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人类脱嘌呤核酸内切酶的研究进展
各种致癌物和细胞毒性化合物均可引起DNA损伤.一些DNA损伤由太阳紫外线、烟草、不完全确定的饮食因素及环境毒物所引起,大部分DNA损伤则是由超氧化物自由基(ROS)和具有烷化作用的代谢物等引起.DNA修复系统在修复DNA损伤、维持DNA完整中起着不容忽视的作用,而碱基切除修复(BER)则是DNA修复系统中主要的一种修复途径.在BER的第2步反应中,有一种脱嘌呤(AP)核酸内切酶参与,在人类细胞为人类脱嘌呤核酸内切酶1(HAP1,又称Apex、Ape1、Ref1),它是一种多功能蛋白质,可参与许多与细胞重要功能有关的反应.作为DNA修复酶,它作用于AP位点,是BER的重要酶类;作为氧化还原因子,它在转录因子活性降低时维持转录的进行,是维持细胞氧化还原状态的重要物质.
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活性氧促使U937细胞对砷剂敏感的信号机制研究
三氧化二砷(As2O3)促白血病细胞凋亡效应与细胞氧化还原状态有关[1,2],我们曾发现,NB4细胞固有的活性氧(ROS)水平明显高于U937细胞[3,4].近年研究显示ROS不仅是一个毒性分子,还是一种重要的信号分子,参与细胞增殖、分化和凋亡的信号转导.我们采用二甲萘醌(DMNQ)提高细胞固有ROS水平,探讨提高ROS水平以增进肿瘤细胞对促凋亡制剂的敏感性及其介导的信号传导途径.
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硫氧还蛋白mRNA在非酒精性脂肪肝大鼠肝组织中的表达
近年来,随着生活水平的提高,饮食结构的改变,NASH的发病率有逐年升高的趋势,并可发展为肝硬化和肝癌以及成为肝衰竭的少见原因.对其发病机制的研究表明,NASH与氧化应激诱导的肝细胞内脂质过氧化损伤密切相关.硫氧还蛋白(Trx)是一个控制细胞氧化还原状态的、广泛表达的小分子蛋白质,通过其活性中心硫氢键和二硫键的可逆转换参与细胞内的氧化还原过程.Trx被认为是除GSH和SOD系统之外的另一个内源性抗氧化系统.为此,本研究采用高脂胆固醇饮食建立的NASH大鼠模型,观察大鼠肝组织中Trx mRNA的表达情况,对NASH的发病机制作初步探讨,为其发生和治疗提供理论基础.
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流式细胞术在检测细胞氧化还原状态荧光蛋白探针中的应用
目的·探索流式细胞术检测基因编码的荧光蛋白探针roGFP2的方法,比较其与经典的激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)检测方法的异同,探讨其在检测不同氧化还原状态细胞亚群中的应用价值.方法·用roGFP2转染HeLa细胞,经H2O2处理后,采用LSCM技术和流式细胞术分别检测roGFP2,以405nm/488nm荧光信号强度比值反映细胞氧化还原状态.转染胰腺癌细胞株Panc-1细胞,应用流式细胞术检测CD44和CD24不同标记细胞亚群的roGFP2,比较干细胞与其他细胞氧化还原状态的异同.结果·与LSCM技术相比,流式细胞术也可检测H2O2引起的roGFP2变化,且可区分群体中不同的亚群.Panc-1细胞中CD24+/CD44+肿瘤干细胞群与非干细胞群相比,roGFP2比值更低,细胞处于更还原的状态.结论·流式细胞术可用于检测基因编码的氧化还原探针和特异地分析亚群的变化,可能将应用于肿瘤生物学、干细胞生物学等研究中.
关键词: 流式细胞术 细胞氧化还原状态 基因编码荧光蛋白探针 roGFP2 肿瘤干细胞 -
大黄素提高砷剂抑瘤效果的体内研究
目的研究大黄素增强砷剂的抑瘤作用,探讨肿瘤细胞敏感性、抗凋亡信号NF-κB激活与氧化还原状态的关系.方法在HeLa细胞移植瘤的动物模型上,应用不同剂量大黄素和砷剂腹腔注射,2周后检测瘤重、体重;留取新鲜组织,检测其抗氧化能力;瘤组织分离培养后,用荧光素酶报告基因法和凝胶电泳迁移率分析法,检测NF-κB与DNA结合能力和促进转录能力.结果大黄素增强了砷剂抑制裸鼠移植瘤生长的作用;肿瘤大小与抗氧化能力呈正相关(r=0.826);大黄素能增强砷剂抑制NF-κB结合DNA、促进转录的能力.结论大黄素通过干预肿瘤细胞氧化还原状态,抑制NF-κB结合DNA、促进转录的能力,终提高砷剂体内抑瘤效果.