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食管鳞癌中Livin及相关蛋白的表达及意义
目的 探讨食管鳞癌组织中Livin、Ki-67蛋白和Livin mRNA的表达及其与临床病理指标和预后的关系.方法 采用原位杂交方法和微波EliVisionTM免疫组织化学法检测78例食管鳞癌组织中Livin、Ki-67蛋白和Livin mRNA蛋白的表达情况,并与38例癌旁正常食管黏膜组织进行比较.结果 在食管鳞癌组织中Livin和Ki-67分别表达定位于细胞浆和细胞核,Livin mRNA阳性反应主要定位于细胞浆,其表达明显高于正常食管黏膜组织(P<0.05).Livin、Ki-67蛋白和Livin mRNA的表达与淋巴结转移、分化程度及病理分期有关(P均<0.05),三者之间表达呈正相关(P均<0.05).结论 Livin、Ki-67蛋白和Livin mRNA在食管鳞癌呈高表达,且与食管鳞癌的发生、发展及浸润转移有关,可作为判断食管鳞癌生物学行为和预后的重要指标.
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环氧合酶-2在胃癌细胞中的表达及意义
目的通过研究环氧合酶-2(COX-2)在胃癌、癌前病变及慢性炎症中的表达情况,探讨COX-2与胃癌发生、发展的关系及意义.方法采用免疫组化和原位分子杂交法,对15例正常胃黏膜组织及123例不同病变胃黏膜组织标本中COX-2进行检测.结果COX-2蛋白在胃癌组织中的表达明显增强,其阳性率(62.26%)显著高于正常胃黏膜、慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎伴肠化及不典型增生胃黏膜组织(6.67%,17.86%,30.43%,42.11%;P均＜0.05);COX-2蛋白的阳性表达与胃癌组织学分级、浸润深度及有无淋巴结转移有关;高、中分化胃癌组中COX-2的表达明显高于低分化组;同时,在COX-2蛋白阳性的相关胃黏膜组织细胞中亦可见到COX-2mRNA的阳性表达.结论COX-2的过度表达可能参与了胃癌形成的全过程,不仅在胃癌形成的早期,且与胃癌的侵袭、转移及预后亦有一定关系.
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血管内皮生长因子mRNA及其蛋白、上皮细胞钙黏蛋白在喉鳞状细胞癌中表达的研究
目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)mRNA及其蛋白、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,并探讨它在喉鳞状细胞癌发生、发展中的作用及其临床应用价值.方法 应用原位分子杂交和免疫组织化学SP法,检测VEGF mRNA及其蛋白、E-cadherin在60例喉鳞状细胞癌、30例喉不典型增生和20例慢性喉炎组织中的表达.结果 ①60例喉鳞状细胞癌组织中,VEGF mRNA及蛋白阳性率为80.0%(48/60)、73.3%(44/60),E-cadherin阳性率为18.3%(11/60).②VEGF mRNA及蛋白的表达与淋巴结转移、甲状腺软骨累及、T分期、TNM分期有关(P＜0.05);VEGF蛋白表达与病理分级有关(P＜0.05),而VEGF mRNA表达与病理分级无关(P＞0.05),两者与性别、年龄、临床分型、肿瘤大小及部位无关(P＞0.05).E-cadherin的表达与淋巴结转移、病理分级、T分期、TNM分期有关(P＜0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小、部位及甲状软骨累及无关(P＞0.05).③VEGF mRNA及蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的表达呈显著正相关(r=0.358,P＜0.05),而VEGF蛋白和E-cadherin在喉鳞状细胞癌组织中的表达呈显著负相关(r=-0.396,P＜0.05).结论 ①VEGF在喉鳞状细胞癌中过度表达及E-cadherin的下调对喉鳞状细胞癌的发生、发展可能起协同作用.②联合检测VEGF和E-cadherin对预测喉鳞状细胞癌浸润转移有重要意义,并可作为判断喉鳞状细胞癌生物学行为的指标.
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死胎肾脏组织中HBVDNA表达的临床和病理研究
目的观察死胎肾脏组织中HBVDNA的表达情况,探讨通过产妇传播到死胎肾脏组织中的HBV是否存在复制.方法采集40例乙型肝炎产妇产下的死胎,常规尸检,取肾脏组织.采用原位分子杂交法,检测其中的HBVDNA;收集产妇产前静脉血HBV的检测结果.结果死胎肾脏组织中HBVDNA的检出率为65.0%(26/40).产妇产前静脉血HBV呈高、低和无复制状态时,肾脏组织中HBVDNA的检出率分别为2/4、50.0%(10/20)例和88.0%(14/16),差别有显著性意义(P＜0.05).HBVDNA颗粒在肾实质细胞(近、远曲小管上皮细胞和肾血管球毛细血管内皮细胞,球内、外系膜细胞,球旁细胞,足细胞)浆,肾脏血管中呈点、灶状分布,少数在肾实质细胞核上.结论死胎肾脏组织中有HBV复制;死胎肾脏组织中HBVDNA表达与产妇血清中HBV复制状态有关.
关键词： 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 死胎 肾脏组织 原位分子杂交 -
Snail mRNA在乳腺癌中的表达及临床意义
目的 观察Snail mRNA在人乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,并探讨其在乳腺癌发生、发展中的作用及临床应用价值.方法 应用原位分子杂交方法,检测Snail mRNA在70例乳腺癌、30例乳腺导管内癌和30例乳腺单纯性增生组织中的表达.结果 70例乳腺癌组织中Snail mRNA阳性率为81.4%(57/70),分别高于乳腺导管内癌组织的阳性率46.7%(14/30)和乳腺单纯性增生组织的阳性率23.3%(7/30),三者比较差异有统计学意义(x2=32.4,P＜0.01).有淋巴结转移者Snail mRN阳性率为92.7%(38/41),无转移者阳性率为65.5%(19/29),两者比较差异有统计学意义(x2=8.29,P＜0.01);Snail mRNA的表达与年龄、肿瘤大小及组织学分级均无关(P＞0.05).结论 Snail mRNA的表达与乳腺癌的发生、发展及淋巴结转移密切相关,可作为判断乳腺癌预后、转移的生物学标志.
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胆囊癌组织中CD44V6蛋白的表达与胆囊癌的关系
目的研究CD44V6在胆囊腺癌细胞中的表达,探讨CD44V6影响肿瘤转移的作用机制.方法应用原位分子杂交、免疫组织化学分析方法研究CD44V6在胆囊癌的表达.结果 CD44V6在胆囊腺癌细胞中均有表达,不管在mRNA水平还是在蛋白质水平,淋巴结转移和临床Ⅳ期、Ⅲ期细胞表达均高于无淋巴结转移和Ⅰ、Ⅱ期.结论 CD44V6的表达与胆囊癌细胞的转移潜能有关.
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Snail mRNA在喉鳞状细胞癌中的表达研究
上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是多细胞生物胚胎发生中的基础过程,在胚胎发育早期较为多见,它以上皮细胞极性丧失及其间质特性的获得为主要特征[1].EMT在肿瘤的发生、浸润和转移中扮演着重要角色,研究表明转录因子Snail可促使EMT的发生[2],进而促使肿瘤的浸润、转移.本研究采用原位分子杂交技术检测Snail mRNA在喉鳞癌、不典型增生和慢性炎症组织中的表达,旨在探讨其在肿瘤的发生发展和浸润转移中的作用.
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携带脑源性神经营养因子基因腺病毒载体转染在体大鼠损伤坐骨神经基因表达的检测
目的:观察携带小鼠脑源性神经营养因子cDNA表达片段的重组腺病毒载体AxCA-BDNF,转染大鼠坐骨神经后基因表达的情况.方法:实验于2000-03/2002-04在第三军医大学大坪医院野战外科研究所、北京军区总医院神经外科实验室完成.实验材料:体质量200 g左右的Wistar大鼠90只,雌雄不限.实验方法:①制备坐骨神经损伤模型:用1%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠.在大鼠右侧股后部作纵行切口,无菌条件下显露坐骨神经,自股中部切除10 mm坐骨神经,然后随机分为3组,每组30只,按不同方式处理:A组:坐骨神经缺损+硅胶管+AxCA-BDNF原液8 μL;B组:坐骨神经缺损+硅胶管+脑源性神经营养因子溶液8 μL;C组:坐骨神经缺损+硅胶管+空白病毒稀释液8 μL.②灌注固定和组织切片制备:分别于术后3 d、7 d、14 d、1个月、2个月、4个月共6个时相点,每组各取5只大鼠进行灌注.另外取5只正常Wistar大鼠作为正常对照.应用原位杂交和免疫组化等手段从脑源性神经营养因子m RNA和蛋白水平,定性和半定量分析测定坐骨神经损伤后脑源性神经营养因子基因表达.结果:90只大鼠均进入结果分析.A组3 d、7 d、14 d、1个月时近、远端神经干和脊髓(L3～6)中脑源性神经营养因子m RNA水平均远远高于B、C组(近端神经干:A组:90.70±3.32,108.32±3.95,110.51±2.13,60.39±3.24;B组:15.46±1.89,20.50±2.31,94.37±2.45,48.32±2.37;C组:14.49±2.03,22.42±2.24,95.28±3.66,46.47±2.11;远端神经干:A组:96.24±4.58,113.10±5.83,116.28±5.22,66.91±3.87;B组:21.37±3.39,28.56±2.67,105.62±4.31,52.54±4.15;C组:20.75±3.56,27.33±2.52,104.45±4.98,53.40±3.76;脊髓:A组:100.43±4.17,109.69±6.06,103.47±5.47,60.84±4.84;B组:50.51±4.32,37.36±3.15,35.05±3.82,35.82±3.35;C组:51.03±3.91,38.98±3.75,39.36±3.34,34.64±2.84,P＜0.05,P＜0.01),脑源性神经营养因子水平也高于C组.结论:通过腺病毒介导转染的脑源性神经营养因子基因在大鼠坐骨神经内得到了有效表达,并通过轴突逆行转运到了相应的脊髓神经元.
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细胞色素C及相关细胞凋亡蛋白、基因在原发性肝癌组织表达的临床意义
目的 观察外源性凋亡通路中Caspase8和Bid及内源性凋亡通路中Bcl-2、Bax、细胞色素C (Cyt-C)和Caspase9在50例原发性肝细胞癌(肝癌组)及30例正常肝组织(对照组)中的表达,并分析其与病理分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测Bax表达,应用核酸原位分子杂交方法检测Caspase8、Bid、Bcl-2、Cyt-C和Caspase9表达.结果 Caspase8表达强度与对照组比较呈升高趋势(P＜0.05),阳性表达率组间差异未见统计学意义 (P＞0.05).Bid阳性表达率与对照组比较呈下降趋势(P＜0.01),表达强度两组间差异未见统计学意义 (P＞0.05).Bcl-2阳性表达率和表达强度较对照组均明显下降(P＜0.01),Bax阳性表达率和表达强度较对照组均下降(P＜0.05和P＜0.01).Cyt-C和Caspase9的阳性表达率和表达强度两组间比较差异均未见统计学意义(P＞0.05).高、中分化肝癌组Cyt-C阳性表达率均明显高于低分化肝癌组 (P＜0.05和P＜0.01),但其与病理分级和淋巴结转移未见相关性(P＞0.05).Caspase8、Bid、Bcl-2、Bax和Caspase9在不同病理分级、肿瘤分化程度和淋巴结转移组中表达差异均未见统计学意义(P＞0.05).结论 在肝癌发生发展过程中,早期外源性凋亡通路发挥促凋亡活性,而随着肿瘤分化程度的降低,内源性凋亡通路发挥抗凋亡活性,且Cyt-C的表达调节应该是一晚期事件.
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死胎肾脏组织中HBVDNA的表达的临床和病理研究
目的观察死胎肾脏组织中HBVDNA表达的情况,探讨通过产妇传播到死胎肾脏组织中的HBV是否存在复制.方法采集40例乙型肝炎产妇产下的死胎,常规尸检,取肾脏组织.采用原位分子杂交法,检测其中的HBVDNA;回访产妇产前静脉血HBV的检测结果.结果死胎肾脏组织中HBVDNA的检出率为26/40(65.0%)例.产妇产前静脉血HBV呈高、低和无复制状态时,肾脏组织中HBVDNA的检出率分别为14/16(88.0%)例、2/4(50.0%)例、10/20(50.0%)例;高、低、无复制者之间相互比较,差异显著(P<0.05).HBVDNA颗粒在肾实质细胞(近、远曲小管上皮细胞和肾血管球毛细血管内皮细胞,球内、外系膜细胞,球旁细胞, 足细胞)浆,肾脏血管中点、灶状分布,少数在肾实质细胞核上.结论死胎肾脏组织中有HBV复制;死胎肾脏组织中HBVDNA表达与产妇血清中HBV复制状态有关.
关键词： 死胎 肾脏组织 原位分子杂交 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 -
死胎胸腺组织中HBVDNA表达的初步探讨
目的观察死胎胸腺组织中HBVDNA表达的情况,探讨通过产妇传播到死胎胸腺组织中的HBV是否存在复制.方法采集40例乙型肝炎产妇产下的死胎,常规尸检,取胸腺组织.采用原位分子杂交法,检测其中的HBVDNA;回访产妇产前静脉血HBVM的检测结果.结果死胎胸腺组织中HBVDNA的检出率为27/40(68%)例.产妇产前静脉血HBV呈高、低和无复制状态时,胸腺组织中HB VDNA的检出率分别为2/4(50%)例、11/20(55%)例和14/16(88%)例;高、低、无复制者之间相互比较,差异不显著(P>0.05).HBVDNA颗粒分布在胸腺细胞浆内、细胞间和毛细血管内,少数分布在胸腺细胞核上.结论死胎胸腺组织中有HBV 复制;死胎胸腺组织中HBVDNA表达与产妇血清中HBV复制状态无关.
关键词： 死胎 胸腺组织 原位分子杂交 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 -
环氧合酶-2 mRNA在结肠癌组织表达的临床意义
目的 探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在结肠癌组织中表达的临床意义.方法 采用原位分子杂交方法检测63例结肠癌、22例结肠腺瘤、23例正常结肠粘膜组织中COX-2 mRNA的表达.结果 COX-2 mRNA在结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠粘膜组织中的表达阳性率分别为74.60%、72.73%、34.78%,癌及腺瘤组表达阳性率明显高于正常组,P＜0.001.结肠癌组COX-2 mRNA的表达阳性率与性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型等因素差异无统计学意义P＞0.05,随着分化程度的升高其阳性表达率也升高,且有统计学意义P＜0.05;另一方面也可见到当结肠癌已突破浆膜、有淋巴结转移和血管有浸润及远处有转移时组织中的阳性率虽高于未然组,但未见有统计学意义.结论 COX-2虽参与了结肠肿瘤的发生、发展,却远非结肠癌恶变的早期指标.
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CyclinD1、CyclinE、CDK6在原发性肝细胞癌中的表达
探讨细胞周期调控因子CyclinD1、CyclinE、CDK6在原发性肝细胞癌中的表达及意义.应用免疫组织化学、原位分子杂交和细胞图象分析技术检测原发性肝细胞癌组织及其对应的癌旁肝组织(各20例)、正常肝组织(5例)中CyclinD1、CyclinE和CDK6mRNA表达情况.结果显示:CyclinD1、CyclinE和CDK6mRNA在肝细胞癌组织中呈阳性表达,阳性率分别为70%、75%和25%,正常肝组织呈阴性表达;肝细胞癌组织中CyclinD1和CyclinE的阳性表达与癌旁肝组织、正常肝组织相比,差异均有显著性意义(P＜0.05);CyclinD1和CyclinE的过表达在肝细胞癌的发生和发展中起着重要作用.
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死胎大脑组织中HBVDNA表达的临床和病理研究
观察死胎大脑组织中HBVDNA表达的情况,探讨通过产妇传播到死胎大脑组织中的HBV是否存在复制.采集40例乙型肝炎产妇产下的死胎,常规尸检,取大脑组织.采用原位分子杂交法,检测其中的HBVDNA;回顾产妇产前静脉血HBV的检测结果.死胎大脑组织中HBVDNA的检出率为13/40(33%)例.产妇产前静脉血HBV呈高、低和无复制状态时,大脑组织中HBVDNA的检出率分别为1/4(25%)例、5/20(25%)例和7/16(44%)例;三者之间相互比较,差异不显著(P＞0.05).HBVDNA颗粒在大脑胶质细胞浆、血管中呈点、灶状分布,大脑胶质细胞核不着色.死胎大脑组织中有HBV复制;死胎大脑组织中HBVDNA表达与产妇血清中HBV复制状态无关.
关键词： 死胎 大脑组织 原位分子杂交 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 -
死胎肾脏组织中HBVDNA表达的临床和病理研究
目的:观察死胎肾脏组织中HBVDNA表达的情况,探讨通过产妇传播到死胎肾脏组织中的HBV是否存在复制.方法:采集40例乙型肝炎产妇产下的死胎,常规尸检,取肾脏组织.采用原位分子杂交法,检测其中的HBVDNA;回访产妇产前静脉血HBVM的检测结果.结果:死胎肾脏组织中HBVDNA的检出率为26/40(65.0%)例.产妇产前静脉血HBVM呈高、低和无复制状态时,肾脏组织中HBVDNA的检出率分别为2/4(50.0%)例、10/20(50.0%)例和14/16(88.0%)例;高、低、无复制者之间相互比较,差异显著(P＜0.05).HBVDNA颗粒在肾实质细胞(近、远曲小管上皮细胞和肾血管球毛细血管内皮细胞,球内、外系膜细胞,球旁细胞,足细胞)浆,肾脏血管中点、灶状分布,少数在肾实质细胞核上.结论:死胎肾脏组织中有HBV复制;死胎肾脏组织中HBVDNA表达与产妇血清中HBV复制状态有关.
关键词： 死胎 肾脏组织 原位分子杂交 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 -
HPV DNA病毒原位杂交检测方法的改进与应用
原位分子杂交与病理免疫组织化学相比有定位更准确、特异性更强、敏感性更高、无内源性干扰等特点,从分子生物学水平为病理诊断、鉴别诊断和预后判定提供了更可靠的指标,从而受到广泛重视.然而此项技术又因实验步骤繁杂、技术要求高、耗时长、影响因素多,在基层医院推广应用受到一定的限制.为此,我们对原始操作方法加以改进,同样取得良好效果.
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凋亡抑制基因Survivin在非小细胞肺癌中的表达及其与Caspase-3、Bcl-2蛋白表达的关系
目的:探讨Survivin基因的表达在肺癌发生、发展中的作用及其与Caspase-3、Bcl-2蛋白表达的相互关系.方法:对13例正常支气管粘膜上皮、11例不典型增生、54例肺癌及12例淋巴结转移癌石蜡切片组织,应用原位分子杂交法检测Survivin mRNA的表达;用免疫组化S-P法检测Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达.结果:肺癌、淋巴结转移癌中Survivin mRNA阳性率分别为74.07%及91.67%,显著高于正常支气管粘膜上皮及不典型增生中的阳性率7.69%及27.27%(P均＜0.01);低分化、中分化肺癌中阳性率96%、75%较高分化30.76%显著升高(P＜0.01,P＜0.05).TNM分期Ⅲ期病例中,SurviViB mRNA表达阳性率92.31%高于I+Ⅱ期病例的57.14%(P＜0.01).Survivin mRNA表达与Caspase-3蛋白表达呈负相关(P＜0.01),与Bcl-2蛋白表达呈正相关(P＜0.01).结论:Survivin基因在非小细胞肺癌中表达上调,提示其通过抑制细胞凋亡,在肺癌癌变发生、发展中起重要作用,可能成为肺癌基因治疗的新靶点;Survivin基因通过与激活的Caspase-3结合,抑制其活性,从而阻止细胞凋亡,其阳性表达亦预示肿瘤有较高的侵袭性和不良预后;Survivin基因与凋亡抑制基因bcl-2的共同表达可能在肺癌中起协同作用.
关键词： 肺肿瘤 原位分子杂交 免疫组织化学 Survivin基因 细胞凋亡 -
多肿瘤抑制基因MTS1 mRNA和蛋白在胃癌及癌前病变中的表达及意义
目的:探讨多肿瘤抑制基因(MTS1)在胃癌发生、发展中的意义和临床应用价值.方法:应用原位分子杂交技术、免疫组织化学技术分别检测210例标本中MTS1基因mRNA及其蛋白的表达规律.结果:正常胃粘膜、轻、中度异型增生及小肠型肠化间差异无显著性(P＞0.05),但与重度异型增生、结肠型肠化及胃癌组织间差异有显著性(P＜0.01),而后三者相互间差异则无显著性(P＞0.05).正常胃粘膜与轻、中度异型增生之间MTS1蛋白表达的阳性率及强阳性率差异均无显著性(P＞0.05);正常胃粘膜与重度异型增生之间MTS1蛋白阳性率差异无显著性(P＞0.05),而强阳性率间差异则有显著性(P＜0.01).正常胃粘膜与两型肠化及胃癌组织间的阳性率、强阳性率差异均有显著性(P＜0.05, P＜0.01),重度异型增生、两型肠化与胃癌组织间的阳性及强阳性差异均无显著性(P＞0.05);MTS1蛋白阴性表达患者五年生存率与阳性表达者差异无显著性(P＞0.05),而两者与强阳性表达者的差异则有显著性(P＜0.01).结论:MTS1基因变异在胃癌的发生、发展中具有重要意义.MTS1基因mRNA及其蛋白表达的检测有助于胃癌的早期诊断和治疗;其蛋白的功能异常与患者预后密切相关.
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人肺癌组织细胞Na+/H+交换蛋白-1基因的表达与其抗凋亡的关系
目的:通过对临床人肺癌组织Na+/H+交换蛋白-1(NHE-1)mRNA的表达的检测,探讨肿瘤治疗新的特异靶点.方法:采用RNA原位分子杂交法(RNA-IMH)检测了27例人肺癌组织和正常肺组织NHE-1mRNA的表达.结果:人肺癌组织细胞NHE-1mRNA的表达显著增强,呈过表达,而各病理类型间无显著差异.结论:人肺癌组织细胞中NHE-1mRNA过表达这一区别于正常组织细胞的分子生物学特征与肿瘤细胞的抗凋亡特性的形成密切相关,可能为肿瘤治疗学提供良好的特异靶点并具有重要的潜在临床意义.
关键词： 支气管肺癌 酸碱平衡 Na+/H+交换蛋白 基因表达 原位分子杂交 -
人口腔黏膜癌变不同阶段端粒酶逆转录酶及p53蛋白的表达
目的:探讨人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)mRNA和p53蛋白在口腔黏膜癌前病变癌变过程中的作用,以及两者的关系.方法:应用原位杂交和免疫组化法对口腔黏膜单纯增生(HP)9例、轻度异常增生(LD)11例、中度异常增生(MD)10例、重度异常增生(原位癌CIS)9例、鳞癌(SCC)11例进行hTERTmRNA及p53蛋白的检测.结果应用计算机图像分析系统分析,显著性检验采用单因素方差分析(one-way ANOVA),hTERT和p53蛋白表达的相关性应用直线相关分析.结果:口腔黏膜上皮随异常增生程度HP、LD、MD、CIS到SCC,hTERT和p53蛋白的阳性细胞面积指数及光密度(OD)值均逐渐上升,SCC时达到高峰;且随着细胞异常增生程度的加重,hTERT阳性表达细胞从基底层向角化层发展,在高分化鳞癌中,主要分布在癌巢周边,分化较差的鳞癌则散布于整个肿瘤组织中.p53在HP及LD中几乎不表达,在CIS及SCC的表达率分别为66.67%和72.72%.直线相关分析显示无明显相关性.结论:hTERT与p53均参与口腔黏膜癌前病变癌变的发生发展过程,口腔鳞癌是由多基因参与的疾病.
