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登革病毒衣壳蛋白研究进展
登革病毒衣壳蛋白是病毒的结构蛋白之一,可与病毒基因组RNA结合构成病毒的核衣壳.同时,衣壳蛋白可进入细胞核,与多种蛋白质结合,并有可能参与对宿主细胞的调控,在病毒的感染过程中具有重要的作用.本文综述了近年来登革病毒衣壳蛋白的结构与功能等方面的研究进展情况.
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乳头瘤病毒病毒样颗粒的研究进展
乳头瘤病毒病毒样颗粒(VLP)主要衣壳蛋白L1体外表达后自我组装成结构和功能类似天然病毒的颗粒,在HPV诊断、防治等方面有重要作用.本文就HPV VLP的制备、结构,病毒组装机理,病毒与细胞相互作用以及VLP在血清学检测中的应用等方面作一综述.
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黄病毒衣壳蛋白研究进展
衣壳蛋白是黄病毒的主要结构蛋白之一,除与RNA结合构成病毒核衣壳外,衣壳蛋白还参与了病毒感染的其他过程.同时,衣壳蛋白作为减毒突变的靶标为黄病毒疫苗的研究提供了新的思路.本文就黄病毒衣壳蛋白的结构、功能及其在疫苗研究中的应用做一综述.
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GⅡ型诺如病毒衣壳蛋白抗原表位预测及单克隆抗体的制备
目的 原核表达诺如病毒衣壳蛋白VP1,制备抗诺如病毒衣壳蛋白VP1的单克隆抗体,并研究其抗原表位特性.方法 PCR扩增GⅡ型湖州株诺如病毒VP1蛋白基因,将目的基因克隆至载体pET28a(+),转化至大肠埃希菌原核表达.纯化表达产物免疫BALB/c小鼠,将成功免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合.用Modeller9.9为诺如病毒GⅡ型湖州株VP1蛋白构建三维模型,构建好的三维模型提交到SEPPA在线B-cell空间表位预测软件,对GⅡ型湖州株VP1蛋白进行空间表位预测.用预测的表位序列来筛选阳性克隆,得到对应这些表位的单克隆抗体.结果 成功构建重组表达载体pET28a(+)-Noro-VP1并在大肠埃希菌中获得表达,重组蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,用预测的抗原表位多肽筛选,获得10株杂交瘤细胞株.与重组蛋白的ELISA结果显示1E8、1P10、2C15和2L16四株反应性强,其他几株反应性较弱.Western blotting结果显示只有2K10、1K16、1E8三株能与重组蛋白很好的结合.结论 成功制备了抗GⅡ型湖州株诺如病毒VP1蛋白的单克隆抗体,抗原表位位于衣壳蛋白的P2区,为制备诺如病毒快速免疫诊断试剂盒及抗原表位的研究提供基础.
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纳米银溶液作用噬菌体MS2衣壳蛋白的分析
目的 观察纳米银消毒剂溶液对噬菌体MS2衣壳蛋白的作用,以了解金属离子类纳米消毒剂灭活噬菌体MS2的机理.方法 采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试验方法,检测纳米银消毒液作用后的噬菌体MS2衣壳蛋白的存在情况.结果 用400 mg/L纳米银消毒液对噬菌体MS2作用10 min,其平均灭活率为99.9%.作用10 min后噬菌体MS2的衣壳蛋白条带趋近消失;作用40 min可使该噬菌体完全灭活,其衣壳蛋白条带完全消失.结论 纳米银消毒液对噬菌体MS2的衣壳蛋白具有破坏作用,因此认为纳米银消毒液可有效杀灭噬菌体MS2.
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诺如病毒分子生物学研究进展
诺如病毒(NoVs)是引起人感染性胃肠炎和腹泻的主要病原体之一,通常会造成群体性的暴发疫情,给患者造成心理恐慌,同时给社会带来严重的经济负担.然而,NoVs尚不能在体外培养、基因型众多且容易变异,导致NoVs疫苗和抗病毒药物研究进展缓慢.随着病毒分子生物学技术的不断深入,NoVs基因组结构、复制特征、致病机制以及机体的免疫应答等方面已取得新的突破.本研究在介绍NoVs基因结构特征的基础上,着重从分子生物学角度将近些年有关NoVs发病机制、体内外模型、感染的诊断以及抗病毒药物及疫苗的研究现状做一综述和展望.
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兔出血症病毒复制子的构建及其在RK-13细胞中的复制
为研究兔出血症病毒(RHDV)的复制机制、病毒与宿主之间的相互作用以及致病机制等,创建一个安全、有效的技术平台,在前期构建的RHDV侵染性克隆基础上,将病毒的衣壳蛋白编码区删除,保留了RHDV复制必需的所有蛋白酶基因和两端的非编码区,构建了RHDV复制子.试验结果证明,将该复制子RNA导入RK13细胞中后,能够进行高水平的复制和表达.
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猪盖他病毒衣壳蛋白的原核表达、纯化和多克隆抗体的制备
原核表达猪盖他病毒(Getah virus)衣壳蛋白(Cap)并制备多克隆抗体.设计一对特异性引物,从含有Cap基因的pT Cap质粒中扩增全长Cap基因,克隆至携带有His标签的原核表达载体pCold Ⅰ中,通过PCR、酶切鉴定和序列测定后,重组质粒pCold-Cap转化大肠杆菌Rosetta 2,IPTG诱导后SDS-PAGE和Western blot鉴定融合蛋白；蛋白经镍柱纯化后切胶免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体.实验表明:经终浓度0.1 mmol/L IPTG 15℃诱导24 h后,Cap基因在Rosetta 2中获得高效表达,表达量占菌体蛋白的40.2％,SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量为32.3 kD.Western blot显示制备的鼠源抗血清可以与融合蛋白发生反应,有明显的特异性条带.猪盖他病毒衣壳蛋白原核表达成功,制备的多抗可以识别Cap蛋白.
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竹花叶病毒卫星RNA分子特性、基因组变异及其在生物防治上的应用
病毒虽然需要依赖寄主细胞才能存活,但却有许多亚病毒分子为其寄生物,这些亚病毒分子需要辅助病毒来帮助其复制与包被.卫星病毒(satellite virus)、卫星RNA(satellite RNA)和类病毒(viroid)是目前所知分子小的生物实体(biological entity).多数卫星病毒与植物病毒相关,少数与噬菌体或动物病毒相关,如腺病毒的卫星病毒.卫星病毒可分为两大类,一类可编码自身的衣壳蛋白(capsid protein),另一类为卫星病毒RNA分子(曾被称为virusoid),需利用辅助病毒的衣壳蛋白.卫星病毒基因组为长度约0.5～2kb的单链RNA,与辅助病毒基因组无同源性,复制时常干扰辅助病毒的增殖.
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圆环病毒Cap基因及其编码的衣壳蛋白研究进展
圆环病毒负义链上的Cap基因是基因组中变化大的基因,其编码病毒的衣壳蛋白,具有良好的免疫原性,N端的核定位信号与病毒的定位有关.本文对圆环病毒Cap基因的序列特点、编码衣壳蛋白氨基酸序列的特点、基本功能、在病毒复制、运输中的作用以及与MKRN1蛋白、热激蛋白Hsp40、受体蛋白gC1qR、补体因子C1qB的相互作用进行了总结,旨在阐明衣壳蛋白在病毒吸附、复制以及运输中发挥着重要作用,为今后深入研究提供重要的理论依据.
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降低重组腺相关病毒载体免疫反应的策略
重组腺相关病毒(Recombinant adeno-associated virus,rAAV)载体在基因治疗研究中应用广泛,但可能引发机体产生免疫反应,限制了其在基因治疗领域的临床应用,如何降低rAAV载体的免疫反应已经成为基因治疗领域的研究重点之一.本文从对rAAV载体的选择和对患者免疫抑制调控两个方面介绍降低rAAV载体免疫反应的策略.
关键词： 基因治疗 重组腺相关病毒(rAAV)载体 免疫反应 衣壳蛋白 -
风疹病毒诱导细胞凋亡分子机制的研究进展
风疹病毒是披膜病毒科风疹病毒属的唯一成员,能够诱导细胞发生细胞凋亡.Ras-Raf-MEK-ERK和PI3K-Akt信号通路是病毒增殖与细胞生存的必要通路,在细胞凋亡过程中起着必不可少的作用.p53蛋白和TAp63蛋白能够进入细胞核与DNA特异结合,抑制Bcl-2的表达,促进Bax的表达,导致线粒体内外膜间的物质(细胞色素C等)释放,进而引起caspase级联反应,终导致细胞凋亡.本文从风疹病毒感染的细胞系,病毒感染导致的细胞病理改变和病毒诱导的细胞凋亡信号通路及其相关因子等方面对风疹病毒诱导细胞凋亡的分子机制进行了综述.
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诺如病毒CHN02/LZ35666株RdRp和VP1基因序列分析
诺如病毒(Noroviruses, NVs)为杯状病毒科的一个属,是引起人类病毒性胃肠炎暴发的重要病原.在美国、欧洲和日本,病毒性胃肠炎暴发中由NV引起的占93%[1-3].NV的基因组为单股正链RNA,全长约7.7kb,由3个开放阅读框(open reading frames, ORFs)组成,ORF1编码非结构蛋白,其中包括RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase, RdRp )[4],ORF2和ORF3分别编码主要(VP1)和次要(VP2)衣壳蛋白[5].VP1蛋白折叠成两个区域,壳区(Shell,S)和突出区(Protruding,P),S区形成内壳,P区形成拱样结构突出于内壳外.P区进一步分为P1和P2亚区,后者位于衣壳的外面, P2区相对于S区和P1区序列高度变异,被认为是免疫识别和受体结合的关键部位[6-9].
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黄瓜花叶病毒衣壳蛋白基因转化辣椒研究
黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)的普遍发生和严重危害是辣椒生产上的一个重要限制因素,寻求新的防治方法是当前辣椒生产上的当务之急.我们在南方香蕉花叶病的调查研究中共鉴定了三种CMV株系[1,2,3],并将其优势株系CMV-BS的衣壳蛋白(coat protein,CP)基因转入了土尔其(Turkish)烟、本生烟(Benthemiana)[4]和广东两种烤烟(G28和K326)[5],对其后代的检测表明,表达CMV-BS株系CP基因的植株具有较为广谱的抗病毒能力.因此我们利用农杆菌双元载体系统将CMV-BS株系的CP基因转化入了辣椒.
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肠道病毒71型的研究进展
肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)是小RNA病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus)成员,其感染主要引起患者手足口病(hand-foot-and-mouth disease,HFMD).通常情况下,EV71感染引起的HFMD在临床症状等方面与柯萨奇病毒A16(Coxsackie A16,CA16)引起的手足口病难以区别,但EV71感染除了引起HFMD以外,还能够引起无菌性脑膜炎(aseptic meningitis)、脑干脑炎(brainstem encephalitis)和脊髓灰质炎样的麻痹(poliomyelitis-like paralysis)等多种与神经系统相关的疾病[1].自1974年首次报道[2]以来,EV71已在世界范围内引起十多次爆发与流行[3-6].近年来,EV71病毒的流行在亚太地区呈上升趋势[7-9].根据病毒衣壳蛋白VP1核苷酸序列的差异,可将EV71分为A、B、C 3个基因型,其中,B型和C型又进一步分为B1、B2、B3、B4以及C1和C2亚型[10-12].
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柯萨奇B3病毒基因在重组痘苗病毒中的表达
将编码柯萨奇B3病毒(CVB3)衣壳蛋白VP1和VP2的基因,分别克隆到具有7.5k启动子的痘苗病毒表达载体pGJP5上;将CVB3衣壳蛋白全基因克隆到具有T7启动子的痘苗表达载体pTM1上,并筛选到相应的重组痘苗病毒VVP1、VVP2和VVP/4/2/3/1.VVP1和VVP2稳定表达产物为CVB3衣壳蛋白VP1和VP2,而VVP/4/2/3/1的产物VP4/2/3/1为一无分泌性的多聚蛋白,且这三种表达产物均属无分泌性蛋白.为了表达成熟的CVB3衣壳蛋白,将去除5′端非编码区的CVB3全基因克隆到具有T7启动子的痘苗表达载体pTM1上,利用重组痘苗病毒VT7所提供的T7RNA聚合酶,在哺乳动物细胞中进行了暂时表达研究.Western blot分析提示,VP1、VP2和VP3蛋白得到成熟表达,且发现表达产物具有分泌性.本研究将为今后研究CVB免疫性打下基础.
关键词： 柯萨奇B3病毒(CVB3) 衣壳蛋白 重组痘苗病毒 -
凋亡素选择性抗肿瘤的分子机制
凋亡素(apoptin)是一种来源于鸡贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)的小分子量蛋白.CAV是一种无囊膜的DNA病毒,其基因组为2300 bp的单链环状DNA分子,含有3个完全或部分重叠的开放读码框,分别编码3个蛋白质:VP1、VP2和VP3[1].VP1为主要的衣壳蛋白,相对分子质量51 600.VP2为非结构蛋白,相对分子质量24 000,其具有双重性质的磷酸酶活性并且主要与VP1相互作用.VP1与VP2为CAV复制所必需[2].VP3亦称为凋亡素,相对分子质量13 600,能选择性诱导多种肿瘤细胞凋亡,如骨肉瘤、肝癌、黑色素瘤、肺癌、前列腺癌等,而不杀伤正常细胞[1,3-5].
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特异性的VP1-siRNA对CVB3复制抑制作用的研究
目的研究特异性的CVB3-VP1 siRNA对CVB3体外复制的抑制作用的量效关系与时效关系.方法CVB3感染HeLa细胞,利用脂质体介导将CVB3-VP1 siRNA转染HeLa细胞,用RT-PCR法检测CVB3-VP1 RNA水平,免疫荧光检测CVB3-VP1蛋白的表达水平.结果60pmol/L CVB3-VP1 siRNA是抑制CVB3 RNA及VP1表达的佳剂量;在转染后的48 h,siRNA对CVB3-VP1的抑制作用达到佳状态.结论特异性的CVB3-VP1 siRNA对CVB3-VP1蛋白表达水平及CVB3-RNA复制水平呈明显的剂量依赖关系和时效关系,转染后48 h呈现出完全抑制作用.
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乙肝病毒衣壳作为肝癌基因转移载体的有效性检测
乙型肝炎病毒(HBV)的嗜肝性主要是由于衣壳上镶嵌的外衣壳蛋白PreS1(21～47 区段)与肝细胞膜表面的HBV受体结合而引起,因此利用此生物学特性有可能将HBV改造成肝癌靶向性基因转移载体.
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WU多瘤病毒衣壳蛋白原核表达及初步分析
目的 获得WU多瘤病毒重组衣壳蛋白,分析其抗原性,筛选具有诊断价值的抗原.方法 采用PCR技术扩增WU多瘤病毒衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的基因片段,并将目的基因插入PGEX-20T表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达.用免疫印迹法对表达蛋白进行鉴定和分析并用临床样本进行初步验证.结果 重组质粒在BL21(DE3)菌株中经IPTG诱导、SDS-PAGE和免疫印迹鉴定显示在相对分子质量(Mr) 69×103、63×103和56×103处出现清晰条带,重组质粒经双酶切鉴定,表达产物经GST标签鉴定均正确.16份呼吸道分泌物WU多瘤病毒核酸阳性血清标本和70份阴性标本免疫印迹分析表明,重组蛋白具有良好的抗原性.结论 成功构建了WU多瘤病毒衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的表达载体,表达的重组蛋白具有良好的抗原性,为进一步研究提供了资料.
