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淋巴瘤TCRγ及TCRβ克隆性基因重排分析
T淋巴细胞免疫球蛋白受体包括αβ和γδ两组,共涉及到相应的4条基因重排并编码合成.检测淋巴组织中这4处基因重排为克隆性还是非克隆性,可以鉴别组织中淋巴细胞是克隆性增生的瘤细胞还是非克隆性反应性增生的淋巴组织,对淋巴瘤的诊断有重要意义[1-2].
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基础研究弥漫性大B细胞淋巴瘤免疫球蛋白基因重排特点及规律研究
目的 探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)生发中心B细胞型(GCB)及非生发中心B细胞型(non-GCB)中Ig基因重排的特点及规律.方法 采用免疫组化法检测46例DLBCL中CD10、BCL-6、MUM1表达,采用Hans免疫分型方法将DLBCL分为GCB和non-GCB;同时提取所有样本基因组DNA,利用BIOMED-2克隆分析系统进行PCR扩增Ig基因,核酸分子异源双链凝胶电泳分析基因重排情况,并以15例反应性增生病变作为阴性对照.结果 46例DLBCL样本中GCB 12例、non-GCB 34例,其中45例样本扩增出Ig基因的克隆性重排条带,检测敏感性为97.8%,15例反应性增生病变均未检测到重排条带,检测特异性为100.0%.GCB和non-GCB重链IGH重排差异无统计学意义(P>0.05),但轻链IGκ-A、IGκ-B和IGλ重排差异有统计学意义(P<0.05).结论 GCB和non-GCB的Ig基因轻链重排条带分布具有显著的特点和规律,可为病理诊断和临床应用提供更为准确的依据.
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良性淋巴组织中Ig/TCR基因重排分析
目的 探讨良性淋巴组织Ig/TCR基因重排特点,为临床病理诊断提供更为可靠的依据.方法 选取淋巴结反应性增生、扁桃腺炎、阑尾炎淋巴组织标本各20例和正常人外周血淋巴细胞标本15例,提取DNA,利用BIOMED-2引物系统进行Ig/TCR PCR扩增和核酸分子异源双链凝胶电泳分析.结果 75例均扩增出与BIOMED-2克隆分析系统规定的单克隆性重排大小和范围一致的产物,分别是IGH-A的320 bp片段和IGH-C的130 bp片段,其中IGH-A 占77.3%,IGH-C占 76.0%.所有样品均扩增出BIOMED-2克隆分析系统规定的非特异性重排产物,全部为IGH-E的100 bp片段和211 bp片段.结论 BIOMED-2系统存在一定的非特异性产物,主要集中在IGH-A、IGH-C、IGH-E;正确认识非特异性产物可为病理诊断和临床应用提供更为准确的依据.
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m336抗体基因重排有助杀伤MERS病毒
复旦大学基础医学院传出消息：该院医学分子病毒学教育部、卫生部重点实验室应天雷课题组，与美国国家过敏与传染病研究所疫苗研究中心周同庆课题组、美国国家癌症研究所等，经过一年多合作研究发现m336抗体的基因重排，对杀伤中东呼吸系统综合征冠状病毒（MERS-CoV）有重要作用。这一解析，为研发应对MERS病毒更高效、更安全的抗体药物提供重要理论基础与指导方向。
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11q23/MLL基因重排阳性急性白血病的临床及实验室特征
目的:研究伴11q23/MLL基因重排阳性急性白血病(AL)的临床与形态学、免疫学、遗传学特征.方法:回顾性分析6例伴11q23/MLL异常AL的临床、形态学、免疫分型及11q23/MLL基因特征.结果:6例11q23/MLL,基因重排阳性AL患者,2例为急性髓细胞白血病(AML)M5a,4例为急性淋巴细胞白血病(ALL)L2型.免疫表型:2例M5a伴有CD14、CD33表达,4例ALL伴有CD10、CD19表达(均为B细胞ALL),6例患者均伴有CD34表达.FISH检测11q23/MLL基因重排均为阳性.3例患者早期死亡,3例化疗获得缓解,2例分别于缓解后3个月与6个月复发,1例骨髓持续缓解22个月,但出现多部位髓外浸润.结论:11q23/MLL基因重排主要见于M5a和B细胞ALL,多伴CD34表达,预后恶劣.
关键词： 基因重排 11q23/MLL:白血病 预后 免疫表型 -
急性淋巴细胞性白血病T细胞受体γ链基因重排的检测及临床意义
近20年来,随着化疗及造血干细胞移植技术的不断提高,急性淋巴细胞性白血病在治疗上取得了很大的进展.目前,90%以上的儿童及75%以上的成人ALL患者通过化疗可以获得完全缓解(CR),甚至痊愈[1].
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T细胞分化过程中的基因调控与自身免疫病
组成免疫系统的细胞来自骨髓中具有自我更新能力的造血干细胞(HSC).虽然成熟T细胞在胸腺产生,但从根本上说它们来源于造血干细胞.通过接受分化信号,HSC定向分化为淋巴和髓系细胞.T细胞是适应性免疫的重要组成部分,每个T细胞能表达特异性识别非自身抗原决定簇的抗原受体,不同T细胞克隆数量足以识别任何分子.这一识别系统所需的多样性来自抗原受体位点的T细胞受体(TCR)基因重排.
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胸腺细胞分化发育的凋亡调控
胸腺细胞在胸腺内的发育过程经历TTCR基因重排与表达、阳性选择和阴性选择三个主要过程.凋亡,又称程序性细胞死亡,在胸腺细胞发育过程贯穿始终,因此研究胸腺内T细胞发育过程中的凋亡对揭示胸腺选择作用和中枢耐受形成机制有重要意义.本文就胸腺细胞在胸腺内发育过程中凋亡的发生及其调控作一综述.
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人白血病细胞株重组激活基因表达及T细胞受体基因重排的检测
背景:淋巴细胞特异性重组激活基因编码的重组激活基因1与重组激活基因2蛋白是参与V(D)J重排机制的重要的重组酶.除参与V(D)J重排以外,近年的研究结果表明重组激活基因介导的转位作用可能与染色体易位及淋巴性恶性肿瘤的发生有关,但迄今尚未有明确定论.目的:检测重组激活基因、DNA修复因子Ku70/Ku80和末端脱氧核苷转移酶mRNA表达以及T细胞受体基因重排在人白血病和淋巴瘤细胞株的发生情况.设计:重复测量实验.单位:南方医科大学生物技术学院分子免疫研究所.材料:T淋巴白血病细胞株Jurkat和6T-CEM购自上海细胞生物研究所;T淋巴白血病细胞株Molt-4,皮肤T细胞淋巴瘤细胞株HuT 102,Burkitt's淋巴瘤细胞株Raji和Daudi以及原髓细胞白血病细胞株HL-60和慢性髓原白血病细胞株K562均由本实验室保存.细胞用含有体积分数0.1胎牛血清的RPMI 1640培养基于37℃,体积分数0.05 CO2条件下培养.方法:实验于2005-10/2006-01在南方医科大学生物技术学院分子免疫研究所完成.采用反转录聚合酶链反应检测重组激活基因1,重组激活基因2,非同源末端连接装置途径中的DNA修复因子Ku70/Ku80,以及末端脱氧核苷转移酶mRNA表达;采用巢式、半巢式聚合酶链反应、连接介导的聚合酶链反应等方法检测T细胞受体重排删除DNA环和T细胞受体β链重组信号序列两端的断裂点.了解参与V(D)J重排过程的基因表达和T细胞受体基因重排中间体的产生情况.主要观察指标:重组激活基因、DNA修复因子Ku70/Ku80和末端脱氧核苷转移酶mRNA表达以及T细胞受体基因重排在人白血病和淋巴瘤细胞株的发生情况.结果:反转录聚合酶链反应检测结果显示:重组激活基因1 mRNA在4种T细胞株中均被检测到,在两种B细胞株和两种髓性白血病细胞株中未检测到;重组激活基因2和末端脱氧核苷转移酶mRNA表达仅在Jurkat,Molt-4和6T-CEM 3种T细胞株中检测到,但在6T-CEM表达较弱;除HL-60细胞未检测到Ku80表达外,所有细胞株均检测到Ku70和Ku80表达.对4种T细胞株T细胞受体重排中间体检测结果表明:仅在Jurkat细胞中检测到Dβ2-Jβ2 sjTRECs与Dβ2 5'端和3'RSS断点,表明Jurkat细胞发生T细胞受体基因重排.同时发现Jurkat TCRDβ2-Jβ2重排删除环结合区具有明显的多样性特征.结论:重组激活基因可能与T细胞白血病具有更为密切的关系.Jurkat细胞有可能成为研究重组激活基因与T细胞淋巴性肿瘤的一个潜在的细胞模型.
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儿童急性淋巴细胞白血病预后因素的研究进展
研究证实,影响儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)比较肯定的预后因素主要有年龄、性别、初诊时外周血白细胞数、FAB分型以及一些细胞免疫学、遗传学、分子生物学方面的指标,如Ph+、MLL基因重排、TellAml-1融合、染色体数＞50、P170以及所采用的治疗方法;另外,一些分子生物学指标如CD10、CD2、P16、MDM2等也可能与儿童ALL的预后有关联.
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多重PCR检测急性非淋巴细胞白血病IgH及TCRVγΙ-Jγ基因重排
目的:为进一步了解急性非淋巴细胞白血病(ANLL)病人基因重排情况.方法:应用多重PCR技术检测41例ANLL病人IgH及TCRVγI-Jγ基因重排.结果:26.8%(11/41)ANLL病人存在IgH或/和TCRVγI-Jγ基因重排,3例病人同时存在IgH和TCRVγI-Jγ基因重排;基因重排阳性ANLL治疗缓解率低于重排阴性ANLL病人(P<0.05).结论:①IgH或TCR基因重排并非局限于淋巴细胞白血病,也可发生于部分ANLL病人;②多重PCR技术可以一次PCR扩增同时检测两种重排基因,更适于临床推广应用.
关键词： 多重聚合酶链反应 急性非淋巴细胞性白血病 基因重排 -
外周B淋巴细胞BCR二次重排(编辑/修正)与选择
B淋巴细胞介导的获得性免疫能识别、应答多种多样的抗原;分清自我和非我;形成免疫记忆.这些特性的机制是经典的Burnat克隆(或者细胞)选择学说,即B淋巴细胞在骨髓的发育过程中,经过重链和轻链基因重排(Rearrangement),组成了外周多样性的BCR淋巴细胞库,同时对自身反应性B淋巴细胞,通过凋亡或克隆无能进行选择(细胞水平选择或克隆选择,Cell or clonal selection);抗原将从已存在的多样免疫抗原受体中挑选特异性的克隆细胞;免疫记忆是抗原特异性细胞的大量扩增后部分保持的结果.
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检测人TCR BD基因重排时RSS断裂末端的LM-PCR方法的建立
目的:建立检测人T细胞TCR BD基因(Diversity Gene)经历重排的连接介导PCR方法(Ligation-Mediated PCR,LM-PCR),为T细胞重排和疾病的关系研究提供基础.方法:在人TCRβ链BD1与BD2 5'端重组信号序列(RSS)前,BD1与BD2 3'端RSS后各设计两套用于巢式PCR引物;设计并合成和双链RSS平断裂末端相接的特殊接头(BW Linker),提取胸腺组织、正常人和急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)外周血单个核细胞(PBMC)样本总DNA,和BW-linker连接,进行巢式PCR,PCR产物琼脂糖电泳分析,阳性产物做胶回收,并克隆测序鉴定.结果:在1例胸腺组织提取的总DNA中证实存在BD1和BD2 5'和3'的RSS断裂末端,在2例T-ALLs的PBMC中检测到BD2 5'和3'的RSS断裂末端,2例正常人PBMC中未能检测到RSS断裂末端,阳性的LM-PCR产物通过测序鉴定,和基因组中序列完全相符合.结论:1例胸腺组织和2例T-ALL的PBMC中检测到RSS断裂末端,提示TCR BD基因正经历重排,测序结果表明建立的监测TCR重排的LM-PCR方法可靠,可用于T细胞重排模型和相关疾病的机制研究.
关键词： 连接介导PCR(LM-PCR) 胸腺 基因重排 重组信号序列(RSS) -
活动性肺结核患者α/β TCR基因重排及CDR3谱型分析
目的:建立多重PCR方法扩增α/β TCR全长序列,分析活动性肺结核患者病变局部T淋巴细胞α/β TCR基因重排特点及CDR3谱型.方法:分离结核患者肺泡灌洗液中的淋巴细胞,提取RNA后用SMART方法逆转录,运用根据现有文献设计的α和β TCR扩增引物,进行多重PCR扩增以获得其全长序列,构建重组质粒并测序,利用DNAstar及网上TCR资源分析序列.结果:3例患者共获得24个α链序列,13个β链序列.α链以AV1S2(54%)、AV12S3(41%)、AV12S2(5%)为主;β链以BV2(38%)、BV29S1(46%)、BV14(3%)、BV4S2(3%)为主.同一病例及不同病例之间CDR3区呈现多样性,但是标本1、标本3各有一条β链的CDR3氨基酸序列相同:SVGTGTLHQETQY;标本2和标本3的各有2条α链CDR3序列相同:AVRDWAGNMLT;标本2的一个α链和标本3的一个α链的CDR3均有:AV…DNN…RLM序列.结论:建立了TCRα和β链全长序列的多重PCR扩增方法.结核患者病变局部克隆性增殖的TCR α和β链谱型呈限制性取用,克隆增生的T淋巴细胞来自不同的亚群,但是相同的CDR3序列对于识别MTB多肽可能具有特异性.
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正常人外周血和胸腺T细胞中TCR DδX基因重排的特点
目的:分析正常人外周血和胸腺细胞中TCR DδX基因重排分布特点.方法:利用半巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞(PBMCs)、4例分选的外周血CD3+T细胞和7例正常人胸腺细胞DNA的TCR DδX基因与JδX、Dδ3和ΨJα重排的情况,从不同含量DNA的PCR分析,了解其重排分布频率.结果:TCR DδX分别与JδX、Dδ3和ΨJα的重排均可见于多数外周血T细胞和胸腺细胞中,对不同含量的DNA的PCR分析显示TCR DδX重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同.结论:TCR DδX-ΨJα的重排常见于成熟和未成熟T细胞中,而TCR DδX-Dδ3则在未成熟T细胞中多见.
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应用荧光定量PCR检测急性白血病微小残留病的临床意义
对于完全缓解的白血病患者,体内存在的微小残留病(MRD)是复发的主要根源?本实验是通过双链DNA结合SYBR Green I的实时PCR方法应用免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体(TCR)基因重排作为ALL微小残留病的检测靶基因,实验证明: MRD可以作为预后风险的一个独立指标.SYBR Green Ⅰ实时PCR是一种更适于临床应用的简单、快速、便宜、可行,特异性好、敏感性又高的技术方法.
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白血病基因诊断及其信息系统建立
目的 用基因诊断技术对白血病分型诊断及微小残留病(MRD)监控,同时对所检测数据建立信息系统.方法 巢式RT-PCR扩增急髓性白血病融合基因,PCR扩增急性淋巴细胞白血病基因重排,用Delphi程序设计信息系统.结果 M2b型白血病能扩增出AML1/ETO融合基因;M3型白血病能检测出L型和S型融合基因;慢粒白血病可检测出b3a2和b3a2融合基因;急淋白血病可检测出IgH、TCRγ、TCRδ基因重排.结论 基因诊断能有效进行白血病分型及MRD监控,信息系统的建立方便了检测信息的管理及查询.
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急性淋巴细胞白血病TCR/IgH基因重排的联合检测及临床意义
目的 探讨T细胞受体γ(T cell receptor γ,TCRγ)、T细胞受体δ(T cell receptor δ,TCRδ)、免疫球蛋白重链(Immunoglobulin heavy chain H,IgH)基因重排的联合检测方法及其在监测急性淋巴细胞白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia,ALL)微小残留病(Minimal Residual Disease,MRD)中的临床意义.方法 应用PCR/SSP的方法对104例急性淋巴细胞白血病患者(83例儿童、21例成人)进行TCRγ、TCRδ、IgH三种基因重排的联合检测,并通过动态监测来了解它们与临床MRD的关系.结果 三种基因重排联合检测在ALL患者的检出率较高(儿童前B-ALL为89.2%,T-ALL为94.4%;成人PreB-ALL为84.6%,T-ALL为87.5%),远高于单一基因重排的检出率;联合检测持续阳性患者的复发率远高与阴性患者(χ2＝9.07,P＜0.01).结论 TCRγ、TCRδ、IgH基因重排的联合检测方法简便、敏感性高,对于急性淋巴细胞白血病的诊断以及MRD的监测具有非常重要的临床意义.
关键词： 基因重排 微小残留病 急性淋巴细胞性白血病 -
急性白血病MICM分型及其形态学和临床特点
MICM分型是在细胞形态学(Morphologic, M)、细胞免疫学(Immunologic, I)和细胞遗传学(Cytogenetic, C) ,简称MIC分型的基础上补充近年分子生物学(Molecular biology, M)即基因水平的新分型.它是研究和了解白血病本质的重要方法,遗传学异常的分子水平表现在与白血病发病有关的基因重排及融合基因的形成上.由于不少融合基因在病程中比较稳定且有独特的形态学和临床特点,所以是比较可靠的分子标志.本文介绍近年发现以及较有代表的一些基因型(Genotype)及其特点.
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B系急性淋巴细胞白血病与基因重排
分子生物学是当今生命科学中热门的前沿学科,尽管它在恶性血液病中的应用尚处于起始阶段,对细胞学诊断的影响也还有限.但是愕然回首,它已深深地影响到我们对细胞形态学和细胞遗传学,以及它们与临床之间诸多联系的理解,对肿瘤细胞生物行为和临床行为之间的了解,分子生物学检查能提供精确的证据、超前的信息和崭新的视角.本文就B系细胞白血病的相关基因重排与临床表型之间的关系作一综述.
