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广西虎纹捕鸟蛛毒诱导U251胶质瘤细胞凋亡及Caspase-3的激活
目的:探讨虎纹捕鸟蛛毒抑制体外脑胶质瘤细胞系U251生长并诱导其凋亡,激活半胱天冬酶-3(Caspase-3)的作用.方法:将U251细胞分为3组:空白组、顺铂组、加药组(虎纹捕鸟蛛毒素浓度为37.5,50,75,100,150 mg·L(-1)),毒素作用24,48 h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性并与顺铂组、空白组做对比;流式细胞仪AnnexinV-FITC检测细胞凋亡率;Caspase-3分光光度法检测Caspase-3的相对活性.结果:虎纹捕鸟蛛毒素剂量为37.5,50,75,100,150 mg·L(-1)时,对U251细胞的增殖有显著性抑制作用(P<0.05或P<0.01),IC,.为53.48 mg·L(-1).虎纹捕鸟蛛毒素可诱导U251胶质瘤细胞凋亡并呈浓度依赖关系.在剂量为150 mg·L(-1)诱导48 h,细胞早期凋亡率84.1%,晚期凋亡率4.48%.用不同浓度分别处理细胞,Caspase-3活性于48 h,150 mg·L(-1)时达高峰,对细胞中的执行分子Caspase-3的激活速度快,活化程度为9.23,并存在剂量依赖关系和浓度依赖性的升高.结论:虎纹捕鸟蛛毒素明显抑制U251细胞生长并诱导其发生凋亡,凋亡过程中有Caspase-3的激活.
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甘草总黄酮抑制硫代乙酰胺诱导肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1及Caspase-3的表达
目的:研究甘草总黄酮(LF)对硫代乙酰胺(TAA)诱导慢性大鼠肝纤维化的抑制作用及对肝脏中转化生长因子-β1(TGF-β1)和半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响.方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、LF组(400,200,100,50mg·kg-1·d-1)及水飞蓟素(silymarin,30 mg·kg-1·d-1)阳性药物组共7组.除正常对照组外,其余各组均按150 mg·kg-1剂量给予腹腔注3％ TAA,每周2次,连续12周诱导大鼠慢性肝纤维化模型.期间正常对照组、模型组灌胃给予1 mL·kg-1·d-1的生理盐水.造模及药物干预后,HE,Masson染色法观察肝组织病理变化及肝纤维化的形成程度;采用生化法检测血清中ALT,AST,ALP及肝组织中羟脯氨酸(HYP)的含量;采用放免法测定血清透明质酸(HA)的含量;采用免疫组织化学法测定肝组织中TGF-β1和Caspase-3的蛋白表达,qRT-PCR方法检测肝组织中TGF-β1的mRNA表达.结果:与模型组相比较,甘草总黄酮能够保护肝组织结构的完整,并能明显减轻肝细胞变性坏死和纤维组织增生程度;甘草总黄酮能够显著降低血清中AST,ALT和ALP的水平;降低血清HA水平的同时降低肝组织中HYP的含量;甘草总黄酮能够剂量依赖性的下调肝组织中TGF-β1,Caspase-3蛋白的表达同时,下调肝组织中TGF-β1的mRNA的表达.结论:甘草总黄酮具有抗硫代乙酰胺诱导大鼠慢性肝纤维化的作用;其作用机制可能与下调TGF-β1和Caspase-3的蛋白表达有关.
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双氢青蒿素诱导人前列腺癌细胞系PC-3凋亡
目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人前列腺癌细胞系PC-3的凋亡诱导作用,并探讨其可能机制.方法 人前列腺癌PC-3细胞经不同浓度(0、25、50和100 μmol/L)DHA处理48 h,用FCM法检测各组细胞凋亡率.用荧光定量PCR检测细胞中HSP70 mRNA的表达.用蛋白质印迹法检测细胞中HSP70蛋白、凋亡酶激活因子(Apaf-1)及caspase-3的表达;荧光定量PCR及蛋白质印迹法增加两组,即100 lμmol/L HSP70抑制剂槲皮素(quercetin)作为阳性药物对照组,以DMSO作为溶剂对照组.结果 DHA能明显诱导PC-3细胞凋亡(P＜0.05).不同浓度DHA能明显下调HSP70 mRNA及蛋白表达水平(P＜0.05),上调Apaf-1及caspase-3蛋白表达水平(P＜0.05).结论 双氢青蒿素能诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡,其作用机制可能是DHA干扰HSP70的表达,促进caspase信号通路中Apaf-1及caspase-3表达.
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可溶性CD40配体对白血病HL-60细胞Caspase-3及Caspase-8表达的影响
目的 Caspase-3和Caspase-8在多种肿瘤中异常表达,与白血病的疗效等密切相关.本研究分析可溶性CD40配体(soluble CD40 ligand,sCD40L)对人白血病HL-60细胞Caspase-3及Caspase-8表达的影响,探讨其对HL-60细胞的作用机制.方法 2.0、4.0和6.0 mg/L的sCD40L作用HL-60细胞48 h,采用流式细胞术检测HL-60细胞凋亡水平及细胞周期,RT-PCR检测HL-60细胞中Caspase-3和Caspase-8基因的表达水平,蛋白质免疫印迹法检测HL-60细胞中Caspase-3和Caspase-8的蛋白表达.结果 2.0、4.0和6.0 mg/L的sCD40L作用HL-60细胞48 h后,浓度依赖性诱导HL-60细胞的凋亡,凋亡率分别为(48.17±3.22)％、(60.73±5.46)％及(71.26±5.83)％,与对照组(36.42±2.75)％比较,差异有统计学意义,F=36.373,P=0.003.sCD40L阻滞HL-60细胞在G0/G1期,RT-PCR结果显示,Caspase-3和Caspase-8 mRNA的表达上调;蛋白质印迹法结果显示,Caspase-3和Caspase-8蛋白表达增强.结论 sCD40L在体外能够以浓度依赖性促进HL-60细胞凋亡,阻滞细胞在G0/G1期,其可能机制是通过激活Caspase-3和Caspase-8.
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神经生长因子的脑保护作用与Caspase-3表达的相关性
目的 研究神经生长因子(NGF)的脑保护时间窗与半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达的相关性.方法 采用兔局灶性脑缺血再灌注损伤模型,分别于再灌注后0h、1h、3h和6h将NGF立体定向导入梗死灶周,再灌注72h观察神经功能、梗死体积、灶周凋亡率和Caspase-3表达.结果 再灌注0h、1h和3 h灶周给予NGF,梗死体积分别较对照组下降50.1%、42.5%和35.2%,相应的灶周凋亡率及Caspase-3表达明显下降,神经功能恢复较好,用药越早越明显;再灌注6h给药,则无明显作用.相关分析显示梗死体积变化与Caspase-3表达具有明显相关性(P＜0.05).结论 NGF脑保护治疗时间窗与Caspase-3表达相关,抑制Caspase-3表达可能是NGF介导神经保护作用的机制之一.
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nm23-H1基因转染前后人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中蛋白激酶C转位的变化
目的 研究nm23-H1基因转染诱导人舌鳞状细胞癌(以下简称舌鳞癌)Tca8113 细胞凋亡过程中蛋白激酶C-θ(PKC-θ)的作用.方法 采用脂质体转染法将真核表达载体pAdEasy-nm23-H1 转染人舌鳞癌Tea8113细胞株.应用PKC-θ活化抑制剂 Calphostin C 和 DMSO 预处理细胞30 min 后,常规培养24 h,倒置显微镜观察细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot分析Tca8113细胞中PKc-θ裂解活化状况;酶标仪(ELISA)检测Caspase-3的相对活性.结果 人舌鳞癌Tea8113 细胞胞浆中及核周存在PKC-θ的表达,nm23-H1基因转染后PKC-θ从胞浆、核周转位到细胞核内表达.nm23-H1基因转染可导致PKC-θ的裂解活化,形成功能性的催化片段,而Calphostin C 抑制转染诱导的PKC-θ裂解活化.nm23-H1基因转染后,Calphostin C 预处理组和DMSO预处理组Tca8113 的凋亡率、Caspase-3的活性增加,两组间有明显差异(P<0.05).结论 nm23-H1诱导细胞凋亡过程中有PKC-θ的裂解活化,PKC-θ是 nm23-H1 诱导舌鳞癌 Tea8113 细胞株凋亡过程中的参与者,PKC-θ激活Caspase-3诱导细胞凋亡是nm23-H1基因诱导肿瘤细胞凋亡机制之一.
关键词： nm23-H1 基因 蛋白激酶C-θ 半胱天冬酶-3 转位 凋亡 -
安多霖对微波辐射致大鼠心肌细胞半胱天冬酶-3表达的影响
目的 探讨抗辐射中药复方安多霖对微波辐射后大鼠心肌细胞半胱天冬酶(caspase)-3表达的改变及其意义.方法 将140只二级雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、辐射对照组、安多霖0.75 g/(kg·d)、1.5 g/(kg·d)及3 g/(kg·d)预防组.预防组每日1次灌胃给予安多霖溶液,连续给药2周.给药结束后即刻30 mW/cm2微波辐射大鼠1次,辐射时间为15 min.于停药后7 d和14 d,采用Western印迹法、免疫组织化学和图像分析技术,研究大鼠心脏细胞caspase-3表达的变化规律.结果 停药后7和14 d,辐射对照组大鼠心肌细胞caspase-3主要位于胞浆,其蛋白表达显著升高(P< 0.01);0.75 g/(kg·d)安多霖预防组大鼠心肌细胞caspase-3表达与辐射对照组相似;1.5 g/(kg·d)和3 g/(kg·d)安多霖预防组大鼠心肌细胞caspase-3表达比辐射对照组显著下降(P<0.01).结论 30 mW/cm2微波辐射可引起大鼠心肌细胞caspase-3表达增强;给予安多霖1.5和3 g/(kg·d)对微波辐射致大鼠心肌caspase-3表达升高有降低作用;安多霖对微波辐射引起心脏损伤的预防作用可通过下调caspase-3表达来实现.
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长春瑞滨诱导人肺癌Calu-3细胞凋亡及机制
目的观察长春瑞滨(VRB)诱导人肺癌Calu-3细胞凋亡时Bcl-2和半胱天冬酶-3的表达有无变化.方法以不同浓度的VRB(20,40和60 μmol*L-1)作用于体外培养的人肺癌Calu-3细胞24 h后,TUNEL法和吖啶橙染色法观察肺癌细胞凋亡形态学特征;流式细胞仪检测肺癌细胞凋亡率和肺癌细胞Bcl-2蛋白表达水平;以半胱天冬酶-3荧光分析检测试剂盒测定肺癌细胞半胱天冬酶-3活性.结果 VRB(20,40和60 μmol*L-1)处理细胞24 h,TUNEL法及吖啶橙染色均观察到典型的凋亡细胞形态学特征.流式细胞仪检测VRB处理的肺癌细胞凋亡率分别为(3.1±0.6)%,(7.8±1.2)%和(19.6±4.3)%,较对照组(凋亡率为0)显著增高且呈剂量依赖性(P<0.01);Bcl-2蛋白阳性表达细胞率分别为(37.6±6.9)%,(25.4±6.2)%和(8.4±2.5)%,较对照组(48.3±7.1)%显著降低且呈剂量依赖性(P<0.05);肺癌细胞半胱天冬酶-3活性分别为(332±16),(417±11)和(631±27)μmol*L-1*h-1,较对照组(195±12)μmol*L-1*h-1显著增高且呈剂量依赖性(P<0.01).结论 VRB可以诱导肺癌细胞凋亡,抑制Bcl-2表达及增强半胱天冬酶-3活性.
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异氟醚预处理对大鼠肠缺血再灌注后肠损伤的影响
目的 研究不同浓度的异氟醚预处理对大鼠肠缺血再灌注损伤的影响,并初步探讨其作用机制.方法 成年雄性SD大鼠60只,按照随机分层区组设计分为5组(n=12):肠缺血再灌注组(缺血再灌注损伤组):暴露腹腔后夹闭肠系膜上动脉1h后开放再灌注2 h;0.25肺泡低有效浓度、0.5肺泡低有效浓度、1.0肺泡低有效浓度异氟醚预处理30 min组(即0.25M组、0.5M组和1.0M组):在暴露腹腔前预吸入相应浓度的异氟醚30 min,再行肠缺血再灌注；假手术组:仅暴露腹腔,不行异氟醚预处理及肠系膜上动脉夹闭.颈动脉插管监测平均动脉压.在再灌注2h时采血检测血浆超氧化物歧化酶活力、丙二醛和肿瘤坏死因子α含量；取小肠组织行组织切片HE染色,在光镜下观察其结构病理变化程度及改良Chiu's评分,并用免疫组化染色法和Western blot方法检测肠组织Caspase-3活化表达情况.结果 与缺血再灌注损伤组比,0.5M组、1.0M组的病理评分值显著性减低(P＜0.01),而0.25M组无显著差异(P＞0.05).在再灌注期,缺血再灌注损伤组的平均动脉压随时间延长呈明显下降趋势,显著低于假手术组(P＜0.05),而异氟醚预处理能明显减缓平均动脉压下降(P＜0.01).0.5M组、1.0M组较缺血再灌注损伤组的超氧化物歧化酶活力显著性增高,而丙二醛水平减低(P＜0.01).与缺血再灌注损伤组相比,1.0M组、0.25M组的肿瘤坏死因子α含量无显著性差异(P＞0.05),而0.5M组较缺血再灌注损伤组显著性降低(P＜0.01).0.5M组、1.0M组的caspase-3蛋白表达量较0.25M组和缺血再灌注损伤组明显减少(P＜0.05).结论 0.5M与1.0M异氟醚预处理均能相似地减轻缺血再灌注后的肠黏膜结构的病理改变,并可减缓再灌注期的低血压,其保护效应可能与提高超氧化物歧化酶活性、减少丙二醛生成、下调肿瘤坏死因子α生成的炎症反应级联效应以及抑制细胞凋亡有关.
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扇贝多肽抑制紫外线A波诱导的HaCaT细胞凋亡依赖p38 MAPK通路和caspase-3
目的 从p38促细胞分裂剂激活性蛋白激酶(p38 MAPK)通路和半胱天冬酶-3(caspase-3)的角度,研究扇贝多肽(polypeptide from Chfamys farreri,PCF)抑制紫外线A波(UVA)引起的HaCaT细胞凋亡的分子机制.方法 实验分为6组:对照组、UVA模型组、UVA+5.68 mmol·L-1维生素C阳性对照组、UVA+5.69 mmol·L-1 PCF组、UVA+2.84 mmol·L-1 PCF组、UVA+1.42 mmol·L-1 PCF组.以正交实验设计确立UVA诱导HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳分析PCF、p38 MAPK抑制剂(SB203580)及caspase-3特异性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)对细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38 MAPK及磷酸化p38 MAPK表达;流式细胞术检测caspase-3的活性.结果 PCF能明显抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡;SB203580和Ac-DEVD-CHO对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.42～5.69 mmol·L-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的p38MAPK磷酸化及caspase-3的活化.结论 PCF可抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38 MAPK通路和caspase-3活性有关.
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高压氧对大鼠短暂全脑缺血半胱天冬酶-3的影响
为探讨高压氧(HBO)对脑缺血半胱天冬酶-3(简称caspase-3)活性的影响,将200～250 g SD大鼠分为缺血再灌注组(I/R组)、高压氧(HBO)处理组及假手术组,以Pulsineli等报道的四动脉阻断法建立脑缺血再灌注动物模型,缺血20 min,分别于再灌注6、24、48及96 h取顶叶皮质匀浆,用显色法测定caspase-3活性.结果显示:再灌注6h,HBO组及I/R组同假手术组相比,caspase-3活性无显著差异(P＞0.05),但HBO显著高于I/R组(P＜0.05);24 h时间点HBO组及I/R组均高于假手术组(P＜0.05),但前2组之间无显著差异;48及96 h时间点HBO及I/R组虽高于假手术组,但差异无显著性意义(P＞0.05),且此2组间亦无显著差异,说明此时caspase-3已基本降至正常.提示全脑短暂性缺血再灌注后caspase-3被激活,缺血早期用HBO处理可促进其活化,而HBO处理多次后对凋亡的作用已不明显.
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高压氧对短暂前脑缺血小鼠海马半胱天冬酶-3表达的影响
旨在通过测定缺血再灌注时半胱天冬酶-3(caspase-3)的表达以及高压氧对表达的影响,从细胞凋亡的角度探讨高压氧治疗脑缺血的分子生物学机制.将C57BL/6N小鼠分为假手术组(正常对照组)、缺血再灌注组(I/R组)及缺血再灌注加高压氧治疗组(HBO组),后2组夹闭双侧颈总动脉20 min后再通血流,建立脑缺血再灌注模型,分别于再灌注6 h、12 h、24 h和48 h取海马.采用半定量反转录-PCR及蛋白免疫印迹(Western Blotting)方法分别检测caspase-3在转录水平(mRNA)及翻译水平的表达变化.结果:各I/R组及HBO组海马中caspase-3 mRNA及酶原表达水平与假手术组相比均有明显升高,且差异有统计学意义(P<0.05);各I/R组与相应时相点HBO组caspase-3 mRNA及酶原表达水平相比差异均无统计学意义(P>0.05).提示:脑缺血再灌注损伤诱发caspase-3转录水平增加,而且这是引起其酶原增加的主要原因;caspase-3介导的细胞凋亡参与了缺血再灌注损伤;本实验中所采用的HBO治疗方案对caspase-3转录及酶原水平无明显作用.
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黄芩苷对D-氨基半乳糖致大鼠急性肝衰竭的保护作用
目的 观察黄芩苷对大鼠急性肝衰竭的保护作用并探讨可能机制.方法 86只大鼠随机分为正常对照组、模型组和黄芩苷组,模型组和黄芩苷组再分为1、3、5、7天4个亚组.采用腹腔注射D-氨基半乳糖建立大鼠急性肝衰竭动物模型,黄芩苷组于造模后每隔12h腹腔注射黄芩苷(120mg/kg)1次.全自动生化仪检测血清ALT、AST和TBil水平；HE染色观察肝组织病理学变化；RT-PCR法检测肝组织Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA表达；蛋白免疫印迹法检测肝组织Bax、Bcl-2蛋白表达量.统计学处理采用方差分析.结果 黄芩背组肝组织损伤程度明显轻于模型组.黄芩苷组大鼠各时间点血清ALT、AST、TBil水平较模型组明显降低(t=18.85,15.63,8.86;P均＜0.01).黄芩苷组肝组织Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA的表达趋势与模型组一致,随时间延长3天时达高峰,5、7天时逐渐降低,与模型组相比Bax、caspase-3 mRNA表达量明显降低(t=-55.51,-16.20；P均＜0.01)、Bcl-2 mRNA表达量较模型组升高(t=51.91,P＜0.01).黄芩苷组Bax、Bcl-2蛋白表达趋势与模型组一致,Bax蛋白表达量较模型组明显降低(t=-21.32,P＜0.01),Bcl-2蛋白表达量较模型组明显升高(t=50.91,P＜0.01)；黄芩苷组各时间点Bcl-2/Bax蛋白比率明显高于模型组(t=68.08,58.11,64.04,17.50;P均＜0.01).结论 黄芩苷可以通过上调抗凋亡基因Bcl-2的表达和下调促凋亡基因Bax,进而减少caspase-3的表达,保护D-GalN诱导的大鼠急性肝衰竭.
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成年大鼠心肌缺血再灌注后X染色体连锁凋亡抑制蛋白的动态表达变化
目的 测定心肌缺血再灌注过程中X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)动态表达变化,探讨其与缺血再灌注损伤所致心肌细胞凋亡的关系.方法 将健康成年雄性SD大鼠随机分为两组,手术组和伪手术组,每组根据再灌注时间再分为6组:缺血30min,再灌注0、1、2、3、12、24 h组.采用半胱天冬酶-3(Caapaae-3)活性检测判定大鼠心肌细胞凋亡发生情况;用Western Blot和实时定量PCR技术分别检测各组心肌组织中XIAP的蛋白和基因表达水平.结果 Caspase-3活性从心肌缺血再灌注1 h开始升高,再灌注12 h活性大,再灌注24 h趋于正常.心肌缺血再灌注3 h,XIAP蛋白表达开始降低,再灌注12 h表达低;而XIAP的mRNA水平表达各组差异无统计学意义.结论 成年大鼠心肌缺血再灌注后Caspase-3活性增高可能与XIAP表达降低有关,提示XIAP表达降低可能参与了心肌缺血再灌注诱导的细胞凋亡.
关键词： 缺血再灌注 X染色体连锁凋亡抑制蛋白 半胱天冬酶-3 -
调心方对β淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元凋亡的调控作用
目的探讨调心方的药效及作用机制.方法原代培养大鼠海马神经元,Aβ 1-42诱导神经细胞毒模型.采用FDA与PI双染检测神经元存活率,Hoechst 33258染色、TUNEL判断神经元凋亡,免疫细胞化学研究Caspase-3表达,Northern Blot、RT-PCR研究凋亡相关基因(bcl-2、bax、c-jun、c-fos)表达.结果神经元经Aβl-42处理后,活细胞数减少,染色质浓缩、核碎裂,TUNEL染色阳性神经元增多,Caspase-3表达增加,bcl-2 mRNA表达减少,而bax与c-jun表达增加、c-fos的表达变化不明显.调心方可显著改善上述变化.结论调心方对Aβ 1-42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存活率,抑制凋亡.其机制可能通过提高bcl-2 mRAN水平,降低bax和c-jun mRAN水平,减少Caspase-3表达而实现.
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辛伐他汀对脑缺血-再灌注损伤大鼠周围血MIP-3α、BDNF、cleaved Caspase-3表达与mNSS 的影响
目的通过观察辛伐他汀对脑缺血-再灌注损伤大鼠巨噬细胞炎性蛋白-3α（ MIP-3α）、脑源性神经营养因子（ BDNF）、活化的Caspase-3的表达及神经功能评分的影响，揭示辛伐他汀在促进脑缺血-再灌注损伤大鼠神经功能恢复中的作用。方法成年雄性Wistar大鼠60只，随机分为3组：缺血-再灌注损伤后辛伐他汀治疗组；缺血-再灌注损伤后生理盐水对照组；假手术组。每组各20只。采用Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血-再灌注模型，缺血2h 后给予再灌注。治疗组缺血-再灌注损伤1d 后口服辛伐他汀1mg· kg－1· d－1；对照组口服等量生理盐水；假手术组只分离血管。各组大鼠在治疗后1、3、5、7、14d进行神经功能评分（ mNSS评分），检测血清中MIP-3α和BDNF的表达以及各组大鼠脑组织中活化的Capsase-3的表达。结果 mNSS评分结果显示在给药的前3d，治疗组与对照组相比神经功能恢复没有明显差别（ P＞0．05）。给药后第5天至第14天，治疗组神经功能恢复明显好于对照组（ P＜0．05）。血清中MIP-3α的表达结果显示，治疗组与对照组在给药后第1天没有明显差异，而从治疗的第3天开始直至实验结束。结论治疗组MIP-3α的水平始终低于对照组（ P＜0．05）。治疗组血清中BDNF的表达，给药后的第5天开始直至结束显著高于对照组（P＜0．05）。治疗组在给药第3天和第5天后，脑组织中活化的Caspase-3表达低于对照组（P＜0．05），而到给药第14天时这种差异不明显。
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缺血预适应对大鼠海马神经元凋亡的影响
目的 探讨缺血预适应对缺氧复氧后大鼠海马神经元的影响.方法 用300μmol/L氯化钴预处理大鼠海马神经元2 h,然后更换正常的培养基培养24 h,之后用无血清的培养基培养,建立预适应的细胞模型.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因的表达情况,用免疫印迹法检测细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白磷酸化水平的变化.结果 300μmol/L氯化钴预处理可以明显增加神经元在无血清刺激下的增殖能力,减少凋亡(P＜0.01).300μmol/L氯化钴预处理可以上调凋亡抑制基因bcl-2的表达(P＜0.05),下调凋亡促进基因半胱天冬酶-3的表达(P＜0.05)及ERK1/2的表达(P＜0.05).结论 300μmol/L氯化钴预处理通过抑制ERK1/2磷酸化对大鼠海马神经元起保护作用.
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Caspase-8 和Caspase-3在大鼠急性心肌损伤中的作用及药物预处理对其影响
目的:研究半胱天冬酶-8(caspase-8 )、半胱天冬酶-3(caspase-3)在异丙基肾上腺素(isoprenaline,Iso)致大鼠急性心肌损伤心肌细胞凋亡中的作用及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)预处理对其影响.方法:将Wistar大鼠随机分成三组:对照组、Iso损伤组和bFGF预处理组,光镜观察心肌组织病理变化,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化和RT-PCR法检测caspase-8 、caspase-3蛋白及mRNA的表达水平,底物降解法测定酶活性.结果:损伤组心肌坏死较重,心肌细胞凋亡显著,且caspase-8 、caspase-3蛋白及mRNA的表达水平明显升高,酶活性增加;预处理组心肌坏死明显减轻,细胞凋亡减少,caspase-8 、caspase-3蛋白及mRNA的表达水平明显下降,酶活性受抑制.结论:bFGF预处理可能通过抑制caspase-8 、caspase-3的表达及酶活性以减少心肌细胞凋亡从而减轻大鼠心肌损伤.
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染锰大鼠生精细胞Caspaes-3和Ki-67表达
目的 研究氯化锰对大鼠生精细胞半胱天冬酶(Caspase-3)和抗霍奇金淋巴瘤细胞核抗体(Ki-67)表达的影响及意义.方法 48只雄性SD大鼠随机分为6组:空白对照组,15和30 mg/kg MnCl2组,锰与生理盐水均为腹腔注射,1次/d,5 d/周,分别染锰4和6周.用免疫组化法检测睾丸生精细胞Caspase-3与Ki-67表达.结果 与空白对照组比较,各染锰组Caspase-3阳性细胞率均显著升高(P<0.01);染锰剂量相同,染锰6周组与4周组比较,Caspase-3阳性细胞率均显著升高(P<0.01);染锰时间相同,30 mg/kg MnCl2与15 mg/kg MnCl2组比较,Caspase-3阳性细胞率均显著升高(P<0.01).与空白对照组比较,染锰15 mg/kg MnCl24周组Ki-67阳性细胞率降低(P<0.05);染锰30 mg/kg MnCl2 4周组,15 mh/kg MnCl2 6周组,30 mg/kg MnCl2 6周组Ki-67阳性细胞率均显著降低(P<0.01);染锰时间相同,30 mg/kg MnCl2组与15 mg/kg MnCl2组比较,Ki-67阳性细胞率显著降低(P<0.01).各组大鼠生精细胞Caspase-3阳性细胞率与Ki-67阳性细胞率呈明显负相关(r=-0.798,P<0.01),结论染锰15 mg/kg 4周即可促进大鼠生精细胞Caspase-3表达和抑制大鼠生精细胞Ki-67表达,且存在一定的剂量-效应和时间-效应关系,锰的这种双重作用可能是导致大鼠生精障碍的主要机制.
关键词： 大鼠 锰 大鼠生精细胞 半胱天冬酶-3 抗霍奇金淋巴瘤细胞核抗体 -
新生大鼠缺氧缺血性脑损伤caspase-3表达与自由基损伤机制的研究
目的：：研究缺氧缺血性脑损伤( HIBD）新生大鼠caspase-3表达与自由基损伤的机制。方法：建立7日龄新生大鼠HIBD模型，分为HIBD组和假手术组，两组分别于HI后6、12、24、48、72、96 h取脑组织，应用TUNEL法检测神经细胞凋亡，免疫组织化学法检测caspase-3蛋白的表达，硫代巴比妥酸法测定丙二醛( MDA）含量，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶( SOD）含量。结果：HIBD组神经细胞凋亡数量及caspase-3的表达量6 h开始增多，48 h达高峰，各时间点两者均显著高于假手术组(P＜0.05）。 HIBD组MDA含量6 h增高，24 h达高峰，各时间点均较假手术组增高(P＜0.05）。 HIBD组SOD含量6 h下降，24 h降至低，各时间点均较假手术组降低(P＜0.05）。凋亡细胞数量与caspase-3蛋白表达量和MDA含量均呈正相关(r＝0.748、0.654，P均＜0.05），与SOD含量呈负相关(r＝-0.576，P＜0.05）。结论：HIBD时自由基损伤促进caspase-3的表达及神经细胞的凋亡。
