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HBV 感染者胃十二指肠粘膜HBV DNA地高辛原位分子杂交研究
目的：探讨HBV在胃十二指肠粘膜的分布、复制、表达及其意义。方法：应用地高辛原位分子杂交法检测62例HBV感染者胃十二指肠粘膜HBV DNA的分布状态，并与血清HBVM、胃十二指肠粘膜HBsAg、HBcAg、肝炎病情程度进行相关分析。结果：62例HBV感染者，27例(43.55%)胃肠粘膜检出HBV DNA ，检出率与肝炎病情程度、血清HBsAg、HBeAg无明显相关，与血清HBV DNA、胃肠粘膜HBsAg、HBcAg密切相关；胃肠粘膜HBV DNA的表达表现为4种模式。结论：HBV DNA可在胃肠组织原位复制，其不同的表达模式反映了病毒复制或整合的状态。
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p-ERK-1及相关因子在子宫内膜癌中的表达及意义
目的 检测子宫内膜癌组织中p-ERK-1、p-p38和ERK-1 mRNA表达情况并探讨其意义. 方法 采用原位分子杂交方法和免疫组织化学S-P法检测60例子宫内膜癌、32例正常子宫内膜组织中三者的表达情况.结果 子宫内膜癌组织中p-ERK-1和p-p38表达定位于细胞核,ERK-1 mRNA的表达于细胞浆,其阳性表达率分别为68.33％ (41/60)、55.00％(33/60)和78.33％(47/60),明显高于正常子宫内膜组织(P＜0.05).p-ERK-1、p-p38蛋白和ERK-1 mRNA的表达与淋巴结转移、临床分期及病理分期有关(P＜0.05)；在子宫内膜癌组织中p-ERK-1蛋白和ERK-1 mRNA表达存在一致性(P＜0.05),三者之间表达呈正相关(P＜0.05). 结论 p-ERK-1、p-p38蛋白和ERK-1 mRNA在子宫内膜癌呈高表达,且与子宫内膜癌的发生、发展和转移密切相关.
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己烯雌酚干预下围产期小鼠睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA的表达变化
目的:通过体内、体外实验研究己烯雌酚(Diethylstilbestrol,DES)对KM小鼠围产期小鼠睾丸Leydig细胞胰岛素样因子3(Insuliu-like hormone 3,INSL3)mRNA表达的影响,探讨隐睾发生的可能机制.方法:DES分别以低、中、高3组剂量(1、5、25μg/L)分别作用于原代培养的胎龄16 d小鼠胚胎Leydig细胞,应用RT-PCR和原位分子杂交技术检测DES对睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA 的表达水平;DES分别以低、中、高3组剂量[1μg/(kg·d)、10 μg/(kg·d)、100 μg/(kg·d)]灌胃作用于GD(Gestation day)12～PND(Postnatal day)3孕鼠,RT～PCR检测新生小鼠睾丸INSL3 mRNA表达的相对强度,并比较其差异性.结果:DES改变原代培养的小鼠胚胎Leydig细胞和新生小鼠睾丸的形态结构,以中、高剂量组改变尤为明显;体外实验中,DES中、高剂量组原代Leydig细胞INSL3 mRNA表达水平均明显低于对照组(P＜0.01)和DES低剂量组(P＜0.01);DES试验组Leydig细胞INSL3 mRNA表达相对强度低于对照组(P＜0.01) .体内实验中,DES试验组不同时间点的新生鼠睾丸INSL3 mRNA表达相对强度均明显低于对照组(P＜0.05,或P＜0.01),实验组组间两两比较也有差异(P＜0.05,或P＜0.01) .结论:DES可下调睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA的表达水平,其可能是影响小鼠睾丸引带发育导致隐睾的机制之一.
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微血管相关因素在瘢痕组织增生中作用的实验研究
瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕微血管有明显异常,是皮肤损伤后组织过度修复的结果.二者的发病机理尚不完全清楚.为进一步明确微血管及其相关因素在瘢痕增生中的作用,本课题采用免疫组化、原位分子杂交、脐静脉内皮细胞和皮肤成纤维细胞体外培养、同位素掺入、流式细胞仪分析等技术方法,对瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕组织中内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)的表达,细胞间粘附分子1的表达(ICAM-1),血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达,凋亡相关基因c-fos、bcl-2的表达,内皮细胞对成纤维细胞DNA和胶原合成的影响等微血管相关因素进行了研究.
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死胎脾脏组织中HBV DNA表达的临床和病理研究
目的:观察死胎脾脏组织中HBV DNA表达的情况,探讨通过产妇传播到死胎脾脏组织中的HBV是否存在复制.方法:采集40例乙型肝炎产妇产下的死胎,常规尸检,取脾脏组织.采用原位分子杂交法,检测其中的HBV DNA;回访产妇产前静脉血HBV的检测结果.结果:死胎脾脏组织中HBV DNA的检出率为65%.产妇产前静脉血HBV呈高、低和无复制状态时,脾脏组织中HBV DNA的检出率分别为75%、50%和81%;高、低、无复制者之间相互比较,差异无显著性(P＞0.05).HBV DNA颗粒在死胎脾脏白髓、边缘区、红髓中的淋巴细胞和巨噬细胞浆、脾血窦、脾脏血管中呈点、灶状分布,脾脏淋巴细胞和巨噬细胞核不着色.结论;死胎脾脏组织中有HBV复制;死胎脾脏组织中HBV DNA表达与产妇血清中HBV复制状态无关.
关键词： 死胎 脾脏组织 原位分子杂交 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 -
一种基于流式细胞仪分选后的细胞原位分子杂交
原位分子杂交是从组织细胞原位显示特定核酸序列存在的技术,它对一些异质性的细胞群体如血液,脑组织等,常不能准确阐明特定核酸序列表达于何种类型的细胞,或在某一细胞群体是否有特定基因的表达.
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死胎胸腺组织中HBV DNA表达的初步探讨
目的:观察死胎胸腺组织中HBVDNA表达的情况,探讨通过产妇传播到死胎胸腺组织中的乙型肝炎病毒(HBV)是否存在复制.方法:采集40例乙型肝炎产妇产下的死胎,常规尸检,取胸腺组织.采用原位分子杂交法,检测其中的HBVDNA;回访产妇产前静脉血HBV的检测结果.结果:死胎胸腺组织中HBVDNA的检出率为27/40(68%)例.产妇产前静脉血HBV呈高、低和无复制状态时,胸腺组织中HBVDNA的检出率分别为14/16(88%)例、11/20(55%)例和2/4(50%)例;高、低、无复制者之间相互比较,差异无显著性(P＞0.05).HBVDNA颗粒分布在胸腺细胞浆内、细胞间和毛细血管内,少数分布在胸腺细胞核上.结论:死胎胸腺组织中有HBV复制;死胎胸腺组织中HBVDNA表达与产妇血清中HBV复制状态无关.
关键词： 死胎 胸腺组织 原位分子杂交 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 -
BMP4 mRNA在大鼠牙胚发育中的表达
目的 研究BMP4mRNA在胚胎SD大鼠牙胚中的表达,探讨BMP4mRNA在牙胚发育中的调控作用和意义.方法 建立和制备sD大鼠胚胎时期13～19 d等多时间点的牙胚发育模型,用HE染色对牙胚发育的时空变化进行组织学观察以确定牙胚发育的时期,再用原位分子杂交检测BMP4 mRNA在牙胚发育中的表达.结果 BMP4 mRNA阳性细胞在SD大鼠牙胚发育的不同时期均有表达,而且规律性地出现在牙上皮和牙乳头的外胚间充质细胞中.结论 BMP4在牙胚发育中的表达特点表明,BMP4可能参与诱导外胚间充质细胞聚集,诱导细胞增殖、分化,诱导成牙本质细胞分泌基质.
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肝细胞癌和慢性肝病组织中p27kip1基因表达及甲基化分析
目的 研究肝细胞癌和慢性肝病中细胞周期调控因子p27kip1的表达和甲基化的关系.方法 应用免疫组织化学、原位分子杂交技术分别检测正常肝组织、肝硬化、癌周肝硬化和肝细胞癌共68例标本中P27蛋白和p27mRNA的表达.应用甲基化特异性PCR技术检测正常肝组织、肝硬化和肝细胞癌共44例标本中p27基因甲基化情况.结果 P27蛋白阳性率在正常肝组织(66.7%,4/6)、肝硬化(60.0%,6/10)和癌周肝硬化(50.0%,12/24)各组间差异没有统计学意义(P＞0.05),p27mRNA阳性率在正常肝组织(83.3%,5/6)、肝硬化(70.0%,7/10)和癌周肝硬化(75.0%,18/24)各组间差异也没有统计学意义(P＞0.05),但肝细胞癌组P27蛋白(21.4%,6/28)和mRNA(25.0%,7/28)的阳性率与各组比较均显著下降(P＜0.05).P27蛋白阳性信号在正常肝组织和肝硬化组主要定位于胞核,而癌周肝硬化组和肝细胞癌组主要定位于胞浆.正常组与肝硬化合并组P27蛋白和p27mRNA表达具有相关性,癌周肝硬化组和肝细胞癌组P27蛋白与p27mRNA表达不具有相关性.44例样本中检出1例肝细胞癌的p27基因发生甲基化,其蛋白和mRNA表达均呈阴性.结论 P27蛋白及p27mRNA表达下降或缺失可能参与了肝细胞癌的发生和发展,p27基因甲基化可能导致p27mRNA的失转录.
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Bub1在食管鳞状细胞癌组织和正常食管黏膜的表达及临床意义
目的:观察Bub1 mRNA及Bub1蛋白在食管鳞状细胞癌和正常食管黏膜组织中的表达差别,探讨Bub1在食管鳞状细胞癌发生、发展中的作用及其临床意义.方法:收集40例食管鳞状细胞癌标本及相应的食管切缘正常黏膜组织,利用免疫组化染色及原位杂交技术检测Bub1蛋白和Bub1 mRNA在食管鳞状细胞癌组织和正常食管黏膜组织中的表达.结果:与正常黏膜组织相比较,Bub1 mRNA及Bub1蛋白在食管鳞状细胞癌组织中表达水平明显降低(P<0.005),且Bub1 mRNA及Bub1蛋白的表达水平与食管鳞状细胞癌分化程度及有无淋巴结转移相关(P<0.05).结论:Bub1表达水平高低可能与食管鳞状细胞癌的发生发展及淋巴结转移具有一定关系.
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GAD67-GFP基因敲入小鼠黑质网状部神经元GABA与氯离子转运体KCC2和NKCCl的共存
为了观察谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白(GAD67-GFP)基因敲入小鼠黑质网状部(SNr)内,表达GFP的GABA能神经元与一对功能相反的CI-共转运体(K+-CI-cotransporter2.KCC2;Na+-K+-CI-cotransporter 1,NKCC1)的共存情况,奉研究分别运用原位分子杂交与免疫组织化学相结合以及GFP与KCC2或NKCC1免疫荧光染色相结合的双重标记方法,在光学显微镜和激光共聚焦显微镜下同时进行观察.结果显示:(1)SNr内95%以上的GFP阳性神经元同时表达KCC2 mRNA,而50%表达KCC2 mRNA的阳性神经元呈GFP阳性;(2)SNr内80%以卜的GFP阳性神经元同时表达NKCC1 mRNA,约35%表达NKCC1 mRNA的阳性神经元呈GFPH阳性;(3)SNr内90%以上的GFP阳性神经元同时表达KCC2,双标神经元约占KCC2阳性神经元的50.5%;(4)SNr内80.5%以上的GFP阳性神经元同时表达NKCC1,双杯神经元约占NKCC1阳性神经元的42.5%.以上结果表明,SNr内表达GFP的GABA能神经元大部分与KCC2和NKCC1共存,提示氯离子共转运体可能对SNr内GABA能神经元起重要的调控作用.
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慢性酒精刺激对大鼠海马胶质源性神经营养因子及其功能性受体c-ret mRNA表达的影响
采用原位分子杂交方法观察了慢性酒精刺激对大鼠海马胶质源性神经营养因子(GDNF)及其功能性受体c-ret mRNA表达的影响.结果发现:慢性酒精刺激30 d时,GDNF与c-retmRNA在海马的表达与对照组相比明显增加;慢性酒精刺激60 d时GDNF与c-ret mRNA的表达与30 d时相比显著下降.此结果提示,GDNF及其功能性受体c-ret可能在慢性酒精刺激的早期对海马神经元具有保护作用.
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NGF及NGF mRNA在去部分背根猫脊髓和背根节表达的变化
用成年猫单侧备用根模型(切断一侧L1～5、L7～S2节段脊髓背根,保留L6背根),用免疫组织化学和原位杂交技术,对脊髓背角Ⅱ板层、背核和L6背根节中神经生长因子的表达进行了动态观察.结果证明,部分背根去传人后:(1)脊髓各节段双侧背角I板层的神经生长因子和神经生长因子mRNA阳性神经元的数量及体积显著增高、增大;(2)手术侧背核神经生长因子和神经生长因子mRNA阳性神经元的增高强于非手术侧,但术后两时间组的手术侧之间无差异;(3)备用根背根节新出现了神经生长因子mRNA阳性神经元,且神经生长因子阳性神经元数量明显高于正常组,且随术后时间增加而递增.以上结果表明:部分背根去传人猫脊髓背角I板层及背核内神经生长因子水平提高,尤其备用根背根节神经元神经生长因子的增加,为备用背根传人纤维侧支生芽和突触重建提供了良好的条件,有助于解释脊髓初级传入纤维损伤溃变后代偿性机能恢复的机制.
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邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯对胚胎及新生小鼠睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA表达的影响
目的:通过体内体外实验探讨邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对胚胎及新生小鼠睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA表达的影响. 方法:DEHP 50,100,200 mg/L分别作用于原代培养的小鼠胚胎Leydig细胞,应用RT-PCR和原位分子杂交技术检测DEHP对Leydig细胞INSL3 mRNA表达的影响;DEHP分别以低、中、高三组剂量(100,200和500 mg/kg·d)灌胃作用于GD(Gestation day)12～PND(Postnatal day)3孕鼠,RT-PCR检测新生小鼠睾丸INSL3 mRNA表达的相对强度. 结果:DEHP改变原代培养的小鼠胚胎Leydig细胞和新生小鼠睾丸的形态结构;各实验组包括原代Leydig细胞及不同时间点的新生鼠睾丸INSL3 mRNA表达水平、表达相对强度均明显低于对照组(P＜0.05,或P＜0.01). 结论:DEHP下调小鼠睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA的表达,可能是影响引带发育导致隐睾的机制之一.
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人原发性肝内胆管细胞癌中HCV基因及其抗原表达的意义
［王文亮，王春杰，王冰枫. 世界华人消化杂志，2001;9(5):542-545］ 目的检测HCV基因及其抗原在人原发性肝内胆管细胞癌中的表达，探讨肝内胆管细胞癌的病因及发病机制. 方法用免疫组化技术检测HCV抗原，用原位分子杂交技术检测HCV基因(HCV RNA). 结果在40例肝内胆管细胞癌中，HCV C33c抗原、核心抗原及HCV RNA阳性率分别为52.5%，72.5%和57.5%；在21例癌旁肝组织中，其阳性率分别63.6%，45.5%和48.5%. 结论人原发性肝内胆管细胞癌的发生除与HBV有密切关系外，与HCV慢性感染也有密切关系.(何扬举)
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邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯对胚胎及新生小鼠睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA表达的影响
目的:通过体内体外实验探讨邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对胚胎及新生小鼠睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA表达的影响.方法:DEHP50、100、200mg/L分别作用于原代培养的小鼠胚胎Leydig细胞,应用RT-PCR和原位分子杂交技术检测DEHP对LeydigINSL3 mRNA表达的影响;DEHP分别以低、中、高三组剂量(100、200和500mg/kg·d)灌胃作用于GD(Gestation day)12～PND(Postnatal day)3孕鼠,RT-PCR检测新生小鼠睾丸INSL3 mRNA表达的相对强度.结果:DEHP改变原代培养的小鼠胚胎Leydig细胞和新生小鼠睾丸的形态结构;各实验组包括原代Leydig细胞及不同时间点的新生鼠睾丸INSL3 mRNA表达水平、表达相对强度均明显低于对照组(P＜0.01,或P＜0.01).结论:DEHP下调睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA的表达,可能是影响引带发育导致隐睾的机制之一.
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人肺癌组织单羧酸转运蛋白-1基因的表达及其意义
目的研究人肺癌组织中单羧酸转运蛋白-1(MCT1)基因的表达水平,探索肿瘤治疗新策略.方法以寡聚脱氧核苷酸为探针,用原位分子杂交法探测人肺癌组织和人正常肺组织MCT1 mRNA的表达水平.结果人肺癌组织的MCT1 mRNA的表达显著强于正常肺组织,呈过表达.结论 MCT1基因的过表达可能是肺癌组织细胞的分子生物学特征之一.
关键词： 肿瘤 酸碱平衡 基因表达 单羧酸转运蛋白-1(MCT1)基因 原位分子杂交 -
死胎胎盘组织中HBV DNA的表达
目的观察死胎胎盘组织中HBV DNA表达的情况,探讨通过产妇传播到死胎胎盘组织中的HBV是否存在复制.方法采集40例乙型肝炎产妇产下的死胎,常规尸检,取胎盘组织.采用原位分子杂交法,检测其中的HBV DNA.结果死胎胎盘组织中HBV DNA阳性者29例,占72.5%(29/40).产妇产前乙型肝炎血清学标志物(HBVM)呈高、低和无复制状态时,胎盘组织中HBV DNA的检出率分别为50.0%(2/4)、65.0%(13/20)和88.0%(14/16);高、低、无复制者之间相互比较,差异不显著(P>0.05).HBV DNA颗粒分布在死胎胎盘的蜕膜细胞、滋养层细胞、绒毛间质细胞、绒毛毛细血管内皮细胞浆、血管中,少数分布在这些细胞核上.结论死胎胎盘组织中有HBV复制;死胎胎盘组织中HBV DNA表达与产妇血清中HBV复制状态无关.
关键词： 死胎 胎盘组织 原位分子杂交 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸
