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戊型肝炎病毒抗原研究进展
戊型肝炎病毒(HEV)为线状单股正链RNA病毒,基因组全长约7.5kb(7.2~7.6kb),编码2 400~2 533个氨基酸,由5'端非结构区(NS)和3'端结构区(S)组成,3'端带一个由150~200个腺苷酸残基组成的poly A尾巴.HEV基因组含3个开放读码框架(ORFs),ORF1位于5'NS区,长5 079bp(第28~5107nt),编码HEV复制相关蛋白,包括甲基转移酶、木瓜酶样的蛋白酶、解旋酶、RNA依赖性RNA聚合酶(RDRP);ORF2从ORF1终止密码下游37个bp开始,长1 980bp(第5 147~ 7127nt),编码660个氨基酸,主要包括信号肽和衣壳蛋白;ORF3位于ORF1、ORF2之间(第5 106~5 478nt),与两者均有部分重叠,长369bp,编码一段123个氨基酸的多肽,功能不清.有学者认为ORF3编码的蛋白是一种与细胞骨架有关的磷蛋白,也有认为与转膜元件有关.本文仅就HEV抗原表位及ORF2抗原真核表达的研究进展简要综述如下.
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前S1蛋白检测在慢性乙型肝炎患者病理诊断中的价值
乙型肝炎病毒(HBV)的外衣壳蛋白包括S蛋白、前S1蛋白(Pre-S1)和前S2蛋白,近年来一些基于血清学的研究资料显示,Pre-S1蛋白含有肝细胞膜受体,与病毒侵入肝细胞以及HBV复制关系密切.而对于肝组织中Pre-S1蛋白的表达与HBV DNA的复制状态、血清学标记及组织损伤程度等关系的研究较少,我们采用免疫组化、免疫组化双标记结合肝脏组织学病变对Pre-S1蛋白在慢性乙型病毒性肝炎病理诊断中的价值进行了初步探讨.
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慢性乙肝患者检测HBV前S1蛋白的临床意义
HBV的衣壳蛋白包括S和前S蛋白,后者又分为前S1(Pre-S1)和前S2(Pre-S2)蛋白,前S蛋白在HBV附着和侵入细胞机制中起着重要作用[1].本文采用酶免疫分析法和放射免疫分析法,对乙肝病人及HBV携带者血清进行Pre-S1蛋白和乙肝标志物的检测,分析在各种型别乙肝病人体内Pre-S1的存在情况,从而评价Pre-S1在HBV感染过程中的作用.
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哺乳动物呼肠孤病毒外壳蛋白和受体研究进展
哺乳动物呼肠孤病毒吸附和侵入宿主细胞是感染启动的关键一步,包括病毒表面蛋白的不同区域同细胞表面不同的受体发生相互作用.病毒表面蛋白包括三种:s1、s3和m1,这三种蛋白在与受体的结合上具有不同的作用.细胞表面的受体包括唾液酸、JAM-1,未知的碳水化合物等,这些受体在病毒吸附和侵入细胞时能特异性的与病毒表面蛋白结合,被认为是病毒宿主范围和组织嗜性的一个决定因素,因此,受体与表面蛋白的相互作用的研究有助于揭示病毒的感染途径及细胞内的复制过程.本文简要介绍近年来在这方面的研究进展.
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新疆Kaposi肉瘤组织中人类疱疹病毒8型潜伏期相关核抗原的检测
人类疱疹病毒8型(HHV-8)又称为Kaposi肉瘤相关疱疹病毒,与Kaposi肉瘤相关疾病的发生有密切关系[1,2].HHV-8潜伏期相关核抗原(LANA)是HHV-8的开放阅读框73(ORF73)编码的一种病毒衣壳蛋白,潜伏感染状态病毒稳定表达LANA,它在病毒基因整合到宿主基因组的过程中起重要作用,而且可以抑制P53蛋白转录活性,因其较好的表达稳定性和特异性常用来检测HHV-8的感染状态.我们用免疫组化方法在43例新疆Kaposi肉瘤石蜡组织中检测了LANA的表达情况,并探讨了在Kaposi肉瘤发病中的作用.
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沙眼衣原体噬菌体衣壳蛋白Vp1血清抗体的检测
衣原体噬菌体作为一种侵袭衣原体的病毒可使衣原体解体,具有抗感染的作用.目前已经发现6种衣原体噬菌体,其上的Vp1蛋白为衣原体噬菌体的衣壳蛋白.是主要的结构蛋白.该蛋白高度保守并可诱导机体产生抗体反应,适用于作为噬菌体的诊断抗原[1].沙眼衣原体是引起非淋球菌性尿道炎的主要病原体,其诊断困难、并发症严重.目前尚未在沙眼衣原体中发现噬菌体的存在.我们以豚鼠结膜炎衣原体(GPIC)噬菌体(PhiCPGI)的莺组Vp1纯化蛋白为抗原,通过ELISA法初步了解Ct感染者血清中针对Vp1蛋白的抗体,并用Western印迹法验证该抗体的特异性,推测Ct感染者血清中Vp1蛋白的存在,为沙眼衣原体与噬菌体的研究提供参考.
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人乳头瘤病毒衣壳蛋白结构生物学研究进展
人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的感染会导致人类多种疾病,尤其是女性宫颈癌.HPV衣壳是由主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2形成的T=7的正二十面体结构,L1蛋白具有较强的免疫原性且能在体外自组装形成与天然病毒结构相似的类病毒颗粒(virus like particle,VLP),是目前HPV疫苗的理想形式.此外,L1、L2蛋白在病毒的感染中发挥着重要作用.对HPV衣壳蛋白结构和功能的研究,有助于进一步阐明HPV的颗粒组装机制、致病机理及感染机制,为今后开展HPV相关疾病的研究提供指导方向.本文就HPV衣壳蛋白的结构、病毒颗粒组装及衣壳蛋白间相互作用研究进展进行综述.
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肠道病毒衣壳蛋白致病性研究进展
肠道病毒是人类感染率很高的一种病毒,其衣壳蛋白在病毒的致病性方面起着重要的作用.近年来,大量的研究工作致力于肠道病毒农壳蛋白的致病性研究.此文就衣壳蛋白的基因组结构、基因分型、与病毒受体的相互作用和疫苗研制等方面作了综述.
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肠道病毒71型衣壳蛋白VP1的原核表达和纯化及其抗原性和免疫原性的验证
目的 探究利用大肠埃希菌原核表达系统表达的肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1的抗原性和免疫原性.方法 将EV71 H3-TY株的VP1基因通过PCR扩增,并引入Nde Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点,定向克隆至pET44a-EV71 VP1表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3),并用IPTG诱导VP1的表达.然后将表达的重组VP1 (rVP1)经超声、离心和Ni-NTA亲和层析柱纯化并透析复性,用Western免疫印迹法和先前建立的夹心ELISA等方法检测其抗原活性,同时用rVP1免疫兔子并通过测定其诱导的特异性抗体水平来确定其免疫原性.结果 rVP1在大肠埃希菌中主要表达于包涵体中,但能被顺利且有效地纯化和复性.SDS-PAGE显示表达的rVP1相对分子质量约为34 000,与预期大小相符.纯化的rVP1可分别与兔抗EV71多克隆抗体、大鼠抗EV71 VP1单克隆抗体(单抗)和小鼠抗EV71 VP1单抗进行特异性免疫应答.rVP1免疫兔诱导产生的特异性抗体效价高达729 000,高于本底效价,且差异有统计学意义(t=2.646,P<0.01).结论 EV71 VP1在大肠埃希菌原核表达系统中得以成功表达,纯化的rVP1具有良好的抗原活性和免疫原性.
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2014年浙江湖州南浔地区肠道病毒71型VP1基因特征分析
肠道病毒71(EV71)是引起HFMD的主要病原。EV71是小 RNA 病毒科肠道病毒属(Enterovirus)成员,是正向单链RNA病毒。 EV71病毒粒子的衣壳由60个亚单位构成,后者又是由4种衣壳蛋白(VP1~4)拼装成五聚体样结构。4种结构蛋白中,除VP4包埋在病毒粒子外壳的内侧与病毒核心紧密连接以外,其他3种结构蛋白均暴露在病毒颗粒的表面,因而抗原决定簇基本上位于VP1~3。根据病毒衣壳蛋白VP1核苷酸序列的差异,可将EV71分为A、B和C三个基因型[1]。
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乙型肝炎病毒PreS1抗原检测的临床应用
PreS1抗原位于乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)组成成分之一大分子蛋白的N末端,只存在于具有传染性的完整的HBV颗粒上,它与乙型肝炎病毒S抗原、前S2共同构成HBV的衣壳蛋白.PreS1含有肝细胞膜受体,可直接与肝细胞膜结合,在HBV感染肝细胞和机体免疫应答中起重要作用.
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登革热病毒(DENV)包膜蛋白特异性人源抗体筛选与鉴定
目的 建立自外周血快速筛选识别登革热病毒衣壳的人源抗体的方法,从病毒感染者外周血记忆B细胞中筛选出特异性抗体并进行性质分析.方法 通过流式细胞术分选得到外周血中登革热病毒包膜蛋白特异性的单个记忆B细胞,结合高效单细胞PCR技术获得抗体基因序列,对重组表达的单克隆抗体进行结合活性及中和活性检测.结果 成功筛选到识别DENV-1包膜蛋白的6株人源单克隆抗体,其中4株抗体均具有很强的结合活性以及中和活性.结论 成功的通过流式细胞术对DENV特异性记忆B细胞进行分选,并结合单细胞PCR技术,实现了对DENV特异性人源单克隆抗体的高效筛选.通过该平台有希望筛选得到DENV的广谱中和抗体,用于登革热的预防和治疗.
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阴道毛滴虫病毒衣壳蛋白基因cap2037的克隆与表达
目的 对阴道毛滴虫病毒衣壳蛋白基因的克隆与原核表达.方法 提取阴道毛滴虫总核酸为模板,根据所克隆的阴道毛滴虫病毒部分序列和GenBank中发表的阴道毛滴虫病毒TvV-T1序列设计一对引物,经RT-PCR得到与预计大小一致的PCR特异性产物,将其克隆到pMD-18T载体后测序,并与GenBank中核苷酸序列进行同源性搜索与分析,再将其克隆至表达载体pET28a.并以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.结果 目的基因片段长度为2 037bp,与阴道毛滴虫病毒T1株(U08999)的同源性高为82.9%,构建原核表达载体pET-Cap2037;IPTG诱导后,SDS-PAGE显示表达产物的大小约75kDa.结论 成功克隆出阴道毛滴虫病毒衣壳蛋白基因序列,与TVV-T1株序列有82.9%的同源性,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明,75kDa蛋白基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达.
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亚洲1型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因在昆虫细胞中的共表达
目的 在昆虫细胞中表达亚洲1型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和疫苗奠定基础.方法 从质粒pTOP-P1-2A和pTOP-3C中分别扩增出编码亚洲1型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和3C蛋白酶基因,构建转移载体pDual-P1-2A-3C并与大肠杆菌(Escherichia coli)DH10Bac中的Bacmid质粒重组,构建重组转座质粒rBacmid-P1-3C.在脂质体介导下将rBaemid-P1-3C转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒.在Sf9昆虫细胞中共表达P1-2A和3C蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot和Dot-ELISA试验鉴定重组蛋白.结果 目的基因在昆虫细胞中得到了正确的表达,表达蛋白与抗亚洲1型FMDV血清发生特异性反应.有良好的抗原性.结论 成功在昆虫细胞中表达亚洲1型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因.
关键词: 口蹄疫病毒 衣壳蛋白 昆虫细胞杆状病毒表达系统 表达 -
诺如病毒衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
目的制备诺如病毒衣壳蛋白特异性单克隆抗体,为诺如病毒的快速检测及致病机制的研究提供实验材料.方法用分别表达GGⅡ1、GGⅡ3、GGⅡ4和GGⅡ7型诺如病毒衣壳蛋白的重组腺病毒联合免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得分泌高滴度针对衣壳蛋白的杂交瘤细胞株,测定单抗免疫球蛋白亚类及单抗效价,用间接ELISA、间接免疫荧光和Western-blot检测单克隆细胞株的特异性.结果通过细胞融合和克隆化,筛选出4株分泌抗衣壳蛋白的杂交瘤细胞株V1E、V1E9、V1D6和V6D6.间接ELISA、免疫荧光和Western-blot检测结果表明,V1E和V1E9可以与GGⅡ4型诺如病毒衣壳蛋白发生特异性反应,V1D6和V6D6可以同时与GGⅡ1、GGⅡ3、GGⅡ4和GGⅡ7型诺如病毒衣壳蛋白发生特异性反应.结论获得了诺如病毒特异性单克隆抗体,为制备免疫诊断试剂盒及致病机制的研究奠定了基础.
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肠道病毒71型VP1蛋白研究进展
肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)为手足口病的主要病原体.目前,手足口病的发病机制并不完全清楚,临床上缺乏有效的疫苗及特异性治疗药物.作为EV71主要衣壳蛋白,VP1在EV71的吸附和穿入过程中起着重要作用.另一方面,VP1上存在特异性中和性抗原表位,在EV71疫苗研究中占有重要地位.本文主要概括EV71 VP1结构、功能及与之相关疫苗的研究进展.
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汉坦病毒基因分型及其分子流行病学研究进展
汉坦病毒属布尼亚病毒科(Bunyaviridae)汉坦病毒属(Hantavirus,HV),为分节段的单股负链RNA病毒,病毒基因组有大(L)、中(M)、小(S)3个片段组成,分别编码病毒RNA依赖的RNA多聚酶、病毒糖蛋白G1和G2以及病毒的糖衣壳蛋白(NP)[1].已知人类感染HV病毒主要引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒肺综合征(HPS).该病毒自1978年韩国和1981年我国被发现并分离成功以来,已建立了许多的实验诊断技术和研究方法,并不断地改进和发展,极大的提高了相关实验技术的特异性和敏感性[2-3].近年来,随着分子生物学技术迅速发展,特别是PCR和序列分析技术的广泛应用,人们对HV病毒分子结构本质和特征的研究取得了突破性进展,新发现的HV病毒数目急剧增加,到目前为止至少有近30种HV病毒血清/基因型[4-5].现将近年基因分型及其分子流行病学研究综述如下.
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乙肝患者前S1蛋白与乙肝标志物联合测定临床意义的探讨
乙肝病毒(HBV)是一种嗜肝细胞病毒,在人群中具有很高的感染率.HBV的衣壳蛋白包括S蛋白和前S蛋白,前S蛋白又分为前S1蛋白和前S2蛋白.现巳证明前S1蛋白对HBV附着于肝细胞及诱导特异性免疫应答具有重要作用.有人分别对前S1蛋白和前S2蛋白进行详细研究,认为前S1蛋白较前S2蛋白在病毒的致病机制中可能起着更为重要的作用.它可作为病毒复制和判断病毒活动的指标.本文对303例HBV患者同时作前S1蛋白和乙肝标志物测定,对两者的关系作进一步探讨.
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诺如病毒衣壳蛋白在酵母细胞中的表达研究
目的研究诺如病毒衣壳蛋白在酵母细胞中的表达.方法2013年3-11月收集病毒性腹泻患者粪便标本.将GII-4型诺如病毒的衣壳蛋白序列克隆到pPICZ A载体中.然后将重组的pPICZ A-NV4质粒转化到毕氏酵母中进行蛋白表达.并采用western blot和电镜方法鉴定表达产物.结果除未诱导(0 h)外,其他诱导的时间下均检测到预期的衣壳蛋白(58 kDa),并且蛋白表达量随诱导时间有递增趋势,在72 h达到高峰,96 h表达量略有下降.空白对照(未含有衣壳蛋白序列的Pichia pastoris的Pichia pastoris(诱导72 h)未检测到相应的杂交信号.在Pichia pastoris中表达出诺如病毒的衣壳蛋白,呈病毒颗粒状,直径为30 nm左右.结论成功表达出颗粒状的衣壳蛋白,为进一步开发诺如病毒的快速检测试剂盒和疫苗的研究奠定了基础.
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HBV前S1抗原及HBV-M和HBV-DNA在乙型肝炎诊断及判断预后中的关系
前S1蛋白(PreS1),前S2蛋白和乙型肝炎病毒s抗原(HBsAg)三者共同构成乙型肝炎病毒(HBV)的衣壳蛋白,PreS1含有肝细胞膜受体,在HBV感染肝细胞和机体免疫应答反应中超重要作用.作为一项新的HBV血清学检测指标,PreS1-Ag的检测已被普遍应用于乙型肝炎的实验室诊断和疗效观察.我们对310份慢性乙型肝炎患者血清进行了酶联免疫吸附实验,基因检测及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)联合检测,进而分析探讨这些指标之间的关系.