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重视高迁移率族蛋白B1免疫效应的探索
新近的研究提示,高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein, HMGB1)不仅是真核生物细胞中普遍存在的非组蛋白DNA结合蛋白,还是重要的炎症因子,巨噬细胞、垂体细胞及中性粒细胞等受到炎性刺激时,都可以分泌HMGB1.严重创(烧)伤、休克及脓毒症患者血中HMGB1水平明显升高,HMGB1作为一种预警及炎症信号,可进一步影响机体的炎症及免疫反应,从而参与脓毒症发生发展的病理生理过程.
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阻断炎症介质的信号转导对极限肝切除术后大鼠肝内细胞因子表达的影响
目的探讨炎症介质特异性阻断剂AG490对极限肝切除术后大鼠细胞因子信号转导及肝内细胞因子表达的影响.方法将90%肝切除大鼠38只分为对照组(n=10)和AG490组(n=28),后者术中至术后36 h内每12 h腹腔内注射AG490(1 mg/kg),其间检测肝组织中磷酸化Janus激酶2(Jak2)和信号转导与转录激活子3(Stat3)蛋白水平,并测定剩余肝中白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)的表达.结果应用AG490后,术后8 h和12 h细胞因子信号蛋白Jak2和Stat3磷酸化显著下降并递次改变,大鼠肝脏中IL-6表达、IL-6/IL-10比值下降,而IL-10的表达增高.结论阻断Jak2与Stat3细胞因子信号通路能使剩余肝内促炎细胞因子表达下降和抗炎细胞因子表达升高,减轻极限肝切除术后大鼠体内炎症反应.
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THAP8基因在卵巢癌组织中的表达及其临床意义
在妇科肿瘤中,卵巢癌的发病率居第3位,但其病死率却居首位[1],其发生涉及细胞生长、分裂、分化和凋亡等生命科学的根本问题.凋亡相关蛋白(thanatos-associated protein,THAP)家族属于转录因子家族,其通过调节细胞增殖、细胞周期、凋亡、基因转录、染色体修饰等活动[2],参与细胞分化和胚胎发育等生命过程[3-4].THAP8属于锌离子依赖的DNA结合蛋白,是THAP家族的新成员[5-6],其基因定位于染色体19q13.13,并在肺、肝、肾、甲状腺、胰腺和脑组织中广泛表达.已有的研究表明,THAP8基因在神经系统肿瘤、肌肉和皮肤组织肿瘤中表达异常[6].国内外对于THAP8基因在其他肿瘤中的表达及其作用机制研究较少,其与卵巢癌发病的关系还不明确.本研究旨在观察THAP8基因在卵巢癌中的表达,探索其在卵巢癌的发生和发展中的作用.
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蛛网膜下腔出血后大鼠基底动脉高迁移率族蛋白B1的表达变化
脑血管痉挛(CVS)是蛛网膜下腔出血(SAH)后严重的并发症之一,尤其是迟发性脑作用.高迁移率族蛋白(high-mobility group box 1,HMGB1),是一类广泛分布于高等真核生物细胞核内的非组DNA结合蛋白,具有胞外促炎性反应因子的作用[1];它是一种新的晚期炎性反应介质,可分泌到胞质乃至胞外[2],并作为重要的炎性反应因子在机体炎性反应中起重要作用.
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局灶性脑缺血再灌注信号转导子与转录激活子-3激活与MR扩散加权成像的实验研究
缺血性脑血管病占脑血管疾病的80%[1],其中以大脑中动脉分布区的发病率高.MRI可以反映缺血后脑组织的病理生理变化,但是MRI变化是否与缺血后脑组织的分子生物学变化存在关系有待研究.信号转导与转录激活子( signal transducer and activator of transcription, STAT)是一类DNA结合蛋白,参与细胞生长、恶性转化、凋亡等生理功能的调节[2],磷酸化STAT3(P-STAT3)是STAT3的活化状态.本实验结合急性脑缺血再灌注后STAT3的激活和DWI状况进行研究,探讨脑缺血再灌注分子机制,为进一步研究脑缺血后的治疗提供理论基础.
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核因子-κB在胰腺疾病中的研究进展
核因子-κ B(nuclear factor-κ B,NF-κ B)是一类能与多种基因启动子κ B位点发生特异性结合并促进转录的DNA结合蛋白的总称,其具有广泛的生物学活性.NF-κ B激活后通过控制细胞因子、黏附分子、趋化因子等多种基因的表达,参与机体炎性反应、免疫反应及肿瘤的发生、发展等许多生物进程[1].本研究就NF-κ B在胰腺疾病中的研究进展综述如下.
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慢性神经病理性疼痛大鼠背根神经节和脊髓背角pCREB表达的变化
目的探讨背根神经节和脊髓背角磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)表达在慢性压迫性神经损伤(CCI)致神经病理性疼痛大鼠痛觉过敏中的作用.方法成年雌性SD大鼠32只,体重230~270 g,随机分为4组(n=8):空白组、sham组、CCI 2w组和CCI 4w组.CCI前测定痛阈[机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)]基础值,CCI后(空白组、sham组和CCI 2w组于CCI 14 d;CCI 4w组于CCI 28 d)再次测定痛阈.后一次测定痛阈后次日,取L4,5脊髓和L5背根神经节,免疫组织化学染色,计数pCREB免疫反应阳性(pCREB-IR)神经细胞数量.结果MWT:CCI后sham组、CCI 2w组、CCI 4w组均低于基础值,CCI后sham组低于空白组,CCI 2w组低于sham组(P<0.01);TWL:CCI 2w组短于基础值,CCI 2w组短于sham组,CCI后CCI 4w组长于CCI 2w组(P<0.01).sham组背根神经节pCREB-IR神经细胞数量多于空白组,CCI 2w组背根神经节及脊髓背角pCREB-IR神经细胞数量多于sham组,CCI 4w组背根神经节及脊髓背角pCREB-IR神经细胞数量少于CCI 2w组(P<0.05或0.01).结论CCI致慢性神经病理性疼痛大鼠背根神经节和脊髓背角pCREB表达增加,这可能是外周神经损伤后中枢和外周敏感化的分子机制.
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鞘内注射H-89对神经病理痛大鼠脊髓背角磷酸化cAMP反应元件结合蛋白表达的影响
目的观察鞘内注射高选择性蛋白激酶A抑制剂H-89对慢性神经病理痛大鼠脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)表达的影响.方法成年雌性SD大鼠58只,体重230~270 g.采用右侧慢性坐骨神经结扎的方法建立慢性神经病理痛模型.第一部分,取28只模型大鼠随机分为4组(n=7),H1、H2、H4组分别单次鞘内注射1、2、4 nmol H-89[用二甲亚砜(DMSO,10mmol/L)溶解成10 μl],Con组单次鞘内注射10 mmol/L DMSO 10μl.给药前和给药后15、30、60min分别测定右侧50%缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL).第二部分,取24只模型大鼠随机分成4组(n=6),Con组:单次鞘内注射10 mmol/L DMSO 10 μl,H1、H2、H4组分别单次鞘内注射H-89 1、2、4 nmol(10μl);另取6只大鼠实施假手术后,单次鞘内注射10mmol/LDMSO 10μl(Sham组).第二部分大鼠给药后30min处死,取L4,5脊髓,免疫组织化学染色观察脊髓背角pCREB的表达.结果与给药前比较,H2组MWT给药后15 min增加,H4组给药后15、30 min MWT增加,TWL延长(P<0.05或0.01);与Con组比较,H2组MWT给药后15 min增加,H4组给药后15、30minMWT增加,TWL延长(P<0.05或0.01).与Con组比较,Sham、H1、H2和H4组脊髓背角pCREB免疫反应阳性神经元数量和表达降低(P<0.05或0.01).结论鞘内注射H-89抑制了神经病理痛大鼠脊髓背角pCREB表达,PKA/CREB信号通路的激活参与了慢性神经病理痛的维持.
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鞘内注射DREAM-shRNA对神经病理性痛大鼠脊髓背角p-CREB表达的影响
目的 探讨鞘内注射转录因子下游调控元件拮抗因子-短发夹RNA(DREAM-shRNA)对神经病理性痛大鼠脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)表达的影响.方法 成年健康雄性SD大鼠,体重280~320 g,采用坐骨神经慢性压迫(CCI)法建立大鼠神经病理性痛模型.于CCI后第3天鞘内置管.取鞘内置管成功的大鼠24只,随机分为4组,每组6只,假手术组(S组):仅暴露坐骨神经,不结扎;神经病理性痛组(NP组):于CCI后第8天鞘内注射生理盐水10 μl;RNA干扰组(RNAi组):于CCI后第8天鞘内注射DREAM-shRNA 5 μl和牛理盐水5 μl;空白载体组(BV组):于CCI后第8天鞘内注射慢病毒空白载体5 μl和生理盐水5μl,各组连续注射7 d.于CCI前1 d(T0,基础状态)、CCI后第7~14天(T1-8)时测定机械痛阈.于CCI后第15天时测定脊髓背角绿色荧光蛋白(GFP)和p-CREB的表达水平.结果 与基础值比较,各组各时点机械痛阈降低(P<0.05或0.01);与T1时比较,NP组和BV组T5-8时机械痛阈降低,RNAi组T8时机械痛阈升高(P<0.05或0.01);与S组比较,NP组和BV组机械痛阈降低,RNAi组T2时机械痛阈降低,T8时升高,NP组、RNAi组和BV组脊髓背角p-CREB表达上调(P<0.05);与NP组比较,RNAi组T6-8时机械痛阈升高,脊髓背角p-CREB表达下调(P<0.05).RNAi组脊髓背角可见大量绿色荧光,即GFP表达阳性,其余3组脊髓背角未见绿色荧光,即GFP无表达.结论 鞘内注射DREAM-shRNA缓解大鼠神经病理性痛的机制可能与抑制脊髓背角p-CREB的表达有关.
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HPV E2蛋白及其在宫颈癌演变中的作用机制
宫颈癌及其癌前病变的发生是多种因素协同作用的结果,高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌演变的始动因素,而HPV与宿主染色体的整合则是推动宫颈癌变进展的重要事件.病毒基因组的整合破坏了E2基因完整性,E2蛋白断裂使宫颈细胞更易于永生化,促进癌变发展.下面就E2基因的功能及病毒基因组整合后癌变发生的机制进行阐述.E2蛋白是一种序列特异性DNA结合蛋白,可调节DNA复制、转录,在HPV感染及感染后病毒生活周期的正常维持中具有关键作用.宫颈癌的演变与高危型别HPV感染不可分割,以HPV16、HPV18两型感染常见.HPV16 E2蛋白编码基因序列位于基因组第2 755~3 852位;HPV18 E2蛋白编码基因序列位于基因组第2 817~3 914位.
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高迁移率族蛋白B1及其信号分子作用研究进展
HMGB1是HMGB亚家族成员之一.早期研究显示,HMGB1是一种DNA结合蛋白,通过与多种转录因子、复制蛋白、甾体受体及RAG1重组酶作用,参与DNA重组、修复、基因转录调控,细胞复制和分化成熟等多种生命活动[1].
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大鼠心肌肌质网DNA结合蛋白的提取及在急性气胸时的变化
目的:探讨心肌细胞肌质网是否存在DNA结合蛋白,并观察它在急性气胸时的变化.方法:Wistar大鼠随机分为对照组、急性气胸组,差速离心法分离大鼠心肌细胞和后肢骨骼肌肌纤维肌质网(sarcoplasmic reticulum,SR)膜蛋白,采用West-ern免疫印迹技术分离出SR DNA结合蛋白,并观察此蛋白在急性气胸时的变化特征.结果:大鼠心肌SR上存在DNA结合蛋白,相对分子质量分别为60kD和78kD.急性气胸时,此蛋白的量增加.结论:大鼠心肌SR上存在DNA结合蛋白,该DNA结合蛋白与心肌功能状态密切相关.
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改良EMSA法分析人α1(Ⅰ)胶原基因序列特异性DNA结合蛋白
目的:分析人α1(Ⅰ)胶原基因5′侧翼区具有较高启动调控活性序列的DNA结合蛋白.方法:以原代培养人瘢痕皮肤成纤维细胞为胶原产生细胞,采用限制性内切酶消化、DNA混合片段末端标记和增强化学发光的改良电泳迁移率改变实验 (EMSA)分析人α1(Ⅰ)胶原基因5′侧翼区-268~+42 bp序列DNA结合蛋白.结果:在胶原产生细胞--人瘢痕成纤维细胞中存在α1(Ⅰ)胶原基因-268~+42 bp序列的DNA结合蛋白,其结合活性具有特异性,并能被Sp-1,NF-1,NF-κB识别序列所竞争.结论:改良EMSA法可用于分析较长序列的DNA结合蛋白,人α1(Ⅰ)胶原基因-268~+42 bp序列中存在转录因子Sp-1,NF-1,NF-κB结合序列,这些转录因子结合位点可能与人α1(Ⅰ)胶原基因-268~+42 bp序列的高启动活性有关.
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高迁移率族蛋白1与肿瘤
高迁移率族蛋白(high mobility group,HMG)因在聚丙烯酰胺凝胶电泳中有很高的迁移率而得名.根据其结构,HMG超家族可分为HMGB、HMGN、HMGA三类.高迁移率族蛋白1(HMGB1)属于HMGB家族,是一种高度保守的核蛋白,广泛存在于真核细胞内,与染色质疏松结合.它作为一种DNA结合蛋白,可以稳定核小体,调节多种基因的转录、表达,参与DNA转录与修复、细胞生长与分化、细胞外信号转导等一系列重要的生理过程.
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质粒DNA增强大鼠缺血骨骼肌肌浆网钙转运功能
在大鼠肢体缺血模型上观察了质粒pcDNA3对缺血骨骼肌肌浆网(SR) Ca2+转运的影响.结果显示, 骨骼肌缺血时SR Ca2+转运(Ca2+摄入与释放)较非缺血肌肉增强, 而质粒pcDNA3与SR上DNA结合蛋白结合之后, 可进一步增强缺血骨骼肌SR Ca2+摄入(P<0.01)及释放速率 (P<0.05).提示质粒DNA对正常及缺血大鼠骨骼肌的SR Ca2+转运能力均有影响, 其临床病理生理意义值得进一步研究.
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丙泊酚对大鼠海马cAMP效应元件结合蛋白磷酸化和cAMP效应元件结合蛋白mRNA表达水平的影响
目的 探讨丙泊酚对大鼠海马cAMP效应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)磷酸化和CREB mRNA表达水平的影响.方法 成年雄性SD大鼠64只,体重250 g~280 g,采用RandA1.0随机分组软件将实验动物随机分为2组(每组32只),丙泊酚组(P组)于训练前15 min腹腔注射丙泊酚9 mg/kg,容量2 ml/kg;生理盐水组(S组)注射等容量生理盐水.采用避晴箱实验测试大鼠认知功能.首先对大鼠进行训练,记录100 s内大鼠不再钻入暗室所需的训练次数.于训练结束后1、3、24 h(T1~3)时点记录大鼠在明室停留的时间即记忆潜伏期.各组于给药后15 min(T0)和T1~3记忆能力测试结束后,各断头处死8只大鼠,分离海马,测定CREB、磷酸化CREB(p-CREB)、CREB mRNA的表达水平.结果 P组大鼠不再钻入暗室所需的训练次数3(1.25)较S组1(0.25)明显增加(P<0.01).s组大鼠T1~3时记忆潜伏期均长于300 s,P组大鼠T1时潜伏期319(144)s,T2时潜伏期131(114)s,T3时潜伏期56(30)s,提示腹腔注射丙泊酚9 mg/kg明显降低大鼠学习获得能力,缩短恐惧记忆的存储时间而发生顺行性遗忘;与S组比较,T0~3时CREB磷酸化水平降低(P<0.01),T3时海马CREB mRNA表达水平显著降低(P<0.01),各时点海马CREB的表达差异均无统计学意义(P<0.05),提示丙泊酚遗忘作用与抑制大鼠海马CREB磷酸化水平、下调CREB mRNA的表达有关.结论 丙泊酚可抑制大鼠海马CREB的磷酸化水平,并下调CREB mRNA 的表达水平.
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15-脱氧-△12,14-前列腺素J2在脑缺血中的神经保护作用
15-脱氧-△12,14-前列腺素J2(15-deoxy-△12,14-prostaglandin J2,15d-PGJ2)是过氧化物酶体增殖物激活受体γ的天然配体之一,在脑缺血中发挥重要的保护作用.文章对15d-PGJ2神经保护机制的研究进展进行了综述.
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生物信息学方法在判断DNA结合蛋白质和预测结合位点中的应用
综述生物信息学方法在判断DNA结合蛋白质和预测结合位点中的应用研究进展.蛋白质与DNA间的相互作用是基因表达调控的分子生物学基础,因此DNA结合蛋白的判断以及DNA与蛋白质间作用位点的预测一直以来都是分子生物学和生物信息学的前沿领域.采用生物信息学方法进行这类判断和预测,具有省时、省力的特点,近年来吸引了众多科学家的关注.
关键词: 生物信息学 蛋白质-DNA相互作用 DNA结合蛋白 结合位点预测 -
抗辐射菌DNA结合蛋白的氨基酸序列分析
目的对抗辐射菌D.radioudurans的DNA结合蛋白(DBP)进行N-末端氨基酸(AA)序列分析,探讨其抗辐射分子学组成的特性.方法采用地高辛(DIG)标记染色体DNA作为探针,South-Western印迹法检测DBP,在N-端AA自动序列仪上分析AA序列.结果野生型抗辐射菌存有8种DBP的特性蛋白(分子量分别为122、93、33、29、16、15、14和12kd);AA序列分析发现其中93kd和33kd可能为新的蛋白质;两种新DBP的表达水平随不同培养基和培养时间而变化.结论抗辐射菌的DBP,尤其是93kd和33kd的DBP与其辐射耐受性可能有密切关系.
关键词: 抗辐射菌 D.radiodurans DNA结合蛋白 氨基酸序列 辐射耐受性 -
NKX 3.1基因上游一个30 bp负调控区结合蛋白的初步鉴定
目的:鉴定NKX 3.1基因上游30 bp负调控区的结合蛋白.方法:人工合成30 bp负调控序列,用末端转移酶对其进行地高辛标记;提取细胞核蛋白,采用电泳迁移率变动分析(EMSA)方法,检测细胞核提取液中与30 bp负调控序列特异结合的核蛋白.结果:在LNCaP细胞及其他不同肿瘤细胞系核提取液中,检测到与30 bp负调控序列特异结合的核蛋白,但在不同的细胞系中有不同种类的结合蛋白.结论:NKX 3.1基因上游的30 bp负调控机制在不同的细胞中普遍存在,不同的细胞核中有不同的结合蛋白,可能涉及不同的调控机理.