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小鼠同种异基因骨髓腔内骨髓移植促进早期造血功能重建
目的 探讨同种异基因骨髓腔内骨髓移植(IBM-BMT)对小鼠早期造血功能重建的影响.方法 将BALB/c小鼠骨髓单个核细胞(BMNCs)分别用胫骨骨髓腔内注射(IBMI)和尾静脉注射(IV)两种方法移植入经致死量~(60)Coγ射线辐照后的60只C57BL/6小鼠.受鼠随机分为3组:骨髓腔内注射高和低剂量组(IBM1和IBM2组)、尾静脉注射组(IV组),每组20只.在骨髓移植后1、3、6和9 d分别计数各组受鼠胫骨骨髓腔内有核细胞总数,并用流式细胞术检测供体植入水平(供体来源有核细胞总数、供体来源髓系细胞数).结果 于移植后6 d,IBM1组和IBM2组注射侧胫骨骨髓腔内有核细胞总数、供体来源有核细胞总数、供体来源髓系细胞总数均明显高于IV组(P<0.05或P<0.01).结论 IBM-BMT较IV-BMT更能促进同种异基因骨髓移植后的早期造血功能重建.
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肺炎克雷伯菌两种感染方法小鼠模型的研究
目的 探讨尾静脉注射法和鼻腔滴注法对肺炎克雷伯菌小鼠模型的影响.方法 选择体质量30 g左右清洁级雄性昆明小鼠30只,随机分为对照组、尾静脉组、鼻腔组给予菌液后,每2 h观察小鼠发病情况,记录小鼠体质量变化.小鼠感染后眼球取血法处死一批小鼠.采用酶联免疫法检测血清C-反应蛋白(CRP ) 、降钙素原(PCT )和白细胞介素-1(IL-1) 、IL-6 .苏木精-伊红染色法(HE)染色观察肺组织病理形态学改变.结果 对照组小鼠活跃,饮食正常.尾静脉组6 h后均开始发病,脸部肿胀,28 h死亡1例.小鼠鼻腔滴注细菌后,24 h后小鼠逐渐开始发病,36h后小鼠症状加重,对照组小鼠28h和50h体质量为(318.4±09.9)g和(323.1±11.3)g高于感染前(299.3±09.8)g(P＜00.01);尾静脉组28h和鼻腔组小鼠28h、50h体质量分别为(268.2±05.2)g和(283.6±08.8)g、(260.6±08.2)g低于对照组相应时期(P＜00.01).尾静脉组小鼠28 h体质量低于感染前和鼻腔组28 h(P＜0 0.01) ;随时间延长,鼻腔组体质量逐渐下降(P＜0 0.01).感染后尾静脉组小鼠CRP 、PCT和IL-1 、IL-6分别为(44 0.6 ± 10 3.7)μg／ml 、(18 6.4 ± 6 9.2)ng／ml 、(158 6.2 ± 33 8.6)pg／ml 、(19 1.5 ± 4 8.2)pg／ml和鼻腔组为(183.9±46.9)μg／ml、(6 .23±2 .03)ng／ml、(1030.3±27 .22)pg／ml、(12 .18±3 .80)pg／ml高于对照组(P＜0 0.01) ;尾静脉组小鼠CRP 、PCT和IL-1 、IL-6高于鼻腔组(P＜0 0.01).尾静脉组小鼠肺组织出现炎性渗出物,肺泡腔内浸润大量炎性细胞,肺泡结构模糊;鼻腔组肺泡出现炎性细胞浸润,肺泡结构呈现模糊.结论 尾静脉注射和鼻腔滴注构建肺炎克雷伯菌小鼠模型,体质量、CRP 、PCT 和炎性因子水平存在差异性,且尾静脉注射比鼻腔滴注严重.
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改良小鼠尾静脉注射器联合微量注射泵在Micro-CT碘海醇增强造影中的应用
目的 探讨本研究组改良的穿刺设备及其他类型的穿刺设备在基于碘海醇的小鼠Micro-CT腹部增强造影中的效果.方法 100只昆明小鼠尾部热浴后,使用小动物麻醉机进行麻醉,并监测生命体征.应用5组设备行尾静脉穿刺:①常规1ml注射器及2.5 #诺和锐针头;②常规1ml注射器及4.5#针头;③常规输液器7#针头;④常规输液器5 #针头;⑤改良4.5#针头及输液连接装置,评价5组的优缺点并记录穿刺成功率.经Micro-CT扫描,记录图像采集率以及扫描后小鼠死亡率.结果 5组设备穿刺成功率、图像采集成功率以及小鼠死亡率均有差异(p＜0.05).综合比较各组成功率和小鼠死亡率,第5组为优,能较好的对图像进行采集并且大程度地减少小鼠的死亡.结论 改良的尾静脉穿刺设备联合微量注射泵及小动物麻醉机的综合方式,能显著提高尾静脉穿刺和图像采集成功率以及降低小鼠死亡率,很好地应用于Micro-CT增强造影中,降低了实验动物成本.
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小鼠尾静脉注射与心肌注射腺病毒载体转染效率的比较
目的：比较小鼠尾静脉注射或心肌注射腺病毒载体后心脏组织和肝脏组织中靶基因的转染效率。方法构建表达绿色荧光蛋白 GFP 的腺病毒载体（GFP－Ad）。 C57BL／6小鼠20只随机分为尾静脉注射腺病毒载体组与心肌注射腺病毒载体组各10只，用实时定量 PCR 检测不同时间点小鼠心肌组织和肝脏组织中 GFP 的mRNA 表达水平，并且通过荧光显微镜观察 GFP 荧光表达情况。结果心肌注射腺病毒载体组心脏组织中 GFP 的mRNA 表达水平明显高于尾静脉注射腺病毒载体组，心肌注射腺病毒载体组心脏组织中荧光强度明显增强。同时，我们发现两组的肝脏组织中 GFP 的 mRNA 表达水平和荧光强度均明显高于心脏组织中；且在尾静脉注射腺病毒载体组，肝脏组织中 GFP 的 mRNA 表达水平和荧光强度在7 d 达高峰，而心肌注射腺病毒载体组则在3 d 达高峰。结论提高心脏组织中靶基因的转染效率宜采用心肌注射腺病毒载体的方法；对于肝脏组织转染效率，两种注射方法均可，鉴于尾静脉注射腺病毒载体的方法创伤小，宜采用。
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抑制小鼠乳腺肿瘤转移 microRNA 的筛选
目的：鉴定25种microRNA的功能及其在乳腺癌中发挥的作用，以筛选新的抑制乳腺癌转移的microRNA分子。方法利用脂质体2000将25种鼠源microRNA表达载体转染至4TO7细胞，经G418筛选结合流式细胞仪分选获绿色荧光细胞得稳定表达鼠源microRNA 的细胞株。将细胞2×105个/只尾静脉注射接种于BALB/C小鼠，14 d后解剖分离肺组织，统计小鼠肺组织结节数目。结果和接种阴性对照细胞小鼠相比，接种mir-449a稳转细胞的小鼠肿瘤肺转移减少。而接种 mir-1935稳转细胞的小鼠肿瘤肺转移增多。其它23种microRNA稳转细胞接种小鼠肿瘤肺转移既不增加也不减少。结论从25种鼠源microRNA中筛选到2种与乳腺癌肿瘤转移相关的microRNA：mir-449a抑制乳腺癌细胞肺转移，mir-1935则促进癌细胞肺转移。
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一种简易小鼠尾静脉注射固定法--笼盖压制法
目的：介绍一种简便易行的小鼠尾静脉注射固定方法。方法20只BALB／C雄性荷瘤裸鼠，由实验员A和实验员B用笼盖压制法固定小鼠进行尾静脉注射，观察注射完成时间和成功率。结果两位实验员100％均可完成尾静脉注射。结论笼盖压制法为小鼠进行尾静脉注射提供了一种简易方法，特别对于特殊形态的小鼠进行尾静脉注射更加有效。
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一种小鼠尾静脉注射的操作方法
目的：为小鼠尾静脉注射提供一种实用的装置与使用方法。方法利用自制装置上的恒温部分、照明部分以及固定部分进行小鼠尾静脉注射操作，对比使用装置进行操作前后注射的难易程度及完成时间的差别。结果使用自制装置进行尾静脉注射更准确更快速。结论该自制装置在小鼠尾静脉注射操作过程中能明显提高注射成功率，缩短注射时间。
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小鼠内眦静脉丛注射与尾静脉注射比较
目的 对小鼠内眦静脉丛注射与尾静脉注射进行比较.方法 对4～6周的BALB/c小鼠注射等量生理盐水,对其操作的难易程度以及操作时间进行对比.结果 小鼠内眦静脉对于刚刚开始操作的实验人员来说更容易上手;小鼠尾静脉注射相比内眦静脉注射难度稍高,且实验之前需多次训练方可熟练操作.结论 小鼠内眦静脉注射是一种操更简便,且成功率更高的小鼠静脉注射方法
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C57BL/6 小鼠尾静脉四种穿刺方法的比较
目的 探究C57BL/6小鼠不同尾静脉注射方法的差异,为小鼠尾静脉注射提供更为安全、可靠、成功率高的基础实验依据.方法 将320只小鼠按照随机数字法随机分成4组:空白对照组、白炽灯烘烤法组、三头线法组和联合应用法组.选择穿刺小鼠左侧或右侧外周静脉进行取血,记录各组穿刺成功率,采用SPSS 13.0统计软件进行分析,比较各组间的统计学差异.结果 与空白对照组相比,白炽灯烘烤法组、三头线法组和联合应用法组穿刺成功率均显著提高(P< 0.001).其中,三头线法组优于白炽灯烘烤法组(P< 0.001),而联合应用法组成功率则明显高于三头线法组和白炽灯烘烤法组(P< 0.001).结论 C57BL/6小鼠尾静脉不同注射方法中,联合应用法操作简单,可重复性高,穿刺成功率很高,值得进一步推广使用.
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树鼩尾静脉注射单人操作方法与经验
目的 介绍树鼩清醒状态下尾静脉注射的单人操作方法与经验,提高尾静脉注射给药成功率.方法 采用帆布手套套取和文件夹夹紧手套的方法固定树鼩,左手固定树鼩尾巴,右手持1 mL一次性注射器注射药物.结果 本方法操作简单、经济实用、固定效果好、动物依从性好、给药成功率高.结论 本方法与其他的尾静脉注射方法比较,有明显的优势.可单人操作,简便快速,省时省力;实验成本低,使用效果好,物美价廉;显著提高了树鼩尾静脉注射给药的成功率.
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大鼠清醒状态下尾静脉注射的快速操作技巧与体会
目的：介绍大鼠清醒状态下尾静脉注射的快速操作技巧与体会，提高操作成功率。方法采用自制大鼠束缚衣结合操作者轻按的方法固定大鼠，一人辅助固定，一人穿刺，一人注药，在注射过程中尽量减少对鼠尾的损伤和对大鼠产生的应激，严格规定进针点和穿刺次数，限制一次性大给药剂量和注射速度，并采取将进针与注射药液的部位分开等方法避免药物污的染和浪费。结果本法操作快速、可靠、稳定、重复性好、动物配合度高。结论本法避免了药物的浪费和污染，对于药物昂贵的尾静脉注射实验此做法尤为推荐。
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氧化石墨烯在大鼠体内安全性的初步研究
目的：观察氧化石墨烯在Wistar雄性大鼠中的生物安全性，为氧化石墨烯在生物医学上的应用提供必要前提条件。方法选用体质量150～200 g Wistar雄性大鼠80只，鼠龄6～8周。以60 mg/kg剂量经Wistar大鼠尾静脉注射氧化石墨烯观察大鼠的一般情况，并在注射后第3天、第6天、第9天、第12天、第15天解剖大鼠，观察氧化石墨烯在主要器官分布与代谢的情况，并观察其病理情况。在注射后第6天和第12天采集大鼠血液，观察氧化石墨烯对大鼠血常规和生物化学功能指标的影响。结果经尾静脉注射的氧化石墨烯，注射后第6天和第12天大鼠血常规和生物化学功能指标无影响，注射后第3天、第6天、第9天、第12天、第15天大鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏均未见氧化石墨烯颗粒沉积，这些主要器官的切片中也未见到坏死细胞、巨噬细胞等其他炎性细胞。结论氧化石墨烯剂量为60 mg/kg时对大鼠的一般情况无明显影响，对大鼠的血常规和生物化学功能指标无明显影响；在体内主要器官未发现明显沉积，未发现病理改变；实验证实了氧化石墨烯在大鼠体内的生物安全性，为氧化石墨烯的生物医学应用提供了可靠的前提条件。
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尾静脉注射重组腺相关病毒载体小鼠肾组织病毒表达的观察
目的：通过小鼠尾静脉注射rAAV8-GFP病毒，观察腺相关病毒作为基因治疗载体在肾组织的表达情况，探讨此造模方法使腺相关病毒作为基因载体在肾脏表达的可行性，为进一步基因治疗肾脏疾病提供依据。方法：取16只C57-BL6小鼠，随机分为两组（ n =8），对照组小鼠尾静脉注射 PBS 0．2 ml，模型组小鼠尾静脉注射含有1×1011 Iu／ml rAAV8-GFP 0．2 ml，4周后处死小鼠，用HE染色和免疫组化方法分别观察携有绿色荧光蛋白（ GFP）rAAV-8在肾脏、肝脏、脾脏、肺脏和心脏等各组织，形态结构变化和荧光表达情况，并用PCR和Real-Time PCR方法检测rAAV8-GFP在肾脏、肝脏、脾脏、肺脏和心脏DNA表达情况。结果：与对照组比较，HE染色提示，模型组各脏器组织结构无明显变化。免疫组化提示肝脏有明显绿色荧光蛋白表达，肾脏，脾脏，肺脏和心脏绿色荧光蛋白表达不明显。Real-Time PCR方法发现，与对照组比较，肝脏表达rAAV-8表达高，心脏，肾脏，肺脏和脾脏都有不同层度表达，但表达水平较低。结论：尾静脉注射rAAV8-GFP造模方法可使rAAV8-GFP在肾组织中有一定程度表达，但表达量偏少，尚不能作为一个较好腺相关病毒在肾脏表达的造模方法。
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脂肪来源间充质干细胞移植干预系统性红斑狼疮模型小鼠的免疫功能
背景:虽然间充质干细胞治疗系统性红斑狼疮已取得临床疗效,但其免疫调节的内源性功能及作用机制有待深入研究.目的:探讨来源的脂肪间充质干细胞对系统性红斑狼疮小鼠(MRL/lpr小鼠)免疫功能的影响及其可能机制.方法:将36只MRL/lpr小鼠随机分为3组:模型对照组不进行干预、磷酸盐缓冲液对照组尾静脉注射磷酸盐缓冲液、干细胞移植组尾静脉注射脂肪间充质干细胞;另取12只C57BL/6小鼠作为正常对照组.结果与结论:①分离MRL/lpr小鼠脂肪组织获得的细胞具有脂肪间充质干细胞特性;②模型对照组、磷酸盐缓冲液对照组和干细胞移植组的血清尿素氮、肌酐和抗双链DNA抗体水平均高于正常对照组(P<0.01);干细胞移植组的血清尿素氮、肌酐和抗双链DNA抗体水平低于模型对照组和磷酸盐缓冲液对照组(P<0.05);③模型对照组和磷酸盐缓冲液对照组的外周血调节性T细胞阳性率低于正常对照组和干细胞移植组,干细胞移植组外周血调节性T细胞阳性率低于正常对照组(P<0.01);④模型对照组和磷酸盐缓冲液对照组的脾脏树突状细胞阳性率低于正常对照组和干细胞移植组(P<0.01);⑤模型对照组、磷酸盐缓冲液对照组和干细胞移植组的Th2比例高于正常对照组(P<0.05);模型对照组和磷酸盐缓冲液对照组的Th1比例和Th1/Th2比值低于正常对照组和干细胞移植组(P<0.05);⑥与正常对照组比较,模型对照组和磷酸盐缓冲液对照组外周血中白细胞介素2、干扰素γ、白细胞介素10和T淋巴细胞产生的淋巴毒素水平降低,白细胞介素4水平升高(P<0.05);与模型对照组和磷酸盐缓冲液对照组比较,干细胞移植组外周血中白细胞介素2、白细胞介素10、干扰素γ和T淋巴细胞产生的淋巴毒素水平升高,白细胞介素4水平降低(P<0.05).结果表明脂肪间充质干细胞移植可通过提高树突状细胞和调节性T细胞比例、促进辅助性T细胞亚型的转化对系统性红斑狼疮小鼠免疫功能产生影响.
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甲基强的松龙抑制脊髓损伤模型大鼠小胶质细胞活化介导的炎症
背景:小胶质细胞作为中枢神经系统的固有免疫细胞,已被证实参与调控中枢神经系统损伤后的神经炎症.甲基强的松龙冲击疗法作为目前脊髓损伤早期临床常用治疗方法,其对脊髓损伤后神经炎症的作用及机制尚不清楚.目的:观察甲基强的松龙对脊髓损伤后小胶质细胞活化介导炎症的作用.方法:36只SD大鼠购自上海斯莱克实验动物责任有限公司.将大鼠随机分为假手术组、模型组、甲强龙组,每组12只.假手术组仅行椎板切除术;模型组和甲强龙组均采用NYU脊髓打击器制备脊髓损伤模型,甲强龙组给予甲基强的松龙尾静脉注射;假手术组和模型组给予等量0.9％氯化钠尾静脉注射.干预后3 d取材,采用尼氏染色光镜观察形态,Elisa检测大鼠静脉血中白细胞介素1β和白细胞介素18水平,激光共聚焦扫描显微镜观察活化的小胶质细胞IBA-1/ED-1双阳性细胞数,Western blot检测ED-1蛋白表达情况,qPCR检测白细胞介素1βmRNA和白细胞介素18 mRNA表达量.结果与结论:①尼氏染色提示甲基强的松龙可改善脊髓损伤后神经元形态,促进神经元恢复;②与模型组比较,甲强龙组白细胞介素1β和白细胞介素18表达水平显著降低(P<0.05);③与模型组比较,甲强龙组IBA-1/ED-1双阳性细胞数显著减少(P<0.05);④与模型组比较,甲强龙组ED-1蛋白表达量显著减少(P<0.05);⑤与模型组比较,甲强龙组白细胞介素1βmRNA和白细胞介素18 mRNA表达水平显著降低;⑥结果说明,甲基强的松龙抑制炎症的机制与其抑制脊髓损伤后小胶质细胞活化介导的炎症有关,从而有利于神经元恢复.
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改进型颈动脉注射法递送新型基因运载体包裹绿色荧光示踪蛋白
背景：超支化支链淀粉衍生物作为非病毒基因载体具有低毒性、转染率好的特点，但如何高效递送其进入机体内使有治疗作用基因成功表达的方式仍在探索中。
目的：探讨包裹绿色荧光蛋白的新型基因运载载体经改进颈动脉注射法到达大鼠脑缺血损伤区的表达情况。方法：取雄性SD大鼠制作大脑中动脉梗死模型，24 h后随机分为2组，对照组以尾静脉注射包裹绿色荧光蛋白的超支化支链淀粉衍生物，实验组以改进型颈内动脉注射包裹绿色荧光蛋白的超支化支链淀粉衍生物。7 d后处死大鼠，取出脑组织，qPCR和Western blot检测大鼠脑组织中绿色荧光蛋白的基因和蛋白水平，免疫荧光法观察脑组织冰冻切片中血管内壁附近绿色荧光蛋白的表达。
结果与结论：qPCR和Western blot检测结果均显示实验组大鼠脑组织中绿色荧光蛋白的表达量显著高于对照组(P<0.05)，免疫荧光观察结果显示绿色荧光蛋白在实验组血管内壁附近的表达高于对照组。在SD大鼠大脑中动脉梗死模型中，相比尾静脉注射法，改进型颈动脉注射法可显著促进脑缺血损伤区的超支化支链淀粉衍生物及绿色荧光蛋白在脑组织中表达的量。 -
HCT116细胞意外皮下转移成瘤的初步研究
目的 探讨结肠癌细胞株HCT116皮下种植瘤的组织细胞再行尾静脉注射成瘤的可行性.方法 将30只裸鼠随机分为A、B、C组,每组10只.A组尾静脉注射生理盐水,B组尾静脉注射HCT116细胞悬液0.1 ml,C组尾静脉注射HCT116皮下种植瘤组织悬液0.1 ml.将HCT116细胞皮下种植瘤组织悬液离心分为细胞与组织悬液.另取20只裸鼠随机分为细胞组和悬液组(n=10),尾静脉注射细胞或悬液.观察各组裸鼠成瘤及转移情况.结果 A组无肿瘤形成.B组裸鼠尾静脉注射HCT116细胞成功9只,8只形成肺部转移瘤,其中2只同时形成肝部转移瘤.C组裸鼠尾静脉注射HCT116皮下种植瘤组织悬液成功9只,初期有4只尾根部出现肿块,30天后5只裸鼠的骶部、颈部出现肿瘤(严重者有1只同时胸窝皮下也形成肿瘤),50天后形成肺部转移瘤,死亡;未形成皮下种植瘤的4只裸鼠中有3只形成肺部转移瘤后死亡.细胞组裸鼠注射离心后的细胞成功8只,仅1只形成肺部转移瘤.悬液组裸鼠注射离心后组织悬液无肿瘤形成.结论 HCT116皮下种植瘤组织悬液尾静脉注射后,能定向地从血管迁移至裸鼠皮下组织成瘤.
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mmLDL对小鼠肠系膜动脉α1受体介导的血管收缩及相关蛋白表达影响的研究
目的：探讨mmLDL对小鼠肠系膜动脉α1受体的作用。方法小鼠尾静脉注射mmLDL,微血管肌张力描记仪观察NA引起的小鼠肠系膜动脉收缩量效曲线变化, RT-PCR、Western blot 检测α1受体及α2受体表达。结果mmLDL引起NA收缩量效曲线明显增强,表现为Emax值由生理盐水( NS )组的(120．75±3．44)%上升为(161．00±6．87)%(P<0．01),pEC50值由NS组的(5．65±0．05)上升为(6．20±0．08)(P<0．01)。α1受体拮抗剂哌唑嗪引起量效曲线的明显右移,mmLDL引起α1受体mRNA水平、蛋白表达明显增加,对α2受体表达基本没有影响。结论尾静脉注射mmLDL上调小鼠肠系膜动脉α1受体。
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模拟1型糖尿病发病过程的迟发性动物模型建立
糖尿病是一类由多种病因引起的代谢性疾病,建立稳定可靠的糖尿病动物模型成为该疾病研究的前提~[1].目前多用STZ诱导,给药剂量在50～75 mg·kg(-1)之间~[2].传统方法使模型动物在短期内达到过高的空腹血糖水平,所建立的动物模型无法较为准确地模拟糖尿病患者的真实血糖情况,不能更好地用于糖尿病发生、发展以及发病机制的研究.本研究通过改进传统给药方式和剂量,建立能够模拟1型糖尿病发病过程的迟发性动物模型,为研究治疗糖尿病新型药物奠定基础.
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外源性rIL-10基因质粒静脉注射及其在大鼠体内表达
目的 建立大鼠体内质粒DNA尾静脉快速大容量注射法,使外源性rIL-10在肝组织中高表达,为探索肝脏疾病的基因治疗提供动物试验手段.方法 以rIL-10为报告基因,将含不同体积及不同质粒浓度的质粒DNA溶液经大鼠尾静脉快速注射,在注射后的不同时间内分别收集血浆及肝、肾、肺、脾和心组织,使用RT-PCR、ELISA和免疫组化法检测rIL-10在体内的表达情况.结果 尾静脉快速大容量注射rIL-10 DNA溶液可使rIL-10基因在大鼠肝脏有较明显转录及表达.血浆中rIL-10浓度可通过质粒的重复注射使其保持在一个稳态.结论 尾静脉快速大容量注射法是一种简单、方便和有效的大鼠体内基因转移及基因表达的方法,为进一步探讨rIL-10基因在肝脏疾病的基因治疗打下基础.
