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梅毒螺旋体特异抗原TP0684的克隆和表达
目的 克隆并表达梅毒螺旋体外膜蛋白TP0684,为研制早期诊断试剂盒提供依据.方法 PCR法扩增TP0684编码基因.T-A克隆后构建表达质粒pET-22b(+)-TP0684,经酶切鉴定后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Western blot鉴定.结果 PCR法扩增出了1 212 bp的目的 片段,原核表达质粒pET-22b(+)-TP0684酶切鉴定正确,测序结果与GenBank上公布的该基因的CDS序列完全一致.转化E.coli BL21(DE3)后,IPTG诱导目的 蛋白表达率为25%,SDS-PAGE初步测定目的 蛋白的相对分子质量约43 000,Western blot证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应.结论 所表达的TP0684重组蛋白具有良好的免疫反应性,为进一步研究梅毒血清学诊断试剂奠定了基础.
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钩端螺旋体外膜蛋白基因重组载体构建及在卡介菌中的表达
目的研制一种高效广谱的新型钩体疫苗.方法用PCR方法扩增致病性钩端螺旋体赖型017株外膜蛋白OmpLl基因,将其克隆入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒载体pMV261和pMV361中.结果筛选到两个重组载体pBQ1和pBQ2,通过电穿孔导入卡介菌,重组体经诱导表达了相对分子质量约为35000的融合蛋白.结论卡介菌能有效表达钩体抗原蛋白.
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绿脓杆菌外膜蛋白对感染的保护作用
目的寻找一种防治绿脓杆菌感染的有效方法.方法用绿脓杆菌外膜蛋白免疫的兔抗血清对4种不同血清型的菌株和1株临床绿脓杆菌进行体内外交叉保护性试验.结果家兔免疫1周后即产生抗体,并逐渐升高,至第6周抗体滴度达到1:163840,并维持高水平;抗血清能与4种不同血清型菌株和1株临床菌株产生直接凝集反应.第8周的血清(1:8以上)与其外膜蛋白的ELISA抗体效价相近,小鼠的半保护剂量均在0.05~0.11ml之间.结论外膜蛋白疫苗具有较强的抗原性,而且具有良好的交叉保护作用.
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钩端螺旋体外膜蛋白致病性及免疫性研究进展
钩端螺旋体外膜蛋白在钩端螺旋体的致病与免疫应答过程中起着十分重要的作用,它在疾病感染时既可以作为一种外膜毒性物质,又可以作为一种特异性抗原而诱导免疫应答.本文作者对钩端螺旋体外膜蛋白的生物学特性、致病机理和免疫原性作了全面的综述,为有效地筛选特异的钩体候选疫苗提供可靠的依据,也为特异地诊断和预防钩体病奠定基础.
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壳聚糖-海藻酸盐复合微囊疫苗的制备及其对斜带石斑鱼的口服免疫效果
目的 制备包裹哈维弧菌(Vibrio harve yi,Vh)重组外膜蛋白OmpK的壳聚糖-海藻酸钠复合微囊疫苗,并检测其对斜带石斑鱼的口服免疫效果.方法 采用乳化-复乳化法将壳聚糖、海藻酸钠包裹哈维弧菌重组外膜蛋白OmpK,制备微囊疫苗,测定其粒径、包裹率及载抗原量;经口灌服免疫斜带石斑鱼,2周后进行加强免疫,设OmpK蛋白组和空白对照组,ELISA法检测免疫后斜带石斑鱼血清及后肠黏膜上清抗体水平;于免疫后30 d,经斜带石斑鱼腹腔注射1.0× 107CFU/ml的哈维弧菌,计算各组相对保护率(relative percent survival,RPS).结果 微囊为球形或类球形,粒径5.0~ 20.0 μm,平均粒径10.6 μm;微囊中蛋白平均包裹率为71.26%,平均载抗原量为1.67%.微囊疫苗组血清抗体效价峰值为29,明显高于OmpK蛋白组(P<0.01);微囊疫苗组后肠黏膜上清的吸光值(A450-A 630)明显高于OmpK蛋白组和空白对照组(P<0.01).微囊疫苗组的RPS达62.5%,高于OmpK蛋白组(P<0.01).结论 制备的壳聚糖-海藻酸盐复合微囊疫苗口服石斑鱼后,具有较好的免疫效果,作为鱼类口服疫苗的投递载体是可行的.
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壳聚糖纳米粒在甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白疫苗中的应用
目的 探讨壳聚糖(chitosan,CS)纳米粒作为甲型副伤寒沙门菌重组外膜蛋白NmpC和PagC的佐剂对小鼠的免疫效果.方法 采用离子交联法将甲型副伤寒沙门菌重组外膜蛋白NmpC和PagC与CS结合制成CS纳米粒,扫描电镜观察纳米粒外观,激光粒度分析仪测定纳米粒粒径和多分散系数,BCA法测定其包封率.将CS纳米粒经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体IgG、IgG1和IgG2a水平.结果 载蛋白CS纳米粒粒径约为300 nm,包封率达85%以上.NmpC和PagC的CS免疫组小鼠血清IgG抗体滴度远高于铝佐剂组,产生的IgG1和IgG2a抗体滴度也均高于相应的铝佐剂免疫组,且差异均有统计学意义(P<0.05);IgG1和IgG2a之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 CS纳米粒作为新型疫苗佐剂可用于甲型副伤寒蛋白疫苗的研究.
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淋球菌外膜蛋白疫苗的研究进展
在自然界,淋球菌的唯一宿主是人类,淋球菌在漫长的进化过程中已经形成了一套逃避人体免疫系统的机制,加上缺少很好的动物实验模型,给制备淋球菌疫苗进行淋病预防造成相当大的障碍.但近年来,从Por,Pil,Opa和LOS等淋球菌外膜蛋白抗原的一系列研究中,人们认识到理想的淋球菌疫苗抗原应该具有的一些特性,有力地推动了淋球菌疫苗的研究.
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我国各生态型鼠疫菌外膜蛋白的比较研究
目的研究我国17个生态型鼠疫菌的外膜蛋白谱型,为鼠疫菌分子生物学分型提供科学依据.方法用终浓度为10 g/L的氯霉素28℃下杀死鼠疫菌后,采用Trion-200改进法进行外膜蛋白的提取.以4%积层胶、12%分离胶行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳.根据低分子量标准蛋白和被试菌株的泳距作相关分析,得出各条蛋白带的相对分子量.结果 SDS-PAGE上各生态型鼠疫菌28℃培养物表达的外膜蛋白带在相对分子量大于40 kD小于30 kD的区域谱型基本一致,而在30~40 kD之间稍有差异,岗底斯山型的部分菌株较141株多一条31.6 kD带,锡林郭勒型菌株缺失32 kD条带.结论鼠疫菌的外膜蛋白,作为鼠疫菌种下的分类仅对田鼠型菌株意义较大.
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乙肝患者血清前S1抗原与HBV血清标志物的检测结果分析
乙型肝炎病毒(HBV)外膜蛋白包括S、前S2和前S1三种成分.含有前S1的蛋白主要存在于Dane颗粒上,在病毒感染,装配,复制和刺激产生免疫反应等方面具有十分重要的作用.一般认为与HBV复制有密切关系[1].国外对HBV前S1抗原研究较多,在国内也越来越多的受到人们的重视与关注.为了进一步探讨和证实前S1抗原的表达与乙型肝炎病毒标志物之间的关系,我们对1441例乙肝患者进行前S1抗原和乙肝病毒标志物检测,并对其结果进行了分析.
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钩端螺旋体外膜蛋白研究现状
钩端螺旋体病(leptospirosis,简称钩体病),是由致病性钩端螺旋体(简称钩体)引起的钩端螺旋体病(钩体病),是一种全球性自然疫源性疾病,广泛分布在世界各地.我国是受钩体病危害十分严重的国家, 目前已发现有18个血清群75个血清型,遍布31个省份[1].自1955年以来,病例数超过250万人,平均病死率约为1%.钩体病虽然已发现100多年,但其致病机制至今尚未完全阐明.一般认为,钩体对机体的黏附、侵袭和其自身的运动性、趋向性,以及其代谢产物等因素都与致病性相关.外膜蛋白(Outer membrane proteins,OMPs)位于钩体表面,直接与宿主接触,因而与钩体的致病性密切相关.近年来,随着分子生物学手段、DNA测序技术及生物信息学分析水平的提高,外膜蛋白的研究取得了较大进展,本文就这些研究成果进行综述.
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肺炎衣原体毒力相关基因结构与功能的研究进展
肺炎衣原体是引起人类呼吸道和心血管疾病的重要病原体.目前血清分类法只有1个血清型,近年来对它的基因分析提示可能存在不同的基因型.由属特异抗原基因编码的主要外膜蛋白、热休克蛋白、脂多糖作为毒力因子,在肺炎衣原体致病过程中起主要作用,另外还有一些种特异抗原基因编码的毒力因子和由肺炎衣原体介导宿主产生的毒力因子.
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衣原体主要外膜蛋白的研究现状
衣原体主要外膜蛋白作为外膜复合物中的主要成分,与衣原体致病密切相关.该蛋白是一种跨膜蛋白,为衣原体引起机体免疫应答的重要免疫原,并为衣原体菌株进化及分类提供相关依据.因此,探讨衣原体主要外膜蛋白的结构与功能将有助于对衣原体致病机制及其诊断和预防等方面的研究.
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梅毒螺旋体4种主要膜蛋白分子的研究现状
梅毒螺旋体是梅毒的病原体.因其体外培养至今尚未成功,该螺旋体获取困难,从而制约了其基础研究.但随着基因工程技术的发展,梅毒螺旋体全基因序列已经成功揭示,其主要结构蛋白研究也取得了重大进展,这些都为进一步深入开展研究提供了基础和前提.本文从梅毒螺旋体几种主要外膜蛋白的结构在梅毒致病机制中的作用和功能,以及有关实际应用等几方面进行综述.
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沙门菌外膜蛋白的分子免疫学研究进展
沙门菌外膜蛋白的研究目前是个热点,运用分子免疫学技术和基因检测等手段,对沙门菌外膜蛋白进行分析,有助于更深入地研究沙门菌外膜的生理结构与功能及其致病性,提高实验室诊断水平;同时有助于治疗和预防沙门菌引起的疾病,控制该菌的医院内感染.
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百日咳鲍特菌外膜蛋白的致病性与免疫原性
百日咳鲍特菌外膜蛋白是存在于细菌表面的一组功能性蛋白质,包括P69、FhaC和BrkA,其中以P69为重要。P69分子中的RGD-(GGxxP)_5和(PQP)_5两个富含脯氨酸结构区分别具有粘附作用和很强的免疫原性,其抗体具有较强的保护作用,可作为无细胞型百日咳疫苗中的一个重要抗原成分。P69具有多态性,百日咳流行菌株的P69已从P69A转变成以P69B或P69C为主,所引起的抗原性漂移与疫苗预防效果下降有直接关系。FhaC是该菌的一种外膜蛋白,能特异地辅助丝状血凝素分泌;BrkA不仅具有蛋白转运功能,且能抵抗抗体依赖补体介导的细胞毒作用。
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肺炎衣原体抗原研究进展
本文综述了肺炎衣原体抗原研究进展.肺炎衣原体抗原可分为3类:属特异性抗原,包括脂多糖(LPS)、热休克蛋白(hsp)和主要外膜蛋白(MOMP);种特异性抗原,包括98×103、76×103、53×103、46×103蛋白和43×103蛋白以及型特异性抗原.
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问号钩端螺旋体疫苗候选基因LB061的抗原性和保守性研究
目的 克隆表达和鉴定问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株中疫苗候选基因LB061,研究LB061的免疫原性和在不同血清型钩端螺旋体菌中的保守性.方法 生物信息学软件分析预测LB061的特征.构建原核表达质粒pQE31-LB061,经IPTG诱导后用SDS-PAGE及Western 印迹法鉴定表达情况.用表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,Western印迹法检测其抗原性和在不同血清型钩端螺旋体中的保守性.Western印迹法检测钩端螺旋体全菌兔抗血清中的LB061抗体.结果 生物信息学预测结果显示,LB061含有DUF839家族结构域.成功克隆了重组质粒pQS31-LB061,表达的重组蛋白能刺激BALB/c小鼠产生抗体(效价为1:32 000),并能与相应抗体反应,具有良好的抗原性.在16株不同血清型的钩端螺旋体中均可检测到LB061蛋白的表达,并在钩端螺旋体赖株全菌兔抗血清中检测到其抗体.结论 LB061蛋白可以作为外膜蛋白刺激宿主免疫系统产生抗体,具有良好的抗原性和保守性.本研究为其作为疫苗候选基因的研究奠定了基础.
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血管紧张素Ⅱ1型受体--一种预防大肠埃希菌K1所致新生小鼠脑膜炎的新靶标
大肠埃希菌K1所致脑膜炎的发病率越来越高。随着抗生素耐药不断升级,治疗此致命疾病需替代方案。该研究筛选了美国国立卫生研究院(N I H )收集的小分子库,鉴定替米沙坦为一种血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)阻断剂,可作为大肠埃希菌侵袭进入人脑微血管内皮细胞(HBMEC)的强效抑制剂。免疫沉淀研究表明,AT1R与内皮细胞gp96相互作用,HBMEC中的AT1R是大肠埃希菌外膜蛋白A。将HBMEC用替米沙坦预处理或转染AT1R小干扰 RNA后,能降低蛋白激酶Cα的磷酸化,从而抵抗大肠埃希菌入侵。用替米沙坦可溶性衍生物处理已感染大肠埃希菌的新生小鼠,能预防脑膜炎发生,在大脑中抑制中性粒细胞浸润和神经胶质细胞迁移。因此,替米沙坦有潜力成为防止大肠埃希菌所致脑膜炎的替代治疗药物。
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046中性粒细胞弹性蛋白酶降解外膜蛋白杀灭大肠埃希菌
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029 脑膜炎球菌PorA外膜蛋白序列变异对六价PorA外膜囊疫苗效力的影响