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阴道白假丝酵母菌酶活性影响因素的研究
目的:探讨外环境改变对阴道白假丝酵母菌酵母相和菌丝相的酶活性的影响.方法:收集标本50株菌株,用牛奶培养基和卵黄培养基法检测白假丝酵母菌酵母相与菌丝相分泌型酸性蛋白酶(SAP)和磷脂酶(PL)的酶活性;从中随机挑选20株菌株,分别用不同pH值的培养基检测其酵母相和菌丝相酶活性的改变;在不同乳杆菌浓度的环境下检测阴道白假丝酵母菌酵母相和菌丝相酶活性的变化.结果:酵母相和菌丝相磷脂酶的活性(PZ值)分别为0.546±0.132和0.471±0.119;分泌型酸性蛋白酶的活性(PA值)分别为0.605±0.125和0.568±0.086;菌丝相分泌型酸性蛋白酶和磷脂酶活性均显著高于酵母相(P＜0.001).pH=4时,白假丝酵母菌酶活性低,随着pH值增加,酶活性升高,至pH=7时酶活性降低.未添加乳杆菌组白假丝酵母菌酶活性高,逐渐增加乳杆菌浓度,酶活性随之降低.结论:菌丝相酶活性均高于酵母相;pH值可影响白假丝酵母菌酶活性的改变,过酸或过碱的环境均可抑制白假丝酵母菌酶活性;乳杆菌对白假丝酵母菌的酶活性有抑制作用,且对菌丝相的抑制作用较酵母相更强.
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白假丝酵母菌生物膜形态学及其耐药性研究
目的:(1)运用荧光显微镜及电镜观察不同阶段白假丝酵母菌生物膜的形态变化.(2)研究白假丝酵母菌生物膜形成过程中其耐药性的变化情况.方法:(1)用载玻片法建立白假丝酵母菌生物膜体外模型,通过荧光探针FITC-ConA标记,荧光显微镜及扫描电镜观察不同阶段生物膜的形态变化.(2)用美国临床实验室标准化委员会( NCCLS)微量稀释法检测白假丝酵母菌在游离状态、4h BF及48h BF状态下氟康唑的低抑菌浓度(MIC).结果:(1)白假丝酵母菌在盖玻片上能够形成典型的BF,通过荧光显微镜及扫描电镜可以看到白假丝酵母菌生物膜随着时间延长其细胞数量及细胞外多糖基质逐渐增多,48h已形成典型的生物膜结构.(2)白假丝酵母菌的耐药性随着生物膜成熟不断增强,其对抗氟康唑的MIC值大小依次为:48h BF＞4h BF＞游离状态,且三者之间的差异均有统计学意义.结论:(1)盖玻片法可以很好的构建生物膜体外模型,并可以通过荧光显微镜及扫描电镜检测.(2)白假丝酵母菌其耐药性随着生物膜的成熟逐渐增强.
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不同基因型别的阴道白假丝酵母菌黏附性的研究
目的:研究不同基因型别的阴道白假丝酵母菌黏附性的差异.方法:为阴道白假丝酵母菌进行25S rDNA基因分型,随机选取A、B、C型菌株各20株测定黏附率.结果:pH环境相同时(pH7.0或pH4.0),孢子相菌株A型黏附率显著高于B型(P＜0.05)和C型(P＜0.001),B型显著高于C型(P＜0.01),而菌丝相菌株各基因型别黏附率无统计学差异；孢子相菌株不合内含子组(A型)黏附率显著高于含内含子组(B型和C型)(P＜O.001),而菌丝相菌株两组间黏附率无统计学差异.结论:阴道白假丝酵母菌25S rDNA可转座Ⅰ型内含子与其黏附性密切相关.
关键词： 外阴阴道假丝酵母菌病 白假丝酵母菌 基因分型 二相性 黏附 -
1例血流感染白假丝酵母菌患者的病例分析
假丝酵母菌属包括81种,其中11种对人有致病性,常见的致病菌为白假丝酵母菌[1],又称为白色念珠菌,占80％～90％,该菌常定植在健康人的口腔、皮肤和胃肠道等部位,通常情况下并不致病.近年来,假丝酵母菌从血液中检出的比例不断增加,成为血流感染的主要病原菌之一.本文就1例ICU血流感染白假丝酵母菌患者的治疗进行分析,以探讨治疗药物选择的合理性.
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干酪乳酸杆菌代谢物对白假丝酵母菌生物被膜的体外抑菌效果及分子机制
目的：研究干酪乳酸杆菌代谢物对体外白假丝酵母菌生物被膜的抑菌作用及其机制。方法通过萃取、蒸馏的方式浓缩干酪乳酸杆菌代谢物。采用甲基四氮盐（XTT）减低法测定干酪乳酸杆菌代谢物对白假丝酵母菌YEM30游离态及生物被膜态的小抑菌浓度（MIC80），定量检测干酪乳酸杆菌代谢物对白假丝酵母菌体外代谢活动的影响，观察白假丝酵母菌形态学的转变，并通过双向凝胶电泳（2-DE）对比干酪乳酸杆菌代谢物处理前后白假丝酵母菌蛋白的表达差异。结果干酪乳酸杆菌代谢物对白假丝酵母菌的游离态、生物被膜态的小抑菌稀释倍数分别为1∶256和1∶128。稀释倍数为1∶256的干酪乳酸杆菌代谢物可以明显干扰白假丝酵母菌酵母相向菌丝相的转化。比较双向电泳图谱上获得6个显著蛋白斑点，对其中的4个进行鉴定，结果显示在干酪乳酸杆菌代谢物的刺激下，烯醇酶、苹果酸脱氢酶、泛素连接酶表达升高，己糖激酶表达下降。结论干酪乳酸杆菌代谢物对体外白假丝酵母菌生物被膜具有抑制作用。
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白假丝酵母菌对抗真菌药物敏感性分析
目的 了解院内白假丝酵母菌感染菌株对常用抗真菌药物敏感情况并探讨伊曲康唑对白假丝酵母菌生物膜形成的影响.方法 采用Rosco纸牌扩散法检测附属海慈医院临床分离的白假丝酵母菌对5种抗真菌药物的药物敏感性,采用96孔培养板进行白假丝酵母菌生物膜的培养,利用CCK-8试剂盒来检测生物膜不同时期的活性及对伊曲康唑的敏感性.结果 临床标本107例,检出白假丝酵母菌47例,感染率为43.9％.体外药敏试验显示临床株白色假丝酵母菌对抗真菌药两性霉素B和制霉素敏感性较高(45％、85％),而对康唑类抗真菌药物产生了耐药性.白假丝酵母菌生物膜形成早期(8h)生长较快,24h形成成熟稳定的生物膜,游离态的白假丝酵母菌对伊曲康唑的MIC50为2μg/mL,不同浓度伊曲康唑处理组生物膜活性均有所降低.结论 白假丝酵母菌对常用抗真菌药物的耐药性呈上升趋势.经抗菌性处理的生物材料对预防生物膜的形成有抑制作用.
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白假丝酵母菌假菌丝标本片的制作方法
目的 探讨白假丝酵母菌假菌丝的形成条件,制作成标本片,用于病原微生物学实验教学.方法 将白假丝酵母菌接种于改良Sabourand's培养基,置37℃真菌培养箱孵育1～2天,然后转种于改良1% Tween-80玉米粉培养基继续培养3～4天,制成标本片,染色,显微镜下观察.结果 假菌丝形成良好,形态完整.结论 该方法培养的白假丝酵母菌假菌丝阳性率高、形态完整、易于观察、效果较好.
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丁克阴道泡腾片治疗外阴阴道假丝酵母菌病疗效观察
外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)是常见的外阴、阴道炎症,国外资料显示,约75%的妇女一生中至少患过1次VVC,其中80%～90%的病原体为白假丝酵母菌.
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柠檬精油对变异链球菌及白假丝酵母菌生长及牙菌斑生物膜形成的抑制作用
目的 探讨柠檬精油对变异链球菌及白假丝酵母菌生长及牙菌斑生物膜形成的抑制作用.方法 采用MTT药敏试验检测不同浓度柠檬精油作用后变异链球菌和白假丝酵母菌的存活率,并记录低抑菌浓度.将离体牙片置入无菌唾液中,形成获得性膜后,放入变异链球菌或白假丝酵母菌悬液中培养.取出牙片,经不同浓度柠檬精油处理(变异链球菌作用后的牙片柠檬精油浓度分别为0.563、0.281、0.141、0.071 mg/mL,白假丝酵母菌作用后的牙片柠檬精油浓度分别为1.125、0.563、0.281、0.141 mg/mL),以不含柠檬精油的带菌培养基为阳性对照,记录洗脱液中的菌落数.结果 随着柠檬精油浓度的升高,变异链球菌、白假丝酵母菌的存活率均逐渐降低.柠檬精油对变异链球菌的低抑菌浓度为0.563 mg/mL,对白假丝酵母菌的低抑菌浓度为1.125 mg/mL.经0.563、0.281、0.141 mg/mL柠檬精油作用后变异链球菌洗脱液菌落数均低于阳性对照,经1.125、0.563、0.281 mg/mL柠檬精油作用后白假丝酵母菌洗脱液菌落数均低于阳性对照(P均＜0.05).结论 柠檬精油可抑制变异链球菌及白假丝酵菌的生长;柠檬精油亚抑菌浓度即可抑制变异链球菌及白假丝酵母菌在离体牙表面上形成生物膜.
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婴幼儿口腔感染白假丝酵母菌的耐药性分析
目的 探讨婴幼儿口腔感染白假丝酵母菌的药物敏感性,为临床治疗真菌感染提供依据.方法 用VITEK32型全自动细菌分析系统对我院2007～2009年临床分离的157株婴幼儿口腔感染白假丝酵母菌进行鉴定,药敏试验采用纸片扩散法,判断标准按NCCLS2006年版进行.结果 157株婴幼儿口腔白假丝酵母菌对氟康唑为敏感,敏感率为98.1%;其次为酮康唑96.8%、伊曲康唑86.0%;对咪康唑的敏感率低,仅为55.4%.结论 氟康唑应作为治疗婴幼儿口腔白假丝酵母菌感染的首选药物.
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白假丝酵母菌不同菌株对动物致病性的对比性观察
目的 观察白假丝酵母菌标准菌株(CCCMC1a、ATCC 14053)与临床分离菌株(C1-1,C1-2,C1-3 ,C1-4)对小鼠与家兔的致病情况,并探讨不同菌株对动物致病性与荚膜厚薄的关系.方法 小鼠及健康成年家兔按上述菌株不同分为CCCMC1a,ATCC 14053, C1-1,C1-2, C1-3 ,C1-4共6组,每组小鼠20只,家兔12只;将实验菌种沙保氏琼脂36 h培养物用生理盐水配成约含1×109个/ ml的菌悬液,家兔耳缘静脉注射,1～1.5 ml /只;对BALB/c小鼠腹腔注射,0.5 ml /只,于注射后6 h开始密切观察动物的反应,连续观察7 d,记录动物发病情况:发病天数、死亡天数及死亡动物数、动物死亡率、存活动物数等,比较不同菌株对动物的致病性.待实验动物死亡后,分别取家兔肾组织印片及小鼠腹腔液涂片进行Hiss荚膜染色镜检,用显微测微计测量荚膜层的厚度,各菌株随机计数40个酵母细胞的荚膜层的厚度值,取各菌株荚膜层厚度的均值进行比较,并且与菌株的动物致病性相联系,观察是否具有一定的规律性.结果 C1-2和C1-4相对于C1-1,C1-3,CCCMC1a,ATCC 14053来说,具有很强的动物致病性.标准菌株和临床分离菌株在家兔及小白鼠体内均可形成荚膜,荚膜层的厚度可因不同菌株和不同动物体内形成而有显著差异,P＜0.01或P＜0.05.结果 显示,兔肾感染灶的菌细胞较小鼠腹腔内菌细胞的荚膜明显宽厚,C1-1,C1-2, C1-3 ,C1-4组的兔肾感染灶的菌细胞及鼠腹腔内菌细胞的荚膜比CCCMC1a,ATCC 14053明显宽厚,其中对动物高致病性的C1-2和 C1-4的兔肾感染灶的菌细胞及鼠腹腔内菌细胞的荚膜为宽厚.结论 C1-2和C1-4具有很强的动物致病性,它们的荚膜与其它菌株相比较也更宽厚.荚膜可能是白假丝酵母菌的毒力因子,荚膜的宽厚与动物的致病性有着密切的联系.
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血清芽管实验检测白假丝酵母菌的药物敏感性
目的 了解泌尿生殖道感染白假丝酵母菌对黄连、黄芩、七叶一枝花和氟康唑注射液的敏感性,为临床有效控制其感染提供依据.方法 采用白假丝酵母菌芽管药敏试验法,测定黄连、黄芩、七叶一枝花的50%乙醇提取物和氟康唑注射液对从泌尿生殖道感染标本中分离出的52株白假丝酵母菌芽管的低抑制浓度.结果 黄连、黄芩、七叶一枝花的50%乙醇提取物和氟康唑注射液,在一定的浓度下对泌尿生殖道感染白假丝酵母菌芽管有明显的抑制作用,其抑制芽管的低浓度分别为1.25.5,2.5 mg/ml和0.125 mg/ml.结论 白假丝酵母菌芽管药敏试验法,可为I临床快速筛选敏感药物;黄连、黄芩、七叶一枝花的50%乙醇提取物和氟康唑注射液对白假丝酵母菌有较好的抗菌活性.
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白假丝酵母菌阴道炎小鼠模型的构建
目的: 构建白假丝酵母菌阴道炎小鼠模型,探索佳成模条件,以提供经济实用的白假丝醇母菌性阴道炎动物模型.方法: 采用昆明雌性小鼠,预先连续灌胃给予低、中、高剂量(0.001 5,0.015,0.15 mg/10 g)的戊酸雌二醇7 d后接种白假丝酵母菌建立阴道炎模型,并进行阴道灌洗液真菌载量和阴道组织病理观察.结果: 戊酸雌二醇低、中、高剂量组阴道灌洗液的菌落计数分别为124.67±19.01、217.67±22.50、282.00±27.87,高剂量组与中、低剂量组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).HE染色和PAS染色结果显示,戊酸雌二醇高剂量组有较多多形核粒细胞(PMNs)浸润及紫红色线状菌丝.结论: 戊酸雌二醇高剂量组造模方式为昆明小鼠白假丝酵母菌阴道炎模型的佳造模条件.
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白假丝酵母菌教学标本片制作体会
白假丝酵母菌的形态结构是其鉴别的主要依据之一,一般在组织内能够看到包括假菌丝和厚膜孢子在内的完整结构.为了在体外也看到其完整的结构,一般都是采用小培养或者湿片法来观看其形态结构,这些方法比较繁琐,也不适合大批量制备教学标本.笔者在长期的医学微生物学实验准备过程中,摸索出了一种简便易行的方法,既能观看到白假丝酵母菌生活状态的形态和结构特征,又能制成长期保存的染色标本片,以满足教学的需要.
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pvdQ基因在铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌形态抑制作用中的功能
目的 拟研究长链高丝氨酸内酯降解基因pvdQ在铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌形态抑制作用中的功能.方法 通过乙酸锂转化法构建CAI-4 HWP1-LacZ菌株,使用X-gal平板显色法检测3-oxo-C12-HSL对白假丝酵母菌形态转换的影响;观察与铜绿假单胞菌pvdQ高表达株、野生株PAO1共同培养时,白假丝酵母菌的形态变化,了解pvdQ基因在铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌形态抑制作用中的功能.结果 400 μg 3-oxo-C12-HSL即可完全抑制白假丝酵母菌的形态转换.铜绿假单胞菌pvdQ高表达株和野生株PAO1均可抑制白假丝酵母菌菌丝形成.pvdQ高表达株对白假丝酵母菌的形态抑制作用较野生株PAO1减弱.结论铜绿假单胞菌通过分泌信号分子3-oxo-C12-HSL,可抑制白假丝酵母菌形态转换.随着pvdQ表达增加,铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌的形态抑制作用减弱,即pvdQ基因在铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌形态抑制作用中起负性调节作用.其作用机制可能与pvdQ基因对3-oxo-C12-HSL的水解作用有关.
关键词： 白假丝酵母菌 铜绿假单胞菌 pvdQ基因 3-oxo-C12-HSL -
重组白细胞介素23抗小鼠系统性白假丝酵母菌感染的研究
目的 探讨重组白介素23在抗小鼠系统性白假丝酵母菌感染中的作用.方法 建立环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠系统性白假丝酵母菌感染动物模型,设置对照组(单纯白假丝酵母菌感染组)与处理组(白假丝酵母菌感染前注射重组白介素23).用平皿稀释法检测肾脏、脾脏组织菌落形成单位(CFU)数目;制作肾、脾脏组织病理学标本,评估其病理学分级;并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脾脏干扰素γ分泌水平.结果感染后2、3、7 d,处理组肾脏CFU值明显低于对照组(均P＜0.01);处理组脾脏组织CFU值也低于对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05).肾脏组织病理学评分处理组低于对照组,处理组较对照组感染程度减轻,差异有统计学意义(P＜0.01);脾脏组织病理学评分处理组也低于对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05).同时检测脾脏干扰素γ分泌水平处理组明显高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.01). 结论 重组白介素23在小鼠系统性白假丝酵母菌感染中具有保护作用.
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雌激素依赖的外阴阴道假丝酵母菌病小鼠模型中NF-κB、IL-1β和COX-2 mRNA的表达及意义
目的 观察NF-κB、IL-1β和COX-2 mRNA在雌激素依赖的外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)小鼠模型中的动态变化,探讨雌激素诱发VVC的可能机制.方法 采用雌性昆明种小鼠,预先皮下注射雌激素使其处于假发情状态,然后接种5×10(6)假丝酵母菌孢子构建VVC模型(EI组),并设置雌激素处理未感染组(E组)、未用雌激素处理感染组(I组)和空白对照组(C组).动态观察小鼠阴道灌洗液真菌载量计数(CFU),于接种后的不同时间点摘取小鼠阴道组织.分别采用原位杂交、免疫组化和ELISA检测其COX-2 mRNA、NF-κB的表达及IL-1β水平.结果 COX-2 mRNA在E组阴道组织的表达水平明显高于C组(P＜0.01),EI组表达水平高于其它3组;接种后第4、7、14天EI组及I组IL-1β水平均高于C组(P＜0.01),EI组在第4、7天高于I组(P＜0.01);E组NF-κB的阳性表达率从第4天开始就明显高于C组(P＜0.01),而EI组显著高于I组(P＜0.01).结论 在雌激素依赖的VVC小鼠模型中,雌激素激活阴道组织中NF-κB信号通路,上调COX-2的表达,与感染形成有关;而形成感染后,IL-1β和NF-κB相互作用使COX-2强表达则与感染持续有关.
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非甾体类抗炎药阿司匹林和消炎痛对白假丝酵母菌菌丝形成的影响
目的探讨阿司匹林和消炎痛对白假丝酵母菌菌丝形成的抑制效应.方法选择以10%小牛血清-RPMI1640培养液和微缺氧环境作为诱导菌丝生成的两个条件,检测0.5、1.0、2.0 mmol/L的消炎痛和阿司匹林对3株白假丝酵母菌芽管和菌丝生成的影响.结果 0.5、1.0、2.0 mmol/L消炎痛和阿司匹林的芽管生成率分别是(82.58±4.30)%,(29.25±4.97)%,(5.08±1.83)%和(83.25±2.09)%,(76.67±1.44)%,(74.67±1.97)%;0.5 mmol/L的消炎痛已有显著的菌丝抑制作用,1.0、2.0 mmol/L的消炎痛几乎可以完全抑制菌丝的生长;0.5、1.0、2.0 mmol/L的阿司匹林对菌丝生长无抑制作用.结论消炎痛能抑制白假丝酵母菌菌丝和芽管的生成,极有可能成为一种很有前途的治疗外阴阴道炎症的药物.
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白假丝酵母菌25SrDNA基因分型与粘附力的相关性
目的 调查白假丝酵母菌25SrDNA基因型分布,并分析白假丝酵母菌各基因型与粘附力之间的相关性.方法 收集76株白假丝酵母菌,转沙保罗氏培养液纯培养24 h,裂解法提取基因组DNA,用特异性引物扩增白假丝酵母菌25SrDNA基因,根据PCR产物电泳图谱进行基因分型;分别测定各基因型粘附力.结果 PCR产物电泳结果显示76例白假丝酵母菌可分为A、B、C 3种基因型(其中A型48例,B型8例,C 型20例).测序结果显示,B型和C型产物比A型产物多出1个379 bp的序列(Ⅰ类内含子).根据有无内含子将菌株分为无内含子组(A型)和有内含子组(B型+C型),无内含子组粘附力明显强于有内含子组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 白假丝酵母菌25SrDNA基因型与粘附力之间可能存在相关性,内含子的插入可能影响白假丝酵母菌的粘附力.
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大蒜提取液的杀菌效果观察
目的:了解大蒜提取液对青霉菌,新型隐球菌和白假丝酵母菌的抑制作用.方法:使用K-B法对大蒜提取液对青霉菌、新型隐球菌和白假丝酵母菌的抑菌环直径进行测量.然后采用棋盘法分组对大蒜提取液联合环丙沙星对铜绿假单胞菌PAO1、PAO-JP2生物被膜细菌的影响进行实验测试,并进行比较分析.结果:大蒜提取液对青霉菌、新型隐球菌和白假丝酵母菌的抑制作用效果强弱依次为新型隐球菌、白假丝酵母菌和青霉菌.结论:大蒜提取液对青霉菌、新型隐球菌和白假丝酵母菌都有较强的抑制作用.其与环丙沙星联用,可以增强对铜绿假单胞菌PAO1、PAO-JP2生物被膜细菌的杀菌效果.
