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乳腺癌患者T细胞受体基因重排及CDR3区序列分析
目的 分析乳腺癌转移淋巴结穿刺标本中T细胞受体(TCR)β链克隆性基因重排及互补决定区3(CDR3)区序列.方法 应用RT-PCR扩增2例反应性增生淋巴结及3例乳腺癌转移淋巴结T细胞24个TCR Vβ亚家族的CDR3基因,并经基因扫描确定T细胞克隆性,对提示单克隆或寡克隆增生亚家族的PCR产物进行测序.结果 乳腺癌转移淋巴结T细胞中TCR存在限制性取用,仅表达3～5个Vβ亚家族.增生的T细胞存在克隆性特点,增生形式包括寡克隆及多克隆.CDR3区序列分析证实增生的T细胞克隆具有不同的氨基酸序列.结论 乳腺癌转移淋巴结中存在T细胞克隆性增生,其TCRVβ呈限制性取用,不同T细胞克隆的CDR3序列不同.
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外周T细胞淋巴瘤TCR基因重排及CDR3谱型分析
目的 分析外周T细胞淋巴瘤穿刺标本中T细胞受体(TCR)β链克隆性基因重排及互补决定区3(CDR3)谱型.方法 应用RT-PCR扩增TCR V β 24个亚家族的CDR3基因,并经基因扫描确定T细胞克隆性,对提示单克隆或寡克隆增生亚家族的PCR产物测序分析其CDR3序列.结果 4例淋巴瘤患者TCR表达受到明显抑制,仅表达1～4个Vβ亚家族.所有患者均存在1个或多个Vβ亚家族的克隆增生T细胞,增生形式包括单克隆、双克隆及寡克隆增生趋势.CDR3区序列分析证实增生的T细胞克隆具有不同的氨基酸序列.结论 外周T细胞淋巴瘤患者存在T细胞克隆性增生,其TCR V β呈限制性取用,不同克隆T细胞具有不同的CDR3谱型.
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实验性变态反应性神经炎T细胞受体Vβ基因的表达和特征
目的 探讨在实验性变态反应性神经炎(EAN)中特异性识别抗原并呈优势扩增的为哪些Vβ亚家族基因.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、原位杂交技术,比较T细胞受体(TCR)Vβ2、6、8、10、14基因mRNA在EAN组和对照组大鼠外周血、淋巴结及周围神经组织中的表达水平.结果 (1) TCRVβ6、8基因mRNA在EAN大鼠淋巴结中的表达(个/HP,下同)早期即有升高(分别为41.1±1.1和74.4±1.9,对照组为25.9±1.5和26.1±1.6),至发病高峰期更加明显,恢复期则与对照组无显著差异.(2) EAN组大鼠周围神经浸润T淋巴细胞的TCRVβ 6、8基因mRNA的表达从潜伏期(分别为4.9±2.9和11.7±9.1)至发病高峰期(分别为18.8±5.8和36.5±6.3)逐步增加,恢复期又有所下降,差异有极显著意义.(3) EAN大鼠发病早期及高峰期淋巴结与周围神经浸润淋巴细胞中TCRVβ 8基因mRNA的表达高于TCRVβ 6基因,差异有极显著意义.结论 T细胞上识别和限制EAN发病的特异性抗原的TCRVβ基因亚家族为TCRVβ 6和Vβ 8,以Vβ 8为主;特异性表达TCRVβ 6、8基因的T淋巴细胞在淋巴结中被激活并克隆性扩增,继而迁移至病变的周围神经组织中,可能导致一系列的免疫损害.
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甲状腺乳头状癌的基因重排分析
目的 研究中国人甲状腺肿瘤的RET/PTC和H4-PTEN基因重排的规律及其与临床病理的联系.方法 运用RT-PCR和测序的方法,检测了139例患者的甲状腺肿瘤组织中RET/PTC-1、RET/PTC-2、RET/PTC-3、ELKS-RET以及H4-PTEN(H4/PTEN和PTEN/H4)的重排方式.结果 在126例甲状腺乳头状癌中,共发现12例RET/PTC-1重排、6例RET/PTC-3重排、6例次H4/PTEN重排和7例次PTEN/H4重排,其中有3例同时检出了两种以上重排,总的重排阳性率为21.4%(27/126).H4-PTEN重排阳性的病例在三次重复实验中,不能得到相同的结果.重排阳性的病例具有发病年龄较轻(P=0.02)和淋巴转移概率较高的特点(P=0.02),RET重排阳性的患者颈侧区的淋巴转移的概率较高(P＜0.01).PTEN/H4重排也存在于甲状腺髓样癌(2/5).结论 H4-PTEN重排可以与RET/PTC重排同时发生.甲状腺乳头状癌是一种具有高度重排易感性的肿瘤.重排阳性的甲状腺乳头状癌具有发病年龄较轻和淋巴转移概率较高的特点.
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基因重排检测在原发性鼻腔非霍奇金淋巴瘤诊断和分型中的应用
目的 探讨免疫球蛋白重链(immunoglobulin heavy chain, IgH)和T细胞受体(T-cell receptor, TCR)基因重排在鼻腔非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma, NHL)诊断和分型中的价值.方法 采用两对引物进行半巢式聚合酶链反应(polymerse chain reaction, PCR)检测11例B细胞淋巴瘤组织DNA的单克隆性IgH基因重排;采用两对引物进行一步法PCR 检测23例NK/T细胞淋巴瘤和20例T细胞淋巴瘤组织DNA的单克隆性TCR基因重排.以10例鼻息肉组织标本作为对照.结果 11例B细胞淋巴瘤中IgH基因单克隆性重排10例阳性(90.9%),20例T细胞淋巴瘤中 TCR基因单克隆性重排17例阳性(85.0%),23例NK/T细胞淋巴瘤中TCR基因单克隆性重排10例阳性(43.5%). 10例鼻息肉标本采用相应引物扩增结果均为阴性.结论 在鼻腔NHL中,基因重排检测是一种有效的辅助诊断和分型方法,采用两对引物进行PCR可提高基因重排检测的阳性率.
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免疫球蛋白重链基因重排检测对眼附属器淋巴增生性病变的诊断研究
目的 探讨多聚酶链反应(PCR)检测免疫球蛋白重链(IgH)基因重排在眼附属器淋巴增生性病变良恶性鉴别中的应用价值.设计 实验性研究.研究对象 32例眼附属器淋巴增生性病变存档蜡块标本.方法 应用PCR检测眼附属器淋巴增生性病变的IgH基因重排,结合常规HE染色和免疫组织化学染色结果进行分析.主要指标 组织病理形态,免疫表型特征及基因重排形式.结果 17例淋巴瘤中12例IgH基因呈单克隆性重排,阳性率为70.6%;10例反应性淋巴细胞增生中1例呈单克隆性重排,阳性率为10%.两者差异有统计学意义(P=O.004).5例不典型淋巴细胞增生中,3例基因呈单克隆性重排,支持恶性淋巴瘤的诊断;2例呈多克隆性重排,支持良性反应性增生的诊断.结论 依靠常规HE染色和免疫组织化学染色有时难以明确眼附属器淋巴增生性病变的良恶性,此时应用PCR检测病变的IgH基因重排,有助于鉴别其良恶性.(眼科,2008,17:33-36)
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免疫球蛋白重链基因重排及bcl-2/JH融合基因检测眼眶淋巴细胞增生性疾病
目的探讨检测免疫球蛋白重链(immunoglobulins heavy-chain, IgH)基因重排及bcl-2/JH融合基因在眼眶淋巴细胞增生性疾病诊断中的意义.方法对1994年1月至1999年12月我院通过手术或活检取得的48例眼眶淋巴细胞增生性疾病患者眼眶组织的石蜡标本行光镜、免疫组织化学检查及聚合酶链反应(PCR)扩增IgH可变区第三框架区(third frame work region,FR3)基因重排及bcl-2/JH融合基因检测分析.结果 FR3重排的PCR扩增显示22例标本为淋巴细胞单克隆增生.恶性淋巴瘤、良性反应性淋巴细胞增生及淋巴细胞性炎性假瘤的阳性率分别为75.0%、40.0%及16.7%.bcl-2/JH融合基因的PCR扩增示恶性淋巴瘤的阳性率为30.0%,良性反应性淋巴细胞增生及淋巴细胞性炎性假瘤患者检查结果均为阴性.结论 PCR扩增的FR3基因重排检测对诊断眼眶淋巴细胞增生性疾病有重要价值;bcl-2/JH融合基因检测阳性率偏低,不宜用于临床.
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眼眶自然杀伤-T细胞淋巴瘤的临床及病理观察
目的 探讨眼眶自然杀伤(NK)-T细胞淋巴瘤患者的临床表现、诊断和治疗方法.方法 为回顾性系列病例研究.收集1982年至2004年间7例住院手术、经病理检查证实为眼眶NK-T细胞淋巴瘤患者的临床和病理检查资料,包括手术方式、治疗方法、肿瘤病理标本的HE、免疫组织化学染色和分子生物学检查结果.结果 7例患者均表现为眼球突出、活动受限或固定,视力下降或失明,内眦部和眼睑皮肤红肿、溃烂和腔洞形成,CT检查可见眶内侧有边界欠清、密度不均的肿块.病理活检可见肿瘤内有大量淋巴细胞浸润和坏死组织,CD3、CD45、RO、CD57及Ki-67免疫组织化学染色阳性.2例患者T细胞受体基因重排呈阴性表达.而EB病毒的mRNA检查呈阳性.眶内肿瘤切除、局部放射及全身化学治疗效果均欠佳.结论 眼眶NK-T细胞淋巴瘤少见,其特点是发病急,病变进展快且破坏性大,预后差.后确诊需借助于组织病理学、免疫组织化学或分子生物学检查结果.
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TGF-β1成熟肽基因克隆及在大肠杆菌中表达
为在原核细胞中表达TGF-β1单体蛋白,用基因重组技术构建pBV220-TGF-β和pQE-TGF-β两种原核表达载体,分别在M15和DH5α大肠杆菌中进行表达,然后利用Sephacryl S-100凝胶层析及Ni+-NTA琼脂柱纯化TGF-β1单体.经酶切鉴定及测序结果证明pBV220和pQE30载体上成功地插入了TGF-β1成熟肽基因片段.pBV220-TGF-β和pQE-TGF-β两种原核表达载体在大肠杆菌中均得到了高效表达,表达量约占全菌蛋白的15%和20%,表达的TGF-β1单体蛋白经纯化后进行SDS-PAGE电泳,均显示了一条蛋白带,分子量分别为13kD和15kD左右.
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中国人甲状腺乳头状癌中ret基因重排及类型的分析研究
目的建立ret基因重排的分析方法,提示中国人甲状腺乳头状癌中是否存在原癌基因ret重排及重排类型.方法应用RT-PCR方法对65例甲状腺乳头状癌石蜡切片标本进行ret基因重排检测,并对扩增结果进行测序鉴定.结果在提取RNA成功的38例甲状腺乳头状癌(PTC)标本中,有71%发生ret重排,其中10.5%表达PTC1;5.3%表达PTC3;5.3%表达PTC4,以PTC1发生的频率较高.仅1例表达PIC2与PIC3/PTCA混合型重排,中国人PTC可能与ret和H4及ELE1重排激活相关.结论中国人PTC组织中存在4种重排,且以PTC1较为常见.单一标本中有多种重排形式并存,PIC1+3重排形式10例、3例PIC1+4、1例PIC2+3+4、1例PTC3+4、4例PIC1+3+4,单一标本中多种重排形式并存的比例高达50%,但与癌症的恶性程度、转移等无必然联系.
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DNA损伤应答与DNA双链断裂修复
在多种多样的生物体中,基因组保持完整具有极为重要的意义,它是细胞发挥功能和维持生存的必要条件.但是许多内源或外源因素如电离辐射(IR)、基因毒性剂、复制叉停止、核酸酶、减数分裂、免疫细胞V(D)J基因重排等,均可引起DNA损伤,破坏基因组的稳定性.
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B细胞非霍奇金淋巴瘤患者IgH基因重排检测分析及意义
目的 探讨外周血和骨髓免疫球蛋白重链(Immunoglobulin heavy chain,IgH)基困重排检测方法及其在监测B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者微小残留病(Minimal residual disease,MRD)中的临床意义.方法 应用PCR-SSP方法对B-NHL患者进行IgH基因重排检测,回顾性分析39例B-NHL患者lgH基因重排动态检测结果来了解其与临床MRD的关系.结果 39例B-NHL初诊未经治疗患者IgH基因重排检测34例阳性,阳性率87.1%(34/39).34例初诊阳性患者,治疗后19例达到临床完全缓解的患者中16例IgH基因重排转阴,3例持续阳性;15例临床部分缓解者,IgH基因重排持续阳性.分析发现13例患者骨髓和外周血标本IgH基因重排均呈阳性.结论 IgH基因重排检测可以作为B-NHL的辅助诊断及其微小残留病的监测.
关键词： 免疫球蛋白重链 基因重排 B细胞非霍奇金淋巴瘤 -
急性淋巴细胞白血病患者中T细胞受体基因重排的检测
目的 为了解急性淋巴细胞白血病(ALL)患者T细胞受体(TCR)基因重排情况,明确TCR基因重排在ALL患者微小残留病(MRD)检测中的临床意义.方法 构建实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测TCRVγI -Jγ基因重排技术,并定量分析36例ALL患者,观察治疗前、完全缓解后以及干细胞移植后等不同疾病状态下TCRVγI -Jγ基因重排情况.结果 建立实时荧光定量PCR方法的灵敏度为10-4水平.36例患者荧光定量PCR方法检测结果为初治组为(7.38±6.65) ×10-2水平,完全缓解(CR)组为(1.08±1.02) ×10-2水平,造血干细胞移植术(HSCT)组为(5.65±3.89)×10-3水平.CR组和HSCT组TCRVγI - Jγ基因重排水平显著低于初治组(P＜0.01),HSCT组MRD水平显著低于CR组(P＜0.05).6例HSCT后检测阳性病例中2例MRD水平＜1 ×10-3,此2例获长期无病生存,另4例MRD水平较高患者1年内均出现复发.结论 所建立实时荧光定量PCR方法简便、快速、灵敏及特异；实时荧光定量检测缓解期ALL患者MRD对判断预后具有重要意义.
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15例血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤的临床病理、免疫组织化学及分子分析
目的:对血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤(AITL)的组织病理学、特征性免疫标记、抗原受体基因重排及EB病毒(EBV)感染情况进行全面认识及评价.方法:选择具有淋巴结结构破坏、分支状高内皮血管增生、多形性细胞浸润和/或透明异型T淋巴细胞增生的15例典型AITL病例,进行临床和组织学特点分析,行CD3、CD20、CD4、CD21、CXCLl3、CDl0和BCL6免疫组化染色,PCR分析免疫球蛋白重链(IgH)及T细胞受体(TCR)基因重排,原位杂交检测EBV.结果:组织学检查示8例滤泡萎缩、6例滤泡消失、1例滤泡增生,病变位于滤泡间.8例伴有片状透明细胞聚集,4例伴有大型淋巴细胞,5例富于上皮样组织细胞,CD20染色示4例伴有大B细胞增生,CD21染色显示11例(73.3%)滤泡外滤泡树状突细胞(FDC)网络,部分有围绕血管分布的趋势.CXCLl3的阳性率为73.3%,CDIO的阳性率为6.7%,TCRγ的重排阳性为6/15(40%),均为单克隆;IgH的重排阳性为7/15(46.7%),其中5例单克隆,2例寡克隆.EBV阳性率为8/15(53.3%).伴大B细胞增生的4例中,3例EBV阳性.结论:AITL在临床和病理学上的表现异常复杂多样,深入认识这些多样性、合理应用及正确评价免疫标记和分子技术可以提高诊断准确率.
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肝脾T细胞淋巴瘤临床病理学分析
目的:探讨肝脾T细胞淋巴瘤(hepatosplenic T cell lymphoma,HSTCL)的临床病理特征和病理诊断.方法:复习3例HSTCL患者的临床病理资料,免疫表型,EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)原位杂交及T细胞受体γ (T cell receptor γ,TCBγ)基因重排检测.结果:例HSTCL中,骨髓1例呈间质和窦性浸润,2例呈间质及弥漫性浸润;肝1例和脾1例呈窦性浸润.免疫组化:例均CD3、TIA-1强阳性,而粒酶B阴性;CD56阴性;TCRβ阴性;3例EBV原位杂交均阴性.TCRγ基因重排检测2例呈单克隆性,1例呈弥散态.结论:STCL是一种罕见的非活化T细胞毒性的外周T细胞淋巴瘤(peripheral T cell lymphoma,PTCL),EBV原位杂交阴性和TCRγ脚基因克隆性重排有助于诊断和鉴别诊断.我国病例与国际报道病例临床病理特征基本一致.
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88例恶性淋巴瘤预后相关资料分析
目的:了解恶性淋巴瘤(ML)发病、病理及免疫分型特点,探讨基因分型在诊断中的作用.方法:通过标准链菌素生物素-过氧化物酶标记物法(SABC法)对病理标本进行免疫分型,PCR检测病理及骨髓标本IgH(FR2A,3A)和TCR(β,γ)基因重排,同时对临床及病理资料进行多因素分析.结果:(1)ML中非霍奇金淋巴瘤(NHL)较霍奇金淋巴瘤(HL)发病率高,发病率随年龄增长而递增,60岁以上发病者占38.6%;其平均生存时间明显低于60岁以下者.(2)B-NHL发病率为68.6%,T-NHL为28.6%;B-NHL的3年生存率高于T-NHL.(3)低度恶性NHL占42%,中、高度恶性占58%;低度恶性组平均生存时间较中、高度恶性组长,但统计学上差异无显著性.生存期分析显示Ⅰ～Ⅱ期NHL预后明显优于Ⅲ～Ⅳ期.(4)PCR检测病理及骨髓标本的IgH和TCR重排,B-NHL FR2A的阳性率分别为66.7%及56.2%;FR3A阳性率分别为90.4%及81.2%;T-NHL中TCRβ、γ阳性率分别为91.7%及75.0%;病理标本的阳性率略高于骨髓, T、B分型与免疫分型相符.结论:年龄,T、B分型和临床分期是影响NHL预后的重要因素;分子生物学检测作为辅助手段可以肯定免疫分型结果并补充其不足,骨髓及外周血检测除协助分型外可用于肿瘤微小残留病的监测.
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重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子双体融合分子的三级结构模建
目的:验证重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)双体融合分子(G2)较GM-CSF单体分子具有高活性的结构机制.方法:利用Insight II软件,采用同源性模建结合手工拼接的方法模建出G2融合分子的空间三级结构,并将其与GM-CSF单体的结构相比较.结果:模建出的G2融合分子前后两个结构单元在空间位置上相对独立,二者各自的三级构象及二级结构组成均与GM-CSF非常相似.另外,从受体结合位点的分析结果来看,G2分子在结构上有能力同时结合两分子的GM-CSF受体.结论:G2融合分子中的两个GM-CSF结构单元在结构上基本保持了GM-CSF单体分子的三级结构,其空间结构允许两分子的GM-CSF受体同时结合,引发受体间的交联,从而产生高活性.
关键词： 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 基因重排 蛋白质结构 三级 重组融合蛋白质类
