对照分析
主动脉夹层(aortic dissection,AD)是因主动脉壁中层胶原及弹性蛋白的变性引起的退行性变,血液穿透病变中层,并沿着动脉壁纵轴延伸致剥离的严重心血管疾病,常见于高血压、马凡综合征等患者[1].本文对马凡综合征合并主动脉夹层与高血压合并主动脉夹层发病特点、临床症状及预后等进行分析,报告如下.
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主动脉夹层患者升主动脉中层弹性蛋白与弹力纤维的变化
目的:探讨StanfordA型主动脉夹层(AD)升主动脉中层弹性蛋白和弹力纤维变化.方法:收集10例StanfordA型AD患者术中获取的升主动脉管壁组织标本与10例脑死亡捐献手术中或冠状动脉旁路移植术中获取的正常升主动脉管壁组织标本,用Western blot法检测两组标本中膜层弹性蛋白表达;用EVG弹力纤维染色分析两组升主动脉中膜层弹力纤维形态及含量.结果:Westernblot结果显示,AD升主动脉中膜层弹性蛋白含量较正常升主动脉明显降低[(0.32±0.07)vs.(1.12±0.17),t=6.722,P=0.003].EVG染色结果显示,AD升主动脉中膜层弹力纤维形态和排列紊乱,弹力板层断裂、丢失,而正常升主动脉中膜弹力纤维排列紧密、有序,弹力板结构完整,层次分明;AD升主动脉中膜层弹力纤维含量较正常升主动脉明显降低[(85 762.8±106.2)vs.(164 482.8±161.4),t=5.902,P＜0.001].弹性蛋白与弹力纤维含量在AD与正常升主动脉中膜层均呈明显正相关(r=0.953、0.973,均P＜0.001).结论:Stanford A型AD患者升主动脉中层弹性蛋白和弹力纤维含量下降,弹力纤维形态和结构紊乱,该改变可能在AD的发生中起了重要作用.
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弹性蛋白在高氧致新生鼠慢性肺疾病中的表达及其作用
目的 研究弹性蛋白在高氧致新生鼠慢性肺疾病中的表达及其作用.方法 将足月新生大鼠144只随机分为高氧组和空气组,分别于实验1 d,3 d,7 d,10 d,14 d和21 d应用弹力纤维染色、原位杂交技术分别检测secondary crest定量、tropoelastin mRNA表达.结果 高氧组在3～14 d secondary crest与空气组相比较明显降低(P＜0.05);高氧组在3～10 d tropoelastin mRNA表达与空气组相比较明显降低(P＜0.05),14 d和21 d tropoelastin mRNA表达与空气组相比较明显增加(P＜0.05),弹性蛋白原合成的高峰滞后.结论 弹性蛋白参与CLD肺泡发育受阻和肺纤维化的发生.
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养颜驻颜口服液改善皮肤衰老的作用研究
目的:考察养颜驻颜口服液对皮肤衰老的改善作用.方法:采用D-半乳糖联合紫外光照连续造模40 d制备裸鼠皮肤衰老模型,在造模第11天开始灌胃给予相应药物,连续30 d;实验结束后取材,测定裸鼠皮肤中透明质酸、羟脯氨酸、总胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、弹性蛋白含量以及血清透明质酸含量和皮肤含水量,同时对裸鼠皮肤进行组织病理学检查.结果:养颜驻颜口服液能提高裸鼠皮肤中透明质酸、羟脯氨酸、弹性蛋白、总胶原蛋白及血清透明质酸含量(P ＜0.05或P＜0.01),减轻皮肤失水老化、改善皮肤衰老.结论:养颜驻颜口服液具有一定改善皮肤衰老的作用.
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子宫主韧带中弹性蛋白、赖氨酰氧化酶表达与盆底器官膨出的关系
目的:检测女性盆底器官膨出(POP)患者子宫主韧带中弹性蛋白(elastin)和赖氨酰氧化酶(L0x)表达,探讨两种基因与POP发生发展的关系.方法:选择因子宫脱垂而行全子宫切除术的患者60例,同期选择因妇科良性疾病、无压力性尿失禁(SUI)或POP行全子宫切除术患者60例作为对照.于手术中取子宫主韧带,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定elastin、LOX mRNA的表达,免疫蛋白印迹法(Western blotting)检测两种蛋白表达.结果:无论绝经与否,POP组子宫主韧带中elastin、LOx mRNA及其蛋白表达明显低于对照组,POP组中绝经后患者elastin、LOx mRNA及其蛋白表达明显低于绝经前患者,差异显著(P<0.05);子宫主韧带elastivmRNA及蛋白表达变化与LOX相应水平呈明显的直线正相关(r=0.9959,r=0.9708,P<0.05).结论:POP患者子宫主韧带eJlastin表达减弱影响弹性纤维形成,LOX表达减弱可能通过影响胶原与弹性纤维的交联亦使盆腔支持结构稳定性降低,从而导致POP的发生;绝经后女性体内雌激素水平的降低可能通过影响LOX的表达,进而参与POP的发生.
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动脉弹性蛋白的研究进展
脑血管疾病以其高发病率、高致残率、高死亡率和高复发率,极大地危害着人类的健康.随着世界人口的老龄化,每年因脑血管病死亡的人数占居首位.因此,对脑血管疾病的研究越来越受重视,而其中的主要环节之一就是研究脑血管在生理或/和病理条件下的结构、功能特征及其增龄变化.近年的研究发现:脑动脉内弹性膜的退行性改变在脑血管疾病的发生中起重要作用.目前已经知道:在脑动脉瘤、脑动脉粥样硬化、烟雾病等多种脑血管疾病中都伴有弹性蛋白的变化,提示弹性蛋白在脑血管疾病过程中可能具有重要作用.因此,研究弹性蛋白是研究脑血管疾病的一个重要组成部分,现就有关弹性蛋白的基因结构、合成、年龄变化以及与疾病的关系等方面作一文献综述.
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原纤维蛋白-1和弹性蛋白在女性盆腔器官脱垂患者阴道前壁的表达及意义
目的 探讨原纤维蛋白-1(Fibrillin-1)和弹性蛋白(Elastin)在女性盆底器官脱垂(POP)患者阴道前壁结缔组织中的表达及与疾病发生的关系.方法 选择资料完整的90例因POP行手术治疗患者的阴道前壁组织标本为观察组,其中Ⅱ°脱垂30例,Ⅲ°脱垂30例;同期选30例非POP患者的阴道前壁组织为对照组.采用免疫组化法和逆转录-PCR(RT-PCR)法检测两组Fibrillin-1和Elastin的表达.结果 Fibrillin-1和Elastin在观察组的表达均明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).Fibrillin-1和Elastin的表达在观察组Ⅱ°脱垂及Ⅲ°脱垂中的表达差异有统计学意义(P＜0.05).Fibrillin-1和Elastin在表达上呈正相关(r=0.957,P＜0.01).结论 Fibrillin-1表达的减少导致Elastin的表达减少,从而引起了盆底弹性纤维组织的破坏及缺失,其可能参与了盆底器官脱垂的发生、发展.
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1-磷酸鞘氨醇对肺成纤维细胞纤维化发生的影响和机制
目的:研究S1P对HLF细胞纤维化的影响及机制.方法:(1)分别用S1P(1μmol/L)、FTY720-P(5μmol/L)、ponesimod(5μmol/L)、SEW2871(5μmol/L)处理HLF细胞24 h,使用Western Blot法测ECM相关蛋白表达并与只加培养基空白组对比;(2)分别用S1P1R拮抗剂W146(1μmol/L)、S1P2R拮抗剂JTE-013(0.2μmol/L)和S1P3R拮抗剂TY-52156(1.25μmol/L)预处理HLF细胞1 h,再加入S1P及S1PR激动剂分组孵育24 h后测ECM相关蛋白表达并与无拮抗剂对照组对比;(3)使用S1P2R拮抗剂JTE-013和S1P3R拮抗剂TY-52156共同预处理HLF细胞1 h,加入S1P及S1PR激动剂分组孵育24 h后测ECM相关蛋白表达并与无拮抗剂对照组及单一拮抗剂组对比.结果:(1)S1P及选择性S1P受体激动剂组均上调ECM表达,但程度不同;(2)S1P1R拮抗剂W146不影响S1P及S1PR激动剂诱导ECM合成,S1P2R拮抗剂JTE-013及S1P3R拮抗剂TY-52156均下调S1P及S1PR激动剂诱导ECM合成;(3)两种拮抗剂同时使用能使S1P及非选择性S1PR激动剂诱导ECM合成进一步降低,但不能使ponesimod组进一步降低.结论:HLF细胞中,S1P通过与S1P2R和S1P3R结合增加ECM相关促纤维化蛋白表达.
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基质金属蛋白酶9、微量元素和胎膜早破的关系
胎膜早破(PROM)指临产前的胎膜破裂,其发生率国外5%～15%,国内2.7%～17%[1],是威胁母儿健康的一个常见产科并发症,因此PROM日益受到产科界重视.尽管对PROM发生的原因研究颇多,但其确切病因尚不清楚.近年认为胎膜破裂与胎膜本身的结构变化密切相关.基质金属蛋白酶是一类结构中含Zn2+和Ca2+的蛋白水解酶,能降解细胞外基质中的所有蛋白成分,调控细胞外基质含量和胎膜结构.另外羊膜的弹性、脆性是由纤维母细胞层决定的,而铜参与赖氨酰氧化酶的生化过程,后者与弹性蛋白和胶原纤维的合成有关.本文就MMP-9、Cu2+和胎膜早破的关系作一综述.
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皮肤不老的传说
一说起衰老,每一位爱美的女性总是会非常紧张.其实衰老是机体的自然衰变过程,而皮肤衰老是人体衰老的外部表现.人的皮肤从20～25岁起就进入了自然老化状态.随着年龄的增长,皮肤中胶原蛋白弹性蛋白、糖蛋白、粘多糖及胆固醇分子均有不同程度的下降.主要表现为面部的皱纹,皮肤的松弛、粗糙,色素的沉着,眼袋,精力的不足,记忆的衰退等,这些无一不是美容的天敌.
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肝癌自发性破裂患者中的血管硬化现象
肝癌自发性破裂是一种危及生命的急性出血性并发症,患者血管壁的性能将与肿瘤的破裂有直接相关.我们检测了与血管病变相关的第八因子相关抗原(von willebrand factor,vWF)、弹性硬蛋白、弹性蛋白酶(中性粒细胞性),并发现其确有血管病变现象.
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弹性纤维系统在小鼠支气管肺发育不良中的动态表达规律
目的 观察支气管肺发育不良模型小鼠肺发育过程中弹性蛋白及其相关蛋白的表达情况,探讨弹性蛋白平衡紊乱在支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)中的作用.方法 新生1d内的C57BL/6小鼠按随机数字表法分为两组:BPD组及对照组,BPD组应用高浓度氧暴露建立BPD模型,运用HE染色和免疫组化法观察各组小鼠肺组织形态学改变,弹性纤维染色观察各组小鼠弹性纤维含量,荧光定量PCR技术观察弹性蛋白及其相关蛋白mRNA在各组小鼠中随时间变化的表达情况.结果 与对照组相比,BPD组小鼠第3天开始肺部次级脊形成受阻,直至21 d可见肺泡融合导致正常肺泡结构消失,次级脊消失,弹性纤维和弹性蛋白明显增加且紊乱无序的沉积在肺泡间隔上;BPD组弹性蛋白及其相关蛋白基因的表达显示:Tropoelastin及其相关合成蛋白Fibrillin-1、Fibrillin-2、Fibulin-4、Fibulin-5 mRNA的表达在给氧21 d时有不同程度的增加(P＜0.05),弹性蛋白交联酶Lox mRNA在给氧3～21 d较对照组明显增加(P＜0.01),弹性蛋白降解酶Neutrophil elastase mRNA在给氧1～14d表达较对照组增加(P＜0.05),21 d时减少至与对照组无明显差异(P＞0.05).结论 弹性蛋白平衡是肺泡发育的重要机制,弹性蛋白平衡紊乱在BPD小鼠病理过程中起着重要作用.
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大鼠梗阻性低顺应性膀胱的组织结构改变
目的观察大鼠梗阻性低顺应性膀胱细胞外基质成分的变化.方法光镜、电镜观察大鼠梗阻性低顺应性膀胱壁上两种细胞外基质的主要成分胶原蛋白,弹性蛋白的改变.结果与正常对照组相比,低顺应性膀胱组肌层内平滑肌束间的胶原蛋白浸润明显增多,而弹性蛋白则有所减少.结论膀胱流出道梗阻后,膀胱壁上两种细胞外基质的主要成分胶原蛋白、弹性蛋白的沉积发生了变化,使膀胱纤维化,并终可能对膀胱功能产生影响,使膀胱变为一种低容量,高压力的低顺应性膀胱.
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转化生长因子－β1/Smad3在机械力下调盆底成纤维细胞胶原、弹性蛋白表达中的作用
目的 探讨转化生长因子－β1(transforming growth factor －β1,TGF－β1)/Smad 3信号通路在机械力下调盆底成纤维细胞胶原、弹性蛋白表达中的作用.方法 收集2013年1月至2015年1月于武汉大学人民医院因非盆腔器官脱垂行阴式全子宫切除患者的骶主韧带组织,原代培养成纤维细胞,根据干预因素不同进行如下分组:①对照组:未加力及不添加TGF－β1孵育的细胞爬片细胞;② 机械力组( cyclic mechanical stretch,CMS组):力学参数4 mm 0.5 Hz的机械力加载人盆底成纤维细胞4 h;③TGF－β1组:10 ng/mL TGF－β1孵育人盆底成纤维细胞24 h;④TGF－β1+CMS组:10 ng/mL TGF－β1孵育人盆底成纤维细胞24 h后,力学参数4 mm 0.5 Hz的机械力加载人盆底成纤维细胞4 h.采用Western blot检测各组中TGF－β1、Smad 2/3 (drosophila mothers against decapentaplegic 2/3, Smad 2/3)、磷酸化( phosphorylation,p －) Smad 2、磷酸化(phosphorylation,p－)Smad 3蛋白表达情况.结果 与对照组相比,CMS组TGF－β1、p－Smad 3、I型胶原蛋白A1(Collagen 1A1,COL 1A1)、Ⅲ型胶原蛋白A1(Collagen 3A1,COL 3A1)、弹性蛋白(Elastin)表达明显下调,差异均有统计学意义(P＜0.05),Smad 2/3、p－Smad 2蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05). TGF－β1+CMS组与TGF－β1组相比,p－Smad 3、COL 1A1、COL 3A1、Elastin蛋白表达明显下调,差异均有统计学意义(P＜0.05),Smad 3蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组相比,TGF－β1 组COL 1A1、COL 3A1、Elastin、p－Smad 3蛋白表达明显上调,差异均有统计学意义(P＜0.05),Smad 3蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05). TGF－β1+CMS组与CMS组相比,p－Smad 3、COL 1A1、COL 3A1、Elastin蛋白表达明显上调,差异均有统计学意义(P＜0.05),Smad 3蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 机械力下调盆底成纤维细胞内TGF－β1蛋白表达,抑制Smad 3信号通路磷酸化,从而下调COL 1A1、COL 3A1及Elastin蛋白表达;外源性TGF－β1磷酸化激活Smad 3后可修复机械力对人盆底成纤维细胞ECM代谢损伤.
关键词： 盆腔器官脱垂 TGF－β1/Smad 3 机械力 胶原蛋白 弹性蛋白 -
氧化应激对盆底器官脱垂患者子宫旁韧带组织细胞细胞外基质代谢的影响
目的：检测盆腔器官脱垂(pelvicorganprolapse,POP)患者子宫旁韧带组织中基质代谢相关Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ, COL1)、弹性蛋白(elastin)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase, MMP-9)以及氧化损伤相关8-羟基脱氧鸟苷酸(8-hydroxy-2’-deoxyguanosine urine,8-OHdG)含量的变化,检测人子宫旁韧带成纤维细胞在氧化应激作用下基质代谢相关以上各项指标的变化,为研究氧化应激在POP发生发展中的作用机制提供实验基础和理论依据。方法选择2012年10月至2014年10月在武汉大学人民医院因盆腔脏器脱垂Ⅱ~Ⅳ度( POPⅡ~POPⅣ)行子宫全切术的患者50例( POP组)和因其他良性妇科疾病行子宫切除术患者40例(对照组),采用免疫组化方法检测患者的宫旁韧带(子宫骶韧带、子宫主韧带)组织中COL1、elastin、MMP-9、8-OHdG的表达；过氧化氢( hydrogen peroxide, H2 O2)处理人子宫旁韧带成纤维细胞,建立氧化应激细胞模型,Western blot检测该模型细胞中COL1、elastin和MMP-9蛋白表达。结果免疫组化结果显示,与对照组相比,POP患者宫旁韧带组织中COL1、elastin表达均降低,MMP-9和8-OHdG表达升高；Western blot与免疫组化具有相一致的结果。结论氧化应激可以引起宫旁韧带成纤维细胞细胞外基质( extracellular matrix, ECM)成分改变,可能参与POP的发生发展。
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大鼠大脑中动脉的形态及结构成分的增龄变化
脑血管病更是以其高发病率、高死亡率、高致残率、高复发率极大地危害人类的健康.弹性蛋白作为血管壁的一种重要的细胞外基质蛋白,对于维持正常的管壁构筑和舒缩功能起着十分重要的作用.本实验选用健康Wistar大鼠90只,雌雄不拘 ,分为幼年组(1-2月龄)、成年组(6-7月龄)、老年组(＞24月龄).采用常规染色光镜观察、透射电镜、Weigert染色、改良Heidenhain染色、图像分析等方法对大鼠大脑中动脉(MCA)管壁细胞形态、内弹性膜(IEL)构筑变化、弹性纤维及胶原纤维相对含量变化进行了研究.其结果如下:(1)常规光镜:MCA的中膜较薄、平滑肌细胞(SM Cs)少、约3～5层,与外膜间无明显的分界,弹性纤维形成一层完整的IEL,呈波浪状折叠,且折叠随增龄逐渐减少、甚至消失.(2)透射电镜:幼年组IEL均质、厚度均一 ,边缘光滑,高倍可见其内弹性纤维中心部及周围部均清晰,中膜有1-2层平滑肌细胞; 成年组IEL亦均质,边缘清晰,可见内皮细胞和中膜平滑肌细胞向IEL穿透,中膜平滑肌细胞间有少许胶原纤维;老年组:IEL变溥,不均质,可见断裂和分层,边缘伸出分支到中膜,弹性纤维周围成分消失,内皮细胞和平滑肌细胞向内弹性膜穿过,胶原纤维多.(3 )Weigert法染色:随增龄,可见IEL断裂,折叠幅度减小、数量减少;MCA中弹性纤维相对含量减少,各年龄组间差异显著.(4)改良Heidenhain染色:胶原纤维随年龄增加而增加.上述研究结果表明:大鼠MCA的IEL随增龄呈退行性变,随着年龄的增加,MCA弹性蛋白含量减少,非弹性成分增多,导致血管脆性随增龄而增加.这为探讨脑血管疾病的病理机制提供了进一步的资料.
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TGFβ1基因对血管平滑肌细胞弹性蛋白表达及与基质黏附力的影响研究
了解TGFβ1基因对血管平滑肌细胞弹性蛋白表达及与基质黏附力的影响.用DOTAP 脂质体转染pMAMneoTGFβ1于原代培养的血管平滑肌细胞,经G418筛选,TGFβ1表达经免疫荧光鉴定.原位杂交确定弹性蛋白的表达,微管吸吮系统确定平滑肌细胞与基质的黏附力.结果表明生理情况下的平滑肌细胞能表达少量的TGFβ1及少量的原弹性蛋白.经G418筛选,外源性TGFβ1在血管平滑肌细胞中稳定表达,能显著提高2～3倍原弹性蛋白的表达及细胞与基质的黏附力.说明TGFβ1在血管组织工程中具有重要的应用价值.
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弹性蛋白在生物医用材料中的应用
弹性蛋白是一种极具发展潜力的天然生物材料,它的特殊的交联、疏水结构赋予它许多优良的性质:良好的弹性、延展性、生物相容性和可生物降解等.目前,弹性蛋白是生物医用材料领域中逐渐被关注的一类材料,可应用于组织工程支架、真皮代替物等生物医用材料中.本文阐述了弹性蛋白作为生物医用材料的特性,对弹性蛋白及其衍生物基生物医用材料的应用现状和发展趋势进行了综述.
