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异黄酮衍生物J39136对东莨菪碱致学习记忆障碍模型小鼠的影响
目的:本文旨在初步探讨具有乙、丁酰胆碱酯酶抑制活性的异黄酮衍生物J39136对小鼠东莨菪碱导致的学习记忆障碍的影响,为该化合物后续研究提供实验依据.方法:采用Morris水迷宫、跳台和避暗3个行为学实验,评价J39136不同剂量对小鼠认知和记忆的作用.结果:化合物J39136各给药组均有减少小鼠在避暗试验中的错误次数的趋势;J39136各剂量组均可显著延长小鼠的跳台潜伏期,减少小鼠的跳台错误次数,缩短小鼠在Morris水迷宫实验中的游泳潜伏期,具有一定的剂量依赖性.结论:化合物J39136能够改善东莨菪碱致学习记忆障碍,值得进行深入开发.
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葡萄内酯对脑缺血致血管性痴呆大鼠的保护作用
目的:考察葡萄内酯对脑缺血致血管性痴呆大鼠的保护作用.方法:SD大鼠随机分成假手术组、模型组、安理申组(1.028mg·kg-1)和葡萄内酯低、中、高剂量(0.257,0.514,1.028mg·kg-1)组,ig给药,连续52d.采用永久性结扎大鼠双侧颈总动脉法建立血管性痴呆模型,以Morris水迷宫试验进行行为学测试,观察大鼠的学习记忆能力,检测大鼠脑组织中乙酰胆碱酯酶(AChE)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及丙二醛(MDA)和谷氨酸含量的变化.结果:中、高剂量葡萄内酯可以明显缩短大鼠的逃避潜伏期,提高其穿越平台次数,增强大鼠的空间学习记忆能力,与模型组比较有极显著性差异(P＜0.01).葡萄内酯各剂量均能降低血管性痴呆大鼠AChE活性以及MDA和谷氨酸含量,与模型组相比,均有显著性差异(P＜0.01).葡萄内酯中、高剂量组的SOD活性明显低于模型组(P＜0.01).结论:葡萄内酯对血管性痴呆有保护作用,其作用机制可能与其降低MDA含量、乙酰胆碱酯酶活性以及谷氨酸对脑神经的毒害作用有关.
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对硫磷与对氧磷抑制的人脑乙酰胆碱酯酶的老化及重活化
目的了解对硫磷与对氧磷在试管内对人脑乙酰胆碱酯酶(AChE)的抑制,膦酰化酶的老化速率及肟类药物的重活化效能有何差别.方法微量羟胺比色法测定AChE活性.结果对硫磷与对氧磷抑制人脑AChE 50%活性的摩尔浓度的负对数值(pI50)分别为4.10及7.51,抑制人脑AChE 90%活性的摩尔浓度的负对数值(pI90)值分别为2.55及6.57.氯磷定、双复磷、双磷定和酰胺磷定4种重活化剂对对硫磷与对氧磷抑制的人脑AChE的重活化作用有较大差异, 等摩尔浓度条件下,其对对氧磷的重活化作用普遍好于对硫磷.且双肟类重活化剂作用普遍强于单肟类重活化剂; 对硫磷与对氧磷的佳重活化剂均为双复磷.对硫磷与对氧磷人脑AChE磷酰化酶的半老化时间(t0.5)分别为14及12 h,老化达到99%的时间(t0.99)分别为95及81 h.结论对硫磷或对氧磷中毒时应尽早使用双复磷或双磷定.且在急性中毒症状控制后,仍须连续使用重活化剂4 d.
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淫羊藿苷对淀粉样β蛋白片段25-35所致大鼠学习记忆障碍的改善作用
目的 观察淫羊藿苷对淀粉样β蛋白片段25-35(Aβ25-35)所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法 Wistar雄性大鼠,右侧海马内注射Aβ25-35 10 μg制备AD模型,次日起淫羊藿苷30, 60和120 mg·kg-1灌胃给药,连续14 d,d 15～19 Morris水迷宫检测大鼠空间辨别学习记忆能力;d 20检测海马组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)及一氧化氮合酶(NOS)的活性,免疫组化法检测海马内乙酰胆碱酯酶(AChE)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达.结果 与模型对照组比较,淫羊藿苷给药14 d明显改善大鼠学习记忆能力;海马组织中 SOD和GSH-PX活性升高,NOS活性降低;海马内AChE及ChAT的表达增加.结论 淫羊藿苷可以改善Aβ25-35海马内注射所致AD模型大鼠的学习记忆能力,其作用可能与其增加AChE和ChAT表达,增强SOD和GSH-PX等自由基清除酶活性,降低NOS活性,减少NO释放等多种机制,促进胆碱能递质系统功能的恢复有关.
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大鼠经胃和皮下暴露毒死蜱的毒物代谢动力学和毒效学模型构建
目的：构建毒死蜱（CPF）同时ig和sc暴露的以生理学为基础的毒物代谢动力学和毒效学（PBTK/TD）模型，模拟和验证其预测CPF暴露后体内毒代特征及毒效可靠性。方法①构建CPF的PBTK/TD模型，运用所构建的模型模拟大鼠同时ig和sc暴露CPF的毒代和毒效学数据，预测暴露大鼠血液中CPF及其代谢物3，5，6-三氯-2-吡啶酚（TCP）浓度变化，血液和大脑中乙酰胆碱酯酶（AChE）活性变化曲线。②45只成年雄性大鼠一次性ig和sc联合染毒CPF（50+50）mg·kg-1，染毒后0.0，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，12.0，24.0和48.0 h收集生物样本，测定血浆CPF和TCP浓度，及血浆和大脑皮质AChE活性，将实测值与模型模拟值进行比较，以验证模型的准确性。结果模拟大鼠ig和sc联合暴露CPF 20+20，10+30和（30+10）mg · kg-1后，48 h内血液中CPF和TCP浓度均先上升，达到峰值后随之下降；ig暴露剂量越大，血浆AChE活性下降越快，酶活性抑制程度越重，但酶活性恢复速度很快；大脑AChE活性抑制程度受皮下暴露量的影响较大。实测大鼠联合染毒（50+50）mg·kg-1 CPF后的血浆CPF和TCP浓度，及血浆和大脑皮质AChE活性，与模型预测值基本一致，差异无统计学意义。结论本研究所构建的PBTK/TD模型可预测大鼠同时ig和sc暴露CPF后的体内毒代特征及毒效水平。
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补硒与锌对梭曼中毒大鼠乙酰胆碱酯酶活力和抗氧化力的影响
目的探讨抗氧化剂硒(Se)和锌(Zn)预防梭曼中毒的可能性.方法雄性大鼠40只,按体重随机分为正常对照组、染毒组、硒治疗组、锌治疗组.正常对照组和染毒组每日5 mL@kg-1的生理盐水(NS)ig;硒治疗组每日1 mg@kg-1Na2Se03的NS液ig和锌治疗组每日4 mg@kg-1Zn(C6H11O7)2的NS液ig,共ig 9 d.d 10除正常对照组外其余各组大鼠均sc0.9 LD50梭曼,2 h后断头处死并取样,测定大鼠全血乙酰胆碱酯酶(AChE)活性及血清、大脑、肝脏的超氧化物歧化酶(SOD)活性、总抗氧化力(T-AOC)和一氧化氮合酶(NOS)活性.结果梭曼中毒大鼠后,染毒组大鼠全血AChE活性被明显抑制,血清、大脑、肝脏的SOD活性、T-AOC显著下降,NOS含量明显升高,而硒和锌预防组大鼠对梭曼引起的AChF、SOD、NOS活性和T-AOC变化明显减轻.结论提示硒和锌对梭曼中毒有较好的预防作用.
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二苯乙烯苷对慢性脑缺血大鼠学习记忆的影响
目的 观察何首乌有效成分二苯乙烯苷(TSG)对慢性脑缺血大鼠学习记忆能力的影响,并探讨其可能机制.方法 雄性SD大鼠双侧颈总动脉永久性结扎制备慢性脑缺血致痴呆模型.术前2周起,分别给TSG 30,60及120 mg·kg-1·d-1, ig,连续11周.术后8周时,分别用Morris水迷宫实验和避暗实验检测大鼠的空间学习记忆能力和被动回避学习记忆能力.术后9周时,采用生化方法检测海马乙酰胆碱酯酶(AChE)活性,免疫组化方法检测海马蛋白磷酸酶2A(PP-2A) 和微管相关蛋白2(MAP-2)的表达.结果 慢性脑缺血模型组大鼠空间和被动回避学习记忆能力明显降低,海马AChE活性显著升高, PP-2A和MAP-2表达明显减少.TSG给药10周可显著改善慢性脑缺血引起的学习记忆能力降低;给药11周明显抑制海马AChE活性增高,并增加PP-2A和MAP-2的表达.结论 TSG可改善慢性脑缺血大鼠的学习记忆能力,其机制可能与抑制海马AChE活性,增加海马PP-2A和MAP-2的表达有关.
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乙酰胆碱对乙酰胆碱酯酶立体结构影响的初步原子力显微观察
目的为探索乙酰胆碱酯酶(AChE)活性中心狭隙与其快速水解功能的适应原理,研究乙酰胆碱(ACh)对AChE立体结构的影响.方法在云母表面重组磷脂膜,将AChE重组到磷脂膜上,用原子力显微技术观察.结果天然AChE表面平滑,边界清晰,中间突出,略呈椭圆球体, 蛋白颗粒长径为(62±25)nm, 短径为(53±13)nm,高度为(6±2)nm; 反应后酶蛋白表面变得粗糙,形态不甚规则,蛋白颗粒中心出现近圆形孔洞.结论 ACh对AChE立体结构具有明显影响.
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电鳐乙酰胆碱酯酶单链抗体基因的克隆及表达
目的欲用计算机模拟及分子对接技术揭示抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体3F3抑酶的分子基础,但3F3分子远大于乙酰胆碱酯酶(AChE),难以操作,故拟用其单链抗体为工具进行研究.本研究旨在设计、克隆并表达抗AChE单链抗体Sc3F3基因,推演重组单链抗体的氨基酸顺序,并证明纯化的重组单链抗体有抑制AChE的作用.方法使用分泌抗电鳐AChE单克隆抗体3F3(3F3Ab)的杂交瘤细胞提取总RNA.用RT-PCR技术扩增重链可变区(VH)cDNA及轻链可变区(VL)cDNA基因,通过连接肽(Gly4Ser)3基因将VH基因和VL基因连接,制成单链抗体基因(ScFv).将ScFv基因插入载体pCANTAB-5E用于表达.在大肠杆菌中表达的3F3单链抗体(Sc3F3)用Sephadex G75凝胶过滤和QAE-Sephadex A-50离子交换层析纯化.AChE与抗体的免疫反应性用ELISA法测定.AChE活性用微量羟胺比色法测定.结果测序结果证明所克隆的ScFv基因是功能重排基因, 长度为723 bp.重、轻链基因长度分别为357 bp和321 bp.ScFv基因(含连接肽基因)所编码的纯化的重组Sc3F3的分子量为31.6 ku.Sc3F3与AChE反应良好,但对AChE活性的抑制明显弱于3F3Ab.Sc3F3的抑制效力约为3F3Ab的1/10.结论在计算机模拟及分子对接研究中使用本研究设计的单链抗体Sc3F3应是可靠的.
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可通过血脑屏障的乙酰胆碱酯酶重活化剂的研究进展
神经性毒剂和有机磷农药是乙酰胆碱酯酶的不可逆抑制剂,对人类生命安全构成重大威胁.目前可用于临床预防和治疗的药物大都为季铵型乙酰胆碱酯酶重活化剂,对外周组织和血液中乙酰胆碱酯酶中毒具有较好的活化作用,但季铵盐结构限制了血脑屏障通过率,使这类重活化剂在中枢神经系统发挥作用有限.因此,开发可通过血脑屏障的重活化剂是当前主要发展趋势.本文对可通过血脑屏障的重活化剂的研究进展进行了综述.
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应用基准剂量法探讨氯蜱硫磷的参考剂量
目的 应用基准剂量(BMD)法探讨氯蜱硫磷(毒死蜱)的参考剂量.方法 80只清洁级成年雌性SD大鼠,ig给予氯蜱硫磷0.25,0.5,1,2,4,8和16 mg·kg-1,每天1次,连续21 d.21 d后处死大鼠测定大鼠大脑皮质、海马和血清中乙酰胆碱酯酶(AChE)活性,观察氯蜱硫磷的未观察到损害作用剂量.采用R语言的PROAST28.1软件包计算BMD及其下限值,将BMD下限值除以安全系数100得到氯蜱硫磷的参考剂量.结果 与正常对照组相比,氯蜱硫磷4,8和16 mg·kg-1使大鼠海马中AChE活性明显降低(P<0.01);氯蜱硫磷2,4,8和16 mg·kg-1使大鼠皮质中AChE活性明显降低(P<0.01);而氯蜱硫磷1,2,4,8和16 mg·kg-1使大鼠血清中AChE活性明显降低(P<0.01).随着氯蜱硫磷染毒剂量的增加,大鼠海马、皮质和血清中的AChE活性表现出下降趋势.以AChE活性作为指标,海马、皮质和血清中氯蜱硫磷的未观察到损害作用剂量分别为低于2.0,1.0,0.5 mg·kg-1的剂量,BMD分别为0.81,0.90和0.41 mg·kg-1,参考剂量分别为5.5,4.6和3.6 μg·kg-1;为人类膳食安全,将氯蜱硫磷的参考剂量定为3.6 μg·kg-1.结论 BMD法可制定比未观察到损害作用剂量法更加安全的参考剂量,并可以进一步应用于膳食暴露风险评估.
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中药黄连中小檗碱类主要成分抗阿尔茨海默病的多靶点体外活性研究
黄连为著名的清热泻火中药,体外活性筛选发现,黄连甲醇提取物能够通过抑制Aβ42聚集、乙酰胆碱酯酶(AChE)和β分泌酶(BACE1)的活性而表现出多靶点的体外抗阿尔茨海默病作用.HPLC分析及单体成分的体外活性验证表明,小檗碱类生物碱成分既是黄连的主要成分同时亦是其有效成分.黄连的上述体外药理活性能够通过6个主要生物碱的标准品混合物得到完整再现.分子对接研究表明,小檗碱类生物碱可以通过疏水效应、芳香堆积和静电相互作用等直接结合于Aβ42、AChE和BACE1的活性位点.
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参乌胶囊对东茛菪碱模型大鼠学习记忆能力和脑内胆碱能系统的影响
目的 观察中药新复方参乌胶囊对东莨菪碱致记忆障碍模型大鼠学习记忆及脑内胆碱能系统的影响.方法 将Wistar大鼠随机分为对照组、东莨菪碱模型组、多奈哌齐组(阳性对照药)、参乌胶囊小剂量(0.2 g·kg-1)、中剂量组(0.6 g·kg-1)、大剂量(1.8 g·kg-1)6组,灌胃给药2周后,除正常对照组腹腔注射生理盐水外,其他各组注射东莨菪碱2 mg·kg-1,20 min后进行Morris水迷宫和跳台测试,测试结柬后处死,取其脑皮层、海马,应用生化方法测定乙酰胆碱酯酶(AChE)活性,放射免疫法测定胆碱乙酰基转移酶(ChAT)活性,放射配基法测定M受体结合力.结果 参乌胶囊灌胃给药能够提高东莨菪碱模型大鼠学习记忆能力,缩短Morris水迷宫游泳时间及距离,延长跳台实验的潜伏期,减少错误次数(P<0.05);并能降低模型大鼠脑皮层AChE活性,提高海马ChAT活性,增强皮层和海马M受体结合力(P<0.05,P<0.01).结论 参乌胶囊可以改善东莨菪碱模型大鼠的记忆障碍,其机制可能与提高M受体结合力、增强ChAT活性、抑制AChE活性有关.
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二苯乙烯苷对鹅膏蕈氨酸致痴呆大鼠模型脑内胆碱能系统的影响
目的研究何首乌有效成分二苯乙烯苷(2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷,简称TSG)对胆碱能损伤致痴呆大鼠的保护作用.方法采用鹅膏覃氨酸(IBO)基底前脑注射造成模型大鼠脑内胆碱能系统损伤,模拟老年性痴呆动物模型.实验分为假手术、模型、阳性对照药盐酸多奈哌齐(多奈哌齐1.2mg·kg-1)、TSG小剂量(30mg·kg-1)、中剂量(60mg·kg-1)和大剂量(120mg·kg-1)组,灌胃给药1个月后,取脑分区测定皮层和海马胆碱乙酰基转移酶、乙酰胆碱酯酶活性,M-胆碱能受体结合力.胆碱乙酰基转移酶活性测定用放射化学法,乙酰胆碱酯酶活性测定用羟胺比色法,M-胆碱能受体结合力测定用放射配基结合实验.结果IBO模型大鼠皮层和海马胆碱乙酰基转移酶活性降低,M-胆碱能受体结合力明显下降;皮层乙酰胆碱酯酶活性下降.TSG小剂量可提高模型大鼠皮层和海马胆碱乙酰基转移酶活性;对于M-胆碱能受体结合力的下降,TSG各剂量组均有明显的改善作用;对于皮层乙酰胆碱酯酶活性的下降,TSG中、大剂量组有一定提升作用.结论TSG可明显改善模型动物胆碱能系统的损伤,对于老年性痴呆的治疗有重要意义.
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运用多维在线高效液相色谱-生物化学检测方法筛选银杏叶提取物治疗老年痴呆疾病的药效成分
目的 建立高效液相色谱-生物化学检测 (HPLC-BCD) 多维在线联用分析方法,筛选银杏叶提取物治疗老年痴呆疾病 (Alzheimer disease,AD) 的药效成分.方法 运用HPLC-UV (紫外) -1,1-二苯基-2-三硝基苯肼/2,2-联氮-二 (3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸) 二铵盐 (DPPH/ABTS)、HPLC-UV-乙酰胆碱酯酶 (Ach E) 方法快速筛选银杏叶提取物中的自由基清除剂和Ach E抑制剂.以加兰他敏为阳性对照,考察在线HPLC-UV-Ach E方法的稳定性和重现性.运用超高效液相色谱 (UPLC) -LTQ/线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱 (orbitrap MS) (UPLC-LTQ/orbitrap MS) 方法鉴定主要活性成分.结果 HPLC-UV-DPPH/ABTS方法检测到银杏叶提取物中的14个强抗氧化成分,而运用HPLC-UV-Ach E方法发现了3个Ach E抑制剂,通过UPLCLTQ/orbitrap MS方法鉴定了3个酶抑制剂分别为4-O-beta-glucopyranosyl-cis-coumaric acid、ginkgolide A和3-O-[2-O- (β-D-glucosyl) -α-L-rhamnosyl]quercetin.结论 实验建立的在线HPLC-BCD方法具有良好的灵敏度、重现性和稳定性,能够快速筛选银杏叶提取物中的抗氧化剂和Ach E抑制剂.为快速发现中药治疗相关疾病的有效成分提供一种有效、快速、便捷的分析手段.
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茯神散加减方对小鼠学习记忆的影响及机制初探
目的：观察茯神散加减方对正常小鼠及学习记忆障碍模型小鼠的影响，探索其可能机制，为治疗轻度认知障碍提供实验依据。方法将健康成熟的昆明种小鼠随机分成正常组、模型组、吡拉西坦组（0．6 g／kg）和茯神散加减方低、中、高剂量（5．6、11．2、22．4 g／kg）组。从行为学方面应用自主活动仪、Morris 水迷宫、避暗法、跳台法，考察茯神散加减方对小鼠自主活动及化学物质造成的记忆获得、记忆巩固和记忆再现障碍的作用，用比色法测定小鼠皮层乙酰胆碱酯酶（AchE）、过氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）的含量。结果与正常组比较，茯神散加减方低、中剂量组可明显增加小鼠进入新环境0～15 min 内的探索行为（P ＜0．01）而对之后15～30 min 内的活动没有显著影响，并可以提高正常小鼠在水迷宫测试中的学习记忆成绩。与模型组比较，茯神散加减方各剂量组能明显改善记忆获得障碍小鼠的学习记忆能力（P ＜0．01），中剂量组可以显著改善记忆再现障碍小鼠的学习记忆表现（P ＜0．01），显著降低小鼠脑皮层 AchE 活性，增加 SOD 活性，减少MDA 的生成（P ＜0．01）。结论茯神散加减方可以改善由东莨菪碱、亚硝酸钠、乙醇造成的小鼠记忆获得、巩固、再现障碍，并能增加小鼠对新环境的探索行为，对其自主活动无明显影响。其改善记忆障碍的作用机制可能与降低脑组织 AchE 活性及 MDA 含量、增加 SOD 活性有关。
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抗呆合剂对小鼠缺血再灌注脑内氨基酸、乙酰胆碱酯酶活力的影响
反复脑缺血再灌注后50min,小鼠脑内谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)均升高,γ-氨基丁酸(GABA),也随之升高.抗呆合剂大、小剂量均可抑制Glu、Asp的升高,大剂量还使升高的GABA恢复至接近正常.造模后50min以及7d,模型组小鼠乙酰胆碱酯酶(AchE)活力降低,抗呆合剂可升高AchE活力.
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复方丹参对老年痴呆模型大鼠海马和大脑皮层ChAT、AchE活性的影响
目的 研究复方丹参对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力,海马和大脑皮层胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响.方法 大鼠海马注射B.淀粉样蛋白(Aβ1-40)造成AD模型,采用硫磺素染色来观察模型组大鼠海马老年斑沉积和神经原纤维缠结情况,采用Morris水迷宫检测学习记忆水平,用比色法测定ChAT、AchE活性变化.结果 海马注射Aβ1-40后,大鼠海马出现大量老年斑沉积和神经原纤维缠结,大鼠找到平台的时间和游泳路程明显延长,海马和皮层中ChAT的活性明显降低,AchE活性有增加趋势,但与假手术组相比,没有显著差异(P>0.05);治疗给予复方丹参能显著改善AD大鼠的学习记忆障碍,明显提高AD大鼠海马和皮层中ChAT的活性,但对AchE活性影响不明显.结论 复方丹参能提高AD模型大鼠脑组织ChAT活性,改善AD模型大鼠空间学习记忆损害,提示药物的作用可能与胆碱递质合成增加有关.
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中药复方962对老龄大鼠皮质胆碱乙酰转移酶和乙酰胆碱酯酶活性的影响
为研究中药复方962胶囊对老龄大鼠皮质胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响,将22月龄和24月龄Wistar大鼠分为青年对照组、老年模型组、阳性对照脑复康组(0.56 g/kg)、962中剂量组(0.9 g/kg)和962大剂量组(1.8 g/kg)5组,分别灌胃给药1～2个月后处死大鼠.用Fonnun法和羟胺比色法分别测定5组大鼠皮质的ChAT和AchE的活性.结果:中药复方962大剂量(1.8 g/kg)对老龄大鼠皮质ChAT活性有提高作用(P＜0.05),但对AchE无显著影响.提示:中药复方962可能通过影响老龄大鼠中枢胆碱能神经系统而改善其衰老的变化.
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一种显示神经肌肉接头的改良乙酰胆碱酯酶-硝酸银双染法
哺乳动物的神经肌肉接头(NMJ)是被研究多的突触结构.组织学染色为NMJ形态研究提供了良好途径.本方法总结以往各种染色方案[1～3],针对原有方法的染色背景偏重、神经末梢着染率低、显示不清晰、效果不稳定等缺点,综合Mesulam法和Bielschowsky法[4],摸索出一种改良乙酰胆碱酯酶-硝酸银双染法,染色效果满意,现介绍如下.
