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RNAi特异性抑制A20基因对H2O2诱导的HUASMC细胞表型的影响
目的:通过采用锌指蛋白A20基因干扰技术观察其对H2O2诱导的人脐动脉血管平滑肌细胞(HUASMC)超微结构影响,以初步研究锌指蛋白A20在氧化还原方面对细胞的保护作用.方法:将培养的人脐动脉血管平滑肌细胞随机分六组,空白组;A20siRNA组;scramble siRNA组;H2O2组;H2O2+A20siRNA组;H2O2+scramble siRNA,采用RT-PCR,Western-blotting方法观察A20基因表达变化,应用透射电镜观察细胞超微结构改变.结果:空白组A20mRNA与蛋白有微弱表达,A20siRNA组较空白组表达减少(P＜0.05);H2O2组A20mRNA与蛋白表达明显高于空白组但显著低于H2O2+A20siRNA组(P＜0.05)干扰效率大约55%.空白组平滑肌细胞(VSMC)电镜下呈典型的"收缩表型";H2O2组VSMC表型发生明显改变,呈"合成表型"H2O2+A20siRNA组成典型的合成表型且肌丝明显减少,细胞器及分泌物增多.结论:A20基因可以抑制H2O2损伤诱导的血管平滑肌细胞表型转化.
关键词： H2O2 锌指蛋白A20 基因干扰 人脐动脉血管平滑肌细胞 超微结构 -
肌醇酶1信号通路对氟诱导的成骨细胞分化的影响
目的：观察染氟成骨细胞未折叠蛋白反应肌醇酶1(IRE1)-Xbp1信号通路的表达及siRNA干扰抑制IREl表达后成骨细胞内成骨细胞标志物的变化趋势。方法细胞增殖毒性(CCK-8)实验检测成骨细胞MC3T3-E1增殖活性，设置0.0、0.1、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、20.0、32.0、64.0 mg/L 10个不同氟含量组；选取具有代表性的低、中、高剂量氟(含量分别为2.0、8.0、20.0 mg/L)作用于MC3T3-E1细胞2 d，采用实时荧光定量PCR (Real-time PCR)检测MC3T3-E1细胞中未折叠蛋白反应相关基因和成骨细胞标志物[碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、Runx2、osterix、免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、活化转录因子6(ATF6)、Xbp1]的表达；IRE1 siRNA转染MC3T3-E1细胞并联合染氟，Real-time PCR和蛋白免疫印迹法检测MC3T3-E1细胞中IRE1信号通路和成骨细胞标志物的表达。结果 CCK-8检测结果显示氟的双向效应，即与0.0 mg/L组[1.00±0.01(1 d)、1.00±0.02(3 d)、1.00±0.08(7 d)]比较，成骨细胞活性在2.0 mg/L染氟组[1.11±0.02(1 d)、1.29±0.02(3 d)]、8.0 mg/L染氟组[1.16±0.02(1 d)、1.44±0.03(3 d)]显著增强(P均<0.05)，而20.0 mg/L染氟组却抑制细胞活性[0.83±0.01(1 d)、0.81±0.01(3 d)、0.96±0.04(7 d)，P均<0.05]。2.0 mg/L染氟组显著诱导MC3T3-E1细胞内ALP(12.80±3.62)、Runx2(6.61±0.48)和osterix(21.42±1.56)的表达，与0.0 mg/L组(6.86±2.13、2.65±0.38、12.48±3.96)比较，差异有统计学意义(P均<0.05)，而20.0 mg/L染氟组抑制ALP (0.88±0.17)、OCN (0.16±0.05)和osterix (1.35±0.51)的表达，与0.0 mg/L组[4.58±1.52(OCN)]比较，差异均有统计学意义(P均<0.05)。与0.0 mg/L组[1.36±0.58(IRE1)、0.96±0.45(Xbp1)]比较，IRE1[14.84±2.57(2.0 mg/L)、4.10±0.52(8.0 mg/L)、5.30±0.63(20.0 mg/L)]和Xbp1[2.62±0.66(2.0 mg/L)、1.97±0.47(20.0 mg/L)]基因表达在染氟组中均显著升高(P均<0.05)。IRE1基因敲除后，与对照组比较[基因：3.25±0.48(OCN)、5.62±1.86(Runx2)、2.67±0.35(ALP)；蛋白：0.16±0.03(OCN)、0.34±0.27(ALP)]，OCN基因表达[0.63±0.46(2.0 mg/L)、0.81±0.36(8.0 mg/L)、0.62±0.31(20.0 mg/L)]、Runx2基因表达[0.18±0.03(2.0 mg/L)、0.12±0.01(8.0 mg/L)、1.09±0.33(20.0 mg/L)]和ALP基因表达[1.01±0.12(8.0 mg/L)、0.38±0.09(20.0 mg/L)]在染氟组均显著下降(P均<0.05)，OCN蛋白表达[0.06±0.02(2.0 mg/L)、0.06±0.02(8.0 mg/L)、0.07±0.03(20.0 mg/L)]、ALP蛋白表达[0.02±0.01(8.0 mg/L)、0(20.0 mg/L)]在染氟组均显著下降(P均<0.05)。结论不同剂量的氟作用下成骨细胞内均出现未折叠蛋白反应，IRE1基因敲除能够抑制低氟诱导的成骨细胞内ALP、OCN和关键转录因子Runx2、osterix的表达，提示IRE1信号通路在氟诱导的成骨细胞的分化过程中有一定作用。
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CTGF shRNA表达质粒的构建及对大鼠肌源性干细胞CTGF表达的影响
目的 观察针对结缔组织生长因子(CTGF)所构建的短发卡RNA(shRNA)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠肌源性干细胞(MDSCs)表达CTGF的影响.方法 针对CTGF mRNA上的序列,体外合成表达shRNA的DNA质粒载体pGenesil-3-shRNA并行测序鉴定;从新生SD大鼠骨骼肌中分离培养MDSCs并鉴定.实验分成对照组(MDSCs+TGF-β1培养),实验组(MDSCs+ TGF-β1+pGenesil-3-shRNA培养).观察shRNA质粒转染结果.利用Real-Time PCR及Western Blot检测CTGF mRNA和CTGF蛋白表达.结果 正确构建了靶向CTG,F基因的质粒载体pCenesil-3-shCTGF;大鼠MDSCs 48 h、72h和96h时实验组的CTGF mRNA及蛋白质水平均低于对照组(P＜0.05).结论 针对CTGF构建的pGenesil-3-shCTGF能够转染MDSCs,并在48h、72h和96h时能明显降低TGF-β1刺激MDSCs所产生CTGF的表达.
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SerpinB5能促进胃癌细胞株的恶性倾向
目的 了解SerpinB5在胃癌细胞株中的表达水平,探讨SerpinB5在胃癌发生发展中的作用.方法 实时定量PCR检测胃癌细胞株及正常胃黏膜细胞株中SerpinB5的表达水平;化学合成小片断干扰RNA(siRNA)下调胃癌细胞株SerpinB5的表达;实时定量PCR及免疫印迹检测干扰前后SerpinB5 mRNA及蛋白质表达的变化;MTT 法、软琼脂克隆形成实验和体外Matrigel侵袭实验观察SerpinB5减敲后胃癌细胞株生物学行为的改变.结果 SerpinB5在胃癌细胞株中的表达水平显著升高;经SerpinB5特异的siRNAmix作用后,SerpinB5 mRNA及蛋白质表达明显下降;减敲SerpinB5后,胃癌细胞株HTB103的生长能力、克隆形成能力和侵袭能力均显著降低.结论 SerpinB5的表达水平在胃癌细胞株中显著升高;SerpinB5在胃癌的发生发展中起促进作用.
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靶向沉默维生素D受体基因对前列腺癌细胞迁移及侵袭性的影响
目的:探讨小干扰RNA靶向沉默维生素D受体(VDR)对前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响.方法:构建VDR-shRNA慢病毒载体,用RT-PCR和Western印迹法分别检测VDR的mRNA和蛋白表达水平;通过细胞划痕愈合实验和Transwell小室检测VDR被沉默后的PC-3细胞迁移能力和侵袭性的变化. 结果:VDR-shR-NA质粒显著干扰VDR表达,并成功筛选VDR-shRNA干扰稳定的细胞株;细胞划痕实验结果显示划痕愈合率VDR干扰组为59％明显低于空白对照组73.6％和LV3阴性对照组的77.8％,组间差异有显著性(P＜0.05),空白对照组和LV3阴性对照组组间差异无显著性(P＞0.05).Transwell小室实验显示VDR干扰组透膜细胞数量明显低于空白对照组和LV3阴性对照组约为50％,细胞组间差异有显著性(P＜0.05),空白对照组和LV3阴性对照组组间差异无显著性(P＞0.05).VDR干扰组细胞的迁移和侵袭能力明显低于对照组细胞. 结论:VDR基因表达水平能影响前列腺癌细胞的迁移及侵袭能力,VDR低表达可致前列腺癌细胞迁移及侵袭能力下降.
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SGK-1在缺氧诱导小鼠垂体瘤细胞AtT-20增殖、凋亡中的表达及作用探讨
目的 观察血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK-1)在缺氧诱导小鼠垂体瘤细胞AtT-20增殖、凋亡中的表达,并探讨其在这一过程中的作用.方法 将AtT-20细胞随机分为观察组和对照组,观察组分别加入50、100、200 μmol/L CoCl2(模拟缺氧),对照组不处理,采用MTT法检测24、48、72、96 h时细胞增殖的A570值;将200 μmol/L CoCl2加入AtT-20细胞,培养0、24、48、72、96 h时采用流式细胞术测算细胞凋亡率,分别采用半定量PCR法和Western blot法检测SGK-1 mRNA及蛋白.将AtT-20细胞随机分为4组,A、B组转染干扰质粒SGK-1 siRNA,C、D组转染对照质粒siCon,转染24 h后A、C 组加入200 μmol/L CoCl2,B、D组不处理,分别采用MTT法和流式细胞术检测24、48、72、96 h时细胞增殖的A570值及细胞凋亡率.结果 缺氧处理72 h后,观察组随着CoCl2浓度增加及作用时间延长,AtT-20细胞增殖的A570值逐渐降低,与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05).与0 h时比较,处理24、48 h时细胞凋亡率无明显变化,处理72、96 h时细胞凋亡率增加(P均<0.05);与0 h时比较,处理24、48时AtT-20细胞SGK-1 mRNA及蛋白表达量均增加(P均<0.05),72 h后其表达量无显著变化(P均>0.05).A组缺氧后各时点细胞增殖的A570值均低于其余各组,C组缺氧后72、96 h细胞增殖的A570值高于A组而低于B、C组(P均<0.05).A组缺氧后各时点细胞凋亡率均高于其余各组,C组缺氧后72 h细胞凋亡率低于A组而高于B、C组(P均<0.05).结论 缺氧可抑制AtT-20细胞增殖、促进其凋亡,该过程中SGK-1表达增加可保护细胞免受缺氧导致的损伤.
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HIF-1α基因干扰对低氧环境下人鼻黏膜上皮细胞TGF-β1、VEGF、bFGF表达的影响及其机制
目的 观察低氧诱导因子1α(HIF-1α)基因干扰对低氧环境下人鼻黏膜上皮细胞(HNEC)转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 体外培养HNEC,取传3代对数生长期细胞随机分为空白对照组、NC-shRNA组、HIF-shRNA组和低氧诱导组.空白对照组不予任何处理,NC-shRNA组、HIF-shRNA组分别予NC-shRNA、HIF-shRNA转染,并于转染24 h后经CoCl2化学诱导模拟低氧环境;低氧诱导组仅经CoC12化学诱导模拟低氧环境.采用实时荧光定量PCR法和Western blotting法检测各组HIF-1 α、TGF-β1、VEGF、bFGF mRNA和蛋白表达;采用Western blotting 法检测PI3 K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt表达.结果 与空白对照组比较,低氧诱导组HIF-1α、VEGF、TGF-β1、bFGF mRNA和蛋白表达均明显升高(P均＜0.05);与NC-shRNA组比较,HIF-shRNA组上述指标mRNA和蛋白表达均明显降低(P均＜0.05).与空白对照组比较,低氧诱导组p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显升高(P均＜0.05);与NC-shRNA组比较,HIF-shRNA组p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显降低(P均＜0.05);各组PI3K、Akt蛋白表达比较P均＞0.05.结论 低氧诱导HIF-1 α表达可促进人鼻黏膜上皮细胞TGF-β1、VEGF、bFGF表达,干扰HIF-1α基因则抑制上述因子的表达;HIF-1α对上述因子的调控机制可能与其抑制PI3K/Akt信号通路有关.
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艾灸调控实验性RA基因干扰家兔滑膜细胞分泌功能的研究
目的 通过慢病毒载体介导的RNAi在体阻断SOCS1、PIAS1、PTPN22在RA动物模型的表达,研究艾灸对实验性RA滑膜细胞分泌功能的影响及其SOCS1、PIAS1、PTPN22的调控机制.方法 日本大耳白兔36只,随机分为空白对照组、RA模型组、艾灸治疗组、艾灸+SOCS1基因干扰组、艾灸+PTPN22基因干扰组、艾灸+PIAS1基因干扰组.按0.5ml/kg体重剂量,将福氏完全佐剂平均注入模型组、艾灸各组动物的双后膝关节腔内(对照组动物同法注入无菌生理盐水作为对照),运用慢病毒介导的SOCS1、PTPN22、PIAS1RNAi作为干预手段,麦粒灸“肾俞”、“足三里”穴治疗实验性RA(5壮/穴/天,6天1疗程,共治疗3个疗程,疗程之间休息1天).ELISA法测定艾灸对关节滑膜液IL-1β、TNF-α含量的影响.结果 与对照组比较,模型组IL-1β、TNF-α含量显著升高(P＜0.01);与模型组比较,艾灸组IL-1β、TNF-α含量显著降低(P＜0.01);SOCS1干扰组、PTPN22干扰组、PIAS1干扰组与艾灸组比较,下调IL-1β、TNF-α含量效果不及艾灸组(P＜0.05).结论 艾灸“肾俞”“足三里”穴可显著降低实验性RA家兔滑膜液炎症相关细胞因子IL-1β、TNF-α的含量,但在SOCS1、PTPN22、PIAS1被干扰的情况下其作用显著降低,提示SOCSI、PTPN22、PIAS1对JAK-STAT信号通路的负反馈调控可能与艾灸抑制实验性RA滑膜细胞的异常分泌功能密切关联.
关键词： 艾灸 类风湿性关节炎 JAK-STAT信号通路 负反馈 基因干扰 -
甲胎蛋白表达缺失的人肝癌HepG2细胞株的构建
目的:建立甲胎蛋白(AFP)表达缺失的HepG2细胞株.方法:选择AFP的RNA干涉靶序列,体外合成两段互补的寡核苷酸,与线性化的pll 3.7连接,扩增纯化得到所需质粒.鉴定后将质粒用慢病毒包装、纯化得到病毒粗提液,与HepG2细胞共培养,转染后用RT-PCR和Western blot实验检测细胞AFP的表达情况.结果:RT-PCR和Western blot实验显示,干扰后HepG2细胞AFP基因和蛋白的表达显著减少.干扰效率达84％.所得细胞株传代后仍仅能检测到微量AFP表达.结论:成功构建稳定的AFP表达接近缺失的HepG2模型细胞株.
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下调OCT4基因对人骨肉瘤F5M2细胞系增殖能力的影响
目的 探讨下调八聚体结合转录因子4(OCT4)基因对骨肉瘤细胞F5M2增殖能力的影响.方法 采用RNA干扰技术将OCT4基因特异性小干扰RNA(siOCT4)转染到处于对数生长期的F5M2骨肉瘤细胞中作为siOCT4组,并设立siNC组(转染siNC)及空白对照组.采用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测并比较siOCT4组和siNC组细胞中的OCT4 mRNA水平及蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)法检测并比较各组细胞的增殖能力;采用克隆形成试验检测并比较三组细胞的克隆形成能力.结果 siOCT4组中OCT4的mRNA表达水平及蛋白表达水平均较siNC组显著降低;MTT法的实验结果显示:与siNC组及空白对照组比较,siOCT4组细胞的生长曲线显著右移,增殖能力显著低于其他两组;EdU法检测结果显示:siNC组细胞的24 h平均增殖率为48.50％±4.54％,而siOCT4组细胞的24 h平均增殖率为32.30％±1.72％;与空白对照组及siNC组细胞比较,siOCT4组的克隆形成能力显著降低;以上差异均具有统计学意义(P均<0.05).结论 下调骨肉瘤细胞F5M2中OCT4的表达能抑制其细胞的增殖能力.
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siRNA抑制小胶质细胞上TLR4的表达
应用siRNA转染体外培养的原代大鼠大脑皮质和海马神经元,干扰外源导人基因或内源基因的表达已取得成功.我们设计了4条大鼠小胶质细胞Toll样受体4(TLR4)的siRNA,对比研究基因干扰对小胶质细胞上的TLR4基因表达和蚩白水平的影响.
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结直肠癌侵袭转移与双向调节因子的关系及其作用机制
目的 检测双向调节因子(AREG)在结直肠癌组织和细胞株中的表达,探讨其参与肿瘤侵袭迁移的机制.方法 应用免疫组织化学(IHC)技术检测55例结直肠癌与配对癌旁组织中AREG蛋白的表达,分析该蛋白与结直肠癌侵袭转移病理特征的关系.合成抑制内源性AREG表达的小干扰RNA(siRNA)并转染HT-29细胞;噻唑蓝(MTT)法检测肿瘤细胞的活性;应用划痕实验及Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭迁移能力;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot检测转染前后细胞中侵袭相关基因基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的表达.结果 结直肠癌组织中AREG的表达阳性率(81.82％)明显高于癌旁组织的阳性率(25.45％,P＜0.05);结直肠癌组织中AREG的阳性表达与淋巴结转移、肝转移有关(P＜0.05).AREG-siRNA有效抑制HT-29细胞中内源性AREG表达;MTT结果显示转染48 h后AREG-siRNA转染组细胞活性为0.41±0.04,明显低于非特异性siRNA转染组(Non-siRNA,0.68 ±0.03)和空白对照组(Blank control,0.71 ±0.03,P＜ 0.05).AREG-siRNA转染后HT-29细胞的迁移及侵袭能力与Non-siRNA组、Blank control组比较均明显降低(P＜0.05).AREG-siRNA转染后HT-29细胞MMP-2、MMP-9表达明显降低,TIMP-1表达升高(P＜0.05),而ICAM-1在转染前后比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AREG基因可能通过调节部分MMP-TIMPs家族基因而促进了结直肠癌侵袭转移.
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抑制具有PDZ结合域的转录共刺激因子表达对结直肠癌细胞株HCT116凋亡的影响及机制
目的 探讨RNA干扰技术沉默具有PDZ结合域的转录共刺激因子(TAZ)基因表达对结直肠癌细胞凋亡的影响及其机制.方法 合成TAZ的小干扰RNA(TAZ-siRNA)以80 nmol/L转染结肠癌细胞株HCT116,抑制TAZ表达;转染48 h后细胞计数法(CCK-8)检测细胞的活性,流式细胞仪实验检测细胞凋亡率,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测转染各组HCT116细胞TAZ、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和细胞色素C(Cyt C)基因mRNA和蛋白表达.结果 TAZ-siRNA能有效沉默HCT116细胞TAZ基因的表达(24 h抑制率为40.5％,48 h抑制率为82.5％,72 h抑制率为69.8％).有效抑制HCT116细胞中TAZ表达后,转染组细胞的活性(1.01 ±0.12)明显低于阴性对照组和con-siRNA组(1.73 ±0.12和1.68±0.09);凋亡率在TAZ-siRNA组、阴性对照组、con-siRNA组分别为(33.20±0.35)％、(11.67±0.12)％和(12.03±0.11)％.TAZ-siRNA转染后HCT116中TAZ和bcl-2基因和蛋白表达下调,而bax和Cyt C基因表达升高和蛋白的表达上调(P＜0.05).结论 利用RNA干扰技术沉默结直肠癌HCT116细胞TAZ基因后可以显著抑制细胞的活性,并能明显促进细胞凋亡,其机制可能是TAZ通过调控线粒体相关凋亡途径影响细胞凋亡.
关键词： 结直肠癌 具有PDZ结合域的转录共刺激因子 基因干扰 脱噬作用 -
干扰细胞信号转导抑制因子1表达对人口腔癌细胞生物学功能的影响
目的：研究细胞信号转导抑制因子1（SOCS1）基因对人口腔癌细胞增殖、周期及体外侵袭生物学功能的影响。方法：Western blotting及实时定量PCR验证人口腔癌细胞系KB中基因SOCS1的干扰效果；MTT法检测细胞增殖；应用Transwell侵袭小室模型观察口腔癌细胞的侵袭能力；流式细胞术分析细胞周期的分布情况。结果：SOCS1干扰片段显著降低口腔癌KB细胞SOCS1基因的mRNA及蛋白表达水平。抑制SOCS1表达后，细胞体外侵袭能力明显下降（P<0.05），且转染72 h后KB细胞数量较对照组显著减少（P<0.05）；干扰KB细胞SOCS1基因表达，使G0/G1期细胞数目明显多于对照组（P<0.05），而S、G2/M期细胞数目显著少于对照组（均P<0.05）。结论：干扰人口腔癌细胞株KB中的SOCS1基因表达后，KB细胞增殖、体外侵袭能力减弱，细胞分裂受到抑制。
关键词： 人口腔癌 细胞因子信号转导蛋白抑制因子1 基因干扰 细胞增殖 侵袭 -
大鼠靶向α7nAchR基因shRNA真核表达载体及重组腺病毒构建
目的 构建大鼠烟碱样乙酰胆碱受体α7亚型(α7nAchR)基因短发夹RNA(shRNA)真核表达载体.方法 设计并合成编码α7nAchR基因shRNA的DNA模板引物AY318、AY857、AY444+559、AY318+857,并分别与线性化的质粒载体pGenesil-1.1、pGenesil-1.4、pGenesil-1.2,pGenesil-1.3连接,以构建可以编码1条α7nAchR基因shRNA和编码2条α7nAchR基因shRNA的重组质粒载体;重组质粒载体感染感受态的DH5a细胞,提取细菌质粒进行特定酶切,并用1%的琼脂糖凝胶电泳以鉴定重组质粒是否构建成功;用LR体外同源重组法将AY318、AY444+559、AY857 shRNA表达框分别从重组质粒pGenesil转移至腺病毒pGSadeno质粒表达载体上,构建重组腺病毒质粒;用相同的方法感染DH5a细胞,并鉴定重组腺病毒pGSadeno质粒是否构建成功;提取线性化的重组腺病毒DNA并转染包装细胞HEK293,经放大培养获得滴度为1.0×1010pfu/mL的重组腺病毒上清;将重组腺病毒感染大鼠GH3垂体瘤细胞,以PCR反应鉴定重组腺病毒载体的α7nAchR基因干扰效果.结果 通过酶切片段及其大小,初步判断AY318、AY857、AY444+559、AY318+857 shRNA成功重组入质粒载体,重组腺病毒pGSadeno-shRNA包装成功;重组腺病毒感染HEK293细胞,在荧光显微镜下有绿色荧光蛋白表达;重组腺病毒感染GH3细胞后α7nAchR mRNA表达显著减少,且pGSadeno-AY857 shRNA干扰效果明显(85%).结论 具有感染力和干扰大鼠α7nAchR基因表达的shRNA真核表达载体构建成功,且pGSadeno-AY857 shRNA具有强的基因干扰效果.
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干扰素α-1b治疗慢性乙型病毒性肝炎42例疗效观察
我科用重组基因干扰a-1b(赛若金,深圳科兴生物工程股份有限公司生产)治疗慢性乙型病毒性肝炎(CHB)42例,以观察其疗效与安全性.1资料与方法1.1临床资料选择我科1998年4月至2003年12月的住院和门诊CHB患者70例,其中男56例,女14例,年龄17～49岁,平均34岁.随机分为干扰素a-1b治疗组(42例)和保肝治疗对照组(28例),两组病例在病程、病情、年龄等方面无显著性差异.
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干扰c-myc基因表达增强人胰腺癌细胞对吉西他滨和卡铂的敏感性
目的 探讨干扰c-myc基因表达对人胰腺癌细胞SW1990对化疗药物敏感性的影响.方法 采用实时定量PCR和Western blot检测人胰腺癌细胞系SW1990中c-myc基因的干扰效果;MTT法检测癌细胞对化疗药物吉西他滨和卡铂的敏感性;流式细胞术检测吉西他滨诱导的细胞凋亡情况.结果 c-myc siRNA显著下调人胰腺癌SW1990细胞中c-myc基因的mRNA和蛋白表达水平.干扰c-myc表达后,化疗药物吉西他滨和卡铂对SW1990细胞的半数抑制浓度(IC50)均显著减小(P<0.05),吉西他滨诱导的SW1990细胞凋亡率显著升高(P<0.05).结论 干扰c-myc表达可增强人胰腺癌细胞株SW1990对化疗药物吉西他滨和卡铂的敏感性.
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基因干扰及其在神经科学的应用
基因干扰是针对外源dsRNA(double stranded RNA)如病毒和转座子等的细胞防御性反应,dsRNA介导的转录后基因沉默.将人工设计的dsRNA导入细胞可以激起这种反应,沉默靶基因,产生相应表型.人们利用这一技术在神经基因功能以及神经疾病治疗等方面进行了大量的研究.本文介绍了基因干扰的发现、机制、特点及其在神经科学领域的应用.
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C35对胃癌细胞侵袭性的影响
目的 了解C35基因在胃癌细胞株中的表达水平,探讨C35基因在胃癌发生发展中的作用.方法 培养人胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823、HGC-27及正常人胃黏膜上皮细胞株GES-1,以实时定量PCR检测胃癌细胞株及正常胃黏膜细胞株中C35的表达水平;使用小片断干扰RNA(siRNA)下调胃癌细胞株C35的表达;实时定量PCR及免疫印迹检测干扰前后C35 mRNA及蛋白质表达的变化;MTT法和体外Matrigel侵袭实验观察C35减敲后胃癌细胞株生长能力和侵袭能力的改变.结果 C35在胃癌细胞株中呈高表达,而在正常胃黏膜细胞中不表达;经C35特异的siRNA作用后,C35 mRNA及蛋白质表达明显下降;减敲C35后,胃癌细胞株的生长能力和侵袭能力显著降低.结论 C35在胃癌细胞株中特异性高表达,C35在胃癌的发生发展中起促进作用.
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基因干扰对人肾小球系膜细胞megsin基因表达及α平滑肌肌动蛋白和转化生长因子β1生成的影响
megsin,即SERPINB7,是丝氨酸蛋白酶抑制剂进化单位B的第7位成员[1],为近年发现的特异性表达于肾脏的基因.
