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桥本甲状腺炎合并甲状腺癌患者肿瘤内抗肿瘤免疫临床意义
目的 观察桥本甲状腺炎合并甲状腺癌患者肿瘤内抗肿瘤免疫并探讨其临床意义.方法 应用免疫组织化学二步法检测桥本甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌患者肿瘤组织内S-100蛋白呈阳性的树突状细胞及HLA-DR抗原呈阳性表达的细胞并探讨其临床意义.结果 桥本甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌患者肿瘤组织内存在大量树突状细胞(8/8),数量明显多于不伴桥本甲状腺炎的甲状腺癌患者(1/20),树突状细胞的胞浆突起插入癌细胞之间并与之接触.癌细胞呈不同程度HLA-DR抗原阳性表达.在树突状细胞及HLA-DR抗原阳性表达的癌细胞间可见大量淋巴细胞围绕.癌细胞存在不同程度坏死、崩解、脱落.结论 桥本甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌患者肿瘤组织内存在由树突状细胞、淋巴细胞及HLA-DR抗原阳性表达的癌细胞引起的特异性抗肿瘤免疫,与患者预后可能密切相关.
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中药多糖增强树突状细胞抗肿瘤免疫作用的研究进展
恶性肿瘤是一大类严重威胁人类健康并危及人类生命的疾病.近几年,人们发现中药有效成分之一的中药多糖具有很好的免疫调节抗肿瘤作用,在一定剂量范围内能够增强机体免疫功能或使紊乱的机体免疫状态恢复正常.树突状细胞(dentritic cell,DC)是目前研究发现的体内功能强的抗原提呈细胞(antigen-presenting cell,APC),作为机体初次免疫应答的始动者,由DC激活的细胞免疫应答在机体抗肿瘤免疫中发挥着重要作用.
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傣药嘿良冲剂对免疫功能低下模型小鼠免疫功能的影响
目的 研究嘿良冲剂对免疫功能低下模型小鼠免疫功能的影响,为嘿良冲剂临床应用于抗肿瘤免疫、缓解化疗药物副作用等方面奠定理论基础.方法 建立环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)诱导的小鼠免疫功能低下模型,随机分为正常对照组、CTX模型组和嘿良冲剂给药组(16 g/kg);灌胃给药10d后,计算胸腺指数和脾指数;CCK-8法测定各组丝裂原诱导小鼠脾淋巴细胞增殖功能;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测丝裂原诱导脾淋巴细胞IL-2和IL-4产生水平.结果 嘿良冲剂能够显著增加免疫功能低下模型小鼠胸腺指数和脾指数(P＜0.05),促进受损的T、B淋巴细胞增殖功能的恢复(P＜0.05);同时增加模型小鼠脾淋巴细胞IL-2的产生水平(P＜0.05),然而对IL-4产生水平无明显变化(P＞0.05).结论 嘿良冲剂能够促进免疫功能低下模型小鼠免疫功能的恢复,其作用机制可能与促进脾淋巴细胞释放细胞因子IL-2,维持Th1的优势状态有关.
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膜型Tim-3分子促进荷瘤小鼠抗肿瘤免疫应答的研究
目的 研究膜型Tim-3分子对H22肝癌细胞生长的抑制效应,探讨膜型Tim-3分子对荷瘤小鼠免疫系统的影响.方法 以H22肝癌细胞接种于BALB/c小鼠大腿肌肉建立小鼠实体瘤模型,采用原位注射裸DNA的方法在小鼠体内表达膜型Tim-3进行基因治疗,观察Tim-3对肿瘤生长的抑制作用;采用RTPCR技术在肿瘤生长不同时期检测Tim-3对4-1BB、IFN-γ、galectin-9等免疫相关基因表达的影响;流式细胞术检测膜型Tim-3对脾细胞增殖活性及细胞毒活性的影响;观察Tim-3 +4-1 BBL协同抗肿瘤作用.结果 体内转染表达Tim-3对肿瘤的生长有明显的抑制作用.流式细胞术结果显示,在小鼠荷瘤早期,Tim-3可提高脾细胞在特异性抗原刺激下的增殖反应和对H22肿瘤细胞的细胞毒作用;Tim-3与4-1BBL协同作用时抗肿瘤作用更加明显.结论 膜型Tim-3可在免疫启动阶段作为正向免疫调节因子增强抗肿瘤免疫应答,并可与4-1 BBL协同产生更强的抑瘤效应.
关键词： Tim-3分子 4-1 BB Galectin-9 抗肿瘤免疫 -
瘤体内直接注射白细胞介素-7基因抗小鼠乳腺肿瘤免疫效应的研究
目的 观察瘤体内直接注射白细胞介素(IL)-7基因抗小鼠乳腺肿瘤免疫效应.方法 构建IL-7真核表达质粒(pcDNA3-IL-7)；建立乳腺癌TM40D细胞BALB/C小鼠移植模型；瘤体内直接注射pcDNA3-IL-7,观察小鼠肿瘤体积变化；酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测外周血干扰素(IFN)-γ含量；流式细胞仪检测胞内IFN-γ的分泌量；局部肿瘤经治疗后行常规病理分析.结果 成功构建pcDNA3-IL-7；与对照磷酸盐缓冲液(PBS)组(115.2±11.8) ng/L、pcDNA3组(133.6±9.4) ng/L比较,pcDNA3 -IL-7注射组(242.3±10.1)ng/L外周血IFN-γ明显增高；pcDNA3-IL-7明显抑制肿瘤生长(P＜0.05)；流式细胞仪检测显示pcDNA3-IL-7显著促进CD4+T细胞、CD8+T细胞内IFN-γ的分泌量；常规病理显示pcDNA3 -IL-7注射组肿瘤组织大量坏死,炎性细胞和大量淋巴细胞浸润.结论 瘤体内直接注射pcDNA3-IL-7明显抑制小鼠乳腺肿瘤生长,显著促进IFN-γ分泌,增强了小鼠机体抗乳腺肿瘤的免疫效应.
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程序性死亡受体-1/其配体1单抗联合放射治疗的抗肿瘤免疫机制
免疫治疗可通过激活或者增强机体抗肿瘤免疫功能杀伤肿瘤细胞或抑制肿瘤的发生发展;免疫卡控点分子程序性死亡受体-1(PD-1)与其配体PD-L1、PD-L2结合,抑制T淋巴细胞功能,使肿瘤细胞逃避免疫应答;放射治疗可杀伤肿瘤细胞,同时增强和激活机体的固有和适应性抗肿瘤免疫应答.放疗联合PD-1/PD-L1单抗能够增强抗肿瘤免疫应答、促进肿瘤细胞凋亡,发挥协同抗肿瘤作用.
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转录因子T-bet在射频消融激活的抗肿瘤免疫应答中的作用
目的 观察转录因子T-bet在射频消融(RFA) 激发的抗肿瘤免疫应答中的作用.方法 建立C57BL/6小鼠B16黑色素瘤双侧背部移植瘤模型,当肿瘤体积达500mm3时对右侧肿瘤进行RFA治疗,3d后流式细胞术分析左侧肿瘤浸润淋巴细胞亚群数量以及T-bet 在T细胞与自然杀伤(NK)细胞中的表达;实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测细胞因子的信使核糖核苷酸(mRNA)表达水平;建立敲T-bet基因(T-bet-/-)小鼠RFA治疗模型,分析左侧肿瘤浸润淋巴细胞亚群数量,记录小鼠左侧肿瘤生长曲线与小鼠生存时间.结果 RFA治疗能抑制对侧肿瘤生长,延长小鼠生存时间,两组的生存时间分别为[(29.0±1.4)d]与[(21.0±0.7)d],差异有统计学意义(P=0.000);对照组小鼠左侧肿瘤浸润CD45+、CD3+、CD4+叉状头/翅膀状螺旋转录因子(FoxP3)-、CD8+、NK(NK1.1+)细胞计数(106个/g肿瘤)分别为1.40±0.32、0.46±0.08、0.14±0.11、0.20±0.03与0.05±0.02,消融组分别6.22±0.80、2.06±0.11、0.53±0.20、0.68±0.10与0.17±0.03,差异有统计学意义(P=0.000),两组调节性T细胞(Treg:CD4+FoxP3+)计数分别0.06±0.01与0.07±0.02、差异无统计学意义(P=0.978);消融组Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的mRNA表达水平相对于对照组分别为6.50±0.51、5.02±0.48与4.12±0.31倍,差异有统计学意义(P=0.000);对照组左侧肿瘤浸润CD4+T、CD8+T、NK细胞中T-bet表达率分别为(22.30±0.60)%、(28.40±2.20)%与(9.10±0.20)%,消融组分别(42.60±3.10)%、(48.30±2.50)%与(19.10±1.30)%,差异有统计学意义(P=0.000);T-bet-/-小鼠模型中,RFA治疗组与对照组小鼠生存时间分别(21.00±1.20)d与(21.00±0.56)d,差异无统计学意义(P=0.981).对照组左侧肿瘤CD45+、CD3+、CD4+FoxP3-、CD4+FoxP3+、CD8+与NK1.1+细胞计数(106个/g肿瘤)分别为1.46±0.59、0.43±0.04、0.20±0.03、0.09±0.01、0.15±0.03与0.04±0.02,消融组分别1.55±0.21、0.45±0.10、0.22±0.04、0.11±0.01、0.13±0.09与0.04±0.01,差异均无统计学意义(P值分别为0.454、0.982、0.800、0.987、0.462、0.278).结论 转录因子T-bet在RFA治疗激发的Th1型抗肿瘤免疫应答中发挥重要作用.
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负载肺癌抗原DC疫苗抗肿瘤免疫实验
目的 探讨负载人肺癌细胞株A549冻融抗原DC疫苗体外抗肿瘤免疫效应.方法 自脐血分离单核细胞,经rhGM-CSF、rhIL-4和rhTNF-α诱导树突状细胞(DC),负载人肺癌细胞株A549冻融抗原、LPS诱导成熟,利用免疫磁珠分选获得功能性肺癌DC疫苗(UbDC/AgL),ELISA测定UbDC/AgL培养上清中细胞因子浓度、LDH法测定特异性细胞杀伤(CTL)活性及MTT法检测自身混合淋巴细胞反应(AMLR).结果 UbDC/AgL细胞组IL-1、IL-12、IL-6和IFN-β含量明显高于UbDC/Ag和UbDC组(P＜0.01);UbDC/AgL疫苗细胞能有效诱导肿瘤特异性CTL活性,对A549细胞有特异性杀伤作用(P＜0.01),并能有效促进淋巴细胞增殖.结论 负载肿瘤冻融抗原DC疫苗,能有效激活T淋巴细胞进而诱导肿瘤特异性杀伤效应.
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慢性髓性白血病来源的树突状细胞诱导的CTL体外作用研究
目的研究慢性髓性白血病来源的树突状细胞的免疫功能.方法分离慢性期CML患者外周血单个核细胞(PBMNC),用细胞因子GM-CSF及IL-4在体外诱导培养DC,检测细胞表型,并观察其诱导的CTL体外抗肿瘤效应.用酶联免疫(ELISA)方法测定CML-DC混合淋巴细胞反应(MLR)上清液中IL-12及IFN-γ的量,并与正常DC进行比较.结果联合GM-CSF及IL-4可诱导CML细胞分化为CML-DC,CML-DC的CD1a、CD80、CD83表达率均低于正常DC;CML-DC混合淋巴细胞反应上清IL-12及IFN-γ含量均低于正常DC;CML-DC能诱导出对自身CML细胞有特异性杀伤作用的CTL.结论CML-DC具有抗原提呈细胞的免疫功能,能诱导抗白血病CTL反应.
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细胞间粘附分子-1在抗肿瘤免疫反应中的作用
细胞间粘附分子-1(intercellular adhesionmolecule-1,ICAM-1)为免疫球蛋白超家族的成员.
关键词： 细胞间粘附分子-1 抗肿瘤免疫 淋巴细胞相关抗原-1 -
可溶性转化生长因子βⅡ型受体对LOVO细胞体外增殖和抗肿瘤免疫的影响
目的:构建人转化生长因子βⅡ型受体细胞外区(sTGF-βRⅡ)基因的真核表达载体,初步探讨sTGF-βRⅡ对大肠癌LOVO细胞增殖及抗肿瘤免疫的影响.方法:采用DNA重组技术构建sTGF-βRⅡ的表达载体,用脂质体转染技术转染人大肠癌LOVO细胞,以RT-PCR、Western blot法检测目的基因及其蛋白表达.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和平板法集落形成实验检测sTGF-βRⅡ对LOVO细胞增殖的影响.用淋巴细胞提取液提取外周血淋巴细胞,并与转染了sTGF-βRⅡ的大肠癌LOVO细胞共同培养,用流式细胞仪检测各实验对照组T淋巴细胞亚群的表达.结果:sTGF-βRⅡ在LOVO细胞中获得表达,sTGF-βRⅡ可抑制TGF-β1作用下的LOVO细胞增殖(P＜0.01),与淋巴细胞共同培养后的转染组T淋巴细胞亚群的CD4阳性T细胞、CD8阳性T细胞较其它实验组均显著增高(P＜0.05).结论:sTGF-βRⅡ可拮抗TGF-β1的信号传导,抑制TGF-β1作用下的LOVO细胞增殖,进而拮抗TGF-β1的抑制肿瘤免疫作用,使宿主T细胞的抗肿瘤免疫功能得到较大恢复,从而达到抗肿瘤的作用.
关键词： sTGF-βRⅡ基因 大肠癌 细胞增殖 T淋巴细胞亚群 抗肿瘤免疫 -
热休克蛋白gp96肽复合物免疫治疗小鼠骨肉瘤的研究
目的 研究热休克蛋白gp96(HSPgp96)肽复合物体内外特异性抗肿瘤作用.方法 采用51Cr释放法测定经HSPgp96肽复合物修饰的树突状细胞(DC)对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的影响,同时在骨肉瘤动物模型上观察HSPgp96肽复合物与修饰后的DC对骨肉瘤的生长状况及体内免疫水平的影响.结果 HSPgp96肽复合物修饰的DC可激活小鼠脾淋巴细胞,后者能对人成骨肉瘤细胞系MG-63细胞进行特异性杀伤;HSPgp96肽复合物及修饰后的DC使IL-10表达水平明显降低,IFN-γ水平明显上升(P<0.01),能有效抑制体内肿瘤的生长.结论 HSPgp96肽复合物能很好地修饰体外诱导获取的DC,使DC具有很强的体内外抗肿瘤作用.
关键词： HSPgp96肽复合物 骨肉瘤 树突状细胞 抗肿瘤免疫 -
玉屏风散辅助治疗原发性肝癌的疗效及对抗肿瘤免疫的影响
目的 探讨玉屏风散辅助治疗原发性肝癌的疗效及对抗肿瘤免疫的影响.方法 收集2012年3月～2015年7月间在本院接受治疗的原发性肝癌患者80例,按照随机数表法均分为观察组和对照组.对照组患者接受姑息性手术治疗,观察组患者接受姑息性手术+玉屏风散辅助治疗,持续3个月.分别于治疗前和治疗后1个月检测两组患者的血清肝癌标志物、Th1/Th2细胞免疫指标含量以及外周血T淋巴细胞亚群水平.结果 治疗前,两组患者的血清肝癌标志物、Th1/Th2细胞免疫指标含量,外周血T淋巴细胞亚群水平比较,差异无统计学意义(P>0.05).治疗后1个月,观察组患者血清肝癌标志物AFP、GP73、FER含量低于对照组;血清Th1细胞因子TNF-α、IFN-γ含量高于对照组,Th2细胞因子IL-6、IL-10含量低于对照组;外周血中CD3+、CD4+T淋巴细胞水平及CD4+/CD8+比值高于对照组患者,CD8+T淋巴细胞水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 玉屏风散辅助治疗可降低原发性肝癌的恶性程度,增强抗肿瘤免疫.
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树突状细胞疫苗治疗肿瘤的实验研究进展
树突状细胞(Dendritic cell,DC)是重要的抗原递呈细胞,在抗肿瘤免疫治疗中有巨大的应用前景,本文对近年来DC疫苗在肿瘤免疫治疗中的作用研究进展作一综述,对目前研究中存在的问题作了客观的分析.
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树突细胞-食管癌融合细胞体外诱导特异性抗食管癌免疫反应
背景与目的:树突细胞(dendritic cells,DC)是人体专职的抗原呈递细胞,以DC为基础的DC/肿瘤细胞融合疫苗可以有效地诱导特异性抗肿瘤免疫应答.本研究旨在探讨成熟的DC与人食管癌细胞株ECl09细胞融合疫苗体外诱导特异性抗食管癌细胞的免疫反应.方法:从健康志愿者外周血中分离出单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),在重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage-colony-stimulating factor,rhGM-CSF)和白介素(interleukin-4,IL-4)作用下体外诱导DC,采用聚乙二醇(polyethylene glyco1,PEG)融合法使DC与EC109细胞融合制备DC/EC109细胞融合疫苗,四甲基偶氮唑盐(MTT)实验检测融合疫苗刺激T淋巴细胞增殖的活性,乳酸脱氢酶(LDH)实验检测融合疫苗活化的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)在体外特异性杀伤EC109细胞的活性,并与对人胃癌细胞株SGC7901及人乳腺癌细胞株MCF7的杀伤作用进行比较.结果:DC与EC109细胞的融合效率高达到22.25%.DC/EC109细胞融合疫苗能有效地刺激T淋巴细胞的增殖反应,其刺激T淋巴细胞增殖的能力显著高于DC或EC109细胞(P＜0.05).DC/EC109细胞融合疫苗活化的CTL对EC109细胞具有特异性的杀伤作用,对EC109细胞的杀伤作用显著强于对SGC7901细胞及MCF7细胞的杀伤作用(P＜0.05).结论:DC/EC109细胞融合疫苗能有效诱导抗EC109细胞的特异性免疫应答.
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外源人gp96基因在肿瘤细胞中的高效表达
背景与目的:从肿瘤细胞中分离出的热休克蛋白gp96制备物免疫小鼠可产生抗相应肿瘤的特异性保护性细胞毒性T细胞免疫应答,为肿瘤免疫治疗开辟了一条新的可行性途径.但通常gp96在细胞中的表达水平较低,从有限的细胞或组织中获得的gp96制备物难以满足研究的需要.因此,本研究拟为制备高质量和充足的gp96而建立高表达gp96的单克隆细胞株.方法:构建人gp96cDNA的重组表达质粒pcDNA-hgp96并将其转染HeLa细胞,G418筛选稳定转染的阳性细胞克隆,然后用Western印迹分析单克隆细胞株的gp96表达量.结果:成功构建了人gp96的重组表达质粒,建立了稳定转染的单克隆细胞株,并筛选出一株高表达gp96的单克隆细胞.结论:成功建立了高表达gp96的单克隆细胞株,为gp96抗肿瘤免疫的研究奠定了基础.
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树突细胞激活的肿瘤特异性CTL对肝癌荷瘤裸鼠的治疗作用
树突细胞 (dendritic cell, DC,也称树突状细胞 )作为功能强的抗原提呈细胞,目前已广泛应用于抗病毒和抗肿瘤免疫研究,特别是近年来, DC瘤苗在临床治疗中取得了良好效果.然而, DC在体内含量极低,用直接分离法获得的 DC数量难以满足临床需要.业已证实 [1],用不同细胞因子组合可以从脐血、胚肝、骨髓、外周血培养扩增出大量 DC,然而胚肝、骨髓来源困难,不适宜临床应用,脐血来源方便,但其抗原提呈功能弱于外周血来源的 DC.王月丹等 [2]比较不同来源的 DC,发现外周血单核细胞诱导分化的 DC,其抗原提呈能力强.因此,本实验从正常人外周血中分离单核细胞,用 GM- CSF和 IL- 4组合诱导分化 DC,经形态学、功能学及特异标记鉴定为典型的 DC.用模拟体内实验的方法体外诱导出针对肝癌细胞抗原的特异性细胞毒性 T淋巴细胞 (cytotoxic T lymphocyte,CTL),并用于荷瘤裸鼠的治疗以观察其抑瘤效应.
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LMP1调控的细胞生存与死亡程序及其在抗肿瘤免疫中的意义
EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)基因组编码数种恶性转化必需的蛋白质,如潜伏期膜蛋白1(1atent membrane protein 1,LMP1).LMP1能上调抗凋亡的蛋白质以支持病毒的复制,同时也能增强细胞凋亡,提示一种病毒的蛋白质既能支持病毒的生存,亦能刺激宿主的防御机制,导致受感染的细胞裂解.病灶浸润的CD8阳性T淋巴细胞通过合成Fas配体等效应分子发挥抗肿瘤免疫功能.作为一种核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)依赖性的分子,Fas可被LMP1诱导.根据我们报道的LMP1对刺激物依赖性的细胞凋亡调节模型,LMP1能增强Fas诱导的细胞凋亡.有结果显示,Fas配体介导的细胞毒性对于EBV相关的鼻咽癌具有明显的治疗效果.近来也有报道提示,影响Fas介导细胞凋亡的基凶突变可显著地降低个体对肿瘤的易感性.我们认为,在肿瘤细胞精确地调控Fas水平的细胞因子疗法,仍有可能增强癌症患者的抗肿瘤免疫.
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进展期胃癌患者Th1/Th2失衡的临床进展
我国胃癌发病率在各类恶性肿瘤中居于前列,且胃癌发病存在地域性特征,例如南方地区胃癌患病率较低,而东部沿海、西北地区胃癌患病率相对较高.胃癌发生与多种因素有关,如不良饮食结构、幽门螺杆菌感染、生活环境等.早期胃癌无典型症状,主要表现为嗳气、腹部不适等,容易被误诊为胃溃疡、胃炎,随着病情进一步进展,患者症状越明显.对进展期胃癌患者而言,体重下降、腹部疼痛是常见症状,肿瘤部位不同,患者病情及表现也有差异.目前,已有多项研究提出胃癌发病与1型辅助性T淋巴细胞(Th1)/2型辅助性T淋巴细胞(Th2)失衡相关,为了进一步明确进展期胃癌患者的病理特征,本文对进展期胃癌患者的Th1/Th2失衡进行综述与分析,便于为临床诊疗提供依据.
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枸杞多糖对荷瘤小鼠免疫抑制因子VEGF、TGF-β1水平的影响
目的观察枸杞多糖对荷瘤机体内免疫逃逸有关因子的干预作用.方法采用 H22荷瘤小鼠,用枸杞多糖连续灌胃治疗两周后,观察胸腺、肿瘤重量,计算胸腺指数及肿瘤生长抑制率;ELISA双抗体夹心法检测各组血清中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平.结果枸杞多糖可明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,对小鼠的胸腺具有一定的保护作用,可下调血清中 VEGF、TGF-β1水平.结论枸杞多糖的抗肿瘤作用与抑制肿瘤机体 VEGF、TGF-β1因子的分泌、干预机体的免疫逃逸状态有关.
