酸性成纤维细胞生长因子对人脐带血内皮祖细胞凋亡的影响

目的 探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对人脐带血中内皮祖细胞凋亡的影响及机制.方法 选择健康产妇脐带血,密度梯度离心法获取脐带血单个核细胞,培养7天后,收集贴壁细胞并加入不同浓度(2、5、10μg/L)aFGF干预24 h,流式细胞仪检测aFGF对细胞凋亡的影响,逆转录-聚合酶链反应检测Bcl-2 mRNA表达,Western Blot检测Bcl-2蛋白表达.同时对作用效果为显著的组(5μg,/L aFGF组)分别培养6、12、24、48 h,分别观察内皮祖细胞数量及凋亡状况,从而对其时效关系进行观察.结果 与对照组比较,不同浓度的aFGF可以显著抑制内皮祖细胞凋亡(P＜0.05)；5μg/L aFGF作用24 h时对细胞凋亡抑制的影响为显著(P＜0.05).Bcl-2mRNA和蛋白的表达显著高于对照组.结论 aFGF能抑制人脐带血内皮祖细胞的凋亡,并通过上调凋亡抑制基因Bcl-2而发挥抑制细胞凋亡的作用.

FGF-1对TGF-β1诱导的H9c2心肌细胞凋亡与Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9表达的关系研究

目的 观察酸性成纤维细胞生长因子(FGF-1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的H9c2心肌细胞凋亡作用及对半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响,并探讨可能机制.方法 体外培养H9c2细胞,随机分为5组:模型组,肝素(Heparin)组、FGF-1组、FGF-1/Heparin组和正常对照组.采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色分析检测H9c2细胞的存活率,TUNEL染色检测H9c2细胞凋亡指数和Western blot分析检测H9c2细胞Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9的表达.结果 模型组H9c2细胞存活率与正常对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05),模型组降低;FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞存活率与模型组比较,差异有统计学意义(P <0.05),FGF-1组和FGF-1/Heparin组均升高.模型组H9c2细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达与正常对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05),模型组升高;FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达与模型组比较,差异有统计学意义(P <0.05),FGF-1组和FGF-1/Heparin组降低.结论 FGF-1对TGF-β1诱导的H9c2心肌细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与抑制Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达有关.

酸性成纤维细胞生长因子对顺铂肾损害保护作用的实验研究

目的 研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对顺铂(DDP)引起的体外培养的肾小管上皮细胞损害的保护作用.方法 通过酶消化法获取肾小管上皮细胞,接种于96孔培养板:(1)培养72 h后加入一系列浓度的DDP,实验组在DDP作用12 h后加入不同浓度aFGF,再培养48 h后用WST-8法检测细胞存活率.(2)以DDP建立损伤模型,并在加药后12 h加入一定量的aFGF,观察aFGF对损伤的肾小管上皮细胞的保护作用.结果 (1)aFGF能使DDP对肾小管上皮细胞的半数抑制浓度(IC50)升高.(2)DDP组与对照组比较,各生化和酶学指标差异均有统计学意义;而aFGF加DDP组与对照组比较,SOD、GSH-Px酶活性差异无统计学意义,MDA、NO升高差异仍有统计学意义.结论 aFGF对DDP损伤的肾小管上皮细胞有明显的保护作用.

酸性成纤维细胞生长因子对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨酸性成纤维细胞生长因子(Afgf)对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响.方法 32只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、Afgf低剂量组(8μg/kg)和Afgf高剂量组(16μg/kg),每组8只.以肾缺血再灌注损伤为模型,通过光、电镜观察肾组织病理变化.结果 Afgf能明显减轻肾组织水肿、肾小管扩张和破坏,电镜下见肾小管上皮细胞超微结构(微绒毛、线粒体、溶酶体等)损伤较轻或基本正常.结论 Afgf对大鼠肾缺血再灌注损伤有一定的保护作用.

改构体aFGF对颈动脉窦损伤的保护作用

目的探讨损伤大白鼠颈动脉窦压力感受器神经末梢后,改构体aFGF的保护作用.方法将Wistar大鼠随机分成对照组、改构体aFGF1组、改构体aFGF2组、改构体aFGF3每组各10只.改构体组分别经静脉注射0.14 μg/ml、0.43 μg/ml、1.30 μg/ml的改构体aFGF(1 ml/100 g),而对照组注射同剂量的生理盐水.20 min后,用蘸有80%乙醇的棉球轻轻擦拭右颈动脉窦区,损伤颈动脉窦压力感受器神经末梢,并放置5 min.观察记录各组损伤前后夹闭颈总动脉血压即:收缩压(SP)、舒张压(DP)、平均动脉压(MP)和心率(HR)的变化.结果 (1)损伤右颈动脉窦前,夹闭右颈总动脉,实验组和对照组血压均升高,夹闭前后相比差异均有统计学意义(P<0.01);(2)损伤右颈动脉窦后,夹闭右颈总动脉,改构体aFGF1组、对照组血压不变,夹闭前后相比差异无统计学意义(P>0.05);改构体aFGF2组、改构体aFGF3组血压升高,夹闭前后相比差异有统计学意义(P＜0.05), 夹闭前后两组的血压差分别与对照组的差值相比有统计学意义(P＜0.05).在本实验中,HR均无明显变化.结论改构体aFGF对颈动脉窦损伤有保护作用,并显示一定的量效关系.

酸性成纤维细胞生长因子基因真核表达载体的构建及转染肌卫星细胞

目的 探讨通过构建酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)基因真核表达载体转染大鼠肌卫星细胞(MSCs)建立细胞工程种子细胞可行性.方法 首先提取人类肌肉组织总RNA,RT-PCR法调取aFGF基因,然后用直接化学合成法合成人类白细胞介素2信号肽序列(SPS),通过基因融合得到SPS-aFGF,再通过定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1,终得到重组质粒PEGFP-N1-SPS-aFGF,对重组质粒做测序和酶切鉴定;差速贴壁法获取大鼠MSCs,观察细胞形态,做免疫荧光鉴定;经鉴定正确的细胞随机分为3组:目的基因组(aFGF加N1)、空载质粒组(N1)、空白对照组(blank),前两组分别加入质粒PEGFP-N 1-SPS-aFGF与pEGFP-N1质粒,空白对照不加入任何质粒,均在脂质体Lipofectamine 2000TMReagent介导下转染,转染后荧光显微镜统计发绿色荧光的细胞占各组细胞比例,计算转染效率;转染72h后利用实时荧光定量PCR与Western blot检测aFGF基因在MSCs中表达情况.结果 ①重组质粒测序结果与GenBank公布的序列一致,酶切鉴定条带与实际大小相符.②荧光显微镜下观察到转染细胞有荧光表达,并在转染72 h达到高峰.③转染后72 h,实时荧光定量PCR结果显示目的基因组表达量平均相对比值(aFGF加N1)组(1464.96)显著高于N1组(1.016)、Blank组(1.000),差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测显示aFGF表达呈极强阳性,而N1组及Blank组aFGF表达极弱.结论 成功构建aFGF基因真核表达载体并转染MSCs,aFGF在MSCs内高表达,此种方法有希望获取具备特殊生物学功能细胞.

酸性成纤维细胞生长因子预防失神经支配肌运动终板退变及肌萎缩的实验研究

目的本研究旨在探讨运动神经损伤后运动终板退变及肌萎缩的预防方法.方法SD大鼠40只,随机分成5组.处理组切断右侧腓总神经,修复或不修复神经,酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)纤维蛋白凝胶载体植入失神经支配的胫前肌神经区周围的肌间隙,设立对照,6周后采用形态学检查进行评价.结果采用aFGF纤维蛋白凝胶载体组,神经修复或未予修复其运动终板结构基本正常,肌肉无明显萎缩;对照组运动终板明显退变或消失,肌肉明显萎缩.结论aFGF纤维蛋白凝胶载体可以有效保护失神经支配肌运动终板,防止肌肉萎缩.

酸性成纤维细胞生长因子的新面孔--国家十五重大科技攻关项目概览

酸性成纤维细胞生长因子对大鼠创伤性脑水肿的防治作用

目的 观察酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）对创伤性脑水肿的作用。方法 大鼠脑损伤前应用aFGF持续脑室内注射12 h，观察脑含水量、病理组织学和超微结构改变。结果 脑水肿和神经细胞结构损伤明显减轻。结论 aFGF具有明显减轻脑水肿和神经细胞保护作用。

酸性成纤维细胞生长因子预防失神经支配肌运动终板退变的形态学及电生理研究

目的本研究旨在探讨运动神经损伤后运动终板退变的预防方法.方法SD大鼠30只,等分成3组.处理组切断右侧腓总神经,修复神经,酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)纤维蛋白凝胶载体植入失神经支配的胫前肌神经区周围的肌间隙,设立对照.观察6周,进行形态学及电生理检查.结果采用aFGF纤维蛋白凝胶载体组,运动终板结构基本正常,肌肉无明显萎缩;对照组运动终板明显退变或消失,肌肉明显萎缩;采用aFGF纤维蛋白凝胶载体组低频重复电刺激(RNS)衰减率明显低于对照组.结论aFGF纤维蛋白凝胶载体可以有效保护失神经支配肌运动终板,防止肌肉萎缩,促进神经肌肉接头功能的恢复.

丹参联合aFGF对新生缺氧缺血性脑损伤大鼠大脑的保护作用

目的 观察丹参联合酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对新生缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠大脑的保护作用,旨在为该病临床药物治疗提供理论依据.方法 制作新生HIBD大鼠模型后给予丹参、aFGF和丹参+aFGF,观察血清中超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的水平变化;计数病变大脑组织中血管内皮生长因子(VEGF)阳性细胞数、新生血管和脑皮层的凋亡细胞数.结果 (1)空白对照组中NO和iNOS含量明显增多,使用丹参后NO和iNOS下降,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).(2)正常对照组和空白对照组中新生血管数和VEGF阳性细胞数少,使用aFGF后两者明显增多,丹参+aFGF组两者数量增多,与丹参组及aFGF组比较差异有统计学意义(P<0.01).(3) 使用丹参或aFGF后脑皮层的细胞凋亡细胞数明显减少,与空白对照组比较有统计学意义(P<0.01);丹参+aFGF组脑皮层的细胞凋亡细胞数减少更明显,与丹参组、aFGF组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 复方丹参注射液联合aFGF治疗新生HIBD大鼠在保护脑功能、促进血管增生方面有一定的协同作用.

重组人酸性成纤维细胞生长因子对神经细胞损伤的保护作用

目的 建立谷氨酸损伤模型并探讨重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)对谷氨酸损伤神经细胞的干预作用. 方法 利用流式细胞仪观察rhaFGF对正常培养的神经细胞细胞周期的影响,建立细胞损伤模型,将实验分空白组、模型组和rhaFGF保护组,通过形态观察以及MTT法检测各实验组的细胞活力. 结果 rhaFGF能促进DNA的合成,谷氨酸对细胞损伤程度随浓度的增大而增大,rhaFGF能够拮抗谷氨酸的神经毒. 结论 rhaFGF能促进神经细胞生长同时拮抗谷氨酸兴奋性毒性而发挥神经保护作用.

掌侧经皮Herbert螺钉内固定并注入aFGF治疗26例不稳定型腕舟骨骨折

目的:评价掌侧经皮Herbert螺钉内固定治疗不稳定型腕舟骨骨折的临床价值及酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF) 对腕舟骨骨折愈合的作用.方法:26例不稳定型腕舟骨骨折患者,采用掌侧经皮Herbert螺钉内固定治疗,术中骨折处注入aFGF透明质酸凝胶.结果:26例中25例获随访,随访时间平均11.4个月.25例骨折全部愈合,愈合时间平均为术后3.6个月.25例伤腕没有疼痛,握力良好.2例腕关节活动轻度受限,另23例患侧腕关节桡偏、尺偏、背伸、掌屈活动与健侧相比无明显差别.结论:掌侧经皮Herbert螺钉内固定治疗不稳定型腕舟骨骨折具有创伤小、骨折固定牢靠、术后可早期功能锻炼、手腕功能恢复好、内固定无需取出等优点.术中加用aFGF透明质酸凝胶对骨折愈合可能有促进作用.

酸性成纤维细胞生长因子对离体肾脏低温保存的作用

目的:探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对大鼠离体肾脏的低温保存效果的影响.方法:24只Wistar大鼠随机均分成高渗枸橼酸盐腺嘌呤液(HCA)对照组和aFGF复方保存液试验组:HCA液中含40 μg/L aFGF.采用腹主动脉插管原位灌注法,分别用HCA保存液和aFGF复方保存液灌洗并4℃低温保存肾脏.24、72 h后检测保存液pH值变化,以及肾脏组织丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)和谷草转氨酶(GOT)水平的变化,并进行肾脏组织病理学检查.结果:肾脏低温保存24、72 h后,试验组保存液pH值均高于对照组(P＜0.05),肾组织MDA水平均低于对照组(P＜0.01)；试验组肾组织LDH及GOT水平在24h和对照组无明显差异,而72 h明显低于对照组(P＜0.05).形态学观察结果显示,实验组肾脏损伤较对照组明显减轻.结论:aFGF能改善肾脏的保存效果,并可延长肾脏的保存时间.

aFGF对离体大鼠缺氧/再灌损伤心脏的保护作用

目的:探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对大鼠心脏缺氧/再灌损伤的保护作用及作用机制.方法:在Langendorff装置上建立心脏缺氧/再灌模型,用BL-410生物机能实验系统记录经aFGF预处理的大鼠心脏缺氧/再灌前后左室发展压(LVDP)、左室内压上升/下降的大、小速率((dp/dt)max、(dp/dt)min)的变化,测定不同时点冠脉流出液中的乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量.结果:aFGF预处理可促进心脏缺氧/再灌后心功能恢复,逆转缺氧/再灌导致的SOD降低和LDH、MDA升高.结论:aFGF对缺氧/再灌损伤心脏具有一定的保护作用,其作用机制可能与提高自由基清除酶活性及抑制脂质过氧化有关.

酸性成纤维细胞生长因子受体及信号转导的研究进展

酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)的生物学功能与受体结合、细胞信号转导具有密切的关系.近年来已发现5种成纤维细胞生长因子受体(FGFR),其中主要是FGFR-1、FGFR-2与aFGF结合并被激活,启动多条信号转导途径,引起胚胎发育、血管生成以及创伤修复等多种生物效应,其中,FGFR与aFGF结合后启动的MAPK途径是调节各种细胞趋化应答、分化、分裂的重要途径,是细胞增殖、分化等信息传递途径的交集点和共同通路.

人类重组型酸性成纤维细胞生长因子促分裂效应及其信号转导途径的推测

[目的]通过比较野生型及重组型酸性成纤维细胞生长因子(waFGF,raFGF)对NIH3T3细胞促分裂活性的差别,推测其信号途径的异同,从而评价促分裂性;同时,通过检测肝素(HS)对这两种生长因子生物学活性的影响,评价其在模仿机体内环境中的作用.[方法]应用MTT法检测细胞的促分裂活性.应用Western blot和RT-PCR分别检测FGF1受体磷酸化和Fos基因表达.[结果]raFGF对细胞增殖的作用明显低于waFGF,在5～80mg/mL范围内为明显(P＜0.001);HS均可促进两种因子对细胞的增殖作用,但raFGF+HS组明显低于waFGF+HS组(P＜0.05).waFGF通过核转位和MAPK两种途径发挥促分裂活性,而raFGF则只通过MAPK发挥促分裂性.[结论] raFGF的促分裂作用低于waFGF;肝素对这两种因子的促分裂性具有促进作用;waFGF通过核转位和MAPK两种途径发挥促分裂活性,而raFGF则只通过MAPK发挥促分裂性.

酸性成纤维细胞生长因子对庆大霉素诱导的海马星形胶质细胞凋亡的影响

目的：通过建立海马星形胶质细胞（ AS）的体外培养模型，从细胞凋亡的模块探讨酸性成纤维细胞生长因子（ aFGF）对庆大霉素（ GM）诱导的海马AS损伤的保护作用。方法体外培养海马AS，采用胶质纤维酸性蛋白免疫荧光进行鉴定。将海马AS随机分为3组，分别予正常培养（正常对照组）、2 g／L GM作用24 h（损伤组）及加入4.25μg／L aFGF 24 h后再加2 g／L GM作用24 h（保护组）。通过应用TUNEL结合DAPI核染色法和Annexin V－FITC／PI双染法反映细胞的凋亡状况。结果损伤组的细胞生长受抑制，细胞凋亡，保护组的AS凋亡率下降，其中损伤组TUNEL染色阳性的细胞数较正常对照组显著增加（ P＜0.01），保护组TUNEL染色阳性的细胞数较损伤组显著减少（ P＜0.01）；保护组与正常对照组之间差异无统计学意义（ P＞0.05）；而通过Annexin V－FITC／PI双染法可见：正常对照组、损伤组、保护组细胞的总凋亡率分别为8.37％、28.66％、25.55％。其中，保护组细胞的早期凋亡率与损伤组比较差异无统计学意义，而其晚期凋亡率与损伤组相比有所降低。结论 aFGF具有减轻GM所致AS凋亡的作用，可能阻碍细胞早期凋亡的进一步发展。

aFGF对庆大霉素所致海马星形胶质细胞损害的保护作用

目的 研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对庆大霉素(GM)引起的体外培养的大鼠海马星形胶质细胞损害的保护作用.方法 大鼠海马经分离、剪切、胰蛋白酶消化,进行星形胶质细胞的体外培养.采用兔抗GFAP多克隆抗体进行免疫组织化学染色鉴定,传3代细胞接种于96 孔培养板.(1)培养24 h后加入一系列浓度的GM,再培养24 h后用MTT法检测细胞存活率;(2)培养24 h后在系列GM浓度的基础上加入一定浓度的aFGF,继续培养24 h后用MTT法检测细胞存活率.结果 aFGF能使GM对星形胶质细胞的半数抑制浓度(IC50)升高.结论 aFGF对GM损伤的大鼠海马星形胶质细胞有一定的保护作用.

酸性成纤维细胞生长因子及其在创伤愈合中的应用

机体的创伤愈合包括炎症、增殖、重新塑型三个阶段,需要多种细胞和多种生长因子参与调控.采用外源性生长因子治疗慢性难愈合性创伤是目前临床研究的热点.酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)具有促有丝分裂和非促有丝分裂活性,临床上可用来加速创伤愈合、提高愈合质量.本文对酸性成纤维细胞生长因子的分子结构及其在创伤愈合中的作用作一综述.