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饱和氢盐水对心肌缺血再灌注损伤老年大鼠心肌细胞线粒体损伤的影响
目的 探讨饱和氢盐水对心肌缺血再灌注损伤老年大鼠心肌细胞蛋白激酶C(PKC)/热休克蛋白90(HSP90)信号通路和线粒体损伤的影响.方法 选取18月龄健康老年清洁级雄性SD大鼠150只,采用随机数字表法分为5组:空白对照组、假手术组、缺血再灌注组、饱和氢盐水组、生理盐水组,每组30只.HE染色观察心肌病理学.透射电镜观察线粒体超微结构.蛋白质印迹法和RT-PCR法检测心肌细胞PKC、HSP90、缝隙连接蛋白43(Cx43)、Cx45蛋白及PKC、HSP90、Cx43、Cx45 mRNA表达.结果 与空白对照组和假手术组比较,缺血再灌注组、饱和氢盐水组和生理盐水组大鼠心肌缺血再灌注后12h和24 h心肌细胞线粒体损伤程度评分明显升高,PKC、HSP90、Cx43、Cx45蛋白及PKC、HSP90、Cx43、Cx45 mRNA表达明显增加,差异有统计学意义(P≤0.05).与缺血再灌注组和生理盐水组比较,饱和氢盐水组大鼠心肌缺血再灌注后12h和24 h心肌细胞线粒体损伤程度评分明显降低[(1.34±0.12)分vs (2.54±0.28)分、(2.61±0.29)分,(1.27±0.13)分vs (2.57±0.27)分、(2.64±0.28)分,P＜0.05],PKC、HSP90、Cx43、Cx45蛋白及PKC、HSP90、Cx43、Cx45 mRNA表达明显下调,差异有统计学意义(P≤0.05).结论 饱和氢盐水可减轻线粒体损伤,从而减轻老年大鼠心肌再灌注损伤.
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间隙连接蛋白43在缺血性脑卒中的作用及其研究进展
间隙连接广泛分布于机体的不同组织,维持了相邻细胞间的细胞质连续性,从而保证了细胞之间电信号的传导和协调各细胞间的代谢等各种生物学功能.间隙连接蛋白(Cx)43是脑组织中丰富的间隙连接蛋白,其主要分布在大脑皮质的星形胶质细胞,对神经信号传递和功能发挥起着至关重要的作用.越来越多的研究表明,Cx43与缺血性脑卒中的发生发展密切相关,除此之外,Cx43对血脑屏障的通透性也有一定影响.此综述主要阐述Cx43在脑缺血损伤中的作用,为临床脑血管疾病的治疗提供新思路.
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缝隙连接蛋白43在心房颤动发病及维持中的作用
心房颤动(房颤)是一种临床常见心律失常,普通人群的发病率约为1％,其发病率随年龄的增长而增加[1].房颤发病与高血压、冠状动脉疾病、心脏瓣膜病、心肌病、心脏外科手术、炎症、内分泌疾病、药物等多种因素相关.房颤可引起心房的电重构和结构重构,同时心脏的电重构和结构重构又为房颤复发和持续提供了条件.近年研究发现缝隙连接在房颤的心房电重构中发挥重要作用,但其确切机制尚不明确.缝隙连接是细胞间实现直接通讯的特殊的细胞膜结构,主要由缝隙连接蛋白(connexin,Cx)构成.在人类心肌中表达的Cx主要为Cx37、Cx40、Cx43、Cx45.其中Cx40、Cx43与房颤的关系为密切.我们主要就Cx43与房颤的相关研究做一综述.
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抑制细胞间通讯功能可加速人成纤维细胞的衰老
目的 研究间隙连接蛋白connexin43在人成纤维细胞衰老过程中的调节作用. 方法 设计并合成针对人connexin43的双链RNA(siRNA),抑制人二倍体成纤维细胞WI-38细胞的connexin43表达和细胞间通讯功能,观察对其衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色阳性率、细胞增殖能力、细胞周期调节蛋白P27、P21表达水平等衰老表型的影响.结果 我们合成的siRNA-cx43可高效、特异的抑制connexin43 mRNA和蛋白质表达及细胞间通讯功能.转染WI-38细胞后,细胞增殖能力降低、细胞SA-β-gal染色阳性率(75.32±5.17)较对照组(32.48±3.94)和转染siRNA-con组(37.81±4.12)细胞升高(P＜0.05),P27、P21表达增加,转染siRNA-cx43的WI-38细胞增殖能力显著降低,细胞变扁平、肥大,细胞SA-β-gal染色阳性率达100%,细胞提前出现衰老. 结论 间隙连接蛋白connexin43对WI-38细胞的衰老进程有重要的调节作用,其表达减少和细胞间通讯功能降低,可以促进WI-38细胞衰老进程.
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前列腺癌细胞连接蛋白43表达和细胞间隙连接交流状况
目的观察前列腺癌(PCa)细胞连接蛋白(Connexin,Cx)表达和细胞间隙连接交流(GJIC)状况,探讨胸苷激酶(TK)自杀基因治疗前列腺癌时旁观者效应不够强大的原因以及GJIC与前列腺癌发生的关系.方法分别采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、链霉亲和素免疫组化法(SABC法)和划痕标记染料示踪技术(SLDT)检测前列腺癌细胞系PC-3m的连接蛋白43(Cx43)mRNA、蛋白表达和GJIC功能状况,并观察Cx43蛋白在正常前列腺和前列腺癌组织中的表达.结果PC-3m有Cx43mRNA和蛋白表达,但其表达较弱,且Cx43蛋白大多异常定位于细胞浆中而非细胞膜上;组织切片显示前列腺癌组织Cx43蛋白异常定位且表达水平较正常前列腺组织明显减弱,与病理分级呈负相关关系(χ2＝4.025,P<0.05),高分化和中等分化、低分化腺癌的表达率分别为52.9%及7.1%.此外,PC-3m细胞GJIC功能低下,半定量为(+)或(-).结论前列腺癌细胞GJIC功能低下,Cx43基因下调表达和蛋白异常定位均可能为导致这一现象的原因.GJIC功能缺陷可能是引起单纯疱疹病毒-胸苷激酶/更昔洛韦系统杀伤前列腺癌细胞时旁观者效应不够强大的原因,亦可能是前列腺癌发生、发展中的分子事件.
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缝隙连接蛋白43在去卵巢大鼠骨细胞中的表达及其与骨质疏松的关系
目的探讨去卵巢致骨质疏松大鼠骨细胞中缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达及意义.方法采用10月龄未孕产Wistar雌性大鼠30只,随机分为去卵巢组、假手术组和尼尔雌醇治疗组.于术后8周末测量3组大鼠全身及腰椎骨密度(BMD),采用放免法测定血清雌二醇水平,采用SABC免疫组化法观察Cx43在成骨细胞和破骨细胞中的表达情况,采用3'-OH末端DNA原位标记技术观察凋亡细胞变化.结果术后8周末去卵巢组全身及腰椎BMD和血清雌二醇水平明显低于假手术组和尼尔雌醇治疗组(P＜0.01).去卵巢组成骨细胞内Cx43阳性表达率(13.80%±1.14%)低于假手术组(63.60%±2.46%)和尼尔雌醇治疗组(63.60%±2.12%)(P＜0.01),而破骨细胞内去卵巢组Cx43阳性表达率(66.10%±1.37%)高于假手术组(42.20%±1.93%)和尼尔雌醇治疗组(41.80%±1.81%)(P＜0.01).去卵巢组成骨细胞的凋亡变化(49.30%±3.86%)高于假手术组(24.20%±2.78%)和尼尔雌醇治疗组(25.50%±3.03%)(P＜0.01),破骨细胞凋亡变化(5.80%±1.14%)低于假手术组(19.20%±1.75%)和尼尔雌醇治疗组(19.70%±1.69%)(P＜0.01).而上述观察指标中假手术组和尼尔雌醇治疗组差异无显著性. 结论去卵巢大鼠Cx43在成骨细胞中表达下降,而在破骨细胞中表达增加,在成骨细胞和破骨细胞中Cx43表达的变化与影响破骨细胞和成骨细胞的凋亡有关,这可能是去卵巢大鼠发生骨质疏松的机制之一.
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不同β受体阻滞剂对大鼠心肌间隙连接结构作用的对比研究
目的 比较三代β受体阻滞剂的代表药物卡维地洛、美托洛尔及普萘洛尔对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌间隙连接(GJ)结构的不同作用.方法 将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、卡维地洛组、美托洛尔组及普萘洛尔组.除假手术组只穿线不结扎外,其余各组均结扎左冠状动脉前降支30 min,然后松开结扎线复灌4 h,建立心肌缺血再灌注损伤模型.于再灌4 h末用免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜技术观察心肌间隙连接蛋白43(CX43)的分布及组成变化,用激光扫描共聚焦显微镜对CX43进行定量.结果 与假手术组相比,缺血再灌注组CX43-GJ结构明显异常.与缺血再灌注组比较,卡维地洛组、美托洛尔组和普萘洛尔组CX43-GJ损伤减轻.各药物治疗组间比较,卡维地洛组CX43-GJ结构损伤轻.结论 各种β受体阻滞剂均具有保护心肌GJ结构的作用,以卡维地洛的作用明显.
关键词： 心肌再灌注损伤 肾上腺素能β受体拮抗剂 连接蛋白43 间隙连接 -
普伐他汀对病毒性心肌炎小鼠缝隙连接蛋白43的调节
目的 通过比较普伐他汀不同剂量干预组和模型对照组小鼠的缝隙连接蛋白43(connexin43,Cr43)及细胞因子干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-10的表达水平,探讨普伐他汀对急性病毒性心肌炎及其心律失常的作用,不同剂量疗效的差别及其作用机制.方法 取雄性4周龄Balb/c小鼠,分为模型对照组、普伐他汀40 mg·kg-1·d-1组、普伐他汀80 mg·kg-1·d-1组[以上3组均予以腹腔接种柯萨奇病毒B组3型(CVB3)],空白对照组和毒性实验组(以上2组均予以Eagle's 液腹腔注射).接种病毒当天(第O天),即开始给药.模型对照组和空白对照组给予生理盐水灌胃,毒性实验组用药同普伐他汀80 mg·kg-1·d-1组,持续2周.第14天处死存活鼠.ELISA、实时定量PCR法和免疫组织化学法检测Cx43、IFN-γ和IL-10改变.结果 模型对照组Cx43 mRNA明显少于普伐他汀40 mg·kg-1·d-1组和普伐他汀80 mg·kg-1·d-1组(1.000±0.127比1.320±0.096和1.550±0.126,P均＜0.05),免疫组织化学染色结果基本一致(0.16±0.06比4.55±0.73和5.21±0.42,P均＜0.01).普伐他汀40 mg·kg-1·d-1组、普伐他汀80 mg·kg-1·d-1组IL-10 mRNA表达明显高于模型对照组(1.810±0.029和2.140±0.032比1.000±0.031,P均＜0.05),而IFN-γ mRNA 模型对照组则高于普伐他汀40 mg·kg-1·d-1组、普伐他汀80 mg·kg-1·d-1组(1.000±0.061比0.603±0.063和0.333±0.071,P均＜0.01),血清IFN-γ、IL-10蛋白水平的改变与其核酸水平的改变基本一致.结论 普伐他汀对病毒性心肌炎有一定的疗效.普伐他汀能减轻Cx43基因及蛋白表达的降低,维持IFN-γ、IL-10基因的平衡表达,表明它可通过调节细胞因子的平衡和维持缝隙连接蛋白的正常表达发挥抗病毒性心肌炎及抗心律失常的作用.
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急性心肌缺血时连接蛋白43迅速降解的非均一性研究
目的探讨急性心肌缺血时心肌细胞连接蛋白43(Cx43)含量和分布的改变.方法 20只犬随机分为4组,通过结扎冠状动脉造成分别为0、1、3、6 h的急性心肌缺血,应用激光共聚焦显微镜技术和荧光免疫组织化学方法对缺血心肌Cx43含量和分布的改变进行定量研究.结果急性心肌缺血1h ,Cx43像素密度较对照组减少22.2%(P<0.01),3h减少40.0%(P<0.01),6h减少53.8%(P<0.01).对照组心肌细胞端对端连接处Cx43含量约为侧对侧连接处的1.36倍,缺血6 h后,侧对侧连接处Cx43含量反而为端对端连接处的1.6倍.对照组各层心肌细胞Cx43含量无显著差异,缺血后,中间层心肌Cx43含量较其他层心肌Cx43含量下降更明显,差异有显著性(P<0.05或P<0.01).结论急性心肌缺血时Cx43迅速降解,分布模式也发生明显的改变,各层心肌Cx43的降解程度明显不均一.
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卡维地洛对大鼠心肌间隙连接通讯的影响及作用机制研究
目的研究卡维地洛对大鼠心肌缺血再灌注损伤、心肌间隙连接通讯(GJIC)及连接蛋白43(CX43)的影响,验证卡维地洛可通过改变CX43磷酸化状态抑制GJIC起到防止心肌再灌注损伤的假设.方法将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和卡维地洛组.结扎左冠状动脉前降支致缺血30 min后复灌4 h,建立心肌缺血再灌注损伤模型,于再灌注4 h末测定心肌酶及心肌梗死范围变化;制作Langendorf心脏灌流模型,随机分为假手术组、缺血再灌注组、卡维地洛组和庚醇组,于整体缺血30 min末期用改良的划痕标记染料示踪技术测定GJIC;用Western blot技术检测缺血30 min CX43磷酸化状态的改变.结果与假手术组相比,缺血再灌注组心肌酶及心肌梗死范围明显增加,GJIC无明显变化,非磷酸化CX43升高.与缺血再灌注组比较,卡维地洛组心肌酶及心肌梗死范围显著减少,同间隙连接抑制剂庚醇作用相似,GJIC也明显受到抑制,伴非磷酸化CX43水平明显上升.结论卡维地洛具有使CX43去磷酸化进而抑制GJIC防止心肌再灌注损伤的作用.
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谷氨酰胺诱导热休克蛋白70高表达可抑制大鼠心房肌纤维化及缝隙连接蛋白43重构
目的 探讨谷氨酰胺(glutamine,Gln)诱导热休克蛋白70高表达对大鼠心房肌纤维化及缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)重构的影响及其机制.方法 40只SPF级雄性SD大鼠,体质量(180±20)g,随机数字表法随机分为对照组、二甲基亚砜(DMSO)组、盐酸异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)5 mg· kg-1·d-1组(模型组)、ISO5 mg· kg-1·d-1+内氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)0.75 mg·kg-1·d-1组(干预组)和ISO5 mg· kg-1·d-1+槲皮素(quercetin,QUE) 100 mg· kg-1·d-1 +Ala-Gln0.75 mg· kg-1· d-1+DMSO组(QUE组),每组8只大鼠.每组每天1次给予相应试剂,7d后处死大鼠.放射免疫法检测大鼠心房肌组织中血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)含量；苏木素伊红(HE)染色法观察大鼠心房纤维化情况；Masson染色法计算心房肌胶原容积分数；免疫组织化学SP法观察并半定量测定大鼠心房肌组织中热休克蛋白70(heat shock protein70,Hsp70)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶1/2/3(p-JNK1/2/3)、c-Jun及Cx43的含量.结果 DMSO组大鼠心房肌组织中 AngⅡ含量[(71.47±11.49) pg/L]与对照组[(68.51±10.76) pg/L]比较差异无统计学意义(P＞0.05),而模型组[(211.25±49.49) pg/L]、干预组[(185.32±54.85) ng/L]和QUE组[(189.90 ±42.12) pg/L]则均显著高于对照组(P均＜0.01) HE、Masson染色结果示对照组和DMSO组大鼠心房肌纤维化不明显[心肌胶原容积分数分别为(6.842±1.674)％ 和(7.108±1.343)％],模型组和QUE组则有明显的纤维化[心肌胶原容积分数分别为(29.485±9.966)％和(25.06 ±8.581)％],而干预组纤维化程度[心肌胶原容积分数为(7.861±1.867)％]较模型组和QUE组心房肌纤维化程度弱(心肌胶原容积分数比较P均＜0.01).对照组、DMSO 组、模型组和QUE组心肌组织 Hsp70含量比较差异均无统计学意义(分别为0.160±0.023、0.163±0.022、0.166±0.028和0.168±0.027,P均＞0.05),而干预组(0.215 ±0.018)则显著高于上述各组(P均＜0.01).DMSO组大鼠心房肌组织中p-JNK1/2/3和c-Jun含量(分别为0.154 ±0.021和0.164±0.024)与对照组(分别为0.151 ±0.016和0.163±0.022)比较差异均无统计学意义(P均＞0.05),而模型组(分别为0.202±0.025和0.254±0.044)、QUE组(分别为0.196±0.024和0.251±0.027)均显著高于对照组和DMSO组(P均＜0.01),而干预组(分别为0.160±0.025 和0.168±0.024)与对照组和DMSO组相比差异均无统计学意义(P均＞0.05),且显著低于模型组和QUE组(P均＜0.01). DMSO组大鼠心房肌组织中 Cx43含量与对照组比较差异无统计学意义(0.220±0.032比0.231 ±0.035,P＞0.05)且呈线性规律分布,而模型组(0.163 ±0.013)和 QUE组(0.165 ±0.024)则显著少于对照组(P均＜0.01)且分布无规律性,侧面分布相对增多,干预组(0.216 ±0.026)则较模型组、QUE组多(P均＜0.01)且分布较规律.结论 Gln诱导Hsp70高表达可减轻ISO诱发的大鼠心房肌纤维化程度和Cx43重构,机制可能与Hsp70下调p-JNK1/2/3和c-Jun表达、抑制JNK信号通路激活有关.
关键词： 心房 纤维化 谷氨酰胺 HSP70热休克蛋白质类 连接蛋白43 -
持续快速心房起搏对犬肺静脉及心房组织连接蛋白43和Ⅲ型胶原的影响
目的探讨持续快速心房起搏对犬肺静脉和心房组织连接蛋白43(Cx43)和Ⅲ型胶原的影响.方法 16只杂种犬,随机分为持续快速心房起搏组(8只)和正常对照组(8只),前者以400次/min的频率持续起搏10周,建立心房颤动(房颤)动物模型.分别取两组犬的左上肺静脉、左房游离壁和右心耳等部位的心肌组织进行Cx43的免疫荧光半定量分析和Ⅲ型胶原纤维定量分析.结果10周后快速心房起搏组所有犬均可诱发出持续性房颤.快速心房起搏组犬肺静脉、左房游离壁和右心耳部位的Cx43水平显著高于正常对照组犬各相应的部位(肺静脉:3370.91±275.11与1405.82±90.38, P<0.05;左房游离壁:2448.68±272.10与1467.12±147.93,P<0.05;右心耳:2331.96±199.61与1288.27±216.22, P<0.05).快速心房起搏组犬肺静脉Cx43的水平显著高于左心房游离壁和右心耳(P<0.05),而左心房和右心耳部位的Cx43水平差异无统计学意义 (P>0.05).持续快速心房起搏组犬肺静脉、左房游离壁和右心耳等部位的Ⅲ型胶原含量显著高于正常对照组犬各相应部位(肺静脉:3301.97±309.70与1404.56±178.02, P<0.05;左房游离壁:2477.86±190.43与1479.20±187.17, P<0.05;右心耳:2045.92±139.43与1417.07±139.43,P<0.05).持续快速心房起搏组犬肺静脉的Ⅲ型胶原含量显著高于左房游离壁(P<0.05),后者又显著高于右心耳(P<0.05).结论持续快速起搏心房可使肺静脉和心房组织的Cx43和Ⅲ型胶原纤维的水平增加,其中以肺静脉增加为明显,提示其在房颤的维持机制中具有关键作用.
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线粒体连接蛋白43参与缺血后处理对兔急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨线粒体连接蛋白43(connexin43,Cx43)和线粒体ATP敏感性钾通道(mitoK_(ATP)~+)在缺血后处理保护兔心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 新西兰大白兔64只,建立心肌缺血再灌注模型,给予冠状动脉左前降支30 min缺血,240 min再灌注.随机分为4组,每组16只:假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组和5-羟葵酸加缺血后处理组.测定血浆磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB),肌钙蛋白I(cTnI)含量以及心肌梗死面积,采用电子显微镜观测心肌线粒体结构变化,Western blot检测线粒体Cx43蛋白表达.结果 缺血后处理组心肌梗死面积为(19.1±3.9)%,明显低于缺血再灌注组(35.7±5.8)%,P＜0.01.再灌注4 h末血浆CK-MB与cTnI活性,缺血后处理组明显低于缺血再灌注组和5-羟葵酸加缺血后处理组(P＜0.01).与假手术组比较,其他各组线粒体均损伤明显(P均＜0.01);缺血后处理组线粒体损伤程度轻于缺血再灌注组(P＜0.01);缺血后处理组线粒体损伤程度明显轻于5-羟葵酸加缺血后处理组(P＜0.01).缺血再灌注组和5-羟葵酸加缺血后处理组线粒体Cx43蛋白表达均显著低于假手术组(P均＜0.05);缺血后处理组心肌线粒体Cx43蛋白表达明显高于缺血再灌注组(P＜0.05);缺血后处理组心肌线粒体Cx43蛋白表达明显高于5-羟葵酸加缺血后处理组(P＜0.05).结论 线粒体Cx43可能参与了缺血后处理的心肌保护作用,其机制可能与mitoK_(ATP)~+有关.
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全转录组芯片筛选肝癌组织中CX43的作用靶点
目的 运用全转录组芯片测序技术结合生物信息学筛选缝隙连接蛋白CX43的下游差异性表达基因并进行功能分析.方法 采用TransIntroTM EL将重组pCX43质粒转染至人肝癌SMMC-7721细胞,构建CX43过表达组,对照组仅转染空载质粒.采用RT-PCR、Western blot检测转染后细胞CX43 mRNA和蛋白的表达情况,两组CX43 mRNA和蛋白表达量比较采用t检验.运用全转录组芯片Clariomtm D Assays筛选CX43的下游差异表达基因;利用DAVID和STRING数据库对差异性表达基因进行基因功能、信号通路和蛋白相互作用分析,确定中心节点蛋白.采用Kaplan-Meier曲线和Cox回归分析靶点蛋白在生存预后中的价值.结果 过表达组CX43 mRNA和蛋白表达量分别为363±64、1.36±0.02,明显高于对照组的1、0.81±0.01(t=5.67,19.12;P<0.05).筛选CX43下游差异表达基因,其中上调基因394个,下调基因534个.STRING数据库分析出9个中心节点蛋白.Kaplan-Meier曲线和Cox回归分析显示,ENO1、RALA、SRC高表达患者总体生存率较差(HR=2.29,1.72,1.75;95％CI:1.61～3.27,1.20～2.46,1.22～2.53;P<0.05).结论 ENO1、RALA、SRC为CX43的下游作用靶点,3个靶点蛋白为生存预后的独立影响因素,靶点蛋白高表达患者生存预后差.
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不稳定膀胱与间隙连接相关性的实验研究
目的研究不稳定膀胱逼尿肌细胞间间隙连接蛋白(Cx)的改变,探讨其与不稳定膀胱发病机理的相关性.方法建立Wistar大鼠膀胱出口梗阻模型,行充盈性膀胱测压确定不稳定膀胱(USB)组13只,另设对照组10只.均为健康Wistar雌性大鼠,体重200～220 g.采用Western blot技术、双重标记的荧光免疫组织化学及激光共聚焦显微镜技术定量分析逼尿肌Cx43含量改变.结果Cx43蛋白条带在USB组和对照组均有表达,相对分子质量为43 000.USB组逼尿肌蛋白条带平均灰度值为31.066,对照组为11.701,2组差异有统计学意义(P＜0.01).激光共聚焦扫描观察Cx43表达主要出现在细胞与细胞连接处.USB组Cx43像素密度为29.5250±13.9176,荧光斑面积为(17.9290±8.8403)μm2,对照组Cx43像素密度为14.2140±2.1747,荧光斑面积为(5.7480±3.1075)μm2;两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论逼尿肌细胞间间隙连接蛋白增多引起兴奋传递的增强可能是不稳定膀胱发病的重要因素之一.
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AFP血清浓度及肝癌组织中Cx43的表达与肝癌根治切除后早期复发和预后的关系
目的 研究Cx43、CD105、VEGF在不同血清AFP(α-fetoprotein)浓度的乙型肝炎病毒性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达的关系以及Cx43的表达和RO切除术后复发和预后的关系.方法 应用组织芯片技术和免疫组织化学PV-6000两步法检测234例HBV相关HCC组织标本Cx43和CD105、VEGF的表达,应用RT-PCR检测20例HBV相关HCC标本Cx43mRNA的表达,并分析在不同血清AFP浓度下与Cx43的表达与CD105、VEGF的表达的关联以及与HCC患者根治切除术后的复发和预后的关系. 结果 免疫组织化学法和RT-PCR均检测到Cx43在HCC组织中表达,AFP＜ 400 μg/L的HBV相关HCC组织中Kaplan-Meier分析显示Cx43阳性表达者其1年复发、无瘤生存和总体生存均显著低于阴性表达组(Log Rank P =0.001,0.026,0.000),Cox回归分析表明Cx43阳性表达是HCC早期复发和预后(Log Rank P=0.049、0.035)的独立影响因子,Cx43阳性表达者CD105、VEGF低表达(P=0.018、0.023),并与组织分化程度(P =0.002),病灶数(P =0.033)血管癌栓(P =0.029)有关.结论 Cx43的表达与CD105、VEGF的表达相关,在AFP＜400 μg/L的HBV相关HCC的患者中Cx43阴性表达预示早期复发和不良预后.
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人真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-Cx43的构建及鉴定
目的构建人真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-Cx43,为研究连接蛋白Cx43在心肌细胞间通讯、心脏胚胎发育及心肌细胞分化中的作用机制提供物质基础.方法从质粒p18-T上用限制性内切酶BamH1、Xho1切下Cx43 cDNA片断,进行琼脂糖电泳,割胶回收纯化;限制性内切酶BamH1、Xho1酶切质粒pENTR11,将线形化的载体与回收的Cx43 cDNA片断用T4 DNA连接酶连接,测序后通过LR反应克隆到慢病毒载体pLenti6/V5-DEST中.结果凝胶电泳和测序结果均证明已将人类Cx43 cDNA克隆到慢病毒载体pLenti6/V5-DEST中.结论成功构建了人真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-Cx43.
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舒芬太尼和吗啡对缺血再灌注大鼠心肌Cx43及室性心律失常影响的比较
目的 比较舒芬太尼和吗啡预处理对大鼠心肌缺血/再灌注引发的室性心律失常的影响,以及对心肌连接蛋白43(Cx43)表达及分布的影响,初步探讨两者对Cx43的调节机制.方法 雄性SD大鼠32只随机分成4组:假手术组(C组)、缺血/再灌注组(I/R组)、吗啡预处理组(M组)和舒芬太尼预处理组(S组),每组8只.建立在体心肌缺血/再灌注模型,连续监测Ⅱ导联心电图、平均动脉压(MAP)和心率(HR).观察心电图,分析再灌注前30 min、后30 min室性心律失常发生情况并评分,免疫组化法检测缺血/再灌注区心肌Cx43表达及分布情况.结果 与C组相比,I/R组HR、MAP、率压积(RPP)显著下降(P＜0.05),心律失常评分显著升高(P＜0.05);与I/R组相比,M组及S组HR、MAP、RPP的下降程度均得到明显缓解(P＜0.05),心律失常评分也显著降低(P＜0.05);M组与S组HR、MAP、RPP均较接近(P＞0.05).与C组相比,I/R组心肌组织Cx43表达明显减少(P＜0.05),分布紊乱;与I/R组相比,M组及S组心肌组织Cx43表达相对增多(P＜0.05),分布较规律;M组与S组Cx43表达量接近(P＞0.05),分布相似.结论 舒芬太尼和吗啡均能通过抑制心肌Cx43表达减少,改善其分布,在再灌注时发挥抗心律失常作用.
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促肾上腺皮质激素释放激素、c-Fos及间隙连接蛋白43与分娩发动的相关性
目的 探讨促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、c-Fos和间隙连接蛋白43(Cx43)在足月妊娠子宫平滑肌细胞中的表达变化及其与分娩发动的相关性.方法 选择2006年2-9月在中南大学湘雅二医院住院的足月临产产妇30例(临产组),足月未临产产妇30例(未临产组),因宫颈上皮内瘤样病变行子宫切除术患者30例(对照组).应用放射免疫方法测定3组妇女静脉血中CRH的水平;用核酸原位杂交技术和免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法检测3组妇女子宫平滑肌细胞中c-Fos、Cx43 mRNA及其蛋白的表达水平.结果 (1)CRH水平在临产组产妇为(81.8±11.9)pmol/L,未临产组为(34.5±18.6)pmol/L,对照组为(1.3±0.7)pmol/L,临产组明显高于未临产组及对照组,未临产组明显高于对照组,差异均统计学意义(P＜0.05).(2)c-Fos mRNA及其蛋白的阳性染色主要定位于子宫平滑肌细胞核内,少量位于细胞质内;子宫平滑肌细胞中c-Fos mRNA及其蛋白表达水平,临产组分别为5.4±1.7及5.4±1.5,未临产组分别为4.1±0.9及3.9±0.9,对照组分别为1.0±0.4及1.2±0.4,临产组明显高于未临产组及对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);未临产组也明显高于对照组(P＜0.05).(3)Cx43 mRNA及其蛋白的阳性染色定位于子宫平滑肌细胞质内;子宫平滑肌细胞中Cx43 mRNA及其蛋白表达水平,临产组分别为5.5±1.4及5.6±1.3,未临产组分别为4.1±0.6及4.1±0.5,对照组分别为1.5±0.6及1.1±0.6,临产组明显高于未临产组及对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);未临产组也明显高于对照组(P＜0.05).(4)3组妇女的CRH水平与子宫平滑肌细胞中c-Fos mRNA及其蛋白的表达水平呈明显正相关(r1=0.61,r2=0.50;P＜0.05);与子宫平滑肌细胞中Cx43 mRNA及其蛋白的表达水平呈明显正相关(r3=0.52,r4=0.68;P＜0.05);子宫平滑肌细胞中c-Fos mRNA及其蛋白的表达水平与Cx43 mRNA及其蛋白的表达水平也呈明显正相关(r5=0.51,r6=0.60;P＜0.05).结论 产妇血浆中CRH水平、子宫平滑肌细胞中c-Fos和Cx43的表达与分娩发动有一定的关系,且3者间水平变化均呈明显正相关.
关键词： 分娩 产科 促肾上腺皮质素释放激素 原癌基因蛋白质c-fos 连接蛋白43 -
维甲酸对人子宫颈癌细胞系HeLa细胞间隙连接蛋白转导途径调控作用的研究
目的 探讨维甲酸对人子宫颈癌细胞系HeLa 细胞间隙连接蛋白（Cx）43信号转导途径的调控作用。方法 应用特异性钙指示剂（Fluo-3 AM）在激光扫描共聚焦显微镜下动态观察维甲酸作用后的细胞质内信号转导分子游离钙的分布及强度变化。采用流式细胞仪、结合蛋白印迹技术分析，检测外源信号分子对Cx43的表达以及蛋白酪氨酸磷酸化状态的影响。结果 HeLa细胞内游离钙经维甲酸作用后明显超载，细胞内游离钙浓度（［Ca2+］i） 由静息状态下的35.73 μmol/L上升至58.16 μmol/L。流式细胞仪分析，Cx43阳性细胞表达率由1.9%上升至26.3%。蛋白印迹技术分析，HeLa细胞出现Cx43酪氨酸磷酸化。结论 维甲酸对HeLa细胞Cx43信号转导途径的调控是在细胞质内游离钙的参与下，使Cx43阳性细胞表达率上升，并在酪氨酸位点出现明显的磷酸化作用下实现的。
