首页 > 文献资料
-
番茄红素对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及机制研究
目的 观察番茄红素对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制.方法 取处于对数生长期人骨肉瘤MG-63细胞,设空白组,番茄红素低、中、高剂量组(5,10,20 μg/mL)和顺铂(40 μg/mL)组.各组给予相应干预48 h后,观察细胞生长情况, MTT比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期、细胞凋亡情况并计算凋亡率,逆转录PCR(RT-PCR)法检测凋亡相关基因Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达并计算Bax/Bcl-2值,免疫蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase-3表达情况.结果 光学显微镜下观察可见空白组人骨肉瘤MG-63细胞呈贴壁生长,增殖迅速,而番茄红素各组和顺铂组细胞增殖受到抑制,细胞数明显减少,呈现回缩、脱落现象.番茄红素各组和顺铂组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达量均明显高于空白组(P均<0.05),且番茄红素高剂量组均明显高于顺铂组(P均<0.05).番茄红素中、高剂量组G0/G1期细胞所占比例、Bax mRNA表达量、Bax/Bcl-2值均明显高于空白组(P均<0.05),Bcl-2 mRNA表达量均明显低于空白组(P均<0.05),且除Bax mRNA表达量外,番茄红素高剂量组各指标改善情况均明显优于顺铂组(P均<0.05).结论 番茄红素具有抑制人骨肉瘤细胞增殖并促进其凋亡的作用,机制可能与阻滞细胞周期和影响凋亡调控基因、蛋白表达有关.
关键词： 番茄红素 骨肉瘤细胞 增殖 凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 -
氯化锂对脓毒症大鼠大脑皮质 Caspase－3蛋白表达的影响
目的：观察氯化锂（ LiCl）对脓毒症大鼠大脑皮质半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶－3（ Caspase－3）蛋白表达的影响，探讨其对脓毒症脑损伤的保护作用机制。方法2015年2—6月于四川大学华西第二医院进行实验，将Wist－ar大鼠60只按随机数字表法分为假手术组（ S组， n ＝20）、模型组（ CLP组， n ＝20）、氯化锂干预组（ CLP＋LiCl组， n ＝20），采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症模型。 CLP＋LiCl组于CLP手术后立即给予腹腔注射LiCl溶液（50 mg／kg），S组和CLP组给予等量生理盐水腹腔注射。 CLP术后8 h、16 h、24 h每组取5只大鼠进行神经功能行为学评分的比较，而后采用断头法将大鼠处死取出脑组织皮质部分，采用Western blot法检测大鼠大脑皮质Caspase－3蛋白的表达；每组再于术后24 h各取5只大鼠断头取脑行免疫荧光法检测Caspase－3蛋白的表达。结果与S组比较，CLP组及CLP＋LiCl组术后8、16、24 h大鼠神经功能行为学评分均有降低（ F 8 h＝6．07， P ＝0．015；F 16 h ＝14．10， P ＝0．001；F 24 h ＝25．54， P ＝0．000），免疫荧光法检测大脑皮质Caspase－3蛋白的表达均增加，3组比较差异有统计学意义（分别为0．0195±0．0012、0．0272±0．0010、0．0238±0．0016， F ＝44．67， P ＜0．05）；Western Blot法检测Caspase－3蛋白表达情况，3组差异有统计学意义（ F 8 h ＝12．81， P ＝0．001；F 16 h ＝33．01， P ＝0．000；F 24 h ＝107．28， P ＝0．000）；与CLP组同时间点比较，CLP＋LiCl组神经功能行为学评分升高（除8 h外），而大脑皮质Caspase－3蛋白的表达下降，差异均有统计学意义（ P ＜0．05）。结论氯化锂可能通过抑制大脑皮质神经元Caspase－3蛋白的表达而起到提高脓毒症大鼠神经行为学评分的作用。
关键词： 氯化锂 脓毒症 脑损伤 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 大鼠 -
人肾透明细胞癌中细胞凋亡相关因子Caspase-3和Caspase-9的表达
目的 研究人肾透明细胞癌组织中细胞凋亡相关重要因子Caspase-3、Caspase-9表达的变化与肾癌的关系.方法 标本离体后分成肾透明细胞癌组、癌旁组织组、正常肾组织组,均用10%的甲醛溶液固定48 h,常规石蜡包埋、切片5 μm,应用免疫组织化学方法进行观察研究.结果 Caspase-3与Caspase-9均在正常肾组织中可见少量弱阳性反应,癌旁组织阳性表达增加,肾癌组织表达明显减少,两两比较结果显示,3组之间差异均有统计学意义(P<0.01).肾癌4个期之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).Caspase-3与Caspase-9蛋白表达呈正相关(r=0.988,P<0.05).结论 癌组织中Caspase-3和Caspase-9表达下降,说明细胞凋亡减少,癌组织细胞增殖旺盛,是肿瘤形成的重要机制.
-
大蒜素对人白血病细胞系K562细胞增殖和凋亡影响及其机制探讨
目的:探讨大蒜素对人白血病细胞系K562细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法:体外培养的K562细胞,用不同浓度大蒜素处理24、48、72 h,MTT法测定其对K562细胞增殖的影响;大蒜素(浓度分别为3、6、12μg/ml)处理K562细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Rh123探针染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化,分光光度计检测Casepase-3、Casepase-9相对活性,western blot法检测p16、p27基因表达情况.结果:大蒜素(浓度3～24μg/mL)能抑制K562细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;大蒜素(浓度分别为3、6、12μg/mL)作用K562细胞48 h后,细胞凋亡率分别为13.5％、21.4％、34.6％,对照组凋亡率为2.2％;Casepase-3、Casepase-9相对活性显著增加;p16、p27的表达升高,呈剂量依赖性.结论:大蒜素能抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与上调p16、p27基因的表达,增加细胞Casepase-3、Casepase-9活性及降低线粒体膜电位有关.大蒜素是一种前景广阔的抗肿瘤药物.
-
六味地黄汤对衰老小鼠肾脏Caspase-3表达及活性的影响
目的 研究六味地黄汤对衰老小鼠肾脏Caspase-3表达及活性的影响.方法 雄性KM小鼠分为青年对照组、老年对照组和六味地黄汤组.六味地黄汤组小鼠每日灌胃六味地黄汤,其余两组动物灌胃等量蒸馏水,共8 w.应用免疫组织化学法检测肾皮质Caspase-3表达,分光光度法检测肾脏Caspase-3活性.结果 老年对照组小鼠肾脏Caspase-3表达及活性均高于青年对照组(P＜0.05)；与老年对照组相比,六味地黄汤组小鼠肾脏Capase-3表达及活性下降(P＜0.05,P＜0.01).结论 六味地黄汤可通过抑制肾脏Caspase-3表达及活性,延缓衰老.
关键词： 六味地黄汤 衰老 肾脏 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 -
结直肠癌组织中TAZ表达与Bcl-2、Bax、Caspase-3的关系及临床意义
目的：探讨结直肠癌组织中TAZ蛋白与临床病理特征的关系及其与具有凋亡调节作用的 Bcl-2、Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）表达的相关性。方法免疫组化法检测96例结直肠癌组织石蜡标本及其中50例癌旁组织的 TAZ、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达，分析这4种蛋白的相关关系。记录患者完整的临床病理资料，分析TAZ与结直肠癌临床病理特征的关系。结果与癌旁组织相比，结直肠癌组织中TAZ、Bcl-2表达明显增强（均P＜0.05）；Caspase-3在结直肠癌组织中表达强度明显低于癌旁组织（P＜0.05）；Bax在两种组织中表达无明显差异（P＞0.05）。 TAZ表达与肿瘤浸润深度、临床分期、淋巴结转移、脉管瘤栓有关（均P＜0.05）。肿瘤组织中TAZ与Bcl-2表达存在正相关关系，与Caspase-3表达存在负相关关系（P＜0.05）；Bcl-2与Bax表达存在负相关关系（P＜0.05）； TAZ与 Bax、Bcl-2与Caspase-3、Bax与 Caspase-3无明显相关关系（均P＞0.05）。结论 TAZ蛋白可能作为肿瘤标志物，其在结直肠癌中的作用可能与调控Bcl-2、Caspase-3有关。
关键词： 结直肠癌 TAZ蛋白 Bcl-2 Bax 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 -
静态压力对人牙周膜干细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的:探讨体外模拟正畸牙移动过程中机械压力对人牙周膜干细胞(HPDLSC)凋亡相关蛋白表达的影响.方法:将体外培养的HPDLSC分别在自行研发的加压力装置中进行100、200 Kpa加压1、6和12h后,检测和比较其凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-8的表达;流式细胞仪检测其凋亡状态.结果:100 Kpa加压1h的HPDLSCs中caspase-3和caspase-8的蛋白表达及其凋亡水平均显著高于对照组(P＜0.05),而加力12h的HPDLSCs中caspase-3和caspase-8的蛋白表达和凋亡水平与对照组比较无统计学差异(P＞0.05).200 Kpa加力1h的HPDLSCs中caspase-3和caspase-8的蛋白表达和凋亡水平均显著低于对照组(P＜0.05),而加力12h的HPDLSCs中caspase-3和caspase-8的蛋白表达和凋亡水平与对照组比较无统计学差异(P＞0.05).结论:在体外模拟正畸牙移动过程中,不同强度静态压力作用不同时间对人牙周膜干细胞的凋亡作用不同,100 Kpa静态加力加压1h可更有效地促进人牙周膜干细胞的凋亡,而200 Kpa静态加力加压1h可抑制人牙周膜干细胞的凋亡.
-
甘草甜素对HepG2细胞急性损伤后超微结构和相关蛋白表达的影响
目的利用肿瘤坏死因子-a(TNF-α)和放线菌素D(actinomycin D,ActD)造成HepG2细胞急性损伤,观察甘草甜素(glycrrhizin,GL)对此过程中细胞超微结构和相关蛋白表达的影响.方法给予不同终浓度的甘草甜素预保护30 min后,TNF和ActD共同作用HepG2细胞12 h,电镜观察细胞超微结构的变化,Westernblot检测细胞内凋亡相关蛋白Caspase-3及Bcl-2、Bax的表达情况.结果TNF-a和ActD共同作用12 h可造成HepG2细胞急性损伤,电镜下可见细胞缩小、核浓缩、微绒毛消失等凋亡细胞特征,而100μg/mLGL保护组未见;另外,Western blot检测显示,给予不同浓度甘草甜素预保护后,损伤细胞内Caspase-3的32 kD酶原表达逐渐增加,17 kD活性成分表达逐渐减少,同时Bcl-2表达逐渐增加,Bax表达逐渐减少.结论TNF-α作用12 h后诱导的HepG2细胞急性损伤呈现凋亡细胞特有的超微结构改变,甘草甜素可通过调控凋亡相关蛋白的表达而抑制损伤的发生.
-
AEG-1和Caspase-3在三阴基底样乳腺癌中的表达及其临床病理相关性的研究
目的 着重探讨AEG-1和Caspase-3在三阴基底样癌组织中的表达及其相关性.方法 HE染色对66例检测对象的病理学诊断进行验证;免疫组化检测66例三阴基底样癌中AEG-1和Caspase-3的表达,分析其与临床病理参数的关系及二者的相关性.结果 66例检测对象均为三阴基底样癌;AEG-1和Caspase-3蛋白在三阴基底样癌组织中的阳性表达率分别为73%和60%;AEG-1在三阴基底样癌中的表达随着肿瘤分化程度的降低而增强,在血清学CA153阳性中的表达率显著高于阴性中的表达率,表达差异具有统计学意义(P＜0.05);Caspase-3在三阴基底样癌中的表达随着肿瘤分化程度的降低而减弱,在血清学CA153阳性中的表达率显著低于阴性中的表达率,表达差异具有统计学意义(P＜0.05);AEG-1和Caspase-3在三阴基底样癌组织中表达无相关性.结论 AEG-1和Caspase-3参与三阴基底样癌的发生和发展.但是AEG-1不能单独直接抑制Caspase-3的表达,可能与CA153相互作用,共同抑制Caspase-3的表达.
-
番茄红素对人骨肉瘤细胞生长的影响及机制研究
目的 研究番茄红素(Lycopene,LP)对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响并初步探讨其机制.方法 取处于对数生长期的人骨肉瘤MG-63细胞,设空白对照组,LP低、中、高剂量组(5、10、20μg/mL)和顺铂(40μg/mL)组;给药干预48 h,观察细胞生长状况,MTT比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测细胞周期、细胞凋亡状况并计算凋亡率,逆转录PCR(RT-PCR)法检测凋亡相关基因Bax mRNA、bcl-2 mRNA表达并计算Bax/bcl-2值,免疫蛋白印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白caspase-3表达.结果 光学显微镜下观察可见,空白对照组人骨肉瘤MG-63细胞呈贴壁生长,增殖迅速,而LP组细胞增殖受到抑制,细胞数明显减少,呈现回缩、脱落现象.与空白对照组比较发现经LP干预48 h能够显著提高人骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制率,显著延长细胞周期G0/G1期并缩短S期、G2/M期,显著提高细胞凋亡率(Apoptosis index,AI),上调Bax mRNA表达并下调bcl-2 mRNA表达,显著提高Bax/bcl-2比值,显著上调caspase-3蛋白表达,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 LP具有抑制人骨肉瘤细胞增殖并促进其凋亡的药理学作用,机制可能与阻滞细胞周期和影响凋亡调控基因、蛋白表达有关.
关键词： 番茄红素 骨肉瘤细胞 增殖 凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 -
高压氧治疗对2型糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡和超微结构的影响
目的 探讨高压氧对糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡和超微结构的影响.方法 8只Wistar大鼠为正常对照组(对照组),空腹血糖16.7 mmol/L以上的24只Goto-Kakizaki (GK)大鼠,根据血糖高低排序后采用数字表法分为模型组、二甲双胍组、高压氧组,每组8只.对照组、模型组、高压氧组每天按5 ml/kg灌服纯净水,二甲双胍组按250 mg/kg灌服二甲双胍混悬液,高压氧组每天1次高压氧治疗.3周后,各组大鼠用异氟醚麻醉后取胰腺,部分组织制成电镜切片观察,部分组织制成石蜡切片后分别进行苏木素-伊红(HE)染色、原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)法检测胰岛细胞凋亡,免疫组织化学二步法对胰岛进行半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)标记.结果 电镜观.察到模型组胰岛细胞线粒体明显肿胀、脱颗粒、呈空泡状,高压氧组胰岛细胞线粒体病变较模型组病变轻.各组均有胰岛细胞凋亡发生,高压氧组凋亡指数(AI)为(1.57±0.33)％,caspase-3阳性细胞积分光密度值(IOD)为10.22 ±4.61,模型组AI和IOD值分别为(4.88±0.51)％和14.65 ±4.8,2组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),与对照组[AI为(1.16±0.31)％,IOD值为5.36 ±2.34]、二甲双胍组[AI为(1.72±0.14)％,IOD值为9.37 ±4.64]比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 高压氧可保护线粒体膜,减轻高血糖对线粒体的损伤,抑制2型糖尿病大鼠胰岛细胞的凋亡和caspase-3抗原的表达,有利于糖尿病的治疗.
-
瑞芬太尼对过氧化氢处理脐静脉内皮细胞的抗氧化应激作用
目的 以人脐静脉内皮细胞为细胞模型,建立过氧化氢处理的氧化应激模型,研究瑞芬太尼的抗氧化应激保护机制,并确定信号转导通路.方法 过氧化氢0.1 mol/L孵育原代培养的人脐静脉内皮细胞,建立细胞损伤模型,然后进行瑞芬太尼保护及相关通路研究.实验共分为九组:空白对照组(C组)、过氧化氢组(H1组)、过氧化氢+SP600125组(H2组)、过氧化氢+SB203580组(H3组)、过氧化氢+PD98059组(H4组);过氧化氢+瑞芬太尼组(HR1组)、过氧化氢+瑞芬太尼+SP600125组(HR2组)、过氧化氢+瑞芬太尼+SB203580组(HR3组)、过氧化氢+瑞芬太尼+PD98059组(HR4组).H1组、H2组、H3组和H4组仅进行MAPK通路阻断实验,HR1组、HR2组、HR3组和HR4组分别加入瑞芬太尼10 ng/ml保护1 h.随后分别检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及Caspase-3活性,观察瑞芬太尼抗氧化应激作用并初步确定转导通路;利用RT-PCR观察瑞芬太尼10 ng/ml处理前后c-Jun的表达水平,确定转导通路的信号分子.结果 H1、H2、H3、H4组SOD活性明显低于C组,MDA含量明显高于C组(P<0.05);HR1组SOD活性明显高于H1组,MDA含量明显低于H1组(P<0.05);HR2组与H2组SOD活性及MDA含量差异无统计学意义;HR3组SOD活性明显高于H3组,MDA含量明显低于H3组(P<0.05);HR4组SOD活性明显高于H4组,MDA含量明显低于H4组(P<0.05).H1、H2、H3、H4组Caspase-3活性明显高于C组(P<0.05).H1组和HR1组c-Jun mRNA表达量明显高于C组,且HR1组明显低于H1组(P<0.05).结论 瑞芬太尼10 ng/ml可激活JNK通路及其下游信号分子c-Jun,上调SOD活性,降低MDA含量,进而起到抗氧化应激作用.
关键词： 瑞芬太尼 氧化应激 超氧化酶歧化酶 丙二醛 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 -
凋亡和自噬交互调控元件Bax、Bcl-2、Beclin-1在慢性紫外线损伤小鼠模型皮肤角质形成细胞中的表达
目的 观察慢性紫外线损伤对小鼠皮肤角质形成细胞凋亡和自噬交互调控元件Bax、Bcl-2、Beclin-1及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)的调控效应.方法 健康昆明小鼠30只,雌雄各半,鼠龄6～8周,按性别随机分成慢性紫外线损伤组(20只)和对照组(10只),每组雌雄各半,根据性别将小鼠分笼饲养.采用模拟日光紫外线(UVA+ UVB)光源对实验小鼠进行照射,从小红斑量(UVB 0.07 J/cm2,UVA 0.7 J/cm2)开始,每周增加0.5个小红斑量,每日1次,每周照射5d,共9周,UVB总剂量达9.45 J/cm2,UVA总剂量达94.5 J/cm2.通过组织学观察、特殊化学染色和表皮厚度测量确定皮肤损伤,应用免疫组化法分别对照射前(W0)和实验9周末(W9)Bax、Bcl-2、Beclin-1和caspase3的表达进行检测,表达强度以免疫反应强度分布指数(IRIDI)表示,并与对照组进行比对分析.分别采用配对t检验和Wilcoxon符号秩和检验对各参数进行比较.结果 慢性紫外线照射后,小鼠表皮厚度明显增加.肉眼观察、组织学观察和胶原纤维、弹性纤维特殊染色均显示损伤组小鼠皮肤临床表现和组织学改变均与慢性紫外线光损伤的人类皮肤较为吻合.在损伤组,照光前Beclin-1、caspase3、Bax、Bcl-2的表达计分均值分别为0.30、0.25、0.35、0.25,照光后分别为2.70、3.30、3.35、0.25.Beclin-1、caspase3、Bax蛋白表达显著升高,且差异有统计学意义(Z值分别为4.034、4.001、3.970,均P＜ 0.05),Bcl-2蛋白表达变化不明显(Z=0,P＞ 0.05).对照组小鼠Beclin-1、caspase3、Bax、Bcl-2的均值在W0时和W9时表达差异均无统计学意义(Z值分别为0、0.577、0、0.577,均P＞0.05).结论 慢性紫外线损伤对小鼠皮肤角质形成细胞中凋亡和自噬的交互调控元件Beclin-1和Bax具有上调表达的作用,而对Bcl-2表达调控效应不显著.这一系列的调控效应可能参与了凋亡和自噬在慢性紫外线皮肤损伤中的交互调控.
-
促红细胞生成素对β-淀粉样蛋白引起细胞损伤后坏死样凋亡的保护作用
目的 探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的HT-22细胞损伤后坏死样凋亡(necroptosis)的保护作用及可能机制.方法 四甲基偶氮唑蓝法(MTT)观察不同浓度的Aβ25-35(1 ～ 20 μmol/L) 作用于HT-22细胞24 h,及不同浓度EPO(1～50 U)预处理3 h后再加入20 μmol/L Aβ25-3524 h对 HT-22细胞活力的影响;Hoechst33258核染色法观察细胞形态,蛋白免疫印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达.结果 不同浓度的Aβ25-35作用HT-22细胞24 h后均引起细胞活力的下降,且活力下降呈剂量依赖性;不同浓度的EPO对20 μmol/L Aβ25-35引起的细胞活力下降具有抑制作用.10 μ EPO可有效地抑制20 μmol/L Aβ25-35诱导的caspase-3的裂解片段表达增加.核染色表明EPO可抑制对细胞损伤后necroptosis.结论 EPO对Aβ25-35诱导的细胞损伤后的necroptosis具有保护作用,可能通过抑制caspase-3的裂解片段表达来实现.
关键词： 促红细胞生成素 坏死样凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 β-淀粉样蛋白 -
重组人酸性成纤维细胞生长因子对创面愈合的作用
目的:观察重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)对创面愈合的影响,探讨rhaFGF在组织修复中的作用机制.方法:利用大鼠创伤模型,采用HE染色观察不同时间点创面愈合情况;采用免疫组化方法检测伤后不同时间点创面愈合组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)的表达情况;采用羟脯氨酸测试法检测伤口中胶原纤维的含量,并对照观察创面应用rhaFGF后以上各项指标的变化.结果:外用rhaFGF后创面组织中伤后第8天毛细血管胚芽与成纤维数量显著多于单纯创伤组,伤后第14天,经rhaFGF治疗的大鼠创面的再上皮化明显强于单纯创伤组.创面组织中caspase-3的表达量逐渐增加,外用rhaFGF后第14天和第21天的caspase-3表达量显著高于单纯创伤组.伤口中羟脯氨酸的含量逐渐增加,外用rhaFGF后第8天和第14天的羟脯氨酸含量显著高于单纯创伤组.结论:外用rhaFGF在创伤愈合的前期可以促进肉芽组织生长使得愈合周期缩短.在创伤愈合的后期可以直接或间接的促进成纤维细胞的凋亡,维持了细胞增殖与凋亡的平衡.
-
5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞增殖与侵袭的影响及作用机制
目的 观察5-氮杂胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖及侵袭的影响,并探讨其可能的机制.方法 常规方法培养SMMC-7721细胞,加入不同浓度的5-氮杂胞苷,以CCK-8法测定终浓度为o、5、10、25、50 umol/L的5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞作用24、48、72 h后增殖的影响,并计算细胞生长抑制率；Transwell小室侵袭实验检测各不同浓度5-氮杂胞苷处理SMMC-7721细胞后24 h后的细胞侵袭能力特点；Western blotting法检测Caspase-3、MMP-2的表达.结果 5-氮杂胞苷能显著抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖,并呈时间浓度依赖性(P＜0.05)；与对照组相比,随5-氮杂胞苷浓度增加Caspase-3明显增加,MMP-2蛋白表达量明显增加.结论 5-氮杂胞苷对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖有明显抑制作用,且表现为时间浓度依赖性,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达量,诱导细胞凋亡,及对细胞的直接毒性作用有关.5-氮杂胞苷能增强人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的侵袭能力,其机制可能与上调MMP-2蛋白表达量有关.
-
施普善对慢性低氧高二氧化碳大鼠学习记忆及海马caspase-3表达的影响
目的:观察脑活素(施普善)对慢性低氧高二氧化碳大鼠学习记忆功能的影响及大鼠海马中 caspase-3表达的变化,并探讨可能的作用机制.方法:筛选八臂迷宫训练后清洁级的雄性SD大鼠32只,随机均分为对照组、模型组、施普善1 mL/kg组和施普善2.5 mL/kg组.采用八臂迷宫观察干预前后大鼠空间学习记忆能力的变化,Western -blot法检测大鼠海马caspase-3蛋白的表达.结果:与对照组比较,模型组大鼠空间学习记忆能力下降,海马中caspase-3明显增高.与模型组大鼠比较,2种剂量施普善干预组大鼠的学习记忆能力明显改善,且海马中caspase -3的表达减少.结论:施普善具有改善慢性低氧高二氧化碳大鼠空间学习记忆作用,可能与抑制海马中 caspase-3表达有关.
-
JNK通路在亚急性帕金森病模型小鼠黑质细胞炎症与凋亡过程中的调控作用
目的 研究c-Jun N-terminal protein kinase(JNK)在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)所致亚急性帕金森病(Parkinson's disease,PD)小鼠模型中对黑质环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,Cox-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达调控作用,以探讨PD模型黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元变性失活的可能机制.方法 采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型,通过行为学观察、SP法免疫组化和免疫蛋白印记法,观察模型小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、Cox-2、caspase-3,磷酸化c-Jun(Ser63,p-c-Jun)免疫阳性细胞数量和中脑黑质区TH、Cox-2、caspase-3和p-c-Jun表达水平的变化;观察给予JNK通路特异性抑制剂SP600125后对上述变化的影响.结果 与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现PD典型的行为学表现,黑质区TH阳性神经元和中脑黑质TH含量分别下降约65%和75%,黑质区Cox-2与caspase-3阳性细胞数和中脑黑质Cox-2与caspase-3含量显著增加,黑质区p-c-Jun表达于细胞核内且中脑黑质p-c-Jun含量大幅升高;经JNK抑制剂SP600125处理的PD小鼠行为表现较轻,TH阳性神经元数量和TH表达水平仅较对照组分别下降约15%和25%,与模型组比较,Cox-2与caspase-3阳性细胞显著减少(P＜0.001),p-c-Jun主要表达于细胞质内,中脑黑质Cox-2、caspase-3、p-c-Jun含量明显下降.结论 JNK通路在MPTP诱导的黑质区细胞炎症与凋亡过程中可能起重要调控作用;JNK抑制剂对PD小鼠可能具有神经保护作用.
-
δ阿片受体激活对依赖于PKC路径的血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用
目的 探讨δ阿片受体激活对血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用及机制.方法 新生大鼠心肌细胞分为对照、模型、D-丙(2)-D-亮(5)脑啡肽DADLE 0.1μmol·L-1;DADLE 0.1μmol·L-1+naltrindole(δ阿片受体拮抗剂)10 μmol·L-1、DADLE0.1 μmol·L-1+GFl09203X 10μmol·L-1、DADLE0.1 μmol·L-1+staurosporine 1μmol·L-1组;分组给药48 h后,MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪测心肌细胞的凋亡指数;流式细胞仪检测细胞周期.Western blot法检测心肌细胞的胞质内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶.3(caspase-3)表达及蛋白激酶C(PKC)的表达.结果 δ阿片受体激动剂DADLE能明显抑制由血清饥饿引起的心肌细胞的凋亡,表现为细胞存活率升高,凋亡率下降,G0/G1百分比降低,G2/M百分比增加;caspase-3蛋白表达明显下降;PKC蛋白表达明显升高;加入nahrindole可以阻断DA-DLE对心肌细胞凋亡的抑制作用,加入GF109203X和stau-rosporine可明显拮抗DADLE抑制由血清饥饿引起的心肌细胞的凋亡的作用,表现为细胞存活率降低,凋亡率升高;G0/G1百分比增加,G2/M百分比降低;caspase-3的蛋白表达明显升高;PKC表达明显降低.结论 8阿片受体激活后通过活化PKC通路抑制血清饥饿所致的心肌细胞凋亡.
-
Livin与Caspase-3在口腔鳞状细胞癌中的表达及相关性研究
目的 探讨凋亡抑制蛋白(IAP) Livin和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及其相关性,为对患者诊断及监测、评估术后复发、转移的风险程度提供参考.方法 采用RT-PCR法对45例OSCC组织及11例正常口腔组织(NOT)中的Livin mRNA与Caspase-3 mRNA的表达进行检测.结果 Livin mRNA与Caspase-3 mRNA在45例OSCC组织及11例NOT组织均有不同程度的表达;Livin mRNA在OSCC组织中的表达高于NOT组织(P＜0.05),在有淋巴结转移组的表达高于无淋巴结转移组,差异有统计学意义(P＜0.05).两者在OSCC组织中的相对含量均与患者的性别和年龄无关,但与肿瘤的病理分期、分化程度有关,相关分析显示Livin mRNA与Caspase-3 mRNA在OSCC组织中的表达呈相关关系,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Livin与Caspase-3基因的异常表达与OSCC的病理生物学行为密切相关,联合检测Livin 与Caspase-3可为评价OSCC的浸润、转移及患者预后提供临床参考,为研究OSCC发病机制提供新的思路.
