首页 > 文献资料
-
易导致细菌鉴定失误的因素分析
我科自1983年开始参加细菌室间质控,10多年来,体会到要做好这一工作,除需备有可靠的培养基、生化反应试剂等外,还与选择适当的培养条件,观察结果的方法与时间、检验人员的知识和经验丰富与否有关.否则就有可能造成假阴性或假阳性反应,导致鉴定上的错误.现将历年来部分世界卫生组织及全国分发的室间质控菌株在鉴定过程中容易产生判断失误的实验结果综合报告如下.
-
Bacillus subtilis CICC20034产脂肪酶的培养条件研究
目的 优化Bacillus subtilis CICC 20034产脂肪酶的培养组分和发酵条件,为后续深入研究提供数据资料.方法 优化不同碳源、氮源、金属离子和培养基复配发酵培养组分;优化培养温度、pH、培养时间进一步提升菌株产酶能力.结果 佳利用碳源为甘油,无机氮源比有机氮源更有利于脂肪酶生产,优化培养组分为:10g/L甘油,10 g/LNH4Cl,8g/LNa2HPO4· 12H2O,2 g/L K2HPO4,0.5 g/L MnSO4.适培养pH 6.0,温度30℃,发酵周期28 h.结论 通过前期优化筛选,获得脂肪酶活性达24.16 U/mL,为后续深入优化和代谢调控提供了良好的数据资料.
-
醋酸菌培养条件的优化及醋酸分批发酵
目的 醋酸菌培养条件的优化与醋酸发酵实验.方法 通过正交试验确定佳培养条件,并在优化条件下进行分批发酵.结果 优化培养条件为:葡萄糖10 g/L,酵母膏10 g/L,乙醇10%(v/v),pH 5.5,装量50 mL/500 mL,静置培养5 d.在优化条件下,醋酸产量比用普通产酸培养基提高了36.4%.应用于分批发酵试验产酸较高.结论 优化培养条件适合醋酸菌生长与醋酸发酵.
-
金丝桃细胞悬浮培养条件的优化
目的 优化金丝桃细胞株的悬浮培养条件,提高黄酮产量.方法 研究激素组成、激素浓度、pH值、蔗糖浓度、培养温度、摇床转速、接种量等因素对金丝桃细胞生长量和总黄酮含量的影响,确立高产细胞系.结果 培养基成分MS(Murashige and Skoog培养基)+10-5 mol/L NAA+10-6mol/L BA,25℃,pH值5.7,蔗糖含量3%,摇床转速90 r/min,接种量60 g/L,为佳的金丝桃细胞悬浮培养条件.结论 获得的金丝桃悬浮细胞系稳定、可靠,可作为工业化生产黄酮的种细胞.
-
人黑素细胞培养佳条件的选择和生物学鉴定
观察人黑素细胞分离培养的佳条件,为研究色素性疾病奠定基础.采用改良的胰蛋白酶消化法培养黑素细胞;用多巴染色、Fontana银染、S-100免疫组化染色鉴定黑素细胞;用透射电镜观察黑素细胞超微结构.用改良的黑素细胞培养法,可得到较多的黑素细胞,未见成纤维细胞、角质形成细胞污染,鉴定结果表明为黑素细胞.超微结构显示黑素细胞内与合成功能有关的细胞器非常丰富.采用改良的胰蛋白酶消化法分离表皮和真皮,用MCDB153培养液,添加适当浓度的生长因子,能在体外成功地培养黑素细胞,且方法简单,成功率高.
-
不同培养条件对骨髓基质细胞贴壁及增殖的影响
银屑病是一种以T细胞为主、多种免疫细胞共同参与发病的慢性炎症性皮肤病.经过数年研究并结合国内外研究结果,推测骨髓造血细胞可能参与了银屑病的发病<'1-3>,为进一步研究骨髓造血细胞在银屑病发病中的作用,我们拟将银屑病患者和正常人骨髓移植于SCID鼠,用贴壁法培养骨髓基质细胞,并将其注射于经骨髓移植的SCID鼠腹腔内.在实际培养过程中发现一些问题,现将结果报道如下,供同仁们借鉴.
-
海洋细菌S-9801代谢产灵菌红素佳培养条件的研究
目的 对从渤海大陆架海泥中分离得到的细菌S-9801代谢产灵菌红素佳培养条件进行了研究.方法 通过16S rDNA测序鉴定菌株S-9801属于弧菌属(Vibrio sp.),从该菌的次级代谢产物中分离得到一个红色化合物;运用1HNMR、13CNMR、HPLC-TOF-MS等波谱数据进行结构鉴定,确定该红色化合物为灵菌红素(prodigiosin,PG).通过正交实验,对菌株S-9801产灵菌红素的培养条件进行了优化.结果 与结论以灵菌红素的产量为指标,确定细菌S-9801大量产生灵菌红素的佳培养条件为:采用蛋白胨和酵母粉培养基,NaC1浓度2%,PH 5,30℃条件下培养48 h.在该佳培养条件下灵菌红素产量可迭30 mg·L-1.
-
海洋微生物产抑真菌、抑肿瘤次生代谢产物的初步研究
从海洋环境中分离得到402株海洋真菌,1032株海洋细菌,利用稻瘟霉96孔板筛选模型对其无细胞滤液进行生物活性筛选,经过初筛和复筛得到活性强的菌株45株,其中海洋真菌13株、海洋细菌32株.选择了3株活性强的海洋细菌测试了其菌株产生活性物质的遗传和热稳定性,并选择出适宜的人工培养基.
-
培养条件对极大螺旋藻胞内和胞外多糖含量的影响
极大螺旋藻胞内和胞外多糖的含量与培养条件有关.在营养盐中,NaHC()3和NaN()3浓度减少,胞内多糖含量也减少.硝酸钠浓度减少还使胞外多糖含量增加;K2HP()4和NaCl浓度变化对藻的胞内和胞外多糖含量也有影响.培养液的pH维持在8.0和培养9d后的藻的胞内和胞外多糖含量均高.连续光照比光暗周期培养的藻的胞内多糖含量高.
-
贴壁法体外培养小鼠神经干细胞
神经干细胞是神经组织特异性的具有多向分化潜能的一类干细胞[1].国内外对神经干细胞的分离、培养已有较多研究,不同的实验室有不同的培养方法及培养条件.但用贴壁法体外培养神经干细胞的研究很少见报道,本实验成功地用贴壁法对小鼠的神经干细胞进行了分离、培养和细胞鉴定,并对其生长方式进行了观察.现报告如下.
-
用单层培养法诱导兔骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的实验研究
骨髓间充质干细胞(MSCs)因其具有多向分化潜能,易于分离,且体外扩增能力强,便于自体移植的特点,近年来被认为是有希望的种子细胞来源[1,2].2000年以来,我们在体外培养条件下采用单层培养方式分阶段研究MSCs这一分化机制,研究骨髓间充质干细胞向成软骨诱导的条件、分化模型及其相互关系,从而为气管、甲状软骨等组织工程重建提供种子细胞的可能性.
-
体外受精-胚胎移植术后的妊娠结局及多胎妊娠防治
体外受精-胚胎移植(IVF-ET)指通过超促排卵,将卵子与精子取到体外,在特定培养条件下使其完成受精和早期胚胎发育,再将胚胎移植回子宫完成着床,获得妊娠,是输卵管因素、男性因素(严重的少、弱精者除外)、免疫因素、内分泌因素、排卵障碍等所致不育的治疗手段.
-
适度节食康寿相伴
寿命为何止于120在正常的情况下,人类的寿命极限是多少?根据吉尼斯纪录,世界上长寿的人是法国一位名叫克莱门特的妇女,1996年去世时122岁.其他比较可靠的纪录,多半在110~120岁之间.传说如某某某两百多岁等,因为没有确切的出生证据等资料,都没有得到吉尼斯纪录的认可.为什么人类寿命的极限处在120岁左右?科学家们从细胞学和分子生物学方面找到了根据.著名的就是海弗利克关于细胞分裂次数的研究.此前,海弗利克的老师、法国的诺贝尔奖得主阿莱克西斯·科列尔提出一种观点:如果在适当的培养条件下,细胞能够无限制地长期存活;既然如此,那么,只要生活条件合理,人类是可以永生的.对此许多人都深信不疑.
-
从畜禽肉中分离出带耶尔森氏菌HP1毒力岛的ESIEC大肠杆菌
ESIEC是新发现一种产志贺毒素且具侵袭力的致泻大肠杆菌,是一种新的病原菌,所以我们对9株ESIEC培养条件、生化特性及小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力岛进行了检测,现将结果报告如下.
-
粪便中弯曲菌分离技术关键点研究及在监测中应用
目的:研究弯曲菌分离方法的技术关键点,并应用于腹泻监测.方法:用库存菌株和不同新鲜度腹泻粪便,接种4种弯曲菌分离培养基以五种培养条件进行配伍检测弯曲菌,以了解四种培养基不同条件下的敏感性,并用优化简便的配伍方法对2011年、2012年上半年浦东新区12个监测点的腹泻标本进行弯曲菌监测.结果:CFA和Karmali琼脂体现出良好的性能,产气袋密封罐和标准混合气密封罐显示出良好的培养条件,2~8℃保存的新鲜标本当日检验获得较高的阳性率.结论:优质的选择性培养基,简单可靠的培养条件以及新鲜的标本及时检测是弯曲菌分离技术的关键点,高效方便的分离技术为弯曲菌检测的普及以及有效开展提供强有力的支持.
-
未成熟卵母细胞体外成熟培养技术研究进展
1935年,Pincus和Enzmanz[1]观察到兔的未成熟卵母细胞在体外培养条件下可以自发完成卵母细胞的成熟过程,自此在生殖领域引入了一个新的概念即卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM).自1991年Cha[2]等报道IVM技术取得第1例妊娠以来,IVM技术已应用于治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的不孕,预防卵巢过度刺激综合征(OHSS),并与体外授精-胚胎移植技术(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF -ET)结合治疗患有严重遗传病或者因病切除卵巢的患者.大量哺乳类及人类卵母细胞体外成熟的研究表明,卵母细胞体外发育潜能明显低于体内成熟,临床妊娠率低(20%~35%).目前我们对卵母细胞成熟和获得发育潜能方面的分子机理及生理生化过程了解尚不深入,这提示IVM技术还有待进一步的探索研究.
-
互叶白千层组织培养初步研究
该文研究不同基本培养基、不同激素组合及不同培养方式对互叶白千层无菌苗生长的影响.结果表明木本改良MS基本培养基适合无菌苗生长,不同的植物部分生长对激素浓度的要求不同,在液体培养的条件下比固体培养的条件无菌苗生长较好.
-
猪苓培养条件的确立及其与蜜环菌共同培养的研究
目的 确立猪苓母种和原种的培养条件,揭示猪苓菌丝和蜜环菌菌索共同培养条件下的生长特性.方法 采用培养皿固体培养法,定期测定分析猪苓菌丝和蜜环菌菌索的形态特征及生长指标.结果 黄豆饼粉培养基以麸皮做碳源较好,C:N以4:1为佳.在母种培养基上,猪苓菌丝的长速显著高于蜜环菌菌索,蜜环菌菌索可穿透猪苓菌丝而继续生长.在原种培养基上猪苓菌丝可正常生长,蜜环菌菌索生长受抑制.结论 明确了猪苓母种和原种的佳培养条件及其与蜜环菌共培养的生长特性.
-
慢性粒细胞白血病患者的骨髓间充质干细胞的免疫调节功能特性研究
间质干细胞(MSC)是来源于胚胎发育早期中胚层的一类多能干细胞,在合适的培养条件下,可以分化为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、骨骼肌、心肌和神经细胞~([1]).此外,MSC还可以通过分泌细胞因子和接触作用调控造血干细胞的增殖、成熟、分化和黏附归巢.近的研究发现,MSC具有免疫调节作用,特别是影响T淋巴细胞增殖和功能,从而减轻排斥反应,延长移植物的存活时间~([2,3]).但是,MSC的免疫调节功能是否受到疾病状态的影响,目前尚不清楚.在本研究中,我们获取慢性粒细胞白血病(CML)患者的骨髓MSC,检测其免疫原性及体外抑制异体T淋巴细胞增殖的能力及可能机制,为其今后在临床应用提供实验依据.
-
大肠癌肿瘤相关成纤维细胞原代培养方法的优化
目的 比较大肠癌肿瘤相关成纤维细胞(CCAFs)的不同原代培养方法,筛选佳培 养条件.方法 取新鲜直肠癌标本,以高浓度双抗低温处理后进行原代培养;12 d细胞计数法比较酶消化法与组织块植入法的CCAFs培养效率;利用6d贴壁率及12d爬出细胞数法比较不同组织块大小(1、8 mm3)、培养基种类(1640、DMEM、F12)、培养瓶材质(玻璃瓶、塑料瓶)与血清浓度(10%、20%)的培养效率;所获CCAFs行免疫荧光鉴定并绘制生长曲线;以SPSS 18.0软件进行统计学分析.结果 组织块植入法优于酶消化法,12d细胞计数分别为(9.75 ±0.91) ×104个与(1.83±1.22) ×104个(f=13.733,P<0.01);12 d细胞计数法提示高血清浓度(t=-3.549,P<0.01),较大组织块(t=-1.115,P<0.05)可增加细胞培养效率;与F12和DMEM比较,1640培养基具有更高细胞培养效率和性价比,其回归方程为:Y=10.687 50-3.965 28X22-2.006 94X3+1.03472X4;培养瓶材质不影响细胞数量(t=-0.116,P>0.05);6 d细胞爬H出率与培养瓶和培养基有关,回归方程为:Y =0.813 67 +0.20 478X1-0.333 12X22;原代培养的CCAFs表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白(Vimentin).结论 高浓度双抗低温处理组织标本,以含高浓度胎牛血清的1640培养基,采用大组织块植入法是CCAFs原代培养的优化方法,获得的CCAFs具有典型肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)特征.
关键词: 大肠癌相关肿瘤成纤维细胞 原代培养 培养条件 组织块植入法