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异基因造血干细胞移植中NK细胞的作用
异基因造血干细胞移植后,供者细胞可产生强大而持久的免疫治疗功效,其中异源反应性NK细胞活性是T细胞异源反应活性以外的,具有显著抗肿瘤/白血病活性的自然免疫现象,并逐渐受到人们的重视.已证实,NK细胞通过其受体与靶细胞MHC分子特异性的识别机制参与移植物抗白血病(GVL)作用并影响移植物抗宿主病(GVHD)的发生.异基因造血干细胞移植后异源反应性NK细胞输注已从动物实验逐渐应用于临床.本文就NK细胞异源反应性及其在异基因造血干细胞移植中的作用进行综述.
关键词: 异基因造血干细胞移植 NK细胞 移植物抗白血病 移植物抗宿主病 -
异基因造血干细胞移植中杀伤细胞抑制性受体(KIR)在GVHD和GVL 发生中的作用
杀伤细胞抑制性受体(KIR)属于免疫球蛋白超家族成员I型跨膜蛋白分子,主要表达于人NK细胞和某些T淋巴细胞.它们的配体为HLA I类分子.当KIR所识别的MHC配体缺失时,即表现为对靶细胞的杀伤作用(所谓丢失自我"missing-sdf"机制).已证实,NK细胞和T细胞的KIR分子与靶细胞的MHC分子特异性的识别机制参与移植物抗宿主病(GVHD)的发生并且影响移植物抗白血病(GVL)作用.KIR的存在可能是免疫活性细胞不攻击自身组织的主要机制.KIR基因家族及其配体HLA-C分子均具有基因多态性,因此在HLA相合和不全相合的异基因造血干细胞移植中,供受者KIR基因表达的差异在一定程度上影响移植效果.本文主要就KIR如何影响异基因造血干细胞移植后GVHD和GVL进行综述.
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KIR基因与异基因造血细胞移植
异基因造血细胞移植后,供体细胞所拥有的强大而持久的免疫治疗功效已越来越为人所熟知.本文对2001-2003年具有代表性的关于识别肿瘤靶细胞的KIR和其他NK细胞受体,以及在亲缘移植和无血缘移植时供受者对的KIR多态性的新文献予以综述.异源反应性NK细胞活性是T细胞异源反应活性以外的,具有显著的抗肿瘤/白血病活性(GVL)的自然免疫现象.KIR基因以及配体的研究结果揭示了NK细胞自我识别和攻击靶细胞对于异基因造血细胞移植(Allo-HCT)预后的有利影响.NK细胞通过特异性杀伤宿主抗原呈递细胞(APC),促进残存宿主细胞的清除以及识别和攻击宿主白血病细胞(GVL作用)以达到降低GVHD发生率和移植后白血病复发率之目的.开展NK细胞异源反应活性细胞的诱导、鉴定及分选技术,研发及采用可应用于临床治疗的NK细胞抑制型受体阻滞剂,上调或加强异源反应性NK细胞活性均有可能显著提高移植物抗白血病(GVL)效应.进一步研究KIR抑制型受体的调控将有助于今后癌症免疫治疗新战略及对策的制定.
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骨髓间充质干细胞对异基因骨髓移植后aGVHD和GVL的影响
为了观察骨髓间充质干细胞(BMMSC)对异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)和移植物抗白血病(GVL)效应的影响,以急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠为动物模型,对其进行allo-BMT的同时,静脉输注体外培养的供鼠BMMSC,同时设立单纯allo-BMT对照组.记录受鼠存活时间;观察受鼠发生aGVHD一般反应及病理学变化;用流式细胞术检测受鼠CD4+、CD8+T细胞亚群的差异;采用性染色体检查检测嵌合状况.结果显示:BMMSC推迟aGVHD发生的时间;降低CD4+T细胞的同时增加CD8+T细胞的数量;明显延长受鼠allo-BMT后的生存时间.结论:BMMSC与allo-BMT联合进行具有一定的GVL效应;BMMSC能抑制allo-BMT后aGVHD的发生,但同时具有一定的GVL效应.
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移植前供鼠口服受鼠脾细胞对脾细胞移植后GVHD的影响研究
本研究探讨经口服受鼠脾细胞诱导耐受的供鼠细胞输注是否能减轻移植物抗宿主病(GVHD),并保留的GVL效应.以雄性DBA-2(H-2d)小鼠为供者.供鼠分别用BALB/c鼠脾细胞、DBA-2鼠脾细胞、牛血清蛋白和普通饲料喂养,隔天1次.应用单向混合淋巴细胞反应(MLR)评估诱导耐受状态.以雌性BALB/c小鼠(H-2d)为受者,给予6.0 Gy60Co γ射线全身照射,同一天输注3 X 103鼠白血病细胞,尾静脉输注源于DBA-2小鼠的2×107脾细胞.对照组不给予鼠白血病细胞输注.结果显示,接受已耐受供鼠脾细胞输注的受鼠发生GVHD较其他组轻,流式细胞术检测表明CD4+/CD8+比值增加.接种白血病细胞的受鼠活存率各组间无差别.结论:口服受鼠脾细胞耐受的供鼠,其脾细胞输注给受鼠后GVHD明显减轻,且对GVL效应无影响.
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细胞因子在急性移植物抗宿主病中的作用
急性移植物抗宿主病(aGVHD)是异基因造血干细胞移植的主要并发症,严重限制其应用.细胞因子网络在aGVHD的发病中起重要作用,其作用机制在小鼠模型中已经得到清楚的阐述,而人类aGVHD的发病机制尚需进一步探讨.动态监测移植后血清细胞因子sIL-2R,TNF-α和IFN-γ等的表达或检测移植前细胞因子的基因表达可以对aGVHD进行预测,从而有助于采取针对性的预防措施. GVHD有移植物抗白血病作用(GVL).GVHD和GVL是可分的.细胞因子IL-2,IL-12,IL-11,KGF和G-CSF有降低GVHD保存GVL的作用.
关键词: 细胞因子 急性移植物抗宿主病 移植物抗白血病 异基因造血干细胞移植 -
调控CD95的锤头状核酶抑制小鼠T细胞凋亡及杀伤活性的作用研究
供者淋巴细胞输注(DLI)在诱导移植物抗白血病(GVL)作用,治疗异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)后复发等方面取得了可喜效果.研究表明供者T淋巴细胞可通过CD95-CD95L途径杀伤白血病细胞,以诱导DLI后的GVL效用 [1].但在体内异常微环境及一系列细胞因子的作用下,白血病细胞表面可高表达CD95L,并可通过CD95- CD95L途径诱导CD+95的T细胞凋亡,降低其GVL效应,从而逃逸机体的免疫应答.为减少供者T细胞的凋亡进而提高其GVL效应,本课题构建了针对小鼠CD95基因596位点的锤头状核酶,将其导入小鼠脾脏T细胞,观察该核酶对T细胞凋亡及增殖的影响,探索提高T细胞GVL作用的新途径.
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白血病过继性免疫治疗存在的问题及对策
微小残留白血病(MRL)是造成白血病难治和复发的主要原因.依靠提高剂量及加强化、放疗等手段难以完全清除MRL,且治疗相关的毒副作用大.人们早已认识到白血病的彻底治愈,很大程度上依赖于机体免疫系统对MRL的清除作用[1],在白血病采用自体或同基因造血干细胞移植(HSCT)时复发率远高于异基因HSCT等事实充分地验证了这一点,其主要原因是后者产生了移植物抗白血病(GVL)效应,从而达到彻底清除白血病细胞的目的.然而,白血病患者经化疗后机体处于免疫抑制状态,加之白血病细胞可通过多种机制逃避机体的免疫应答,单靠患者自身的免疫功能难以实现根治白血病的目的.因此,现代医学采取了一系列的免疫干预措施,提高对MRL的免疫治疗效应.在临床上已有抗CD20、抗CD52、抗CD33等单抗的成功应用,并取得相当的疗效.在细胞免疫方面,采取了一系列过继性免疫治疗手段,如供者淋巴细胞输注(DLI)、各种细胞因子的应用、树突状细胞(DC)体外扩增及其修饰以及肿瘤疫苗的应用,均取得一定疗效,但也存在着有待克服的问题.
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骨髓非清除性异基因造血干细胞移植治疗血液恶性肿瘤
骨髓非清除性异基因造血干细胞移植(non-myeloablative allogeneic stem cell transplantation,NMASCT)系指移植前通过相对较经典预处理强度要低的化、放疗剂量来抑制受者的免疫应答,使异基因造血干细胞(Allo-HSC)在受者体内得以植入,移植后再用免疫抑制剂,以抑制供者移植物中T淋巴细胞的免疫活性,达到宿主和移植物之间的双向免疫耐受,形成嵌合体,并诱导移植物抗白血病(GVL)和(或)恶性肿瘤(GVM)效应,清除宿主体内的肿瘤细胞或遗传学异常的造血干细胞,终治愈血液恶性肿瘤。 一、经典的Allo-HSCT的利弊 经典的骨髓清除性Allo-HSCT在移植前受者要接受致死剂量的化、放疗预处理,其目的是:(1)要强烈摧毁受者的免疫功能,使受者失去对外来移植物的排斥能力,这样供者造血干细胞得以在受者体内植入;(2)大限度地杀灭受者体内的残存肿瘤细胞,减少移植后肿瘤的复发率;(3)移植后免疫抑制剂的应用如环孢素A(CsA)和(或)甲氨蝶呤(MTX)等以抑制供者T淋巴细胞的免疫活性,预防移植物抗宿主病(GVHD)的发生。这种经典的骨髓清除性Allo-HSCT其造血干细胞植入稳定,抗白血病和(或)抗肿瘤细胞作用强,移植后复发率低。据文献报告,Allo-HSCT后能使首次完全缓解(CR1)的急性非淋巴细胞白血病(ANLL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)和慢性粒细胞白血病(CML)的治愈率分别可达到60%、50%、40%~60%[1],因此,仍是目前临床上治愈血液恶性肿瘤等疾病为有效的方法。但这种骨髓清除性Allo-HSCT的缺点是移植过程中与移植相关的并发症(如各种机遇性感染,GVHD,间质性肺炎,肝静脉闭塞病和出血性膀胱炎等)和病死率可高达40%左右[2],因此,只适用于年轻患者。
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非清髓异基因造血干细胞移植研究进展(附视频)
本文结合国内外非清髓异基因造血干细胞移植(NST)的新研究进展,从NST的现状、概念和理念、研究热点,特别是NST的疗效、受者存活率、白血病复发、移植后移植物抗白血病效应等方面作了重点介绍,以期为国内的NST临床和基础研究提供借鉴.
关键词: 非清髓异基因造血干细胞移植 移植物抗白血病 复发 -
不同方式刺激脐血树突状细胞对细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞杀伤活性的影响
目前对造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)后残留肿瘤细胞的清除需通过过继免疫治疗等手段来解决.通过特定细胞因子联合扩增脐血中细胞因子诱导杀伤(cytokine-induced killer,CIK) 细胞、自然杀伤(natural killer,NK)细胞,可增强脐血移植(UCBT)后的移植物抗白血病(graft-versus-leukemia,GVL)效应.树突状细胞(dendritic cells ,DC)在免疫应答的诱导中具有独特地位,为了探讨DC以何种方法作用于免疫效应细胞能对免疫杀伤细胞达到更有效的刺激效果,本实验研究了脐血来源的DC以不同的刺激方式作用于同一来源的脐血CIK、NK细胞,探讨对其杀伤活性的影响.
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82例恶性血液病患者异基因造血干细胞移植后复发的危险因素分析
目的 探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后复发的危险囚素.方法 总结82例接受allo-HSCT治疗的血液病患者的临床资料,分析供受者年龄、供受者性别、供受者血型异同、供者类型、疾病状态、HLA配型、预处理方案、移植物抗宿主病(GVHD)的有无、回输CD34+细胞数量、有无巨细胞病毒感染等与移植后复发的关系.结果 16例患者在移植后2~28个月复发.单因素分析结果显示,疾病状态(P=0.013)、疾病诊断到移植的时间(P=0.042)、预处理方案(P=0.046)、急性GVHD(P=0.022)、慢性GVHD(P=0.002)与allo-HSCT后复发有关.Cox多因素回归分析结果显示,疾病状态(OR=2.58,95%CI为1.26~5.01)、疾病诊断到移植的时间(OR=1.98,95%CI为1.11~3.63)和慢性GVHD(OR=3.74,95%CI为1.96~7.97)是allo-HSCT后复发的独立影响因素.结论 复发仍是allo-HSCT失败的首要原因,疾病状态、疾病诊断到移植的时间以及无慢性GVHD是移植后复发的主要危险因素.
关键词: 异基因造血干细胞移植 血液肿瘤 复发 移植物抗宿主病 移植物抗白血病 -
供者淋巴细胞输注(DLI)治疗恶性血液病异基因骨髓移植后复发
异基因骨髓移植(allo-BMT)应用30多年来已使无数恶性血液病患者获得新生.起初认为allo-BMT的抗白血病效应仅依赖清髓性预处理方案中大剂量化放疗效应,输注不被肿瘤污染的供者骨髓只不过起干细胞救援功效,近来发现移植物中供者T细胞诱导的移植物抗白血病效应(GVL)也起重要作用,尤其对控制移植后复发尤为突出.DLI的出现改变了人们对allo-BMT治疗理论的认识,DLI诱导CML移植后复发再次完全缓解(CR)肯定了其治疗价值.
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异基因骨髓间充质干细胞与外周造血干细胞联合移植治疗白血病2例分析
目的初步探讨异基因骨髓间充质干细胞(BM-MSC)与外周血造血干细胞(PBSC)联合移植治疗白血病的安全性、疗效,以及对造血重建、移植物抗宿主病(GVHD)及移植物抗白血病(GVL)的影响.方法采用体外培养扩增供者骨髓间充质干细胞(MSC),联合组织相容白细胞抗原(HLA)全相合PBSC共同移植治疗2例白血病.结果联合移植无明显不良反应.中性粒细胞(ANC)≥0.5×109/L的时间分别为移植后15 d、17 d,血小板(Pt)≥20×109/L的时间分别为移植后21 d、25 d.移植后30 d经短串联重复序列-聚合酶链反应(STR-PCR)显示完全供者型植入.1例发生Ⅱ度急性GVHD(aGVHD).2例患者移植后均获完全缓解(CR),目前持续CR.结论MSC联合HLA全相合PBSC移植治疗白血病安全、有效、可行性大,MSC对异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)造血重建有促进作用,对GVHD及GVL的影响有待进一步研究.
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GVL相关研究进展
异基因造血干细胞移植( AHSCT)是治疗恶性血液病为有效的方法之一,这有赖于移植后产生的移植物抗白血病( GVL)效应,它是同种异体免疫细胞清除白血病细胞和抗复发的重要手段,但常常与 GVHD相伴发生,严重的 GVHD大大削减了移植效果.目前预防 GVHD的措施主要是在移植后应用细胞毒药物和免疫抑制剂,虽然可明显降低 GVHD的发生,但同时也减弱了 GVL效应,存在着原发病高复发的问题.如何建立特异性免疫耐受减轻 GVHD同时保留 GVL效应,是改善异基因造血干细胞移植效果亟待解决的问题,也是移植免疫学所面临的难题.
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超强预处理异基因造血干细胞移植伴随GVL诱导策略预防难治性急性髓系白血病复发的临床观察
目的 探讨超强预处理异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)伴随移植物抗白血病(GVL)诱导策略预防难治性未缓解急性髓系白血病(AML)移植后复发的有效性.方法 2001年5月至2013年6月于南方医科大学南方医院、广州军区总医院、中山大学附属第二医院和中山大学附属第三医院行allo-HSCT的72例难治性AML患者纳入此前瞻性研究.序贯超强预处理方案为氟达拉滨+阿糖胞苷+全身放疗+环磷酰胺+鬼臼乙甙.GVL诱导策略包括:对移植后30 d内未发生急性移植物抗宿主病(aGVHD)者予快速递减免疫抑制剂,移植后60 d内未发生Ⅱ度或以上aGVHD者予供者淋巴细胞输注(DLI).结果 移植后中位随访655(1 ~4 200)d.除2例在移植后1周内分别死于感染和预处理相关毒性外,其他患者均获得完全缓解.预处理相关致死率为1.4%(1/72).1年aGVHD和2年慢性GVHD(cGVHD)累积发生率为60.7%±5.0%和58.5%±4.7%.5年白血病累积复发率为29.6%±6.6%,5年非复发累积死亡率为28.8%±6.0%,5年累积总生存率和无病生存率为51.0%±6.5%和49.9%±6.4%.DLI、cGVHD和移植第0天(回输于细胞前)骨髓幼稚细胞数是移植后复发[HR(95% CI):0.042(0.007 ~0.688)、0.009(0.003 ~0.345)、3.385(1.451 ~7.899)]和生存[HR(95% CI):0.315(0.146 ~0.621)、0.416(0.200 ~0.866)、1.332(1.158 ~1 533)]的独立预后因素.结论 序贯超强预处理allo-HSCT伴随GVL诱导策略有可接受的移植相关毒性,能降低难治性AML复发率和提高其生存率.
关键词: 造血干细胞移植 移植预处理 移植物抗白血病 难治性急性髓系白血病 -
改善移植预后的新方向:双重造血干细胞移植
由于供体的易获得性,单倍型供体干细胞移植(haplo-SCT)和脐血移植(CBT)近年来获得了较快的发展,逐渐成为主要的替代供体。 haplo-SCT具有良好的移植物抗白血病( GVL )效应,但较高的移植物抗宿主病( GVHD )发生率和非复发死亡率( NRM )始终是其制约因素。脐血移植可在保留GVL效应的同时降低GVHD的发生,但其较长时间的骨髓空虚期和高植入失败风险可导致住院时间延长和感染风险增加。随着近年来对二者认识的不断深化,移植学界开始了新的探索,将二者结合起来实现优势互补,并初步取得了较为满意的疗效,国外称之为第三方( third party donor, TPD)造血干细胞联合输注,抑或双重移植(dual transplant),意指同一次移植中的造血干细胞来源于两种不同类型的供体,从而在概念上区别于来源于同一供体、不同移植物类型的混合移植(如骨髓联合外周血干细胞)及来源于同一类型、不同供体的双份干细胞移植(如双份脐血移植)。
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H-2半相合CD34+细胞和TK+T细胞对移植物抗白血病效应的研究
移植物抗白血病(graft-versus-leukemia, GVL)效应是异基因造血干细胞移植免疫清除白血病细胞和防止复发的主要机制,对异体造血干细胞移植治愈白血病起着十分重要的作用.单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)系统在治疗移植物抗宿主病(GVHD)的同时能否保留GVL效应是一个值得研究的问题,我们对此作了初步探讨.
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骨髓间充质干细胞对小鼠异基因脐血移植造血恢复及急性移植物抗宿主病的影响
同种异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)目前已成为治愈血液系统恶性疾病的有效方法之一.但是,由于缺乏HLA组织配型的相合供者,一定程度上限制了其临床应用.脐血已经成为造血干细胞( HSC)的一个重要来源[1-2],但是由于脐血HSC数量的限制,目前主要用于儿童移植.临床应用发现脐血HSC移植存在移植后造血及免疫重建延迟[3-6].而且,虽然认为脐血HSC移植后发生移植物抗宿主病(GVHD)的风险较其他类型HSCT少而轻,但是GVHD仍然是影响其疗效的一个重要因素,现行GVHD的防治措施主要有免疫抑制剂治疗和去除T细胞的造血干细胞移植( T-cell depletion HSCT,TCD-HSCT)[7].免疫抑制剂对移植物植活干扰小,能保留一定的移植物抗白血病(GVL)效应,由于其免疫抑制作用而阻碍免疫重建、影响生存期.TCD-HSCT能大大减少GVHD的发生率,但增加了移植物排斥,导致白血病复发增加[8-9].来源于骨髓的间充质干细胞(BM-MSC)由于能够促进HSC归巢及发挥免疫调节功能而越来越受到移植工作者的重视.将脐血与间充质干细胞共同移植有可能解决上述脐血HSC移植中的两个主要问题.因此,本实验我们通过建立小鼠脐血移植模型,研究MSC在脐血移植中的作用,为临床应用提供理论依据.
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单倍体相合造血干细胞移植后细胞免疫重建的动力学的临床研究
异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)属于造血免疫细胞移植,NK细胞是HSCT后早开始恢复的淋巴细胞亚群.NK细胞受体分子(KIR)在HSCT中与移植物抗宿主病(GVHD)发生以及与移植后复发的关系引人注目[1].异基因供者移植物中的CD4+ CD25+细胞群(Tmg)细胞比例与GVHD发生有关[2-3].我们前期的实验研究发现供者未成熟DC细胞可以防止骨髓移植后GVHD发生而不减弱移植物抗白血病(GVL)效应[4].这些与GVHD密切相关的细胞在单倍体相合移植后免疫功能恢复状况及其与临床表现的关系值得深入研究.我们以相关不相合HSCT患者为研究对象,探讨移植后DC亚群、CD16+ CD158b+细胞和CD4+ CD25+细胞等免疫细胞造血恢复与GVHD发生和复发的关系.