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人防御素-α克隆表达纯化及生物活性初步检测
防御素(Defensin)是一类阳离子大环形多肽,在人体多种器官和组织广泛存在,起着重要的屏障防御作用,对G+/-菌、真菌及病毒都有杀灭作用.临床观察表明,测定血浆及各种体液中防御素的改变有助于某些炎症性疾患的诊断,如脓毒症、细菌感染及早产等.此外,提纯或重组防御素作为"超级抗生素"来取代传统的抗生素已成为药学界的研究热点.本研究拟在大肠杆菌中表达人防御素-α,建立稳定表达的工程菌和纯化、复性技术途径,获得活性蛋白,为进一步研究提供材料.
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促进神经损伤恢复药物-注射用鼠神经生长因子(一)
注射用鼠神经生长因子(苏肽生),是由舒泰神(北京)药业有限公司生产的国家一类新药.苏肽生的主要成分系从小鼠的颌下腺中提取的神经生长因子,是一种分子量为26.5KD的生物活性蛋白,由2条118个氨基酸肽链组成.注射用鼠神经生长因子是目前发现早、研究清楚的一类神经生长因子,具有促进中枢及外周神经神经元存活、生长发育、分化、再生作用的神经营养因子.其主要用于治疗各种原因引起的神经损伤.
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妊娠小鼠子宫GMG细胞中活性蛋白与胚泡植入关系的研究
取孕13～14 d小鼠的子宫腺细胞区,经细胞分离和蛋白提取获得颗粒子宫腺细胞(GMG细胞)中的活性蛋白.将注入活性蛋白的10只孕3 d小鼠作为实验组;对照组10只小鼠给予PBS.注射后5 d取子宫观察胚胎着床情况并计算孕胚数.结果:实验组有9只可见胚胎,胚胎数为112个;对照组有7只可见胚胎,胚胎数为87个.提示:GMG细胞中的活性蛋白对胚泡着床可能有一定促进作用.
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肉毒素在泌尿科的应用
肉毒毒素是肉毒梭菌在生长繁殖过程中产生的一种细菌外毒素,属高分子蛋白神经毒素.它能引起人和动物很高的死亡率.根据毒素的抗原性不同,可将其分为A、B、C、D、E、F、G七个型,C型中有两个亚型C1和C2.而A型易于结晶成标准状态,所以对A型的结构和功能人们了解的也较多.肉毒素一般是以神经毒素和血凝素或非血凝素活性蛋白的复合体形式存在,现流通的几种肉毒素制品都是这样的复合体.
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地龙活性蛋白药理学作用研究进展
地龙是我国重要的中药材之一，其性寒、味咸，具有清热定惊、通络、平喘、利尿等作用。现代研究发现地龙有活血化瘀、溶栓降压、抗肿瘤、平喘止咳、消炎止痛等作用。地龙药材中地龙活性蛋白（Earth-worm active protein，EWAP）是一种含有纤溶酶、蚓激酶、核酸、微量元素等多种成分的生物活性蛋白，随着现代医药技术对其研究的不断深入，EWAP 的药用价值也越来越受到重视。近年来，国内外医药工作者对EWAP的药理作用研究不断有新的进展和成果，本研究就此对EWAP药理作用新研究进展进行综述，为其进一步开发利用提供参考。
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中药望江南子抗真菌蛋白成分研究
以往中药研究较少涉及蛋白质成分的作用.前人曾报道望江南(Cassia occidentalis L.)种子和其它同属药用植物种子的水浸剂有抑制多种人体真菌活性,并确定决明(C.obtusifolia L)和小决明(C.tora L.)的种子中小分子化合物为活性成分.本实验以绿色木霉(Trichoderma viride Persoon ex Friex Accc30048)和红色酵母为指示菌,发现中药望江南子和决明子的水溶性成分均有抗真菌活性,但经蛋白变性处理或热处理后,望江南子的抗真菌活性丧失.经含DDT和PVPP的缓冲液低温抽提、一20℃丙酮沉淀及在FPLC上进行Superdex 75(16/88)凝胶过滤、Mono S(5/5)离子交换层析和RESOUCE PHE(1ml)疏水层析,从望江南种子中纯化到一种相对分子量28 000的单链抗真菌蛋白(Co-AFP).本工作首次从决明属植物望江南的种子中发现了抗真菌蛋白,为药用植物活性蛋白的进一步研究创造了条件.
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金光灿灿话南瓜
南瓜,为葫芦科植物南瓜的果实,在不同地区有倭瓜、金瓜、北瓜、番瓜等别称.南瓜含有丰富的磷、钾、钙、镁、锌等矿物质,以及人体必需的8种氨基酸和儿童必需的组氨酸,可溶性纤维素及淀粉、蛋白质、多糖、活性蛋白等.
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蒙古黄芪中核糖核酸酶活性蛋白AmPR-10的纯化和性质研究
目的 采用全自动智能蛋白纯化系统AKTA Avant25建立蒙古黄芪病程相关蛋白(Astragalus membranaceus pathogenesis-related protein-10,AmPR-10)的稳定快速分离纯化方法,并分析其理化性质和生物学活性.方法 蒙古黄芪经Tris-HC1缓冲液浸提后阴离子交换色谱捕获目标蛋白,疏水色谱精细分离,凝胶滤过色谱进一步精细分离得到AmPR-10.采用MALDI-TOF/TOF质谱法测定相对分子质量,质谱检测后MS/MS Ion Search检索鉴定蛋白,高碘酸-Schiff法判断是否为糖蛋白,琼脂糖凝胶电泳分析核糖核酸酶活性及不同影响因素对核糖核酸酶活性的影响.结果 蒙古黄芪粗提液经QSepharose Fast Flow、Butyl Sepharose High Performance和SuperdexTM 75 10/300 GL 3步纯化后可得到电泳纯AmPR-10;质谱测定其相对分子质量为16 801;蛋白鉴定其属于PR-10蛋白家族;糖蛋白染色显示其不含糖链.AmPR-10具有显著的核糖核酸酶活性,且其活性对NaC1浓度、pH值和金属离子的敏感度低,仅0.5 mol/L NaC1、pH 9.0、Mg2+和Co2+对其有微弱的抑制作用,EDTA对AmPR-10核糖核酸酶活性无影响.结论 离子交换色谱-疏水色谱-凝胶过滤色谱3步法纯化AmPR-10快速稳定,可应用于其他中药蛋白质的分离纯化.AmPR-10可能在蒙古黄芪抵御RNA病毒侵染中发挥重要作用.
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不同炮制方法对全蝎有效成分和活性的影响
目的 研究不同炮制方法对全蝎有效成分和活性的影响.方法 冻干全蝎采用冰箱预冷、冷冻干燥机干燥的方法加工,传统炮制参照<中国药典>2005年版方法;不同炮制工艺全蝎参照<中国药典>2010年版测定醇浸出物得率,水溶性蛋白的测定采用考马斯亮蓝法,抗肿瘤活性比较采用小鼠荷瘤试验.结果 冻杀干燥法加工的全蝎醇浸出物得率显著高于传统清水煮制全蝎,但低于盐水煮制全蝎;水溶性蛋白的量也显著高于传统炮制品;抗肿瘤活性也显著强于传统炮制品.结论 冻杀干燥法加工全蝎可以有效地防止其活性蛋白质因加热而变性失活和被水溶解而造成的损失,显著地提高其蛋白含量和抗肿瘤活性.
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A型肉毒毒素治疗肌张力障碍疾病的应用现状
肉毒毒素(botulinumtoxin,Botox)是革兰氏阳性厌氧芽胞肉毒杆菌在繁殖过程中产生的一种外毒素,与典型的外毒素不同,肉毒毒素并非由生活的细菌释放,而是在细菌细胞内产生无毒的前体毒素,即神经毒素和血凝素或非血凝活性蛋白的复合体,待细菌死亡自溶后游离出来,经肠道中的胰蛋白酶或细菌产生的蛋白激酶作用后方具有毒性,且能抵抗胃酸和消化酶的破坏[1].由于A型肉毒毒素(BTX-A)具有毒力强、稳定、易于生产、提纯和精制其特点,因而早被用于实验研究及临床[2].1979年美国眼科学家Scott首次在自愿者身上用Botox2A治疗斜视获得成功,1989年美国食品与药品管理局(FDA)正式批准Botox2A作为新药用于斜视.在眼肌痉挛和面肌痉挛等肌张力障碍疾病的治疗中取得满意疗效.近年来A型肉毒毒素广泛应用于治疗肌张力障碍的疾病,现将其应用现状综述如下.
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脂肪细胞因子与胰岛素抵抗的研究进展
脂肪组织也是内分泌器官的理论已经被广泛接受.脂肪细胞分泌的许多细胞因子、活性蛋白,不仅与脂肪细胞自身分化和脂肪形成有关,其对全身代谢的调节也存在重要的影响.
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一组遗传性凝血因子缺乏的疾病——血友病
血友病是一组遗传性凝血因子缺乏引起的出血性疾病.凝血因子是人体内一组具有引起血液凝固、具有止血功能的生物活性蛋白.如果血液中缺乏某一种凝血因子,血液就不容易凝固,从而引起出血性疾病.疾病分类血友病依其缺乏凝血因子种类之不同,可分为:甲型血友病:是由于凝血因子八(即Ⅷ)缺乏引起,亦称作血友病A,是临床上常见的血友病,约占血友病人数的80％～85％,在某些高发地区甚至更高.乙型血友病:是由于凝血因子九(即IX)缺乏引起,亦称作血友病B,临床较甲型血友病少见,约占血友病人数的15％左右.
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癌症的8枚“免死金牌”
1.茄子:“霜打茄子”是好药中药许多方剂及民间验方中,时常使用“秋后老茄子”“霜打茄子”.越来越多证据表明,茄子具有抗癌功能.茄子还含有丰富的营养成分,除维生素A、C偏低外,其他维生素和矿物质几乎跟西红柿差不多,而蛋白质和钙甚至比西红柿高3倍.2.苦瓜:李时珍称其为“一等瓜”苦瓜在民间受到两极分化的待遇,不少人很“好”这一口,也有人对其敬而远之.但真正给它“好身份”的是明代大医学家李时珍,他称其为“一等瓜”,是不可多得的抗癌瓜.西医更证明,苦瓜的抗癌功效来自一种类奎宁蛋白,它是一种能激活免疫细胞的活性蛋白,通过免疫细胞做“二传手”,将癌细胞或其他不正常的细胞杀掉.
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哈蟆油蛋白抗疲劳活性及SDS-PAGE凝胶成像分析研究
目的 对哈蟆油蛋白抗疲劳活性及不同来源的哈蟆油与混伪品的鉴别研究.方法 采用Lowry法测定哈蟆油总蛋白的含量,并运用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离哈蟆油总蛋白;采用整体动物实验观察小鼠游泳和爬杆时间;利用SDS-PAGE和凝胶成像分析系统对不同来源哈蟆油及其混伪品进行鉴别.结果 测得哈蟆油水溶性蛋白的含量为42％,哈蟆油中蛋白的分子量在1万～12万可以分离出较清晰的蛋白质点,并具有7条主蛋白带;哈蟆油组和哈蟆油蛋白组相对于对照组均能延长小鼠游泳和爬杆的时间,差异具有统计学意义,且哈蟆油蛋白组优于哈蟆油组;经SDS-PAGE电泳的凝胶成像分析系统分析,表明4个不同地区的哈蟆油均有相同的电泳行为,泳道上有6条主带,而伪品大蟾蜍的干燥输卵管只有一条明显的主谱带.结论 哈蟆油总蛋白是哈蟆油中抗疲劳有效组分,SDS-PAGE电泳的凝胶成像分析法可用于不同来源的哈蟆油与混伪品的鉴别,为哈蟆油的开发利用提供了必要的科学依据.
关键词： 哈蟆油 活性蛋白 SDS-PAGE凝胶成像分析 -
干扰素及其新研究进展
20世纪初,病毒学家发现,当两种病毒感染同一宿主细胞的时候,两种病毒间普遍存在相互拮抗的现象,于是提出了病毒间存在着干扰(interference)的概念.1957年Issacs和Lindermann用灭活的流感病毒和鸡胚绒毛尿囊膜一起培养,产生了一种可溶性物质,该物质作用于其他鸡胚绒毛尿囊膜后,可以抑制随后攻击的活病毒繁殖,于是把这种物质命名为干扰素(Interferon,IFN),干扰素是产生干扰现象的主要原因.后来发现除两栖类外的大多数脊椎动物受病毒感染后均可产生这类抗病毒物质[1].干扰素是一类具有多种生物学活性的低分子量蛋白质.1980年,国际干扰素命名委员会指出:干扰素是一类在同种细胞上具有广谱抗病毒功能的活性蛋白,其活性的发挥又受细胞基因的调节和控制,涉及RNA和蛋白质的合成.
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胃癌患者淋巴转移与RacGAP1及MCRS1在组织中表达的关系及意义
胃癌(GC)为我国现阶段发病率较高的消化道恶性肿瘤,每年有超过 16 万人死于胃癌[1,2].造成胃癌患者死亡的主要原因在于淋巴结转移,如何早期预测淋巴结转移的风险对于个体化治疗,提高患者生存质量及延长患者生存期具有一定意义.研究显示RacGCT酶活性蛋白-1(RacGAP1)和微球蛋白1(MCRS1 )在肺癌和直肠癌等恶性肿瘤中存在高表达[3,4].本文探讨RacGAP1与MCRS1在淋巴转移胃癌组织中表达及对生存时间的影响.
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人血管形成素与恶性血液疾病
人血管形成素(angiogenin,ANG)是一个含123个氨基酸的单链碱性蛋白,分子量14.1 kDa.它初分离自人结肠腺癌细胞HT-29培养上清,是从人类肿瘤中分离的第一个具有强大的促血管形成作用的生物活性蛋白[1,2].ANG存在于正常人体组织和体液中,在感染或肿瘤等病理情况下其全身水平或组织表达可异常升高.ANG与内皮细胞的高亲和力受体结合,激活与细胞连接的蛋白酶,触发血管内皮细胞和平滑肌细胞内的一些事件,诱导内皮细胞增殖、迁移和侵袭.值得指出的是,ANG也是一种与胰RNA酶有35%同源性的弱RNA酶,通过这一功能可以抑制蛋白质的合成.
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锌硒宝片治疗慢性细菌性前列腺炎的临床研究
慢性细菌性前列性炎(CBP)是成年男性常见病.文献报道认为前列腺液中有抗菌作用的活性蛋白,其主要活性成分为锌.
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非肽类内皮素受体拮抗剂的临床研究进展
内皮素(endotheIin,ET)是含21个氨基酸的多肽,有2个二硫键,属于角蝰毒素(sarafo-toxin)家族.已证实内皮素有ET-1、ET-2、ET-3三种,是由内皮素原产生的大内皮素在内皮素转化酶作用下分解而产生的活性蛋白.内皮素与它的G-蛋白偶联受体相互作用,产生重要的生理、病理效应.
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黑素瘤抑制性活性蛋白在恶性黑素瘤中的表达
黑素瘤抑制性活性蛋白(MIA)是近年来在研究黑素瘤细胞株HTZ 19时分离的抑制黑素瘤细胞增殖的因子,其基因与在软骨细胞内发现的CD-RAP基因相同.在对转基因小鼠的研究中观察到,MIA主要在胚胎的软骨细胞内表达,在乳腺胚胎发育过程中也有该基因的短暂表达,乳腺发育成熟后即消失,并且发现MIA在部分乳腺癌及胰腺癌、胃癌中有一定表达.但是进一步研究发现,MIA可能在恶性黑素瘤的发生发展中起作用[1,2].我们通过RT-PCR和免疫组化两种方法在核酸和蛋白质水平检测MIA在不同阶段恶性黑素瘤以及痣细胞痣组织的表达情况,探讨MIA在恶性黑素瘤发生机制中的作用.
