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舒胸方在Caco-2细胞单层模型的转运研究
舒胸方(三七、川芎和红花)具有活血化瘀、通络止痛功效,该文研究舒胸方在Caco-2细胞单层模型的转运特征.采用MTT法确定舒胸方对Caco-2细胞单层模型作用的安全浓度范围;采用Caco-2细胞单层模型探讨舒胸方对地高辛吸收转运的影响;采用HPLC测定并计算地高辛表观渗透系数Papp.结果显示,从顶侧(AP)到底侧(BL) (AP→BL),三七提取液、红花提取液、川芎提取液、(川芎+红花)混合提取液及舒胸方复方提取液表观渗透系数(Papp)分别为(3.12±0.73)×10-6,(2.58±0.41)×10-6,(4.97±0.64)×10-6,(4.63±0.57)×10-6,(5.79±0.68)×10-6 cm·s-1,表明地高辛在Caco-2单层细胞膜转运中主要以主动吸收为主,且需要P-gp蛋白参与;川芎的加入能显著降低地高辛BL→AP方向的转运(P＜0.01),且能显著增加地高辛AP→BL方向的转运(P＜0.05);舒胸方提取液加入后,BL→AP方向地高辛转运受到显著抑制(P＜0.01).研究结果提示,红花提取液不影响P-gp蛋白转运也未对地高辛自主扩散产生影响;川芎提取液和舒胸方提取液均显著降低了地高辛BL→AP方向的转运;三七对地高辛自主扩散并无影响;川芎红花混合提取液与川芎提取液实验结果类似.
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含扶正解毒汤药血清对白血病K562/A02耐药细胞的抑制作用及初步机制
目的:探讨含扶正解毒汤药血清对白血病耐药细胞株K562/A02的抑制效果及可能的机制.方法:采用MTT法检测含扶正解毒汤药血清对K562/A02耐药细胞的生长抑制率,流式细胞技术测定含扶正解毒汤药血清处理各组K562/A02细胞后的凋亡情况,QPCR法检测BCL-2 mRNA的表达,Western blot方法检测BCL-2蛋白的表达,流式细胞技术测定细胞膜P-gp蛋白的表达.结果:MTT细胞毒实验结果表明含扶正解毒汤药血清具有抑制k562/A02细胞生长的效果,且抑制率呈药物浓度相关性;流式细胞检测结果表明含扶正解毒汤药血清可以诱导k562/A02耐药细胞的凋亡,凋亡率呈药物浓度相关性;Q-PCR结果显示,含扶正解毒汤药血清可以下调K562/A02细胞BCL-2蛋白的表达;流式细胞检测结果表明,含扶正解毒汤药血清可下调K562/A02细胞膜P-gp蛋白的表达.结论:含扶正解毒汤药血清可以促进K562/A02耐药细胞的凋亡,其诱导细胞凋亡的机制可能与抑制BCL-2蛋白和P-gp蛋白的表达有关.
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中药复方君子汤联合环孢霉素A逆转白血病细胞諯562/VCR耐药性的实验研究
本研究观察中药复方君子汤(FFJZ)联合环孢霉素A(cyclosporine A,CsA)逆转白血病耐药细胞系K562/VCR细胞耐药性的效果,以便寻找有效的联合逆转剂.采用MTT法、流式细胞术研究FFJZ联合CsA逆转白血病耐药细胞系K562/VCR耐药性的作用.结果表明:FFJZ联合CsA在体外对K562/VCR细胞的耐药性有明显的逆转作用(p＜0.01),能提高K562/VCR细胞对阿霉素(ADM)的敏感性,且在药物有效浓度范围内对细胞本身无毒性作用.FFJZ联合CsA对K562/VCR细胞的P-gp表达的阳性率无明显影响.结论:复方君子汤联合环孢霉素A可能成为治疗白血病多药耐药的安全有效的耐药逆转药物.
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洛贝林逆转胃癌细胞SGC7901/VCR多药耐药的作用
目的:探讨哌啶类生物碱洛贝林(Lobeline)能否逆转人胃癌多药耐药细胞株SGC7901NCR的多药耐药,并进一步探讨洛贝林逆转其多药耐药的机制,评估其有效性.方法:以人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR为研究对象,用四氮唑蓝(MTT)法分别测定在无和有洛贝林(细胞无毒浓度10 μmol/L)作用下多药耐药细胞株SGC7901/VCR对VCR及5-Fu的半数生长抑制率,并由此求其耐药逆转的倍数:RT-PCR分别检测在无和不同终浓度洛贝林(5、10、20、50、100 μmol/L)作用下多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药基因MDR1 mRNA表达情况；Western blot 分别检测在无和不同终浓度洛贝林(5、10、20、50、100 μmol/L)作用下多药耐药细胞株SGC7901/VCR的P-gp蛋白表达.结果:在洛贝林无毒作用浓度(10 μmol/L)作用下,多药耐药细胞株SGC7901/VCR对化疗药的敏感性增加,VCR对耐药细胞株的IC50由原来的16.55 μg/L±0.13 μg/L变成7.27μg/L±0.65 μg/L,逆转指数约为2.28; 5-Fu 对耐药细胞株的IC50由原来的11.01 μg/L±0.43 μg/L变成9.53μg/L±0.79 μg/L,逆转指数约为1.16; RT-PCR检测示多药耐药细胞株SGC7901/VCR呈现MDR1 mRNA高度表达,随洛贝林终作用浓度的增大,MDR1 mRNA表达逐渐下降,各组间差距有统计学意义(P＜0.05)；Western blot检测表明多药耐药细胞株SGC7901/VCR高度表达P-gp蛋白,随洛贝林作用终浓度依次增加P-gp蛋白表达依次减弱,组间呈浓度依赖性,差别有统计学意义(P＜0.05).结论:无细胞毒作用浓度的洛贝林可以逆转胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药,增强VCR和5-Fu的化疗敏感性.洛贝林对SGC7901/VCR细胞多药耐药的逆转可能机制为抑制P-gp蛋白的表达.
关键词： 洛贝林 SGC7901/VCR细胞株 多药耐药 P-gp蛋白 -
非小细胞肺癌MDR-1型化疗耐药的诊断及逆转的研究
目的探讨非小细胞肺癌MDR-1型化疗耐药的诊断方法及逆转方法.方法采用免疫组化+微波抗原修复技术,用于检测MDR-1的表达产物P-gp蛋白,对48例阳性者采用随机配对分组,采用他莫昔芬120mg bid+异博定120mg tid+川芎嗪120mg ivdrip qd联合逆转耐药,自化疗前3天开始,持续至此化疗结束后4天.结果治疗组比对照组有效率提高33.3%.有显著性差异.结论采用免疫组化法+微波抗原修复术用于非小细胞肺癌P-gp的检测是可行的;采用超大剂量他莫昔芬+中剂量异博定+川芎嗪逆转耐药疗效满意,毒副反应可耐受.
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胃癌组织中p53,p16和P-gp蛋白的表达及其与病理学行为的相关性
[目的]探讨胃癌组织中p53,p16和P-gp蛋白的表达及其与病理学行为的相关性.[方法]利用免疫组织化学方法检测121例胃癌和39例正常胃组织中p53,p16和P-gp蛋白的表达水平.[结果]121例胃癌组织中p53,p16和P-gp蛋白的阳性表达率分别为74.4％,19.8％和47.9％,在39例正常胃组织中分别为0％,76.9％和15.4％;与正常组织比较,胃癌组织中p53,p16和P-gp蛋白阳性表达率差异均具有统计学意义(P＜0.001).胃癌病理学行为相关性研究结果显示,胃癌组织中p53,p16和P-gp蛋白的阳性表达率与性别、年龄及肿瘤大小无相关性(P＞0.05),而与胃癌病理学分级、浸润程度、淋巴结转移及远处转移具有显著相关性(P＜0.05).[结论] p53,p16和P-gp蛋白在胃癌发生、发展过程中起重要作用;p53,p16和P-gp蛋白可作为胃癌诊断及预后判定的指标.
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头颈鳞癌p53、Bcl-2及P-gp表达在治疗中的作用
目的 检测突变型p53、Bcl-2及P-gp蛋白在头颈鳞癌中的表达,探讨其在治疗中的作用.方法 97例头颈鳞癌中口咽癌18例、下咽癌27例、声门上喉癌52例,采用S-P法检测癌组织中p53、Bcl-2及P-gp蛋白表达,并结合治疗结果进行统计分析.结果 突变型p53、Bcl-2及P-gp蛋白在头颈鳞癌中的阳性表达率分别为69.07%、46.39%、50.52%.突变型p53蛋白阳性与阴性累计五年生存率分别为38.43%和75.86%.P-gP蛋白阳性与阴性分别为35.23%和63.15%,两者对比有统计学意义(P＜0.05).在单纯手术和术后放疗、化疗两组中,突变型p53蛋白阳性与阴性的五年生存率分别为40.77%和80.00%、25.63%和61.90%,对比均有统计学意义(P＜0.05).术后放疗、化疗组中Bcl-2和P-gp蛋白阳性与阴性的五年生存率分别为23.35%和48.83%、31.43%和60.53%,差别有统计学意义.结论 突变型p53、Bcl-2、P-gp蛋白阳性表达是抵抗放疗或化疗的生物学指标,在预测放疗、化疗敏感性方面有一定作用.
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一种针对mdr1基因的寡核苷酸-阿霉素偶联物:对KB-A-1细胞的毒性及其抑制P-gp蛋白表达的效果
目的:癌细胞膜上P-gp糖蛋白的过量表达是肿瘤多药抗性的主要机制.人体内编码P-gp糖蛋白的基因中仅有mdr1涉及多药抗性.本研究中设计了针对mdr1的反义核酸与阿霉素的偶联物,并且对其细胞毒性进行了考察.同时对偶联物对人表皮癌细胞株KB-A-1内的P-gp蛋白的表达也做了分子水平上的研究.方法:使用MTT法考察偶联物对KB-A-1细胞的毒性.用HPLC考察偶联物对细胞内阿霉素的积累量的影响.对于P-gp蛋白表达的变化,主要是通过RT-PCR及WestemBlot方法进行了研究.结果:偶联物的细胞毒性比寡核苷酸高.在低剂量的偶联物(0.5 μm0l·L-1)的作用下,细胞对阿霉素的敏感性提高.偶联物能有效的提高细胞内阿霉素的积累量.并且从RT-PCR及WesternBlot看,偶联物处理后的细胞内P-gp表达少.结论:选用合适的基团,对反义核酸进行结构修饰能够较好的增强反义核酸的性能.采用阿霉素作为偶联基团尽管增强了细胞毒性,但是在更大程度上增强了其抑制P-gp蛋白的效力,提高了肿瘤耐药性的逆转倍数,具有一定的潜在应用价值.
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罗格列酮逆转丝裂霉素对人胃癌 SGC7901／VCR祼鼠移植瘤耐药作用的研究
目的：探讨 PPARγ激动剂罗格列酮（ ROS ）逆转人胃癌 SGC7901／VCR 细胞裸鼠移植瘤对丝裂霉素（ MMC）的耐药作用及其可能机制。方法建立人胃癌SGC7901／VCR细胞裸鼠移植瘤模型，将48只裸鼠随机分为6组：空白对照组（生理盐水0．2 ml）、MMC组（ MMC 2．5 mg／kg）、ROS组（ ROS 100 mg／kg）、MMC＋ROS中剂量组（ MMC 2．5 mg／kg＋ROS 50 mg／kg）、MMC＋ROS高剂量组（MMC 2．5 mg／kg＋ROS 100 mg／kg）、MMC＋CSA组（MMC 2．5 mg／kg＋CSA 50 mg／kg）。每组8只裸鼠；用药40天后，观察各组裸鼠体重和移植瘤体积变化，计算抑瘤率，绘制移植瘤的生长曲线；Western-blot法检测P-gp和MGr1-Ag蛋白的表达。结果空白对照组、MMC组移植瘤瘤体积和抑瘤率差异无显著性，ROS组、MMC＋ROS中剂量组、MMC＋ROS高剂量组组、MMC＋CSA组与空白对照组、MMC组比较，移植瘤瘤体积和抑瘤率差异有显著性。空白对照组、MMC组中P-gp、MGr1-Ag蛋白表达强，ROS组、MMC＋ROS中剂量组、MMC＋ROS大剂量组、MMC＋CSA组与空白对照组和MMC组P-gp、MGr1-Ag蛋白表达比较有统计学意义（ P＜0．05），MMC＋ROS大剂量组、MMC＋CSA组中其表达弱，组间差异无统计学意义（P＞0．05）。结论罗格列酮可抑制人胃癌SGC7901／VCR细胞祼鼠移植瘤瘤体生长，罗格列酮可下调人胃癌SGC7901／VCR细胞裸鼠移植瘤组织中P-gp和MGr1-Ag蛋白的表达。罗格列酮可部分逆转人胃癌SGC7901／VCR细胞祼鼠移植瘤对丝裂霉素的耐药性。
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乳腺癌耐药细胞株中 P-gp、CD147和 E-cadherin 表达的意义
目的：探讨乳腺癌耐药细胞株中P-gp、CD147和E-cadherin表达的意义。方法采用Western blot 方法，比较不耐药细胞、药物诱导的耐药细胞和mdr1基因导入的耐药细胞中P-gp、CD147和E-cadherin（E-cd）表达的差异性。结果 P-gp在不耐药细胞中表达很弱，而在两株耐药细胞中均呈高表达。 CD147在药物诱导的耐药细胞中表达增强，分子量较小。而E-cd在药物诱导的耐药细胞中表达缺失。结论药物诱导和基因转入均能造成乳腺癌细胞产生多药耐药，而CD147和E-cd在三株乳腺癌细胞中的表达差异与mdr1基因或P-gp蛋白表达并无直接关系，其内在的关系及临床意义值得深入探讨。
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逆转胶囊含药血清对人乳腺癌耐药株MCF-7/ADR细胞P-gp蛋白表达的影响
目的 探讨逆转胶囊在乳腺癌多药耐药中的应用.方法 应用流式细胞技术,测定逆转胶囊含药血清对人乳腺癌耐药株MCF-7/ADR细胞P-gp蛋白表达的影响.结果 阿霉素单用对P-gp表达无明显影响,其余各处理组与对照组(正常鼠血清组)比较P-gp的荧光表达率均有所下降;逆转胶囊含药血清能显著抑制MCF-7/ADR细胞P-gp表达;阿霉素与10%含药鼠血清合用,对人乳腺癌耐药MCF-7/ADR细胞P-gp蛋白表达的抑制效果良好,P-gp荧光表达率的下降幅度大,与异博定+阿霉素+10%正常鼠血清组无明显差异.结论 逆转胶囊含药血清能显著抑制MCF-7/ADR细胞P-gp表达;并有耐药逆转作用.
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慢性粒细胞白血病急性变患者骨髓细胞P-gp和bcl-2蛋白表达水平的研究
我们对24例慢性粒细胞白血病急性变(慢粒急变)患者骨髓细胞多药耐药糖蛋白P-gp和bcl-2蛋白表达水平进行了初步研究,现将结果报告如下.
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两种人大肠癌多药耐药株的建立及耐药性比较
目的 比较递增药物质量浓度持续作用、恒定药物质量浓度周期作用两种方法 建立的人大肠癌多药耐药细胞株的耐药性.方法 用递增药物质量浓度持续作用、恒定药物质量浓度周期作用方式分别建立人大肠癌5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)多药耐药细胞亚系L2和L3,MTT检测两种细胞株的耐药指数,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因mRNA表达,Western blot检测p-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达.结果 递增药物质量浓度持续作用法诱导8个月后,细胞可以在含2.5μg/mL 5-Fu的培养液中正常生长,对5-Fu的耐药指数为26.53,对该细胞亚系命名为L2;以含2.5μg/mL 5-Fu的培养液进行筛选,6个月后细胞能稳定生长,所得细胞亚系命名为L3,其对5-Fu的耐药指数为13.78.与L2相比,G1期细胞数量较少,细胞凋亡较多,MDR1 mRNA转录水平和P-gp表达相对较低.结论 大肠癌LOVO细胞株经递增药物质量浓度持续作用、恒定药物质量浓度周期作用两种诱导方式作用后,成功建立的人大肠癌5-Fu多药耐药细胞亚系L2和L3均可产生MDR;其耐药机制可能与MDR1 mRNA和P-gp的过表达有关.两种方法 建立的肿瘤多药耐药模型在耐药性上有一定差异.
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P53、P-gp蛋白在卵巢癌组织中的表达及意义
目的 探讨P53、P-糖蛋白(P-gp)在卵巢癌组织中的表达与化疗疗效及预后的关系. 方法 采用SP免疫组化法检测53例卵巢癌组织石蜡标本P53、P-gp的表达情况,并分析其与卵巢癌患者化疗疗效及预后的关系.53例卵巢癌患者中Ⅰ期6例、Ⅱ期14例、Ⅲ期23例、Ⅳ期10例. 结果 Ⅰ-Ⅱ期组P53、P-gp的阳性率(35.0%、40.0%)分别低于Ⅲ-Ⅳ组P53、P-gp的阳性率(72.7%、78.8%)( P<0.05).P53、P-gp 阳性表达的患者化疗的有效率分别为35.5%和35.3%,而阴性患者化疗的有效率分别为81.8%、89.5%(P<0.05).P53、P-gp的阴性、阳性表达在Ⅲ-Ⅳ患者的2年及3年生存率之间差异均有显著性(P<0.05). 结论 P53、P-gp 的表达与卵巢癌组织化疗耐药及预后存在相关性, P53、P-gp蛋白表达可作为卵巢癌化疗耐药和预后的检测指标.
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5-Fu抗结肠癌作用与细胞凋亡及P-gp蛋白表达的关系
目的探讨5-氟尿嘧啶(5-Fu)抗结肠癌作用中,细胞凋亡与P-gp(P-glycoprotein)蛋白表达的关系.方法应用琼脂培养MTT法,测定人结肠癌对抗代谢药的药物敏感性,同时观察5-Fu对结肠癌病人手术前化疗疗效;用S-P免疫组化和图像定量分析技术,测定34例人结肠癌组织中P-gp蛋白表达量;采用末端标记法(TUNEL),检测结肠癌细胞的凋亡指数.结果 (1)P-gp蛋白表达量与5-Fu抗药指数呈正相关(r=0.675,P<0.05).(2)凋亡率与5-Fu抗药指数呈负相关(r=-0.53,P<0.05).(3)以5-Fu抗药指数1.0为界,>1为耐药组,<1为敏感组,两组间P-gp蛋白表达量、凋亡指数差异均有显著性(P<0.05).结论 5-Fu通过诱导细胞凋亡产生抗结肠癌作用,而P-gp蛋白高表达阻碍5-Fu诱导的凋亡.
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B超弹性成像监测下应用吉西他滨耐药乳腺癌细胞4T1构建裸鼠乳腺癌肝转移模型
目的 构建吉西他滨耐药乳腺癌细胞4T1耐药株并建立裸鼠乳腺癌肝转移模型.方法 采用低浓度加量持续诱导法,诱导吉西他滨耐药乳腺癌细胞4T1耐药株,命名为4T1/Gem;CCK-8法测定4T1与4T1/Gem细胞的增殖抑制率,计算耐药指数;Western blot法检测细胞P-gp蛋白表达;B超引导下注射4T1/Gem细胞悬液诱导裸鼠肝脏成瘤;HE染色观察肿瘤组织病理情况,免疫组化法检测瘤组织ER、PR、HER2、Ki-67和P-gp蛋白的表达.结果 经过14个月的诱导成功建立4T1/Gem细胞株,可在含40μg/mL的Gem培养液中稳定生长.4T1/Gem细胞耐药指数为4T1细胞的788.547倍.与亲代相比,4T1/Gem处于G1期和G2期的细胞增加,S期细胞减少;上调P-gp蛋白的表达.4T1/Gem细胞成功建立裸鼠乳腺癌肝转移模型,瘤组织中ER、PR、HER2蛋白阴性表达,Ki-67阳性10％和P-gp蛋白阳性表达.结论 成功构建吉西他滨耐药乳腺癌细胞4T1耐药株并建立裸鼠乳腺癌肝转移模型,为开发治疗乳腺癌肝转移化疗耐药的药物提供实验基础.
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肾细胞癌中P-gp、GST-л和TOPOⅡ的表达及其意义
目的:探讨多药耐药(MDR)基因产物P糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST-л)和DNA拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)在肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)组织中的表达及临床意义.方法:采用免疫组化S-P方法检测45例肾细胞癌组织和10例正常肾组织中P-gp、GST-л和TOPOⅡ蛋白的表达情况.结果:①90%的正常肾组织近曲小管上皮细胞膜和/胞质有P-gp表达;P-gp、GST-л和TOPOⅡ蛋白在肾细胞癌组织中的阳性表达率分别为77.8%,71.1%和31.1%.P-gp、GST-л和TOPOⅡ阳性表达与肾细胞癌组织学分型、组织学分级、肿瘤大小及有无脉管浸润转移均无关(P>0.05);②两种MDR基因产物的共表达率为51.1%,两种或两种以上MDR基因产物的共表达率为71.1%,均明显高于单独基因的表达率15.6%(P-gp)和8.9%(TOPOⅡ).GST-л表达均伴有P-gp和/或TOPOⅡ的表达;P-gp表达和GST-л表达呈明显正相关(P<0.01).TOPOⅡ表达与P-gp、GST-л表达均无相关性(P>0.05).结论:P-gp、GST-л蛋白高表达和TOPOⅡ蛋白低表达在肾细胞癌的多药耐药中起重要作用,多基因联合检测有助于判断术后化疗疗效.
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P-gp、GST-Л、TOPOⅡ在肺癌中的表达及意义
目的:探讨多药耐药基因(MDR)产物在肺癌组织中的表达及其相互关系.方法:采用免疫组化S-P方法检测60例肺癌组织中MDR基因产物(P-gp、GST-Л和TOPOⅡ)的表达情况.结果:①肺癌组织中的P-gp、GST-Л和TOPOⅡ阳性表达率分别为63.3%、66.7%和50.0%.GST-Л和P-gp在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达率分别为75%和70.8%,在小细胞肺癌(SCLC)中的表达率均为14.3%,两者比较均有显著性差异(P<0.05).GST-Л和P-gp在腺癌的表达明显高于鳞癌(P<0.01);TOPOⅡ在腺癌组的表达率明显低于鳞状细胞癌组和小细胞癌组(P<0.05).②两种或两种以上MDR基因产物的共表达率为80%,明显高于单独基因的表达率11.7% (P-gp)和13.3%(TOPOⅡ).GST-Л表达均伴有P-gp和/或TOPOⅡ的表达;P-gP表达和GST-Л表达呈明显正相关(P<0.01).TOPOⅡ表达与P-gp、GST-Л表达均呈显著负相关(P<0.01).结论:P-gp、GST-Л和TOPOⅡ在肺癌组织中的表达对肿瘤的耐药起重要作用,单基因和多基因协同作用,以多基因共表达作用为主.
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人原发性肝细胞癌中锌指蛋白A20、NF-κBp65及多药耐药P-gp蛋白的表达
目的 检测锌指蛋白A20、NF-κB p65蛋白及P-gp蛋白在人原发性肝细胞癌和癌旁组织中的表达,比较两者之间的差异,并探讨其与肝细胞癌临床病理学特征的关系.方法 收集2009年2月至2010年8月期间于华西医院肝脏及血管外科行手术切除的32例原发性肝细胞癌患者的肝癌组织标本及对应的癌旁组织26例,行免疫组织化学染色,同时收集患者完整的临床病理学资料.结果 锌指蛋白A20、NF-κB p65蛋白及P-gp蛋白在原发性肝细胞癌组织中的表达阳性率分别为87.5％ (28/32)、81.3％ (26/32)及65.6％ (21/32),高于癌旁组织中的61.5％ (16/26)、34.6％ (9/26)及30.8％ (8/26),P＜0.05.锌指蛋白A20的表达与乙肝表面抗原(HbsAg)表达情况及肝硬变情况有关(P＜0.05);NF-κB p65蛋白和P-gp蛋白的表达均与HbsAg表达情况有关(P＜0.05).结论 锌指蛋白A20、NF-κ3 p65蛋白及P-gp蛋白在原发性肝细胞癌组织中均呈高表达,而在癌旁组织中呈低表达;3种蛋白可能对肝脏肿瘤的良恶性判断起指导作用.
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MDR1及MDR3基因沉默对紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol凋亡能力的影响
目的:探讨采用RNA干扰技术沉默多药耐药基因MDR1及MDR3后对卵巢癌紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol凋亡能力的影响.方法:将MDR1和MDR3的siRNA重组质粒转染A2780/Taxol,通过MTT法、流式细胞术、免疫荧光法及Western blot方法分别检测细胞对紫杉醇的敏感性、细胞周期和凋亡率、细胞中caspase-3的活性及MDR编码的P-gp蛋白的表达的变化.结果:转染SiRNAs重组质粒后,A2780/Taxol对紫杉醇敏感性的相对逆转率分别为64.3%及53.9%,细胞凋亡率由1.59%分别增加到9.43%和8.66%,细胞中caspase-3活性增强,P-gp蛋白含量明显减少,与对照组比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MDR1和MDR3的siRNA质粒可通过诱导卵巢癌紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol凋亡,恢复其对紫杉醇的敏感性.
