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心肾综合征中硫酸吲哚酚对巨噬细胞吞噬氧气型低密度脂蛋白的诱导作用的研究
目的 探讨硫酸吲哚酚(IS)对RAW264.7巨噬细胞吞噬氧气型低密度脂蛋白(ox-LDL)的诱导作用及其作用机制.方法 0、10、50、100、200和400μmol/L IS处理RAW264.7细胞24 h,采用CCK-8法测定RAW264.7细胞存活率,流式细胞术测定RAW264.7细胞的Dil标记氧化型低密度脂蛋白(Dil-ox-LDL)吞噬量.200μmol/L IS处理RAW264.7细胞0、12、24、36和48h,测定RAW264.7细胞存活率和Dil-ox-LDL吞噬量.IS组RAW264.7细胞用200μmol/L IS处理24 h,UO126+IS组RAW264.7细胞以5μmol/L UO126预处理2h后再200μmol/L IS处理24 h,测定非处理组、IS组和UO126+IS组RAW264.7细胞存活率和Dil-ox-LDL吞噬量,并采用蛋白质印迹法(Western blot)检测在IS刺激15 min时的ERK1/1蛋白表达情况.结果 IS对RAW264.7细胞存活率的浓度效应和时间效应检测中,不同组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).Dil-ox-LDL吞噬量与IS浸润浓度及处理时间均呈正相关(P＜001).IS组的Dil-ox-LDL吞噬量和磷酸化ERK1/2蛋白表达量均明显高于非处理组(P＜0.01).UO126+IS组的Dil-ox-LDL吞噬量略低于非处理组,但差异无统计学意义(P＞o.05);磷酸化ERK1/2蛋白表达量大幅低于非处理组,差异有统计学意义(P＜0.01).UO126+IS组同IS组比较,Dil-ox-LDL吞噬量和磷酸化ERK1/2蛋白表达量均呈现大幅降低(P＜0.01).结论 IS可在体外直接诱导RAW264.7巨噬细胞吞噬ox-LDL,该效应经由活跃MAPK信号转导通路实现,且随IS浓度升高和浸润时间延长而增强.
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血液透析患者便秘情况及其相关因素分析
目的 对慢性肾脏病(CKD)维持血液透析(HD)患者便秘的发生情况及其相关因素进行调查.方法 根据Rome Ⅲ诊断标准制作调查表,选取2016年3月该院行HD患者进行问卷调查,了解其便秘的发生情况,并探讨其相关因素.结果 共调查206例HD患者,193例应答,应答率为93.7%;便秘发生率为34.2%.单因素分析结果显示,HD充分性(Kt/V)、血清硫酸吲哚酚(IS)水平、每日蔬菜摄入量、进食蔬菜、水果及运动习惯与HD患者便秘相关.逐步多因素Logistic回归分析提示,IS水平[O^R=1.051(95%CI:1.009, 1.095)]和Kt/V[O^R=0.264(95%CI:0.074,0.945)]是HD患者发生便秘的主要影响因素.结论 HD患者有较高的便秘发生率.IS蓄积是HD患者发生便秘的危险因素,而较高的Kt/V则是保护因素.
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NF-κB途径介导硫酸吲哚酚抑制THP-1源性巨噬泡沫细胞SR-B1的表达
目的 观察尿毒症毒素硫酸吲哚酚(IS)是否促进巨噬泡沫细胞脂滴的蓄积,以及对细胞内B类1型清道夫受体(SR-B1)表达和核因子NF-κB活化的影响.方法 体外佛波酯(PMA)诱导人源单核细胞系THP-1分化为巨噬细胞,加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)培养促进巨噬细胞泡沫化,随后以不同浓度的IS干预巨噬泡沫细胞,油红O染色观察细胞内脂滴变化,实时PCR和Western blotting检测SR-B1 mRNA和蛋白表达的水平,ELISA法检测NF-κB活化情况;经NF-κB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)预处理后IS再干预,实时PCR检测巨噬泡沫细胞内SR-B1 mRNA表达的变化.结果 与对照组(IS 0μmol/L)比较,IS干预后巨噬泡沫细胞内脂滴明显增加,随着IS浓度的升高,细胞内脂滴逐渐增加;IS干预后巨噬泡沫细胞的NF-κB活化程度增高,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,细胞在不同浓度的IS(2.5、25、250μmol/L)处理下,SR-B1 mRNA和蛋白的表达下降,随着IS浓度的增加,SR-B1和蛋白逐渐减少,呈现浓度依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05).PDTC预处理后SR-B1mRNA表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IS抑制SR-B1 mRNA和蛋白的表达,增加THP-1源性巨噬泡沫细胞胆固醇的蓄积,促进巨噬细胞泡沫化,从而促进动脉粥样硬化.NF-κB活化可能是IS抑制SR-B1 mRNA表达的可能机制之一.
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硫酸吲哚酚对THP-1源性泡沫细胞ATP结合转运子A1和G1表达的调控
目的 观察硫酸吲哚酚(IS)是否调节巨噬泡沫细胞脂滴的蓄积,以及对巨噬泡沫细胞ATP结合转运子A1(ABCA1)和ATP结合转运子G1 (ABCG1)表达的影响.方法 体外佛波酯(PMA)诱导人源单核细胞系THP-1分化为巨噬细胞,随后加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激下进一步转变为泡沫细胞.巨噬细胞加入不同浓度的IS以及ox-LDL共同作用24h,油红O染色法观察细胞内脂滴的含量,RT-PCR法检测ABCA1和ABCG1 mRNA水平,Western blotting法检测ABCA1和ABCG1蛋白表达.结果 IS干预可明显促进细胞内脂滴蓄积,下调单核/巨噬细胞泡沫化过程中ABCA1和ABCG1 mRNA和蛋白的表达,且此作用呈浓度依赖性.结论 IS可通过下调ABCA1和ABCG1 mRNA和蛋白的表达,增加细胞内脂滴蓄积,从而促进动脉粥样硬化的发生发展.
关键词： 硫酸吲哚酚 动脉粥样硬化 泡沫细胞 ATP结合转运子A1和G1 -
硫酸吲哚酚在尿毒症并发心血管疾病中的研究进展
慢性肾脏疾病是心血管疾病的重要危险因素.在慢性肾脏疾病患者中,尿毒素尤其是蛋白结合类尿毒素,不仅加重了慢性肾脏疾病,同时促进了心血管疾病的发生、发展,氧化应激认为是心血管疾病的发病机制之一,该假设已得到大量基础和临床研究的证实.硫酸吲哚酚是一种重要的蛋白结合类尿毒素,肾功能衰竭时在肾脏蓄积.目前研究表明,血清中硫酸吲哚酚含量是预测心血管疾病及慢性肾脏疾病肾功能减退的有重要价值的标志物.
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Klotho减轻硫酸吲哚酚诱导的血管内皮细胞损伤及其机制
目的 观察klotho蛋白对硫酸吲哚酚(IS)诱导人脐静脉内皮细胞损伤的作用,并探讨内质网应激是否参与此过程中及可能机制.方法 (1)体外培养人脐静脉内皮细胞,分别以5、25、50 mg/L IS干预细胞48 h,以50 mg/L IS干预细胞12、24、48 h,CCK-8法测定细胞活性,观察IS对细胞活性的影响.(2) 50 mg/L IS处理细胞48 h,同时给予0、1、10、100 μg/Lklotho蛋白干预,CCK-8测定细胞活性,观察不同浓度klotho蛋白对IS毒性的影响.(3)细胞分为对照组、IS组(50 mg/L IS)、klotho组(50 mg/L IS+100 μg/L klotho)和磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路抑制剂Compound C组(50 mg/L IS+100 μg/L klotho+10 μmol/L Compound C)干预48 h,CCK-8测定细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR、Western印迹分别检测糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的mRNA和蛋白表达,Western印迹检测磷酸化AMPK表达.结果 IS以时间依赖性和浓度依赖性的方式抑制细胞活性.50 mg/L IS组细胞活性低于对照组(P＜0.05).klotho蛋白可部分恢复IS抑制的细胞活性且呈浓度依赖.100 μg/L klotho组细胞活性高于IS组(P＜0.05).与对照组比较,IS组GRP78、CHOP表达上调,细胞凋亡率增加,磷酸化AMPK降低(均P＜0.05);与IS组比较,klotho组GRP78、CHOP表达降低,细胞凋亡率降低,磷酸化AMPK上调(均P＜0.05).klotho蛋白的作用可被Compound C阻断,上述指标Compound C组与klotho组差异均有统计学意义.结论 IS对人脐静脉内皮细胞具有毒性作用,可抑制细胞活性,诱导内质网应激及细胞凋亡;klotho蛋白可部分拮抗IS对内皮细胞的毒性作用,其机制可能与活化AMPK通路和降低内质网应激相关的细胞凋亡有关.
关键词： 硫酸吲哚酚 内质网应激 磷酸腺苷酸活化蛋白激酶 Klotho蛋白 -
硫酸吲哚酚与血液透析患者左心室肥厚关系的研究
目的 研究血液透析患者的血浆硫酸吲哚酚(IS)与左心室肥厚(LVH)的关系.方法 对符合标准的血液透析患者(年龄≥18岁,透析龄＞6个月,排除3个月内曾发作充血性心力衰竭以及合并心脏室壁瘤形成的患者),收集临床资料,检测生化指标和心脏超声.应用高效液相色谱-电喷雾-串联质谱(HPLC-ESI-MS/MS)方法检测血浆IS.采用线性回归和Logistic回归模型分析血浆IS与左心室质量指数(LVMI)以及LVH的关系.结果 共入选血液透析患者210例(男性117例),平均年龄(57.2±14.3)岁,LVH的患病率达64.0％.单因素线性回归显示,血浆IS与LVMI呈正相关(β=7.09,P=0.02),校正各种危险因素后IS与LVMI的关系仍有意义(β=4.16,P=0.03).将所有患者分为LVH组和非LVH组,采用Logistic回归分析IS与LVH的关系,校正各种危险因素后血浆IS与LVH独立正相关(β=6.54,OR=1.13,95％CI 1.09～1.44,P=0.03).结论 血液透析患者血浆IS与LVMI呈独立正相关,是LVH的独立危险因素.
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慢性肾功能不全患者血清及硫酸吲哚酚对巨噬细胞脂质聚集的影响
目的：观察尿毒症apoE-/-小鼠主动脉根部动脉粥样硬化病变，慢性肾功能不全患者血清和尿毒症毒素硫酸吲哚酚对巨噬细胞胆固醇转运受体的表达及胞内脂质聚集的影响。方法外科手术法建立尿毒症apoE-/-小鼠的动物模型，分别收集尿毒症apoE-/-小鼠、假手术apoE-/-小鼠、C57BL/6J小鼠的主动脉根部，行冰冻切片油红O染色，计算动脉粥样硬化斑块相对面积。收集慢性肾功能不全患者及肾功正常者血清，以不同浓度的慢性肾功能不全患者血清或不同浓度的硫酸吲哚酚干预巨噬细胞株12 h，测定不同干预条件下胆固醇转运受体SR-A1、CD36、ABCA1、ABCG1、SR-B1 mRNA的表达；干预24 h后诱导泡沫细胞，油红O染色测定不同干预条件下细胞内脂质含量。结果尿毒症apoE-/-小鼠主动脉根部动脉粥样硬化斑块面积较假手术apoE-/-小鼠明显增大。5%的慢性肾功能不全患者血清及250μmol/L的硫酸吲哚酚可明显诱导巨噬细胞CD36 mRNA的表达而不影响其余胆固醇转运受体的表达，同时增加巨噬细胞内脂质的蓄积。结论慢性肾功能不全加速动脉粥样硬化的进展，机制与慢性肾功能不全血清中蛋白结合性尿毒症毒素硫酸吲哚酚诱导巨噬细胞CD36 mRNA表达上调、促进细胞内的脂质蓄积有助于巨噬细胞源性泡沫细胞形成有关。
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涤毒灌肠方对5/6肾切除大鼠血与尿硫酸吲哚酚含量的影响
目的：探讨涤毒灌肠方对5/6肾切除大鼠血、尿硫酸吲哚酚含量的影响。方法 SD大鼠80只，随机抽取8只作为空白对照组，其余72只行5/6肾切除术复制慢性肾衰模型，将造模成功的60只大鼠随机分为模型对照组、药用炭治疗组、涤毒灌肠方高、中、低剂量组，用药周期为56 d。测量大鼠血清肌酐、尿素氮，高效液相色谱-质谱分析法测定血、尿硫酸吲哚酚的含量。结果灌肠方各剂量组和药用炭组血硫酸吲哚酚含量明显下降(P<0.05)，且高、中剂量组比药用炭组下降更为明显(P<0.05)；灌肠方高、中剂量组、药用炭组尿硫酸吲哚酚含量明显下降( P<0.05)，且高剂量组比药用炭组更为明显( P<0．05)。结论涤毒灌肠方降低5/6肾切除大鼠血、尿中硫酸吲哚酚含量可能是其干预肾衰竭的作用机制之一。
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膳食纤维摄入量与慢性肾脏病进展和心血管风险的相关性
目的：观察膳食纤维对慢性肾脏病（CKD）3～4期患者的肾功能、炎症状态、硫酸吲哚酚水平、营养状态及心血管疾病风险的影响。方法用线性回归模型通过回顾性饮食频率问卷法评估膳食纤维摄入量与 CKD参数之间的关系，并比较18个月随访中血清指标变化；用生存分析法研究膳食纤维摄入量与心血管疾病的关系。结果共纳入157例患者。横断面研究结果显示纤维摄入量与炎症指标相关（IL －6：β＝－0．024， P ＝0．035）。队列研究结果显示高纤维摄入组（≥25 g／d）的ΔeGFR、C 反应蛋白（CRP）、IL －6、硫酸吲哚酚及血清总胆固醇水平明显低于低纤维摄入组（＜25 g／d）（P ＜0．05）。高蛋白饮食组患者 IL －6和硫酸吲哚酚水平差异有统计学意义（P ＜0．05）。生存分析结果显示纤维摄入量与心血管事件显著相关（HR ＝0．537，95％CI：0．305～0．947）。本研究中各组蛋白质营养状态差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论高膳食纤维摄入可以延缓肾小球率过滤下降，降低炎症因子、硫酸吲哚酚及血清胆固醇水平，纤维摄入量与 CKD 患者心血管疾病风险呈负相关，但不影响其营养状态。
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血清硫酸吲哚酚水平与冠心病严重程度的关系研究
目的 硫酸吲哚酚(IS)与内皮损伤、NF-κB的激活以及动脉粥样硬化的发生发展有关.本研究拟探索血清IS水平与冠心病(CAD)严重程度指标以及多种心血管风险因素之间的关系.方法 入选疑诊CAD的患者503例,对其进行冠状动脉造影以及冠状动脉CTA检查,计算病变血管支数、Gensini积分以及钙化积分等,使用超高效液相色谱法对所有入选患者血清IS水平进行检测,分析血清IS水平与病变血管支数、Gensini积分以及钙化积分等之间的关系.结果 与冠脉正常的患者比较,CAD患者的血清IS水平较高,并且冠状动脉狭窄程度严重的患者,其血清IS浓度也较高;其次,使用多变量分析发现,血清IS水平与CAD的发病率和严重程度独立相关.此外,血清IS水平和年龄、冠状动脉钙化积分、Gensini积分、冠状动脉斑块以及Framingham-10年风险积分也相关.结论 本研究发现,血清IS水平在CAD患者中明显升高,与其严重程度有关.这就说明,升高的血清IS水平可能参与了冠状动脉粥样硬化的病理过程.
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硫酸吲哚酚对人单核细胞源树突状细胞表型及功能的影响
目的：探讨硫酸吲哚酚（IS）对人单核细胞源树突状细胞（mDCs）的分化、成熟及免疫功能的影响，为进一步探索IS在动脉粥样硬化（AS）免疫炎症反应中的机制提供依据。方法：双密度梯度离心法分离人外周血单核细胞，用rhGM?CSF和rhIL?4体外诱导分化为未成熟mDCs，随机分为PBS组、LPS组（1μg/mL）、IS.1组（30μmol/L）、IS.2组（300μmol/L）、IS.3组（600μmol/L）。流式细胞仪检测各组mDCs表型和吞噬功能变化，ELISA法检测各组mDCs分泌细胞因子IL?12p70的变化，扫描电子显微镜观察细胞形态学变化。结果：不同浓度IS作用于mDCs后，显著上调mDCs表面标志CD80、CD83、CD86、MHC II的表达，降低细胞吞噬功能并促进细胞因子IL?12p70的分泌（P<0.05）；形态学上看，LPS组和IS.2组细胞呈不规则形，胞体表面有形态不一的突起。比较得出IS为300μmol/L时为适宜的刺激浓度。结论：硫酸吲哚酚可诱导人单核细胞源树突状细胞表型及功能成熟，这可能是硫酸吲哚酚参与动脉粥样硬化免疫炎症过程的机制之一。
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真武汤治疗Ⅱ型及Ⅳ型心肾综合征的临床研究
目的 研究真武汤对Ⅱ型及Ⅳ型心肾综合征患者的临床治疗效果.方法 本研究采用前瞻性的研究方式,选择我院2017年3-11月收治的100例Ⅱ型和Ⅳ型心肾综合征患者,随机分成对照组(n=50)和真武汤组(n=50).真武汤组和对照组均采用常规西药治疗,真武汤组加用真武汤治疗,观察两组治疗前后的氨基末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)、肾小球滤过率(eGFR)、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、硫酸吲哚酚(IS)、心脏超声、Lee氏心衰积分、中医症状积分和中医证候疗效变化.结果 治疗后,真武汤组的Lee氏心衰积分、中医证候积分显著低于对照组(P<0.05),真武汤组的中医证候总有效率显著高于对照组(84％vs.66％,P=0.038),真武汤组3b期eGFR较对照组明显升高(P=0.014).自身前后对照发现真武汤组治疗后NT-proBNP较治疗前明显降低(P<0.001),SCr、BUN治疗后水平较治疗前明显降低(P<0.05).治疗后真武汤组3b期IS水平较治疗前明显降低(P<0.05),其余各期真武汤组IS水平呈下降趋势.治疗前后心脏超声、肝功能、电解质未发现有明显差异(P>0.05).结论 在西药常规治疗基础上加用真武汤可进一步改善Ⅱ型和Ⅳ型心肾综合征患者心脏及肾脏功能,对心脏及肾脏起同步保护作用.
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蛋白结合硫酸吲哚酚损伤红细胞膜
目的 研究蛋白结合硫酸吲哚酚对红细胞寿命的影响及作用机制.方法 以4％白蛋白结合不同浓度的硫酸吲哚酚孵育0.4％红细胞悬液48 h,采用流式细胞仪检测红细胞体积,Annexin-V-FITC凋亡试剂盒检测红细胞表面磷脂酰丝氨酸的标记率,钙离子荧光探针(Fluo3/AM)检测红细胞内Ca2+浓度,酶标分析仪检测红细胞的溶血率,采用SPSS18.0统计软件进行统计分析.结果 4％白蛋白结合硫酸吲哚酚孵育0.4％红细胞悬液48 h后,随硫酸吲哚酚浓度逐渐增加,红细胞体积逐渐变小[(1603.33±8.50) vs (742.67±14.04),P＜0.05],红细胞表面磷脂酰丝氨酸的标记率[(0.26±0.06)vs(10.32±1.64),P＜0.05]、红细胞内Ca2+浓度以及溶血率逐渐增加,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05),呈剂量依赖性;当细胞外Ca2+缺乏时,硫酸吲哚酚对红细胞的这种损伤效应明显降低.结论 4％白蛋白结合硫酸吲哚酚通过增加钙内流而损伤红细胞,促进红细胞衰亡,是尿毒症患者贫血的发生机制之一,清除蛋白结合毒素有助于改善贫血.
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UCP2在硫酸吲哚酚诱导心肌细胞肥大中的作用
目的 探讨解耦联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)在硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)诱导心肌细胞肥大中的作用和机制.方法 分离培养新生Sprague-Dawley大鼠心肌细胞,0、100、250、500、1 000μmol/L IS孵育心肌细胞1h或500 μmol/L IS孵育心肌细胞0、15、30、45、60 min后,Western blot检测心肌细胞UCP2蛋白表达变化.UCP2慢病毒转染心肌细胞后,通过α-aetinin免疫荧光染色观察细胞大小,3H-亮氨酸掺入法评价蛋白合成速率,Real-time PCR检测肥大相关基因ANF、BNP和β-MHC mRNA的表达,同时利用MitosoxTM探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成情况.结果 与对照组相比,IS处理组心肌细胞的UCP2蛋白水平明显下降(P＜0.05);与IS处理组相比,UCP2过表达可以明显抑制IS诱导的心肌细胞ROS生成、体积增大、3H-亮氨酸摄入增加及肥大相关基因(ANF、BNP和β-MHC mRNA)的表达增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IS诱导心肌细胞肥大可能与其下调UCP2表达及促进氧化应激有关,而UCP2过表达或许可以通过抑制氧化应激拮抗IS诱导的心肌细胞肥大.
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硫酸吲哚酚诱导心肌细胞肥大的研究
目的 研究尿毒症毒素硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)对心肌细胞肥大的影响及其可能的机制.方法 不同浓度的IS(100、250、500、1 000μmol/L)孵育体外培养的新生大鼠心肌细胞(RNCM)3 h后,2,7-dichlorofluorescin dictate (DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平.500 μmol/L IS孵育心肌细胞24h后,Real-time PCR检测心肌细胞肥大标志基因心房尿钠肽(atrial natriuretic peptide,ANF)、B型尿钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP)及β肌球蛋白重链(beta-myosin heavy chain,β-MHC)的mRNA表达.500 μmol/L IS孵育NRCM 48 h后,3H亮氨酸掺入法检测心肌细胞蛋白合成速率,α-actinin免疫荧光染色观察心肌细胞面积.结果 IS可以剂量依赖性的诱导心肌细胞ROS生成增多(P＜0.05),500 μmol/L IS孵育可以导致心肌细胞肥大标志基因ANF、BNP和β-MHC mRNA表达上调,并显著增加心肌细胞3H亮氨酸摄入量和细胞面积(P＜0.05).结论 IS能够诱导体外培养的新生大鼠心肌细胞肥大,其机制可能与诱导氧化应激增强有关.
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蛋白结合硫酸吲哚酚对单核细胞趋化功能的影响
目的 研究蛋白结合硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)对单核细胞趋化功能的影响及其可能机制.方法 以4％人血白蛋白(human serum albumin,HSA)结合游离的IS制备蛋白结合IS,高效液相色谱法(HPLC)检测其蛋白结合率.CCK-8法检测人单核细胞(THP-1)经不同浓度的游离IS和蛋白结合IS分别作用24 h后细胞增殖能力的变化.200 μmol/L游离IS和蛋白结合IS分别孵育THP-1细胞24 h后,Transwell小室法检测THP-1细胞趋化能力;ELISA法检测细胞培养上清中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)浓度;流式细胞术检测THP-1细胞上CC类趋化因子受体2(CCR2)的表达水平.结果 成功制备蛋白结合IS,其蛋白结合率约为90％;蛋白结合IS和游离IS均可抑制THP-1细胞增殖,且蛋白结合IS对THP-1细胞的增殖抑制作用具有浓度依赖性(P＜0.05);蛋白结合IS和游离IS均可增强THP-1细胞的趋化活性(P＜0.05);蛋白结合IS和游离IS均可使THP-1细胞的MCP-1和CCR2表达上调(P＜0.05).结论 蛋白结合IS同游离IS一样,可通过上调MCP-1及CCR2的表达增强单核细胞的趋化功能.
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硫酸吲哚酚促进肾纤维化的机制研究
目的 探讨尿毒症毒素硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)诱导肾纤维化的作用及可能机制.方法 24只3周龄健康雄性CD-1小鼠,体质量14～15 g,建立1/2肾切除模型后,采用完全随机分组法将小鼠分为IS处理组(n=12)和对照组(n=12),分别给予小鼠腹腔注射IS 100 mg/(kg·d)和等体积灭菌磷酸缓冲溶液,IS注射4周后留取肾脏标本,Masson染色观察小鼠肾间质胶原沉积情况,免疫组化染色检测观察小鼠肾脏α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和β-catenin蛋白表达变化,Western blot检测β-catenin蛋白表达变化;用不同浓度的IS(0、2、10、50 mg/L)孵育人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)72 h后,Western blot检测β-catenin表达变化.结果 与对照组比较,Masson染色发现腹腔注射IS 4周后,小鼠肾脏胶原沉积明显增加[(2.43±0.51) vs (6.57±0.51),P＜0.05],IS处理组肾小管上皮细胞β-catenin[(0.87±0.74) vs(10.87±1.21),P＜0.05]以及α-SMA[(1.30 ±0.56) vs (13.53 ±0.50),P＜0.05]的表达均明显增加;与对照组相比,IS处理组HK-2细胞的β-catenin表达显著增加,且呈剂量依赖效应[(0.71 ±0.71) vs (0.96±0.70)或(0.71 ±0.71) vs (1.10±0.95),P＜0.01].结论 IS可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路发挥促小鼠肾纤维化的作用.
关键词： 硫酸吲哚酚 Wnt/β-catenin 肾纤维化 -
中药结肠透析对慢性肾脏病人蛋白结合型毒素清除的影响
目的:观察中药结肠透析对蛋白结合型毒素硫酸吲哚酚的清除效果.方法:31例慢性肾脏病人随机分为治疗组和对照组.对照组采用基础治疗加中药汤剂口服,治疗组在对照组治疗基础上加用中药结肠透析,观察治疗后2组临床疗效及蛋白结合型毒素变化情况.结果:治疗组显效率33.33％,有效率93.33％;对照组显效率6.25％,有效率81.25％.治疗组总有效率明显优于对照组.2组硫酸吲哚酚(IS)含量比较,治疗组治疗前为9.63±6.30μg/mL,治疗后为7.66±5.31 μg/mL,治疗后下降均值为2.03±0.91 μg/mL;对照组治疗前为7.28±5.15μg/mL,治疗后为7.06±5.29μg/mL,下降均值为0.22±0.16μg/mL,治疗组明显优于对照组.结论:中药结肠透析能显著改善慢性肾脏病患者临床症状,降低蛋白结合型毒素硫酸吲哚酚的血清含量.
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基于UPLC-MS/MSE方法研究马兜铃酸肾病大鼠的血清代谢组学
目的:基于超高效液相色谱-四极杆时间飞行高清质谱串联(UPLC-QTOF/HDMS)-代谢组学方法研究马兜铃酸Ⅰ诱导的马兜铃酸肾病(AAN)的代谢指纹图谱.方法:基于UPLC-QTOF/HDMS的代谢组学方法测定AAN大鼠血清,质谱数据采用MarkerLynx软件处理,然后使用主成分分析和正交校正的偏小二乘判别分析法分析AAN模型组和正常对照组之间的代谢物谱差异,并通过S-plot图选取潜在的生物标示物,通过精确分子量、同位素分布、MSE信息和对照品对照,再通过检索HMDB等数据库对潜在的生物标示物进行鉴定.结果:用代谢组学方法鉴定了10个生物标示物,马兜铃酸Ⅰ上调了鹅去氧胆酸、胆酸、牛磺鹅脱氧胆酸、硫酸对甲酚、肌酐、7-酮基脱氧胆酸、硫酸吲哚酚和12-酮基脱氧胆酸,同时下调了溶血卵磷脂(15∶0)和溶血卵磷脂(17∶0).结论:马兜铃酸诱导的肾损伤干扰了磷脂、胆汁酸、氨基酸的代谢.基于UPLC-QTOF/HDMS代谢组学法能够应用于马兜铃酸诱导的AAN的研究.
