首页 > 文献资料
-
小鼠同种异基因骨髓腔内骨髓移植促进早期造血功能重建
目的 探讨同种异基因骨髓腔内骨髓移植(IBM-BMT)对小鼠早期造血功能重建的影响.方法 将BALB/c小鼠骨髓单个核细胞(BMNCs)分别用胫骨骨髓腔内注射(IBMI)和尾静脉注射(IV)两种方法移植入经致死量~(60)Coγ射线辐照后的60只C57BL/6小鼠.受鼠随机分为3组:骨髓腔内注射高和低剂量组(IBM1和IBM2组)、尾静脉注射组(IV组),每组20只.在骨髓移植后1、3、6和9 d分别计数各组受鼠胫骨骨髓腔内有核细胞总数,并用流式细胞术检测供体植入水平(供体来源有核细胞总数、供体来源髓系细胞数).结果 于移植后6 d,IBM1组和IBM2组注射侧胫骨骨髓腔内有核细胞总数、供体来源有核细胞总数、供体来源髓系细胞总数均明显高于IV组(P<0.05或P<0.01).结论 IBM-BMT较IV-BMT更能促进同种异基因骨髓移植后的早期造血功能重建.
-
腺病毒介导的hVEGF165基因转移促进小鼠骨髓移植后造血重建
本研究探讨内皮细胞生长因子对骨髓移植小鼠造血重建的影响.重组腺病毒AdEGFP/hVEGF165经尾静脉注射给同基因骨髓移植BALB/c小鼠;在移植后10、20和30天时检测hVEGF165在小鼠体内的表达,同时测定外周血白细胞、血小板、红细胞计数和骨髓单个核细胞数;对分离移植后30天的骨髓单个核细胞进行脾集落形成试验.结果显示:重组腺病毒成功介导了hVEGF165在骨髓移植小鼠各脏器和血浆中的长期表达;移植后各时间点,接受hVEGF165治疗组小鼠外周血白细胞、血小板、红细胞计数及骨髓单个核细胞数虽然低于正常对照组,但高于其它实验组(P<0.05);移植后30天时hVEGF165治疗组小鼠骨髓单个核细胞形成的脾集落数(21.4±2.67)恢复正常水平(19.50±2.46)(P>0.05),较其它实验组显著增加(P<0.05).结论:腺病毒介导的VEGF基因转移具有促进骨髓移植小鼠造血功能重建的作用.
关键词: 血管内皮细胞生长因子 重组腺病毒 基因转移 骨髓移植 造血恢复 -
异基因骨髓移植小鼠联合输注IL-3/IL-6双基因转导的骨髓基质细胞促进造血恢复
探讨用逆转录病毒载体转入IL-3和IL-6双基因的骨髓基质细胞系QXMSC1IL-3/IL-6对异基因骨髓移植小鼠造血功能的促进作用.用逆转录病毒载体(含小鼠IL-3 cDNA,人IL-6 cDNA)分别转导到骨髓基质细胞系QXMSC1(H-2d),构建骨髓基质细胞系QXMSC1IL-3/IL-6.供体小鼠BALB/c(H-2d)骨髓去除骨髓中T细胞,受体小鼠C57BL/6(H-2b)经γ射线致死量照射后,输入去除T细胞的供体骨髓(1×107/鼠)的同时输入骨髓基质细胞QXMSC1IL-3/IL-6(5×105/鼠).在骨髓移植后20和40天,分别检测骨髓移植小鼠外周血RBC,WBC和骨髓有核细胞数及骨髓中CFU-S,CFU-GM,CFU-E和CFU-GEMM数.结果:异基因骨髓移植共输入QXMSC1IL-3/IL-6基质细胞系可使异基因骨髓移植小鼠外周血RBC,WBC数明显恢复,骨髓中有核细胞数,CFU-S,CFU-GM,CFU-E和CFU-GEMM明显增加.基质细胞系QXMSC1可作为有效的基因载体促进骨髓移植后造血功能重建.结论:基质细胞转入细胞因子IL-3或IL-6基因可以进一步促进骨髓移植后造血功能重建,联合转导IL-3和IL-6有协同作用.
-
人骨髓间充质干细胞对放射损伤小鼠造血恢复的影响
本研究旨在探讨人骨髓间充质干细胞(hBMMSC)对受γ射线照射小鼠造血恢复的影响.亚致死剂量(6Gy)60Co-γ射线全身照射雌性BALb/c小鼠,静脉输注不同剂量(1×105,1×106和5×106)的hBMMSC,观察注射后小鼠血常规指标、骨髓造血祖细胞集落量以及血清人TPO,SCF和G-CSF水平等动态变化.结果表明:hBMMSC输注对亚致死量照射小鼠早期死亡率无影响;与对照组比较,接受细胞治疗小鼠早期血象水平无显著增高,但在第28天外周血白细胞、红细胞、血小板计数和血红蛋白水平高于对照组,尤以大剂量组明显(P值均小于0.05);在中剂量和大剂量hBMMSC组小鼠骨髓中,单个核细胞集落形成单位总数和粒单系集落形成单位数均高于对照组(P<0.05);hBMMSC输注后第2天,ELISA法检测可在细胞治疗组小鼠血清中检测到人G-CSF和SCF,以hBMMSC高剂量组G-CSF含量为高(P<0.01).所有各组未检测到人TPO,治疗后第9和16天所有各组血清中均未检测到人G-CSF和SCF.结论:hBMMSC输注可加速放射损伤小鼠造血功能的恢复,其机制可能与细胞短暂分泌相关造血细胞调控因子有关.
-
川芎嗪对放射损伤小鼠骨髓白细胞功能相关抗原-1表达的影响
骨髓属于辐射敏感器官,造血功能障碍是放射损伤基本的病理变化.造血细胞的增殖、分化和释放是通过造血细胞与基质细胞上的黏附蛋白配体结合而实现的.以往研究证明川芎嗪可以改善骨髓微环境,提高基质细胞黏附功能[1].本实验采用流式细胞术检测骨髓造血细胞表面黏附分子白细胞功能相关抗原-1(LFA-1)表达水平的变化及骨髓造血恢复的分子生物学机制.
-
辛伐他汀对急性放射损伤小鼠骨髓造血恢复的影响
目的 探讨小鼠受到照射后,辛伐他汀对骨髓造血功能恢复的影响.方法 将66只8周龄清洁级健康昆明小鼠随机分为3组.正常组不做任何处理;对照组和辛伐他汀组于6.0 Gy60 Co γ线一次性全身均匀照射后,分别胃饲等体积的生理盐水和辛伐他汀(16 mg/kg,1次/d),直至处死.于照射后第3、7、10、14天检测小鼠外周血细胞数和骨髓有核细胞数,并用流式细胞仪检测骨髓有核细胞中CD34+细胞百分率,测量骨髓造血面积,观察照射后第10天小鼠脾集落形成单位(CFU-S)数及第28天骨小梁的变化.结果 照射后第3、7、10、14天辛伐他汀组小鼠外周血白细胞数、血小板数、骨髓有核细胞数和骨髓CD34+细胞率均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01),而外周血红细胞数无明显差异.照射后第28天辛伐他汀组小鼠骨小梁的数目明显多于对照组.辛伐他汀组小鼠CFU-S数(11±3)个显著高于对照组(4±3)个.2组小鼠骨髓造血面积随时间的变化差异有统计学意义(P<0.05).结论 辛伐他汀能够促进急性放射病小鼠成骨细胞增生、增加骨髓CD34+细胞率并促进骨髓造血功能的恢复.
-
真皮多能干细胞促进大鼠急性放射损伤造血恢复的研究
目的观察真皮多能干细胞移植对大鼠急性放射损伤后造血恢复的作用.方法分离新生大鼠真皮多能干细胞体外培养至第10代用于研究,观察干细胞层体外对正常大鼠骨髓粒-巨噬系祖细胞和红系祖细胞集落生长的影响;进一步将真皮多能干细胞经尾静脉输入5 Gv γ射线全身照射的大鼠体内,检测移植后骨髓有核细胞、粒-巨噬系祖细胞集落CFU-GM、红系祖细胞集落CFU-E和外周血白细胞数量、血红蛋白含量等指标的恢复情况,观察4周后动物的存活率.结果真皮多能干细胞层体外可促进正常大鼠CFU-GM和CFU-E集落的生长;全身输入干细胞促进了5 Gyγ射线全身照射动物的外周血白细胞和骨髓有核细胞、CFU-GM和CFU-E集落数的恢复.实验组动物4周后的存活率也明显高于对照组.结论真皮多能干细胞具有一定支持造血的功能,可促进急性放射损伤大鼠的造血恢复,为造血损伤相关疾病的干细胞治疗提供新的细胞来源途径.
-
基质细胞支持的体外扩增造血细胞对致死剂量照射小鼠造血恢复的促进作用
目的研究基质细胞支持条件下体外扩增的造血细胞回输体内后,促进经致死剂量照射小鼠造血功能恢复的作用.方法在培养的小鼠骨髓基质细胞层存在的条件下,加入或不加入几种细胞因子组合,分别在小鼠骨髓单个核细胞液体培养体系中进行造血细胞体外扩增.将不同条件下扩增的细胞经尾静脉回输至经致死剂量照射的小鼠体内,并与单纯细胞因子存在条件下的扩增及未扩增造血细胞进行比较,动态观察小鼠的外周血象变化及其一般状况和生存率.结果①单纯细胞因子介导小鼠骨髓单个核细胞(BMMNC)体外扩增后并不能增进这些细胞促进造血恢复的能力;②含有骨髓基质细胞底层的体外扩增,无论是否加入细胞因子,均有明显的促进移植受体造血功能迅速恢复的作用.
-
神经生长因子同时促进放创复合伤小鼠创面愈合和造血恢复的实验研究
目的研究神经生长因子对放创复合伤是否同时具有促进创面愈合和造血恢复的作用.方法全身结合局部给药后,观察动物存活、局部创面愈合速度、修复细胞成分和血细胞的变化.结果 用药后,复合伤动物的存活率提高,外周血白细胞和骨髓有核细胞数明显增加;创面愈合速度加快,局部成纤维细胞和血管内皮细胞数量明显增加.结论神经生长因子对放射复合伤难愈创面具有良好的促愈效果,同时还表现出一定的抗放作用.
-
祛铁治疗对再生障碍性贫血患者造血恢复的作用
目的 评价祛铁治疗对再生障碍性贫血患者造血恢复的作用.方法 1例重型再生障碍性贫血患者经免疫抑制治疗11个月,外周血细胞水平无明显改善,并出现输血相关铁过载.加用祛铁胺规律祛铁治疗.结果 祛铁治疗5个月后患者脱离血小板输注,7个月脱离红细胞输注,9个月停止祛铁治疗,13个月外周血细胞水平恢复正常,无不良反应发生.结论 对输血依赖的骨髓衰竭患者,应密切监测血清铁蛋白水平变化,出现铁过载后及时进行祛铁治疗,有助于患者造血恢复.
-
重组人粒细胞集落刺激因子注射液(粒生素)的研制和应用
本项目是用基因工程的方法生产粒细胞集落刺激因子(G-CSF),属生物技术领域.产品是癌症化疗、放疗后首选升白细胞(造血恢复)制剂,作为有效的支持药物可显著地降低病人的感染发生率、住院天数、抗生素使用天数及因中性粒细胞减少并发的发热.该药为销售额大、市场增长快的生物技术药物.项目包括以下几个部分:①基因的克隆及高表达菌株的构建;②中试及生产工艺的研究;③临床前药理、药效、毒理学评价;④临床多中心评价;⑤项目的推广应用.项目主要技术关键是克隆人G-CSF基因并在大肠杆菌系统中获得稳定、高效表达,特点及技术创新点在于菌株G-CSF表达率达30%以上,高于国外同类产品水平.
-
不同类型急性白血病患者骨髓间充质干细胞的病理学特征
骨髓间充质干细胞(MSC)具有在体内和体外支持造血的功能,因此联合MSC的造血干细胞移植有可能增强移植效果,近研究结果证实联合MSC的造血干细胞移植可以促进造血干细胞的植入和造血恢复[1,2].既往研究发现急性白血病患者骨髓造血微环境存在病理改变,包括细胞的组成和功能改变.但是,急性白血病患者骨髓MSC是否受到影响以及影响程度,尚不清楚.此外,MSC的来源有限,而且异基因MSC存在归巢效率低等问题.因此,本研究获取急性白血病患者自体的骨髓MSC,采用低血清培养基培养和扩增,观察其体外增殖能力、多向分化和支持造血功能,以明确其生物学性状并为自体MSC在临床中的进一步应用提供详尽的实验依据.
-
人脐血间充质干细胞促进脐血CD34+细胞在NOD/SCID小鼠体内植入的实验研究
目的探讨人脐血间充质干细胞(MSC)联合人脐血CD34+细胞移植,能否促进CD34+细胞在NOD/SCID小鼠体内植入及加速其造血恢复.方法NOD/SCID小鼠于60Co 2.5 Gy照射后24h内由尾静脉输注胎儿脐血CD34+细胞1×105/只(低细胞量移植组)或1×106/只(高细胞量移植组),联合移植组同时输注脐血MSC 1×106/只.动态观察移植后小鼠外周血白细胞、血红蛋白和血小板恢复情况,于移植后第8周用流式细胞术检测存活小鼠骨髓中人CD45+、CD45+CD3+、CD45+CD19+和CD45+CD33+细胞的含量.结果①低细胞量移植时,联合移植组的植入率明显高于单纯移植组,分别为26.02%和16.52%(P<0.05);高细胞量移植时,联合移植组和单纯移植组的植入率相近,分别为43.71%和39.23%(P>0.05).②高细胞量联合移植组和单纯移植组的存活率分别为80%和70%;低细胞量联合移植组和单纯移植组的存活率分别为70%和50%.③无论高细胞量还是低细胞量组,联合移植小鼠白细胞、血红蛋白和血小板的恢复明显早于单纯移植组.④移植8周后,小鼠骨髓中人CD45+CD19+、CD45+CD33+细胞含量在低细胞量移植时,联合移植组高于单纯移植组;但在高细胞量移植时,两组之间差异无统计学意义.CD45+CD41a+细胞的含量无论在低细胞量和高细胞量移植时,联合移植组均高于单纯移植组.各组小鼠骨髓中CD45+CD3+细胞的含量均较少,且各组之间差异无统计学意义.结论①低细胞量移植时,人脐血MSC联合移植可提高人脐血CD34+细胞在小鼠体内的植入率.②人脐血MSC与人脐血CD34+细胞联合移植,加速NOD/SCID小鼠各系造血恢复,提高移植小鼠存活率.③MSC联合移植可促进人脐血CD34+细胞在NOD/SCID小鼠体内向粒系、B淋巴系和巨核系定向分化.
-
骨髓间充质干细胞对小鼠异基因脐血移植造血恢复及急性移植物抗宿主病的影响
同种异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)目前已成为治愈血液系统恶性疾病的有效方法之一.但是,由于缺乏HLA组织配型的相合供者,一定程度上限制了其临床应用.脐血已经成为造血干细胞( HSC)的一个重要来源[1-2],但是由于脐血HSC数量的限制,目前主要用于儿童移植.临床应用发现脐血HSC移植存在移植后造血及免疫重建延迟[3-6].而且,虽然认为脐血HSC移植后发生移植物抗宿主病(GVHD)的风险较其他类型HSCT少而轻,但是GVHD仍然是影响其疗效的一个重要因素,现行GVHD的防治措施主要有免疫抑制剂治疗和去除T细胞的造血干细胞移植( T-cell depletion HSCT,TCD-HSCT)[7].免疫抑制剂对移植物植活干扰小,能保留一定的移植物抗白血病(GVL)效应,由于其免疫抑制作用而阻碍免疫重建、影响生存期.TCD-HSCT能大大减少GVHD的发生率,但增加了移植物排斥,导致白血病复发增加[8-9].来源于骨髓的间充质干细胞(BM-MSC)由于能够促进HSC归巢及发挥免疫调节功能而越来越受到移植工作者的重视.将脐血与间充质干细胞共同移植有可能解决上述脐血HSC移植中的两个主要问题.因此,本实验我们通过建立小鼠脐血移植模型,研究MSC在脐血移植中的作用,为临床应用提供理论依据.
-
脾切除治疗慢性粒细胞白血病造血干细胞移植后全血细胞减少患者三例分析
异基因外周血造血干细胞移植(allo-HSCT)是目前治愈慢性粒细胞白血病(CML)的方法之一.移植后血细胞减少是常见的并发症,通过二次移植可以治疗血细胞减少,但长期生存率不高.脾脏对移植的影响一直存在争议.动物及临床试验表明,脾脏会影响移植物功能.巨脾与植入的延迟有父.移植前脾区放疗的患者,中性粒细胞恢复较快,但移植前切脾或脾区放射对移植总生存率并无明显影响.我们对3例CML移植后全血细胞减少患者,排除其他影响造血恢复的因素后进行脾切除治疗,取得较好的效果,现报道如下.
-
单倍体相合造血干细胞移植后细胞免疫重建的动力学的临床研究
异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)属于造血免疫细胞移植,NK细胞是HSCT后早开始恢复的淋巴细胞亚群.NK细胞受体分子(KIR)在HSCT中与移植物抗宿主病(GVHD)发生以及与移植后复发的关系引人注目[1].异基因供者移植物中的CD4+ CD25+细胞群(Tmg)细胞比例与GVHD发生有关[2-3].我们前期的实验研究发现供者未成熟DC细胞可以防止骨髓移植后GVHD发生而不减弱移植物抗白血病(GVL)效应[4].这些与GVHD密切相关的细胞在单倍体相合移植后免疫功能恢复状况及其与临床表现的关系值得深入研究.我们以相关不相合HSCT患者为研究对象,探讨移植后DC亚群、CD16+ CD158b+细胞和CD4+ CD25+细胞等免疫细胞造血恢复与GVHD发生和复发的关系.
-
抗CD40L单抗4F1体外诱导再生障碍性贫血患者T细胞免疫沉默和促进造血恢复的研究
目前认为,原发性再生障碍性贫血(再障)的主要发病机制为T细胞介导的骨髓特异性自身免疫反应[1].根据免疫学基本原理,共刺激信号是抗原特异性T细胞活化过程中的必要条件.虽然对再障共刺激信号系统的改变认识仍非常有限,但已有证据表明,患者的共刺激信号系统存在异常[2,3].CD40/CD40L是共刺激信号系统中一个重要的调节分子对.我们通过观察抗CD40L单抗4F1对再障患者骨髓T淋巴细胞表型及集落形成的影响,研究其对再障T淋巴细胞异常免疫反应的抑制和造血恢复的促进作用.
-
小鼠骨髓间充质干细胞输注促进外周血干细胞移植后造血恢复
骨髓间充质干细胞(MSC)能合成IL-6、IL-11、SCF、flt-3配体等多种正性造血细胞生长因子,具有维持长期培养启始细胞(LTC-IC)增殖的能力,促进CD34+细胞分化[1-3],提示MSC具有支持造血和促进造血恢复的作用.为此,我们观察了MSC输注对小鼠外周血干细胞移植(PBSCT)后造血恢复的影响.
-
异基因造血干细胞移植后全血细胞减少的脾切除治疗一例报告并文献复习
慢性粒细胞白血病(CML)异基因造血干细胞移植后血细胞减少是较常见的并发症,其原因主要为移植物抗宿主病(GVHD)、自身免疫性疾病、脾脏因素、移植失败、巨细胞病毒(CMV)感染等,以往的研究主要关注移植前脾脏大小对造血恢复及复发的影响,而移植后脾切除对造血恢复以及完全嵌合状态(CDC)形成的影响报道很少,我们报告1例并结合文献进行复习.
-
造血干细胞移植后感染的防治
目前,感染仍是造血干细胞移植(HSCT)常见的并发症,也是危及生命的主要原因之一.HSCT后感染与常规化疗所致的中性粒细胞减少并发的感染不尽相同.HSCT经历了比较典型的免疫抑制及其后逐渐恢复的过程,HSCT一般分为造血重建前期、造血重建后近期和远期三个阶段,在不同的阶段发生的感染各有其特点.虽然该划分不能确定明确的时间界限,但在临床感染的处理中有重要的指导意义.另外不同移植类型其移植后感染的发生情况也不相同,自体HCST后感染发生率明显较低,尤其近年来多采用自体外周血干细胞作为移植物,其造血恢复快,但比常规化疗的感染危险性高.HSCT过程中出现的感染,往往来势凶猛、发展迅速、病死率高,且临床表现不典型.所以HSCT过程中采取及时有效的感染防治措施非常重要.由于不同时期感染的发生情况有所不同,所以在采取防治措施时要综合考虑患者的情况加以分析判断.