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益气除痰方对Lewis肺癌小鼠种植瘤细胞周期调控相关因子的影响
目的:观察益气除痰方对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及细胞周期调控相关因子P16、p21/WIF1/CIP1、蛋白激酶C(PKC)、c-myc的影响.方法:建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌种植瘤模型30只,随机分为Lewis肺癌模型组、益气除痰方低剂量组、高剂量组3组,每组10只.灌胃21d后,处死小鼠,检测肿瘤体积、重量,并用免疫组化法观察各组肿瘤组织P16、p21/WIF1/CIP1、PKC、c-myc的表达.结果:各组Lewis肺癌小鼠肿瘤体积、瘤重两两比较差异有统计学意义.其中高剂量组、低剂量组瘤体组织P16相对含量与模型组对比均显著增高(P＜0.05,P＜0.01);高剂量组与模型组、低剂量组对比p21/WIF1/CIP1含量显著增高(P＜0.05,P＜0.01).三组PKC含量两两比较差异均有统计学意义.结论:益气除痰方能抑制小鼠Lewis肺癌的生长,其机制可能与其能通过上调P16、p21/WIF1/CIP1、下调PKC表达引起细胞周期阻滞,延长肿瘤细胞倍增时间相关.
关键词： 益气除痰方 Lewis肺癌 p16 p21/WIF1/CIP1 蛋白激酶C -
阴虚、阳虚体质血清对肺癌细胞NF-κB、P16基因表达的影响
目的:探讨阴虚、阳虚体质血清对肺癌细胞生长的部分机制.方法:肺癌细胞A549培养使用10％的人血清,采用MTT分析细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,用TR-PCR及Western Blot的方法测定基因表达.结果:阴虚、阳虚体质血清培养的细胞增殖数明显高于平和质(P＜0.05),G0/G1期的细胞数低于平和质(P＜0.05),而S期的细胞数明显高于平和质(P＜0.05),而且阴虚、阳虚体质血清培养的细胞内表达的核转录因子-κB(NF-κB)高于平和质(P＜0.05,P＜0.01),P16则低于平和质(P＜0.05).结论:阴虚、阳虚体质血清能促肺癌细胞增殖,可能的机制是促进细胞内NF-κB基因表达,而抑制P16基因表达有关.
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BMI-1、P16在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义
目的:检测不同类型的卵巢组织中BMI-1、P16的表达情况,探讨BMI-1、P16在上皮性卵巢癌的表达及与上皮性卵巢癌患者预后的相关关系.方法:选取不同类型卵巢组织.采用免疫组化P-V二步法检测BMI-1、P16蛋白在它们的表达.结果在卵巢癌的发生发展过程中,Bmi-1和p16的阳性率呈递增趋势(P＜0.05). Bmi-1和p16的表达与年龄大小及组织类型无相关性(P＞0.05),但BMI-1却与有无大网膜转移呈正相关(P＜0.05).结论:BMI-1及P16可能参与了上皮性卵巢癌的发生过程.BMI-1与P16在上皮性卵巢癌组织中表达不相关.
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APC、p16、CDH13和RASSF1A甲基化状态与肺癌的相关性研究
目的 探讨肺癌患者痰液脱落细胞中信号传导通路基因(rasassociation domain family 1A,RASSF1A)和腺瘤样息肉病基因(adenomatous polyposis coli,APC)、T-钙黏蛋白13(cadherin-13,CDH13)和p16基因甲基化的发生状态,及其联合检测在肺癌早期筛查及诊断中的作用和意义.方法 选取2015年1月至2017年12月本院收治的50例肺癌患者,50例肺部良性病变患者和50例正常人痰液标本,采用甲基化特异性PCR法(methylation specific PCR,MSP)检测患者痰液脱落细胞中APC、p16、CDH13和RASSF1A基因启动子区域甲基化发生情况.结果 肺癌患者痰标本中APC、p16、CDH13和RASSF1A基因启动子区甲基化发生率分别为38.00％ (19/50)、54.00％ (27/50)、34.00％ (17/50)和26.00％ (13/50).患者痰标本基因APC、p16、CDH13和RASSF1A基因启动子区甲基化率与患者年龄、性别、组织学分型和临床分期无关,差异不具有统计学意义(P＜0.05).患者痰标本基因APC、p16、CDH13和RASSF1A基因启动子区甲基化率与患者吸烟指数明显相关,差异具有统计学意义(P＞0.05).结论 肺癌患者痰液脱落细胞中APC、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化的联合检测可以提示有效临床肺癌的发生情况.
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Her-2/neu、DPC4和P16在胰腺癌中的表达及其意义
目的 观察Her-2/neu、P16和DPC4基因在胰腺癌中的表达,并探讨其与胰腺癌发生、发展的关系.方法 应用免疫组织化学法检测Her-2/neu、P16和DPC4基因在34例胰腺癌和12例胰腺良性病变和正常组织中的表达水平,将结果与患者的临床病理学资料进行统计.结果 胰腺癌Her-2/neu表达水平和P16表达缺失水平显著高于胰腺良性病变和正常组织(P＜0.05);胰腺癌DPCA表达水平低于胰腺良性病变和正常组织.高、中度分化胰腺癌DPC4表达水平显著高于低分化胰腺癌(P＜0.05);有淋巴结转移的胰腺癌Her-2/neu和P16表达水平显著低于无淋巴结转移的胰腺癌(P＜0.05);随TNM分期增高,Her-2/neu表达阳性率显著降低(Ⅰ期85.7%;Ⅱ期54.5%,Ⅲ期36.4%,Ⅳ期0.0%)(P＜0.05);P16表达阳性率亦显著降低(Ⅰ期100.0%;Ⅱ期72.7%,Ⅲ期54.5%,Ⅳ期20.0%)(P＜0.05).Her-2/neu与P16和DPC4与Her-2/neu的表达密切相关(P＜0.05);P16与DPCA的表达极密切相关(P＜0.01).结论 Her-2/neu、P16和DPC4的表达对估计胰腺癌的生物学行为和判断预后有较大帮助.P16和DPCA的表达对胰腺癌的进展可能有协同作用.
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CpG岛靶向siRNA诱导P16沉默的甲基化分析
目的 探讨RNA介导DNA甲基化(RdDM)是否参与哺乳动物细胞中P16基因的甲基化沉默.方法 将靶向P16基因CpG岛不同位点(启动子区和外显子区)的小干扰RNA(siRNA),分别转染人胃癌细胞系BGC823,用RT-PCR、免疫印迹检测P16基因的表达,用甲基化特异性PCR(MSP)和克隆测序等分析DNA甲基化.结果 靶向P16基因启动子与外显子区域的siRNA均能诱导P16基因表达的降低,但两者都不能诱导同源序列DNA甲基化.结论 在BGC823细胞系上,siRNA不能通过甲基化诱导方式调控P16基因的表达.
关键词： CpG岛 RNA介导DNA甲基化 siRNA p16 -
ERKl和P16在人胃肠道间质瘤组织中的表达及相关性
目的 检测ERK1和P16在胃肠道问质瘤组和正常对照组中的表达,探讨其在胃肠道间质瘤(GIST)发生和发展中的作用和相互关系.方法 采用组织芯片技术和免疫组化Elivision二步法检测40例胃肠道问质瘤组和40例正常对照组中ERK1和P16的表达,应用图像分析软件Image-Pro Plus 6.0对ERK1和P16的表达行平均吸光度分析.结果 与正常组织相比,胃肠道问质瘤组织中ERK1的表达明显增高(P<0.01),而P16的表达明显降低(P<0.01).ERK1和P16的表达与组织学分级密切相关(P<0.05),而与年龄、肿块大小、组织学类型和复发无相关性.胃肠道间质痛中ERK1与P16的表达呈负相关(P<0.05).结论 在胃肠道间质瘤组织中,ERK1明显增高,P16则明显降低,两者之间存在显著负相关.
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p53/Rb细胞转导通路相关基因和蛋白在衰老大鼠睾丸组织的表达
目的 通过检测p53、Rb、p16、p19、p21在衰老大鼠睾丸组织的表达,探讨p53/Rb细胞转导通路相关基因和蛋白在睾丸组织衰老中的意义. 方法 选用8周龄雄性SD大鼠30只,体重180～220g,随机分为正常对照组和模型组,每组15只.模型组大鼠采用D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老大鼠模型.采用RT-PCR方法 检测p53、Rb基因在大鼠睾丸组织的表达;Western blotting法检测大鼠睾丸磷酸化Rb、p16、p19、p21蛋白的表达.结果 模型组睾丸组织p53、Rb基因表达明显高于正常对照组(P<0.01);模型组睾丸组织与正常组比较:p16、p19、p21蛋白的表达明显升高,而磷酸Rb蛋白表达显著下降(P<0.01). 结论 Rb/p53细胞转导通路相关基因及蛋白在衰老大鼠睾丸组织发生明显改变,Rb/p53细胞转导通路阻滞可能在睾丸组织的衰老过程中起着一定作用.
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亚硒酸钠对实验性胃癌形成的作用及对P53和P16表达的影响
目的探讨亚硒酸钠对实验性胃癌形成的作用及对p53和p16表达的影响.方法用N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)(20mg/kg)给大鼠灌胃,每天1次,连续10 d,以诱导大鼠胃癌形成.观察到实验的第43d,用HE染色病理诊断和AB-PAS方法探讨了硒在MNNG诱导Wistar大鼠胃癌形成过程中的作用,用免疫组织化学SP法研究了在此过程中p53和p16蛋白的表达及其变化,并对以上结果进行定性、定位、图像分析和统计学处理.结果饮水中加入2 mg/L和4 mg/L的亚硒酸钠加重胃黏膜的糜烂、出血,促进胃黏膜的肠上皮化生(P＜0.05),在MNNG诱癌过程中发生了浆膜下平滑肌瘤,亚硒酸钠可以增加平滑肌瘤的发生率.免疫组织化学结果显示,p53阳性产物定位在胞核和胞质,主要在胞质;实验对照组、低硒组、高硒组的p53蛋白染色的平均光密度(MA)明显高于正常对照组(P＜0.05,P＜0.01).p16蛋白阳性产物表达在大鼠胃腺和胃上皮细胞核内;实验对照组、低硒组、高硒组的MA值比正常对照组略有升高(P＞0.05).结论在MNNG所致胃癌的过程中,饮水中加入2 mg/L,4 mg/L亚硒酸钠可以促进胃黏膜的糜烂、出血、肠上皮化生,提示亚硒酸钠并不能降低大鼠胃癌的发生率,其机制可能与抑癌基因p53的突变与p16的异常表达有关.
关键词： N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍 胃癌 P53 p16 大鼠 -
细胞衰老过程中p16INK4mRNA稳定性调控
细胞衰老是诸多与之相关的基因或信号分子在环境因素作用下表达或修饰改变引起功能改变的“加合”结果.已发现至少上百个基因与衰老相关,但关键衰老相关基因的作用不可或缺.关键衰老相关基因p16INK4对衰老的发生与维持极其重要,探讨其调控机制一直是衰老及相关领域的重要课题.近年来多项研究表明,转录后水平调控,特别是多因素参与的mRNA稳定性调控是细胞衰老过程中p16表达的重要决定因素.
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p16、Ki-67在宫颈上皮内病变中的表达及意义
目的 探讨p16、Ki-67在慢性宫颈炎及宫颈鳞状上皮内病变中的表达及临床意义.方法 收集本院宫颈活检及LEEP刀锥切标本共276例,其中慢性宫颈炎70例,LSIL68例(CIN Ⅰ),HSIL138例(72例CINⅡ和66例CINⅢ).采用免疫组化SP法检测p16及Ki-67表达情况.结果 p16在慢性宫颈炎、CIN Ⅰ、CINⅡ和CINⅢ中的阳性率分别为5.7％、48.5％、80.6％和95.5％.p16阳性细胞与CIN级别一致的符合率分别为94.3％、89.7％、90.2％和95.5％.Ki-67 ≥50％在各组的阳性率分别为2.9％、89.7％、90.2％和95.5％.p16和Ki-67在慢性宫颈炎和CIN各组间的阳性率差异显著(P＜0.05),p16阳性细胞与CIN级别的符合率差异不显著(P＞0.05).结论 p16和Ki-67联合检测可有助于慢性宫颈炎及宫颈上皮内病变的诊断,可提高CIN分级的正确诊断率,有助于宫颈癌的早期筛查.
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鼻咽癌及癌前病变组织CDK4和p16蛋白的表达
目的观察CDK4和p16蛋白在鼻咽癌组织中的表达,探讨其与鼻咽癌发生发展的关系.方法应用S-P法检测CDK4和p16蛋白在80例鼻咽癌、30例鼻咽黏膜慢性炎组织中的表达.结果80例鼻咽癌中CDK4和p16表达率分别为78.8%和20.0%.CDK4表达率在鼻咽癌与中-重度异型增生黏膜间差异不显著,二者与轻度异型增生黏膜相比均差异非常显著(P＜0.01).角化性鳞癌p16的表达率明显高于分化型非角化性癌和未分化癌(P＜0.01).淋巴结转移组中p16表达率明显低于无转移组(P＜0.01),而CDK4表达率高于无转移组(P＜0.05).结论CDK4过表达与p16低表达可能涉及鼻咽癌的发生发展过程,CDK4基因的扩增或过表达可能是鼻咽黏膜上皮细胞癌变的早期事件.p16的表达缺失与鼻咽癌的转移、组织学分型有关.CDK4的过表达与鼻咽癌的转移有关.
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p16、cyclin E在宫颈鳞状上皮病变诊断中的应用
目的探讨p16、cyclin E在宫颈鳞状上皮病变诊断中的应用.方法观察84例宫颈鳞状上皮增生性病变和16例正常宫颈鳞状上皮的免疫组化表达.结果正常宫颈鳞状上皮、良性反应性增生与CINⅠ级p16未见明显阳性表达,cyclin E少数表达(12.9%).高度CIN与鳞状细胞癌p16和cyclin E高表达,分别为78.6%、87.2%.结论p16和cyclin E与CIN有密切关系,尤其是高度CIN和鳞状上皮癌.
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甲状腺乳头状癌B-raf基因突变及cyclinD1、p16蛋白表达的相关性及临床病理意义
目的 研究甲状腺乳头状癌中B-raf基因突变率及cyclinD1、p16蛋白表达水平,探讨关键信号分子基因突变对相关细胞周期调控因子表达的影响及意义.方法 分别应用免疫组化SP法及实时荧光定量PCR法检测100例甲状腺乳头状癌和20例甲状腺良性病变中cyclinD1、p16蛋白的表达及B-raf基因的突变情况.结果 甲状腺癌中cyclinD1、p16蛋白表达明显高于良性(P＜0.05);其B-raf基因突变率为72％,良性病变组织中未检出突变(P＜0.05).Raf基因突变与患者发病年龄、淋巴结转移及包膜侵犯相关(P＜0.05);cyclinD1蛋白阳性与患者年龄、淋巴结转移及B-raf突变相关(P＜0.05).p16蛋白表达仅与患者年龄相关(P＜0.05),而与其他指标均无关.甲状腺乳头状癌组织中cyclinD1与p16蛋白的表达具有负相关性(P＜0.05).结论 B-raf基因突变及cyclinD1、p16蛋白高表达均为甲状腺乳头状癌发生的重要分子事件,与肿瘤浸润及转移密切相关,对其进行联合检测有助于甲状腺乳头状癌的预后评估及早期诊断.
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宫颈腺癌中IMP3和p16INK4a的表达及意义
目的 探讨宫颈腺癌中胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白(IMP3)和p16INK4a蛋白的表达及意义.方法 运用免疫组化SP法观察IMP3和EnVision法观察p16INK4a在宫颈25例良性腺上皮(BEG)、10例原位腺癌(AIS)和50例浸润性腺癌(ECA)中的表达,同时随机选取IMP3不同程度阳性表达病例25例进行IMP3 mRNA原位杂交检测.结果 IMP3在BEG、AIS和ECA中阳性率分别为16％ (4/25)、90％ (9/10)和78％ (39/50),差异显著(P＜0.01);p16INK4a阳性率分别为0(0/25)、100％(10/10)和82％ (41/50),差异显著(P＜0.01).ECA中,IMP3和p16INK4a在浆液性腺癌中的阳性率(均为100％,3/3)均高于宫颈型(76.19％,32/42和83.33％,35/42)和子宫内膜样型(80％,4/5和60％,3/5);腺癌中,IMP3在高分化腺癌与中-低分化腺癌中的阳性率比较差异显著(P＜0.05).IMP3和p16INK4a分别在不同年龄、组织学类型及FIGO分期中表达差异均不显著(P＞0.05).ECA中,IMP3和p16INK4a共同阳性率为64％ (32/50),阴性率4％ (2/50),两者表达的关联性较低(Kappa值为0.002,P＞0.05).结论 IMP3和p16INK4a在宫颈腺上皮的良、恶性病变鉴别诊断中有重要参考价值,IMP3表达与肿瘤分化程度相关;IMP3和p16INK4a联合运用可辅助临床ECA的诊断.
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p16、Ki-67在440例宫颈病变中的表达及其病理诊断价值
目的 研究p16、Ki-67在不同宫颈病变组织中的表达,探讨其在病理诊断中的意义.方法 采用免疫组化SP方法检测宫颈病变组织中p16、Ki-67的表达水平,其中宫颈良性反应性改变193例(老年宫颈萎缩性改变35例,宫颈鳞状上皮化性77例,宫颈鳞状上皮良性增生81例),宫颈上皮内瘤变(CIN) 227例(CIN Ⅰ86例,CINⅡ88例,CINⅢ53例),宫颈鳞状细胞癌16例及宫颈腺上皮病变7例(其中3例来源于CIN组)共计440例.结果 宫颈良性反应性改变组p16、Ki-67的阳性率明显低于CIN组及宫颈鳞状细胞癌组(P＜0.01)；在CIN组中阳性强度随着CIN病变级别的增加而增强(P＜0.01)；在宫颈鳞状细胞癌病例组中呈强阳性；宫颈腺上皮不典型增生的p16、Ki-67也呈不同程度(+).结论 p16、Ki-67对宫颈良性改变的甄别、CIN级别的判定及宫颈早期浸润癌的诊断具有重要价值.
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p16和cyclin D1蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其意义
目的探讨鼻咽癌组织中p16和cyclin D1蛋白的表达及其意义.方法应用免疫组化S-P法检测p16和cyclin D1蛋白在85例鼻咽癌和18例鼻咽部炎性黏膜组织中的表达.结果85例鼻咽癌中p16的表达率为41.2%(35/85);cyclin D1的过表达率为63.5%(54/85).18例鼻咽部炎性黏膜中,p16的表达率为100%;cyclin D1的表达全部为阴性.高分化鳞癌p16的表达率为75.0%(6/8),低分化鳞癌为38.2%(26/68),两者差异显著(P＜0.05).有淋巴结转移的p16表达率为28.6%(14/49),无淋巴结转移的为58.3%(21/36),两者差异非常显著(P＜0.01).35例p16(+)的癌组织中有28例cyclin D1呈过表达;50例p16(-)的癌组织中有26例cyclin D1呈过表达.结论 p16的缺失表达和cyclin D1的过表达两者可能单独或共同参与了鼻咽癌的发生发展过程.p16的缺失可能还与鼻咽癌细胞的分化、转移有关.
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宫颈上皮内瘤变与人乳头状瘤病毒感染及p16蛋白表达的研究
目的 探讨人乳头状瘤病毒(HPV)感染及p16蛋白表达在宫颈上皮内瘤变(CIN)诊断和分级中的意义.方法 采用免疫组化EnVision法检测191例宫颈各类病变中的p16蛋白表达;通过聚合酶链反应(PCR)检测其中104例HPV16/18型及6/11型DNA感染率.结果 191例标本中,p16蛋白表达率为73.3%,其中75%呈带状,25%呈点状.CINⅠ级p16蛋白表达率较宫颈上皮鳞化伴增生明显增加(P<0.01);CIN Ⅱ～Ⅲ级p16蛋白表达率较CINⅠ明显增加(P<0.01).104例HPV DNA检测病例中,HPV16/18型检出率为49%(51/104),HPV6/11型检出率为9.6%(10/104).CIN Ⅰ级HPV16/18型检出率较鳞化伴增生组明显增加(P<0.05);CINⅡ～Ⅲ级HPV16/18型检出率同CINⅠ差异不显著(P>0.05).结论 p16可以作为宫颈上皮鳞化伴增生与CIN Ⅰ级、CIN Ⅰ级与CINⅡ～Ⅲ级间鉴别诊断的标记物;HPV16/18感染与p16蛋白带状表达明显正相关.
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肺腺样囊性癌中Myb与预后及p16与HPV感染的关系
目的 探讨肺腺样囊性癌(PACC)中Myb蛋白表达及其与预后的关系,p16蛋白表达及其与HPV感染状况的关系.方法 收集北京协和医院2000-2014年间PACC共27例,采用免疫组化EnVision法检测其Myb、p16的表达,并对p16阳性细胞数＞40％的病例用原位杂交方法进行HPV检测.结果 27例PACC,男女之比为8:19,年龄24～74岁,平均年龄51岁;24例为肺原发性,3例为肺转移性.肺原发性病例中,18例随访1～132个月,其中5例复发或转移,1例死亡;6例失访.19例Myb(+)(79.2％),26例p16(+)(100％),对p16阳性细胞数＞40％的11例加做HPV ISH均为(-).无复发和转移组Myb阳性率(66.7％,8/12)低于复发或转移组(100％,8/8),原发性PACC组Myb阳性率(76.2％,16/21)低于转移性PACC组(100％,3/3),差异不显著(P＞0.05).结论 大多数PACC中Myb为(+),但可能与预后无关.虽然p16也呈(+),但未检测到HPV感染,推测其可能不是PACC中p16蛋白阳性的原因.
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p16、DAPK和ESRβ基因启动子甲基化与宫颈癌的关系
目的 探讨p16、DAPK及ESRβ基因启动子区甲基化在宫颈癌发生、发展中的作用.方法 利用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测宫颈癌组织及血清中p16、DAPK及ESR β启动子区甲基化情况,分析三者与宫颈癌发生、发展及临床病理的关系.结果 100例宫颈癌组织中,p16和DAPK甲基化率分别为80％和35％,明显高于对照组(正常或慢性炎症的宫颈组织);p16和DAPK任意一个基因甲基化率为84％.30例宫颈癌患者血清中,p16和DAPK甲基化率分别为40％ (12/30)和20％(6/30),而对照组中未检出甲基化;p16和DAPK任意一个基因甲基化率为46.7％ (14/30).宫颈癌组织和血清中均未检出ESRβ启动子区甲基化.进一步分析p16和DAPK基因甲基化与临床病理关系发现,二者甲基化与宫颈鳞状细胞癌关系更密切,鳞状细胞癌与腺癌比较差异显著(P＜0.01).结论 p16和DAPK基因启动子区甲基化与宫颈癌特别是宫颈鳞状细胞癌的发生、发展关系密切.ESRβ启动子区甲基化可能与宫颈癌的发生、发展无关.
