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轮状病毒SA11衣壳蛋白VP7的毕赤酵母重组表达及IgY的制备
目的 真核重组表达轮状病毒(rotavirus,RV)SA11株VP7衣壳蛋白并制备、纯化其卵黄抗体(IgY).方法 将SA11标准株在MAl04细胞中增殖,收集病毒液.从病毒液中提取RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增获得SA11株衣壳蛋白VP7的长度为978 bp的编码基因,将PCR产物连接到pMD18-T载体上,进行测序.将重组体哑克隆到分泌表达载体pPICZαB中,再将重组体转化人大肠杆菌Top10中,用BstXI线性化酶切重组质粒后电转入毕赤酵母X-33中,进行测序.转染成功的菌落再用甲醇诱导表达,亲和层析法纯化重组蛋白抗原,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹(Western blotting)鉴定,用重组蛋白免疫罗曼母鸡,收集鸡蛋,Western blotting鉴定、纯化IsY.结果 细胞增殖液中提取的RNA银染可见11个条带,成功构建了含pPICZαB-SA11 VP7的毕赤酵母X-33,毕赤酵母X-33分泌的融合蛋白被收集、纯化.毕赤酵母X-33表达的SA11 VP7的衣壳蛋白经Western blotting验证与预测蛋白相对分子质量40 200相符.从鸡蛋中提取的鸡的IgY验证为抗VP7的抗体.纯度可达到95%,1个鸡蛋能产10.2 mg的IgY.结论 抗重组RV SA11衣壳蛋白VP7和IgY的成功制备为疫苗和诊断试剂的开发奠定了基础.
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VCA－IgA 与 Rta－IgG 联合检测诊断鼻咽癌的效能研究
目的：探讨VCA－IgA与Rta－IgG联合检测对鼻咽癌诊断的临床价值。方法收集2013年5月至2014年11月在海口市人民医院体检中心3913名健康体检者（组）；男2367名、女1546名。于耳鼻喉科就诊后，经病理活组织检查确诊为鼻咽癌的169例鼻咽癌患者（组）；男118例、女51例。两组血清标本分别进行EB病毒Rta－IgG、VCA－IgA（ ELISA法）检测。组间差异比较用卡方检验，采用ROC曲线评价诊断效能。结果 EB病毒Rta－IgG分别为鼻咽癌组93．5％（158／169）、健康体检组2．4％（93／3913）； VCA－IgA 阳性率分别为鼻咽癌组79．3％（134／169）、健康体检组8．9％（349／3913）。Rta－IgG诊断鼻咽癌的敏感度93．5％和特异性97．6％，均高于VCA－IgA敏感度79．3％（χ2＝14．49，P＜0．05）和特异度91．1％（χ2＝157．15，P＜0．05）。采用VcA－IgA／Rta－IgG联合检测进行分析，未能有效改善鼻咽癌诊断的效果，检测敏感度降低为72．8％（123／169）。结论 Rta－IgG的诊断效能优于 VCA－IgA。采用 VCA－IgA／Rta－IgG 联合检测模式对鼻咽癌临床诊断效能未有提高。（中华检验医学杂志，2016，39：609－612）
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2013年新疆维吾尔自治区手足口病病原学检测结果分析
目的 分析2013年新疆维吾尔自治区手足口病的病原构成及病原学特征,为手足口病防控策略的制定提供依据.方法 采集2013年1至12月在全疆各级医疗机构就诊的手足口病临床病例标本1 287份(粪便1 083份,咽拭子204份),采用实时荧光逆转录聚合酶链反应RT-PCR检测肠道病毒(EV)、肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇病毒A16 (CA16),对109份其他肠道病毒阳性标本进行柯萨奇病毒A6 (CA6)和柯萨奇病毒A10 (CA10)检测;采用RT-PCR法对6份EV71阳性标本进行衣壳蛋白VP1(VP1)区全长基因扩增和序列检测,运用生物软件ChromasPro1.7.6,Bioedit7.1.9及MEGA6.06进行核酸序列同源性分析并构建系统进化树.用SPSS17.0软件对不同年龄组患者EV阳性检出率进行比较分析.结果 1 287份标本中检出肠道病毒(EV)阳性997份,肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16型(CA16)及非EV71非CA16的其他肠道病毒(其他EV)分别占45.5％(454/997)、13.0％(130/997)和41.4/％ (413/997);不同年龄组患者肠道病毒阳性检出率[7/12 ～85.1％(137/161)]不同,差异有统计学意义(x2=32.29,P=0.000 4),3～5岁组阳性检出率高(82.5％～85.1％).109份其他EV阳标本中检出CA6阳性97份,占89.0％,CA10阳性3份,占2.7％;对6株EV71毒株的VP1区全长基因序列的同源性分析结果显示,6株EV71毒株与2008年安徽阜阳及2007年山东临沂毒株的核酸序列有着较高的同源性(95.3％ ～98.3％),均为C4基因亚型的C4a分支.结论 2013年新疆手足口病的病原中其他EV构成比明显上升,与EV71共同成为当年的优势病原.加强手足口病病原学监测,掌握手足口病的病原特点及重要病原的基因变异变迁规律对手足口病防控工作至关重要.
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融合抗原ELISA检测EB病毒抗体的临床价值
IgG阳性血清均发生反应,与8份两种抗体均阴性血清不发生反应.(2)临床检验:融合抗原EIJSA和IFA同时检测上述442份标本.以IFA为标准,融合抗原检测VCA IgG的敏感度、特异度和准确性分别为97.3%(392/403)、97.4%(38/39)和97.3%(430/442);检测VCA IgM的分别为94.2%(65/69)、99.5%(371/373)和98.6%(436/442).结论 融合抗原ELISA特异性强,灵敏度高,可用于临床EBV感染诊断及流行病学调查.
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编码人疱疹病毒8型小衣壳蛋白开放阅读框65的原核表达及应用
目的 构建人疱疹病毒8型(HHV8)小衣壳蛋白ORF65编码基因的原核表达载体,并进行原核表达.方法 提取BCBL-1细胞(HHV8阳性而EBV阴性)DNA,PCR技术扩增HHV8ORF65基因,目的 基因与原核表达载体pThioHis A连接后,转化宿主菌Escherichia coli BL21,异丙基硫代-D-乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,经带有6个组氨酸标签的亲和层析柱纯化获得重组抗原.重组蛋白电泳后转至聚偏氟乙烯(PVDF)膜,与HHV8阳性血清进行免疫印迹反应.对相关患者进行检测,并与美国Biotrin公司生产的HHV8 IgM和HHV8 IgG抗体间接荧光抗体试验(IFA)检测试剂盒和德国Qiagen公司ELISA检测试剂盒进行比较.结果 DNA序列分析表明目的 基因序列与HHV8标准毒株相应序列完全一致,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酸胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳可观察到相对分子质量为31 500的融合蛋白的表达,免疫印迹反应显示重组抗原具有较高的特异性.基因工程抗原的各项技术指标与Biotrin公司和Qiagen公司检测试剂盒有较好的符合率,对临床标本的检测表明该试剂盒简单、实用、结果稳定可靠.结论 HHV8重组抗原具有较好的抗原性,进一步完善后可用于HHV8抗体的检测.
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CINⅠ的转归及p16INK4a蛋白表达在分流CINⅠ中的临床意义
目的：探讨子宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ的转归，分析影响CINⅠ病变进展的相关因素，并评价p16INK4a蛋白表达在预测CINⅠ病变进展中的价值。方法回顾性分析2010年8月—2013年7月在南京医科大学第一附属医院就诊，初次液基薄层细胞学检查（TCT）结果为≤低度鳞状上皮内病变[LSIL；包括正常、未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞（ASCUS）和LSIL]且高危型HPV阳性，并经阴道镜下子宫颈活检组织病理诊断为CINⅠ的患者104例，随访1年观察病变的转归，同时对患者年龄、初次TCT结果、高危型HPV DNA载量、子宫颈脱落细胞中HPV L1壳蛋白及子宫颈组织中p16INK4a蛋白表达情况与CINⅠ病变进展的关系行单因素及多因素分析。结果（1）104例CINⅠ患者中，初次检查TCT结果正常者15例、ASCUS 78例、LSIL 11例；1年后随访时复查：TCT结果正常且高危型HPV阴性者52例，高危型HPV阳性和（或）TCT结果≥正常但经阴道镜检查评估并行子宫颈活检组织病理检查诊断为正常者30例、CINⅠ10例、CINⅡ5例、CINⅢ7例。78.8%（82/104）的患者病变消退；9.6%（10/104）的患者病变持续；11.5%（12/104）的患者病变进展，其中4.8%（5/104）病变进展为CINⅡ，6.7%（7/104）进展为CINⅢ，无一例进展为子宫颈浸润癌。（2）104例CINⅠ患者中，行p16INK4a蛋白检测者88例，其中30例（34%，30/88）p16INK4a蛋白呈阳性表达，58例（66%，58/88）p16INK4a蛋白呈阴性表达；行免疫细胞化学HPV L1壳蛋白检测者94例，其中49例（52%，49/94）HPV L1壳蛋白阳性表达，45例（48%，45/94）HPV L1壳蛋白阴性表达。（3）单因素分析显示，患者年龄、高危型HPV DNA载量、初次TCT结果、HPV L1壳蛋白表达与CINⅠ病变进展无明显相关关系（P>0.05），而p16INK4a蛋白阳性表达与CINⅠ病变进展明显相关（P<0.05）。多因素分析显示，p16INK4a蛋白阳性表达是影响CINⅠ病变进展的危险因素（OR=5.1，95%CI为1.162～22.387，P=0.031）。（4）30例p16INK4a蛋白阳性表达的CINⅠ患者中8例（27%，8/30）病变进展，58例p16INK4a蛋白阴性表达者中4例（7%，4/58）病变进展，两者比较，差异有统计学意义（P<0.05）。p16INK4a蛋白阳性表达预测CINⅠ病变进展的敏感度为75%，特异度为71%，阳性预测值27%，阴性预测值93%。结论高危型HPV阳性且TCT结果≤LSIL的CINⅠ患者1年内病变进展率较低，无子宫颈浸润癌发生。p16INK4a蛋白阳性是影响CINⅠ病变进展的危险因素，对于预测CINⅠ病变进展有一定的价值，可用于分流CINⅠ，筛查出高危人群进行重点随访。
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HPV58型复合DNA疫苗抗肿瘤免疫效果的初步观察
目的 初步观察PVAX1-HPV58mE6E7FcGB复合DNA疫苗的抗肿瘤免疫效果.方法 在检测该复合疫苗的免疫效果前,自行构建了稳定表达HPV58E6E7融合基因的B16-HPV58E6E7成瘤细胞系,表达并纯化了HPV58E6E7-GST融合蛋白作为抗原.将该疫苗免疫C57BL/6小鼠(免疫组)后,通过抗肿瘤移植保护实验和肿瘤生长抑制实验观察该疫苗对小鼠负荷的B16-HPV58E6E7移植瘤的防治效果；通过特异性抗体检测、酶联免疫斑点检测、特异性杀伤实验观察该疫苗在被免疫小鼠体内诱发的体液和细胞免疫反应.以单纯抗原PVAX1-HPV58mE6E7 Fc免疫小鼠作为单纯抗原组.结果 抗肿瘤移植保护实验显示,经PVAX1-HPV58mE6E7FcGB疫苗免疫的小鼠成瘤率仅为9/15,但成瘤时间长[为(13.6±1.7)d],且肿瘤生长慢.在肿瘤生长抑制实验中,疫苗组小鼠的肿瘤生长抑制率达81.4％.体液免疫检测显示,该疫苗和单纯抗原均能在小鼠体内诱发特异性抗体,高滴度分别为1∶25 600和1∶12 800,两组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；但在细胞免疫检测中,疫苗组激活的特异性T淋巴细胞数[(219±34)个/4×105个脾淋巴细胞]约为单纯抗原组[(55±25)个/4×105个脾淋巴细胞]的4倍,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；且该疫苗诱发的特异性针对B 16-HPV58 E6 E7细胞的杀伤率(高为43.3％)也明显高于单纯抗原组(杀伤率高为31.3％),两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PVAX1-HPV58mE6E7FcGB复合DNA疫苗能有效激发特异性的体液和细胞免疫反应,显著抑制B16-HPV58E6E7肿瘤细胞的生长,在细胞免疫上优于单纯抗原,可作为HPV58阳性相关肿瘤及其癌前病变免疫治疗的候选疫苗.
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子宫颈液基细胞学检查异常的涂片中人乳头状瘤病毒L1蛋白的表达及其意义
目的 探讨人乳头状瘤病毒(HPV)L1蛋白在官颈液基细胞学检查异常涂片中的表达及其意义.方法 选择2006年9月-2008年9月间,在中日友好医院就诊的官颈液基细胞学检查诊断为≥未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS),且其第2代杂交捕获试验(HC-Ⅱ)榆测HPV DNA结果均为阳性,同时有组织病理学诊断的患者共274例.其中,宫颈液基细胞学检查诊断为ASCUS 105例、低度鳞状上皮内病变(LSIL)119例、不除外高度病变的不典型鳞状上皮细胞(ASC-H)9例、高度鳞状上皮内病变(HSIL)36例、官颈鳞癌5例;组织病理学检查(作为金标准)诊断为炎症96例、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ 85例、CIN Ⅱ 55例、CIN Ⅲ 32例、官颈鳞癌6例.对此274例患者的官颈涂片,采用伞反应抗体的免疫细胞化学染色进行HPV L1蛋白的榆测,分析其对官颈病变进展的预测价值.结果 274例患者中,组织病理学检杏诊断为炎症的组织中HPV L1蛋白阳性表达率为69.8%(67/96),CIN Ⅰ为83.5%(71/85),CIN Ⅱ为41.8%(23/55),CIN Ⅲ为3.1%(1/32),宫颈鳞癌为0(0/6),除CIN Ⅲ与官颈鳞癌比较,差异无统计学意义(P>0.05)外,其他不同病变问比较,差异均有统计学意义(P<0.01);细胞学检查诊断为LSIL的细胞中HPV L1蛋白阳件表达率(75.6%,90/119)高,其次为ASCUS细胞(63.8%,67/105)和HSIL+宫颈鳞癌细胞(9.8%,4/41),3者问比较,差异有统计学意义(P<0.01).71例未经治疗的ASCUS、LSIL患者中,55例HPV L1蛋白阳性表达者中无一例疾病进展,16例HPV L1蛋白阴性表达者疾病进展的发生率为19%(3/16),两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 HPV L1蛋白在宫颈液基细胞学检查异常涂片中的表达情况可以帮助了解宫颈的病变程度,预测宫颈病变的发展趋势,尤其对细胞学检查诊断为ASCUS和LSIL的患者可协助指导临床处理.
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高危型HPV阳性妇女子宫颈脱落细胞HPV L1蛋白检测的临床意义
目的：探讨高危型HPV阳性妇女子宫颈脱落细胞HPV L1蛋白检测的临床意义。方法收集2012年11月—2013年6月间，在浙江省湖州市妇幼保健院和浙江大学医学院附属妇产科医院就诊的符合入组条件[包括既往无子宫颈上皮内瘤变（CIN）史及恶性肿瘤史，无子宫颈手术史，年龄为30~65岁，非妊娠期妇女]的高危型HPV阳性妇女。收集子宫颈脱落细胞，分别行液基薄层细胞学检查（TCT）和免疫细胞化学染色检测HPV L1蛋白。所有高危型HPV阳性妇女均行阴道镜检查，并对可疑病变部位行阴道镜活检病理检查。比较不同组织学诊断妇女的子宫颈脱落细胞中HPV L1蛋白的表达情况，评估子宫颈脱落细胞HPV L1蛋白检测在子宫颈病变筛查中的价值。结果符合入组条件的高危型HPV阳性妇女共386例，其组织学诊断为：正常子宫颈162例，低度鳞状上皮内病变（LSIL）94例，高度鳞状上皮内病变（HSIL）128例，子宫颈鳞癌（SCC）2例。HSIL和SCC妇女的HPV L1蛋白阳性表达率显著低于LSIL和正常子宫颈者[分别为19.2%（25/130）和66.4%（170/256）；P=0.000]。在高危型HPV阳性妇女中，子宫颈脱落细胞HPV L1蛋白检测预测组织学诊断≥HSIL病变（包括HSIL和SCC）的敏感度（分别为80.77%、50.77%）和阴性预测值（分别为87.18%、76.47%）均显著高于细胞学检查（P<0.01），但其特异度（分别为66.41%、81.25%）显著低于细胞学检查（P<0.01）；而两者的阳性预测值（分别为54.97%、57.89%）比较，差异则无统计学意义（P=0.619）。在高危型HPV阳性、细胞学检查正常的妇女中，HPV L1蛋白检测预测组织学诊断≥HSIL时的敏感度和阴性预测值分别为87.50%和94.12%，特异度和阳性预测值分别为61.54%和41.18%；而在高危型HPV阳性、细胞学检查结果为未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞（ASCUS）的妇女中，HPV L1蛋白检测用于预测的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为80.00%、86.36%、80.00%和86.36%。结论子宫颈脱落细胞HPV L1蛋白检测在高危型HPV阳性妇女的子宫颈病变筛查中具有一定的价值，可能成为高危型HPV阳性，而细胞学检查正常或ASCUS妇女的一种合适的分流方法。
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黄病毒衣壳蛋白研究进展
黄病毒科病毒是一类单股正链RNA病毒,其基因组包含一个长的开放读码框.编码约含3 400个氨基酸残基的聚蛋白分子.聚蛋白经蛋白酶剪切加工得到衣壳(capsid,C)蛋白、prM蛋白和包膜E蛋白三种结构蛋白以及至少7种非结构蛋白.黄病毒的衣壳蛋白是病毒颗粒的构成成分之一,以多拷贝的形式与单拷贝的病毒基因组RNA共同构成病毒的核衣壳结构.近年来对C蛋白的研究取得了一定进展,已发现其除形成核衣壳结构外,还具有其他功能,这些功能涉及病毒RNA复制、病毒与宿主的相互作用等方面.本文综述了C蛋白结构与功能研究的新进展.
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真核表达东方马脑炎病毒衣壳蛋白Capsid抑制IFNγ应答基因转录
目的 克隆东方马脑炎病毒(EEEV)衣壳蛋白(Capsid)基因,构建其真核表达载体,检测该基因在293细胞中的表达,并初步研究其对干扰素(IFN)应答基因表达的影响.方法 构建包含EEEV capsid基因的真核表达载体pcDNA3-Flag-capsid,以威格拉斯脂质体转染293细胞进行瞬时表达,Western印迹检测其表达情况;应用定量PCR比较IFN效应基因Gbp1,Gbp2和Isg15在pcDNA3-Flag-capsid和空载体转染细胞中mRNA表达差异.结果 构建了EEEV Capsid真核表达质粒,并且该质粒能够在293细胞中有效表达,同时定量PCR结果 表明,与空载体转染对照组相比,外源导入EEEV Capsid抑制IFN应答基因Gbp1,Gbp2和Isg15的转录.结论 真核表达EEEV Capsid抑制细胞内IFN应答基因的表达,为研究EEEV致病机制奠定基础.
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抗体库技术中辅助噬菌体的研究进展
噬菌体抗体库作为噬菌体展示和抗体库2种技术的集合体,可以不需经过免疫而直接获取各种人源抗体,目前已广泛应用于生物学及医学等领域.在通常使用的噬菌粒系统中,使用野生型辅助噬菌体会导致"噬菌体污染",使得仅有很少部分子代噬菌体带有抗体片段,这对抗体库的筛选工作非常不利.近年来,研究人员通过对噬菌体衣壳蛋白基因(g3)部分缺失、引入琥珀突变、构建新型辅助噬菌体或辅助质粒等策略,不仅有效避免了辅助噬菌体污染问题,使抗体展示效率提高了5～20倍,进而通过增加单价抗体展示在每个噬菌体表面,使抗原结合能力提高400倍,并且在第二轮筛选中即可得到有效富集(阳性克隆率超过50%).本文综述了近年来应用在噬菌体抗体库的一些新型的辅助感染系统.
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心脏基因工程研究:柯萨奇B2病毒云南分离株VP1基因的分子特征
目的:探讨CVB2云南分离株编码主要中和抗原的衣壳蛋白VP1基因的分子特征,以期为中国CVB2感染致病的分子基础、基因疫苗的研制和心脏基因工程实施提供参考依据.方法:采用逆转录PCR技术扩增CVB2云南分离株VP1基因,经分子克隆获得pMD18-T-CVB2VP1并测序,应用生物信息学进行其序列、同源性分析、预测蛋白质二级结构,并建立进化树.结果:CVB2云南分离株VP1基因全长约846bp,无起始密码及终止密码,与Ohio-1株(GenBank登录号:AF081312)核苷酸、氨基酸序列同源性高为98%.BC环的βB区与βC区之间缺失6个腺嘌呤,其编码2个构成无规卷曲结构的赖氨酸.CVB的共同抗原表位区中RIYFKPKHVKA高度保守,为云南分离株及其他参考毒株的共同序列,变异主要在CVB2云南株的251～252位,W→Y,V→I.结论:CVB2云南分离株与Ohio-1株同源性高,亲缘关系近,以主要中和抗原表位区存在缬氨酸缺失,CVB共同抗原表位区存在具有规律性的变异及保守序列等为其主要分子特征.
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基因工程烟草花叶病毒在疫苗研发中的应用
烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)是一种能感染植物的RNA病毒.因其基因组较小,易于进行遗传操作,且感染过程简单,适于改造成微小颗粒,故近年来已广泛用于疫苗研发.此文对TMV多肽表达及抗原展示系统的应用、疫苗开发中TMV操作的新进展以及疫苗在动物模型中诱导体液和细胞免疫应答做一综述.
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密码子优化的HPV6b L1 DNA诱导BALB/c小鼠产生增强的免疫应答
目的 探讨真核细胞偏好密码子优化对人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)6b型L1 DNA诱导BALB/c小鼠特异性体液和细胞免疫应答的增强效应.方法 利用PCR从尖锐湿疣组织中扩增HPV6b L1基因,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建野生型pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(wt)并进行鉴定;同时,对HPV6b L1基因进行真核细胞偏好密码子优化,进一步通过重叠PCR的方法获得全长基因,构建密码子优化的重组质粒pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(mod.)并进行鉴定.将6～8周龄雌性BALB/c小鼠分成4组,分别肌肉注射3次pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(mod.)、pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(wt)、pcDNA3.1(+)载体和PBS,间隔2周,每次剂量为150μg/鼠.分别于免疫前和免疫后每隔2周,收集血清,用间接ELISA检测血清igG抗体;并于第8周取小鼠脾细胞,采用乳酸脱氢酶释放法,按效应细胞与靶细胞之比(E:T)为5:1、10:1、20:1进行免疫小鼠特异性CTL杀伤活性检测.结果 成功构建了密码子优化的HPV6b L1重组质粒.小鼠免疫后血清特异性IgG抗体水平随着免疫时间和次数的增加而升高.pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(mod.)组血清IgG抗体在第8周达到高峰,与pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(wt)、载体和PBS对照组相比差异均有统计学意义(t=18.138、t=29.140、t=30.840,P值均＜0.01);而pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(wt)组与载体和PBS组比较差异也有统计学意义(t=20.072、t=22.457,P值均＜0.01).在特异性CTL杀伤实验中,当E:T分别为5:1、10:1、20:1时,pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(mod.)组的脾细胞特异性CTL杀伤率明显高于pcDNA3.1(+)/HPV6bLl(wt)组(t=11.892、t=15.329、t=2.911,P值均＜0.05)、载体组(t=12.936、t=16.613、t=13.90l,P值均＜0.01)和PBS对照组(t=14.768、t=18.935、t=10.925,P值均＜0.01).结论 密码子优化的HPV6b L1 DNA可诱导BALB/c小鼠产生增强的特异性体液和细胞免疫应答.
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广东地区急性呼吸道感染儿童人类博卡病毒的流行状况
目的 了解广东地区急性呼吸道感染患儿人类博卡病毒(HBoV)的感染情况.方法 收集广东地区2007年6月至2008年5月期间呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物447份,采用PCR法检测HBoV衣壳蛋白(VP)基因片段,阳性标本作核酸序列测定,并与基冈库中的已知序列进行序列比对和系统进化树分析.结果 447例呼吸道感染患儿标本中HBoV阳件率为5.1%.其中10例患儿与其他病毒混合感染,占阳性标本的43.5%.阳件患儿的主要临床诊断为喘息性肺炎、毛细支气管炎和支气管肺炎,年龄分布从42 d到6岁,主要集中在1岁以内,HBoV感染的季节分布偏向夏、秋及晚春.经序列比对和进化树分析.阳性株的VP基因片段与瑞典株ST1的核酸及氨基酸序列同源性分别为97.8%～98.8%及99.3%～100.0%.结论 HBoV是广东地区儿童下呼吸道感染的重要病原之一,且在1岁以内患儿中高发.该地区HBoV流行株的VP基因片段较为保守,但也存在导致氨基酸改变的突变株.
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衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1对豚鼠结膜炎衣原体及E型沙眼衣原体的抑制作用
目的 探讨豚鼠结膜炎衣原体(GPIC)噬菌体衣壳蛋白Vp1对GPIC及E型沙眼衣原体的抑制作用,为沙眼衣原体感染的治疗提供新的思路.方法 用Vp1-pET30a(+)重组质粒菌表达Vp1蛋白,Western印迹法鉴定蛋白,透析袋纯化蛋白,BCA法测定蛋白浓度,将GPIC、E型沙眼衣原体分别与Vp1蛋白、Tris甘氨酸溶液、S蛋白及培养液室温孵育3h,衣原体培养过程中分别加入相同浓度的上述液体,72 h或48 h后,免疫荧光计数包涵体数.结果 GPIC在Vp1蛋白组、Tris甘氨酸溶液组、S蛋白组及培养液组培养72 h,包涵体计数分别为5.0±1.5、24± 1.2、25±1.7及25±1.5,各组包涵体数比较,差异有统计学意义(F=476.632,P＜ 0.05).Vp1蛋白组GPIC包涵体数显著低于Tris甘氨酸溶液组、S蛋白组及培养液组(P＜0.05),而后3组之间差异无统计学意义(P＞0.05).与阴性对照组(培养液组)相比,Vp1蛋白对GPIC的抑制率为(80.2±3.99)％.此外,Vp1蛋白对E型沙眼衣原体的抑制率为(77.2±1.79)％,t检验示Vp1对GPIC的作用与对E型沙眼衣原体的作用差异无统计学意义(f=2.057,P＞0.05).结论 Vp1蛋白可明显抑制GPIC的感染,同时对E型沙眼衣原体有相似的抑制作用.
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人乳头瘤病毒衣壳蛋白L1的相关研究
人乳头瘤病毒(HPY)是引起尖锐湿疣等上皮乳头瘤样增生性疾病的主要病原。HPV衣壳蛋白L1，由于其结构特征及精确的抗原特性，在黏附宿主细胞、识别病毒受体、协助病毒DNA的人胞转运中均发挥重要作用，在HPV感染的临床评估和HPV疫苗的研究中日益受到关注。该文对HPV衣壳蛋白L1的结构和功能及其相关的应用进行了综述。
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人乳头瘤病毒L1壳蛋白在筛查宫颈鳞状上皮内病变中的应用
目的：探讨人乳头瘤病毒( HPV) L1壳蛋白筛查HPV阳性妇女宫颈脱落细胞中宫颈鳞状上皮内病变的应用价值。方法：选取2012年5月至2014年12月就诊于温州市人民医院的妇女212例,收集宫颈脱落细胞并行HPV L1壳蛋白检测、HPV DNA分型、TCT(液基细胞学)及阴道镜下活检,比较HPV阳性妇女的宫颈脱落细胞中HPV L1壳蛋白的表达情况。结果：212例细胞学标本中HPV L1壳蛋白阳性率为33.9%,其中未见上皮内病变/恶性细胞组( NILM)、无明确诊断意义的鳞状上皮细胞病变组( ASCUS)、低度鳞状上皮内病变组( LSIL )、不能排除高度鳞状上皮内病变组( ASC-H )、高度鳞状上皮内病变组(HSIL)中阳性率分别为47.1%、35.1%、54.2%、29.2%、16.1%,各组比较差异有统计学意义(P<0.05)；两两比较,HSIL组与LSIL组和NILM组比较,差异均有统计学意义(P均<0.005)；进行数据合并后,LSIL/ASCUS组与ASC-H/HSIL组比较差异有统计学意义( P=0.001)。178例宫颈细胞学异常患者中,宫颈低级别病变和宫颈高级别病变的HPV L1壳蛋白阳性率比较,在ASCUS组( P=0.000)、LSIL组( P=0.004)中均有差异,在ASC-H组( P=0.127)、HSIL组( P=0.515)中均无差异。 HPV 16/18感染患者的HPV L1壳缺失同宫颈高级别病变有更紧密的关系( P=0.003)。结论：子宫颈脱落细胞HPV L1壳蛋白检测在HPV阳性妇女的子宫颈病变筛查中具有一定的价值,可能成为一种合适的分流方法。
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药物治疗340例宫颈乳头瘤病毒感染的临床观察
目的 探讨药物治疗在宫颈人乳头瘤病毒L1(HPVL1)壳蛋白检测阴性治疗中的价值.方法 采用杂交捕获二代(HC2)技术,将2009年9月至2011年1月在郑州大学第二附属医院妇科门诊确诊的宫颈高危型人乳头瘤病毒(hr-HPV)感染经 HPVL1壳蛋白检测阴性的患者随机分成观察组和治疗组.对观察组不采取任何治疗,对治疗组用药物(辛复宁和保妇康栓)治疗3个疗程后停药.两组患者8个月后,复查hr-HPV和液基薄层细胞学(TCT).结果 治疗组hr-HPV转阴率为80.0%,观察组转阴率为15.3%.治疗组TCT结果未发现异常病例,观察组发现慢性宫颈炎伴上皮内可见控空细胞1例,宫颈上皮内瘤变1级(CIN1)2例.结论 药物治疗HPVL1壳蛋白阴性患者有一定作用.
