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恶性黑素瘤组织中Bmi-1及增殖细胞核抗原的表达
目的:探讨恶性黑素瘤(MM)组织中干细胞再生因子Bmi-1及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.方法:应用免疫组化sP法检测36例MM(26例皮肤原发性黑素瘤及lO例转移性黑素瘤)、30例皮内痣组织中Bmi-1及PCNA蛋白的表达.结果:MM、皮内痣组织中Bmi-1蛋白的阳性表达率分别为61.1%、20.0%,差异有统计学意义(χ2=11.323,P=0.001);PCNA蛋白的阳性表达率分别为80.6%、10.o%,差异有统计学意义(χ2=32.614,P<0.001).原发性黑素瘤和转移性黑素瘤组织中Bmi-1蛋白的阳性表达率分别为57.3%、70.0%,差异无统计学意义(P=0.706);Bmi-1蛋白的阳性表达率分别为73.1%、100.0%,差异无统计学意义(P=0.155).MM组织中Bmi-1与PCNA蛋白阳性表达率有关(χ2=6.618,P=0.010,rp=0.399).结论:Bmi-1及PCNA蛋白表达与MM的发生发展密切相关.
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Bmi-1在乳腺癌组织中的表达及相关性研究
目的 研究Bmi-1在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达,探讨其与乳腺癌临床病理特征的关系.方法 采用免疫组化SP法检测60例乳腺癌组织中Bmi-1蛋白的表达情况,并结合患者的临床病理资料分析与其相关性.结果 60例乳腺癌标本中有49(81.7%)例强阳性表达.统计分析结果 发现Bmi-1的强阳性表达与乳腺癌的淋巴结转移及临床分期密切相关(P<0.05),而与肿瘤大小及雌激素受体、孕激素受体、cerbB-2、血管内皮生长因子等临床病理特征无显著性相关(P>0.05).结论 Bmi-1蛋白在乳腺组织中的高表达与乳腺癌的进展相关,预示肿瘤具有高度转移潜能,Bmi-1可能成为预测乳腺癌转移的标志物.
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Bmi-1、Notch1在乳腺癌中的表达及意义
目的 探讨Bmi-1蛋白和Notch1蛋白在乳腺癌发生、发展中的作用,以及两者之间存在的相互关系,分析其临床病理学意义.方法 采用免疫组化方法,分别检测68例乳腺浸润性导管癌、32例乳腺纤维腺瘤和30例正常乳腺组织中Bmi-1及Notch1蛋白的表达.结果 Bmi-1、Notch1蛋白在乳腺癌组织中的表达明显高于其在乳腺纤维腺瘤及正常乳腺组织中的表达,3组间比较存在显著性差异(P<0.05).Bmi-1及Notch1蛋白的表达率与乳腺癌的淋巴结转移、分化程度及分期有关(P<0.05);Bmi-1和Notch1在乳腺癌中的表达呈正相关(r=0.583,P<0.05).结论 Bmi-1、Notch1蛋白高表达与乳腺癌的恶变演进有关,Notch1信号通路可能调控Bmi-1的表达,从而影响乳腺癌的发生、发展.
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上调miR-495靶向Bmi-1抑制AML细胞增殖及促进凋亡
目的 检测miR-495与Bmi-1在急性髓系白血病(AML)患者骨髓细胞中的相对表达水平,研究上调miR-495对AML细胞HL-60的作用以及miR-495与Bmi-1的靶向关系. 方法 qRT-PCR检测AML患者骨髓样本中miR-495与Bmi-1 mRNA的相对表达量,Western-blot检测Bmi-1蛋白的相对表达量;miR-495 mimics和miR-495 scramble转染入AML细胞HL-60;CCK8实验检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡,双荧光素酶报告基因实验验证Bmi-1是否为miR-495的靶基因. 结果 AML患者骨髓样本中miR-495相对表达含量降低且Bmi-1 mRNA及其蛋白的相对表达显著升高(P<0.05).与对照组和空白组比较,miR-495组细胞在24、48、72、96 h的吸光度值均显著降低(P<0.05).流式细胞术检测显示miR-495组细胞凋亡率较对照组和空白组显著增加(P<0.05).双荧光素酶报告实验结果显示,共转染miR-495 mimics和pmirGLO-Bmi-1-Wt组的荧光强度显著低于其他三个对照组(P<0.05). 结论 miR-495在AML患者骨髓细胞中异常低表达,而Bmi-1高表达;上调miR-495的表达可抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡;Bmi-1是miR-495的靶基因.
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实时荧光定量RT-PCR检测白血病细胞中BMI-1 mRNA的表达及其意义
目的:建立SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR方法检测白血病细胞中BMI-1 mRNA的表达并探讨其临床意义.方法:在TRIzol提取总RNA后,将mRNA逆转录成cDNA,再用SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法检测BMI-1 mRNA在白血病细胞系(K562、HL-60、Daudi、Jurkat、Molt-4、U937和THP-1)、56例AML初治患者的骨髓ACDA抗凝标本和30例健康体检者的外周血EDTA抗凝标本以及6例细胞形态学正常的骨髓ACDA抗凝标本中的表达,扩增产物的特异性通过熔解曲线和凝胶电泳双重确认,以ABL为内参照,采用2-△△ct法计算其相对表达量.结果:①BMI-1 mRNA在白血病细胞系(K562、HL-60、Daudi、Jurkat、Molt-4、U937和THP-1)均存在表达,其中U937表达高,而HL-60表达低.②与对照组相比,BMI-1 mRNA在白血病细胞中的表达显著升高(P<0.01).结论:①SYBR Green Ⅰ实时RT-PCR是一种快速有效、灵敏度高、特异性好的定量检测BMI-1 mRNA的方法.②BMI-1参与白血病的发生,可能是一种新的肿瘤分子标记物.
关键词： 白血病 实时荧光定量RT-PCR SYBR Green Ⅰ BMI-1 -
BMI-1 shRNA载体的构建及其在Hela细胞中的表达
今后研究BMI-1在肿瘤基因治疗中奠定基础.
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原癌基因BMI-1的研究进展
BMI-1 (B-cell specific moloney leukemia virus insertion site 1,BMI-1)是PcG(Polycomb group,PcG)家族的一员,同时也是一种原癌基因,与cmyc一起参与小鼠T、B细胞淋巴瘤的发生.选择性敲除BMI-1可导致出生后进行性发育迟缓、神经系统异常和严重的造血缺陷等.本文就原癌基因BMI-1的研究进展作一综述.
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Bmi-1及Mel-18反向调节结直肠癌的形成和发展
目的 探讨Bmi-1和Mel-18在结直肠癌组织中的表达和临床意义.方法 采用免疫组织化学染色法和RT-PCR检测Bmi-1和Mel-18基因与蛋白在50例结直肠癌组织、20例结直肠腺瘤组织及20例正常结直肠组织中的表达.分析两者在结直肠癌组织中的表达情况和相关性,以及两者表达与临床病理因素的关系.结果 Bmi-1 mRNA和蛋白的表达在正常结直肠组织、结直肠腺瘤组织、结直肠癌组织均呈明显依次递增(均P ＜0.05),而Mel-18则呈反向趋势；结直肠癌组织中Bmi-1与Mel-18 mRNA及蛋白表达之间均明显呈负相关(r=-0.551,P=0.000;r=-0.579,P=0.000)；Bmi-1基因表达和蛋白阳性率水平与远处转移及临床分期呈正相关(P＜0.05).Mel-18基因表达水平与远处转移及临床分期呈负相关(P＜0.05).结论 Bmi-1高表达与Mel-18低表达可能是结直肠组织恶性转变以及结直肠癌发生浸润转移的重要生物学诊断指标.
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Bmi-1在神经母细胞瘤中的表达及意义
目的 通过检测原癌基因Bmi-1在神经母细胞瘤(NB)中的表达以及观察其表达水平对神经母细胞瘤的影响,探讨其在神经母细胞瘤中的作用.方法 用免疫组织化学和免疫印迹法检测方法分别检测人神经母细胞瘤标本和神经母细胞瘤细胞系细胞中Bmi-1的表达情况;采用逆转录病毒转染法将目的基因Bmi-1/si转染至Ⅰ型神经母细胞瘤细胞系BE-2-C细胞,通过Western免疫印迹法监测转染效果,并用软琼脂实验观察转染后的BE-2-C克隆形成能力.结果 在32例人神经母细胞瘤标本中29例有Bmi-1的高表达(90.63%),且Bmi-1的表达程度的高低和NB的临床分期和临床预后密切相关(P＜0.05),Western免疫印迹实验也显示9种不同病理类型的神经母细胞瘤细胞系细胞中均有Bmi-1的高表达,其表达水平和病理类型有密切相关.在软琼脂实验中,与对照组(空白载体转染组)比较,Bmi-1/si转染后的BE-2-C细胞所形成的克隆数目不仅显著减少,克隆也明显变小.结论 Bmi-1在神经母细胞瘤中高表达,其表达水平与肿瘤恶性程度密切相关,它在神经母细胞瘤的形成中起重要作用.
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Bmi-1通过抑制p16基因的表达促进人胰腺癌细胞的增殖
目的 观察靶向下调Bmi-1基因对人胰腺癌细胞(PANC-1)细胞增殖、p16启动子甲基化、p16表达的影响.方法 构建反义Bmi-1真核表达载体转染人人胰腺癌PANC-1细胞,运用荧光倒置显微镜观察、Western blot技术检测靶基因沉默效率；运用流式细胞术检测细胞周期及凋亡；Western blot、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测p16基因表达；甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测p16启动子甲基化变化.结果 荧光倒置显微镜观察转染后48 h细胞转染效率在90％左右；细胞周期出现阻滞(G0/G1期细胞由40.52％上升至60.48％,P＜0.05)、凋亡增加(由7.87％上升至21.67％,P＜0.05)；Bmi-1蛋白表达水平明显下降[吸光度(IA)值318.54±1.21到175.39±0.73,P＜0.05]；p16启动子甲基化水平降低而p16基因RNA(从3.563±0.128上升到8.621±0.310,P＜0.05)及蛋白质表达上升(IA值213.38±0.54到304.12±0.76,P＜0.05).结论 本实验构建的反义Bmi-1载体能够有效沉默细胞中靶基因的表达,抑制细胞增殖；Bmi-1很可能通过甲基化的方式对p16的表达进行调控.
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Bmi-1基因及其编码蛋白在SKM-1细胞系中的表达
目的探讨人类Blymphoma Mo-MLV insertion region(Bmi-1)基因及其编码蛋白在骨髓增生异常综合征(myelodysplasia syndrome,MDS)发病中的地位和作用.方法以正常骨髓和白血病细胞系K562为对照,利用半定量RT-PCR和Western Blot研究MDS细胞系SKM-1中Bmi-1基因在mRNA和蛋白水平的改变.结果SKM-1中Bmi-1在mRNA和蛋白水平均较正常组织有明显表达(P<0.05),二者表达水平与K562细胞系无显著差异(P>0.05).结论Bmi-1基因在MDS亚型RAEB细胞系SKM-1中有明显表达,其在RAEB发病中可能具有重要意义.
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RNAi技术沉默Bmi-1基因对人胃癌AGS细胞株的作用
目的:探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默Bmi-1基因表达对人胃癌细胞株AGS增殖和侵袭能力的影响.方法:利用慢病毒表达体系pHelperl.0/pHelper2.0/pGCL-GFP,构建针对Bmi-1基因shRNA序列的RNAi重组质粒vshRNA Bmi-1,转染AGS细胞,采用Western blot检测重组质粒对Bmi-1蛋白表达的影响,MTT法检测重组质粒对AGS细胞体外生长的抑制作用,P1单染法流式细胞术检测转染重组质粒后细胞凋亡与细胞周期的变化,小室侵袭实验检测AGS细胞侵袭能力变化.结果:成功构建了vshRNA-Bmi-1重组质粒,并成功转染AGS细胞抑制Bmi-1蛋白的表达.转染重组质粒后,AGS细胞增殖明显受到抑制,细胞凋亡增加,S期比例上升,细胞侵袭能力弱于非特异性转染组.结论:vshRNA-Bmi-1重组质粒明显下调Bmi-1蛋白在AGS胃癌细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞的增殖与侵袭,促进其凋亡.
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Bmi-1基因表达与血管内皮细胞衰老的相关性
目的:探讨Bmi-1基因与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的相关性,为研究血管内皮细胞衰老的分子机制打下基础.方珐:采用细胞传代及肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激方法模拟内皮细胞衰老,用SA-3-半乳糖酐酶(SA-β-gal)染色检测衰老,Real-time PCR检测P16INK4A及Bmi-1基因的表达变化.结果:随着细胞传代次数的增加,HUVECs体积变大,细胞浆内颗粒和空泡增多,β-gal阳性染色率显著增多,P16INK4A mRNA表达逐渐升高(第6、8代与第1代相比P＜0.05),同时Bmi-1 mRNA表达下降(第2、4、6、8代与第1代相比均P＜0.05).TNF-α(10 ng/mL)孵育HUVECs 48 h,与对照组相比,P16INK4A mRNA表达明显增加(P＜0.05),Bmi-1 mRNA表达下降(P＜0.05).结论:Bmi-1在衰老内皮细胞中表达显著降低,提示其在血管内皮细胞衰老发生发展中起重要作用.
关键词： BMI-1 内皮细胞 衰老 Real-time PCR -
褪黑素对人神经胶质瘤DBTRG细胞Bmi-1基因表达的影响
目的:观察褪黑素是否抑制DBTRG细胞增殖;DBTRG细胞中Bmi-1基因的表达是否受到褪黑素的影响.方法:用不同浓度的褪黑素刺激体外培养的入神经胶质瘤细胞系DBTRG细胞,MTF法检测各组细胞的活性,显微成像系统对各组细胞进行拍照,观察细胞形态的变化;运用Real-time RT-PCR检测癌基因Bmi-1的表达水平,Western-blot检测Bmi-1的蛋白水平变化.结果:(1)使用药理浓度的褪黑素(0.5、1.0、2.0 mmol/L)可抑制DBTRG细胞增殖,且随作用时间延长抑制效果越明显.(2)未经处理的DBTRG细胞Bmi-1 mRNA水平很高,经褪黑素刺激后DBTRG细胞中Bmi-1 mRNA明显下降,并有浓度依赖.(3)经褪黑素刺激后DBTRG细胞中Bmi-1的蛋白水平明显降低.结论:褪黑素可能通过调低DBTRG细胞中癌基因Bmi-1的表达来抑制DBTRG细胞增殖.
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Bmi-1在胆管细胞癌中的表达及统计分析
目的:探讨Bmi-1在胆管细胞癌中的表达及统计分析.方法:收集武汉大学人民医院病理科2002～2008年胆管细胞癌存档蜡块40例,其中男性20例,女性20例.另取胆管细胞癌周围正常组织5例作对照.所有标本采用免疫组织化学S-P法检测各组中Bmi-1的表达,利用HPIAS-2000图像分析系统测定各组中Bmi-1表达的平均光密度和平均阳性面积率.采用HPIAS-1000 高清晰度彩色病理图文报告管理系统对Bmi-1的表达进行定量分析,并用SPSS11.5 软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q) 检验.结果:Bmi-1的表达:正常对照组中小叶间胆管上皮Bmi-1表达弱或无表达;胆管细胞癌组中癌细胞胞浆内Bmi-1表达强,胆管细胞癌组与正常对照组比较,差异有显著性(P<0.05).结论:Bmi-1在在胆管细胞癌的发生发展中发挥着重要的作用.
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Bmi-1基因RNA干扰对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响
目的 构建针对Bmi-1基因的RNAi表达载体,观察其对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响.方法 利用慢病毒表达体系pHelper1.0/pHelper2.0/pGCL-GFP,成功构建针对Bmi-1基因的RNAi重组质粒vshRNA-Bmi-1,适时定量PCR(real-time PCR)检测稳定转染后胃癌细胞SGC-7901中Bmi-1mRNA表达,流式细胞术检测细胞凋亡,MTT法检测其增殖能力.结果 稳定转染vshRNA-Bmi-1后SGC-7901细胞Bmi-1 mRNA表达明显下降,总抑制效率达85％;癌细胞增殖减慢,凋亡率明显增加.结论 构建针对Bmi-1基因的RNAi表达载体,成功转染胃癌细胞SGC-7901,可促进癌细胞凋亡,抑制其增殖能力.
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磷酸化p38介导低切应力诱导的血管内皮细胞Bmi-1表达
目的 探讨低切应力(LSS)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中Bmi-1表达的影响及其可能的机制.方法 原代培养HUVEC,免疫荧光检测Bmi-1在细胞中的定位;运用平行平板流动腔系统,给HUVEC加载0.5 Pa低切应力0.5 h、1h、2h和4h,以无切应力加载为对照组,用实时定量RT-PCR检测Bmi-1 mRNA表达,用Western blot检测Bmi-1蛋白表达,利用p38特异性抑制剂SB2219探讨信号转导途径.结果 免疫荧光观察发现Bmi-1主要分布在HUVEC胞核中;HUVEC在LSS作用0.5 h后Bmi-1表达即明显增强,随着作用时间延长(1h、2h、4h),Bmi-1mRNA及蛋白表达逐渐降低;切应力能显著激活磷酸化p38表达;SB2219可以明显抑制Bmi-1表达.结论 LSS可诱导HUVEC中Bmi-1表达,其表达量与刺激时间长短密切相关,这种作用可能通过p38信号调节.
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体外培养的平滑肌细胞多梳基因Bmi-1的表达变化及其与细胞增殖和细胞周期的关系
目的 探讨多梳基因Bmi-1在体外培养的血管平滑肌细胞中的表达变化及其与细胞增殖和细胞周期谮的关系,以了解在平滑肌细胞表型转换及增殖过程中的早期基因事件.方法 逆转录聚合酶链反应检测1～4代大鼠平滑肌细胞及不同浓度的丙戊酸钠作用于第4代血管平滑肌细胞24、48、72和96 h后Bmi-1 mRNA的表达.倒置显微镜下观察正常细胞及各组药物作用后细胞数量和形态的变化.四甲基偶氮唑盐法分析各组药物作用后细胞增殖活力的改变.流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡.结果 体外培养的第1代大鼠血管平滑肌细胞有少量的Bmi-1 mRNA的表达,在传代过程中Bmi-1 mRNA的表述量逐渐增加,到第4代达到较高水平;经0.5～4.0mmoL/L丙戊酸钠作用于第4代平滑肌细胞24、48、72和96 h后,Bmi-1 mRNr A的表达量随浓度的增加和时间的延长而呈下降趋势.各浓度丙戊酸钠干预组随作用时间及浓度的增大均出现了生长抑制.经丙戊酸钠处理后各组出现细胞周期G2/M期阻滞及细胞凋亡,且随药物浓度的升高而增大.结论 平滑肌细胞体外增殖及由收缩表型向合成表型的转化过程中出现平行的Bmi-1基因表达上调.丙戊酸钠可通过降低Bmi-1的表达明显抑制血管平滑肌细胞生长,并具有细胞周期G2/M期阻滞及捉凋亡作用.
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多梳基因EZH2与BMI-1在动脉粥样硬化大鼠主动脉中的过表达和EZH2的磷酸化
目的 检测EZH2与BMI-1在动脉粥样硬化大鼠主动脉中的表达改变,以及磷酸化蛋白激酶B-磷酸化EZH2通路在动脉粥样硬化大鼠主动脉中的表达变化,以探讨动脉粥样硬化发病中DNA甲基化修饰异常的上游表观遗传机制.方法 建立大鼠动脉粥样硬化模型,通过血脂生物化学分析以及主动脉HE染色切片鉴定动脉粥样硬化模型.取胸腹主动脉内膜、中膜为标本,逆转录聚合酶链反应检测EZH2和BMI-1的mRNA表达,免疫组织化学法检测蛋白激酶B和EZH2蛋白磷酸化在动脉粥样硬化主动脉中的变化.结果 模型组EZH2和BMI-1的mRNA表达明显高于正常对照组(P＜0.05和P＜0.01).模型组中蛋白激酶B和EZH2蛋白的磷酸化程度均明显高于正常对照组(P＜0.01).结论 EZH2和BMI-1的mRNA在动脉粥样硬化病损动脉中显示共同高表达;且磷酸化EZH2蛋白和磷酸化蛋白激酶B蛋白表达在动脉粥样硬化病损动脉中平行上调,提示EZH2和BMI-1的共同高表达和蛋白激酶B介导的EZH2磷酸化可能是动脉粥样硬化发病过程中的早期表观遗传机制紊乱.
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Bmi-1及Mel-18在乳腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系
目的:探讨Bmi-1和Mel-18在乳腺癌组织中的表达和临床意义.方法:采用RT-PCR和免疫组织化学染色法检测Bmi-1和Mel-18基因与蛋白在40例乳腺癌组织和20例乳腺良性肿瘤组织及20例正常乳腺组织中的表达.分析两者在结直肠癌组织中的表达情况和相关性,以及两者表达与临床病理因素的关系.结果:Bmi-1 mRNA的表达和蛋白阳性率在正常乳腺组织、乳腺良性组织、乳腺癌组织均呈明显依次递增(均P＜0.05),而Mel-18则基本呈反向趋势(正常乳腺组织与乳腺良性组织间差异不明显);乳腺癌组织中Bmi-1与Mel-18 mRNA及蛋白表达之间均明显呈负相关(r=-0.317,P=0.023；r=-0.413,P=0.008)；两者基因表达和蛋白阳性率水平与淋巴结转移及临床分期密切相关(均P＜0.05),而与患者的年龄、绝经状况、肿瘤大小、组织学分级无关(均P＞0.05).结论:Bmi-1过表达与Mel-18低表达可能是乳腺组织恶性转变以及乳腺癌发生浸润转移的重要生物学标志.
