首页 > 文献资料
-
凝血因子活性测定的规范化问题
凝血因子合成减少或缺陷,常会引起出血;凝血因子合成增加或异常激活,则会导致血栓 [1].所以,凝血因子活性检测对疾病的诊治具有重要意义.由于凝血因子活性检测可受多种因素干扰,加强试验的规范化尤为重要, 我们对试验的规范化作一简述.
-
全自动sta-compact凝血仪与半自动Coachrome-Ⅳ型凝血仪测定凝血因子Ⅷ促凝活性的比较
凝血因子Ⅷ活性测定是血友病A诊治过程中极为关键的检查项目,过去采用传统的手工操作、自配试剂等方法,FⅧ∶C测定结果波动较大.近年,随着半自动及全自动凝血仪的日渐普及,大大提高了FⅧ∶C检测的准确度及检测效率.本研究通过在全自动Sta-compact凝血仪和半自动Coachrome凝血仪上测定FⅧ∶C的比较,以探讨不同类型仪器测定FⅧ∶C的准确性,现报道如下.
-
原发性胃结直肠癌组织中黄嘌呤氧化还原酶活性的变化
目的:通过测定胃结直肠原发性癌组织和对照组组织中的黄嘌呤氧化还原酶(xanthine oxidoreductase,XOR)活性的变化,来研究癌肿的发生和发展在胃肠道各部位所具有特殊的生物学变化,为治疗胃、结直肠癌提供理论依据.方法:连续收集中山医院手术室中速冻保存的胃肠道癌切除标本49例,分别测定癌肿组织和标本切缘相对正常组织的XOR活性,按照性别、年龄、部位、分化程度4个指标分组进行统计学分析.结果:按部位分组,结肠组内的癌组织XOR活性明显低于对照组,分别为0.8338和1.1404U,两者酶活性均数存在显著差异;其他所有分组中癌组织和对照组的酶活性均无显著差异.用广义线性模型和SNK法分别分析,正常粘膜组织按照部位分为三组的组间XOR活性均数无差异.结论:人原发性结肠癌组织在其发生和发展中具有特殊的生物学变化,可能产生抑制XOR活性的物质,其原因和机制尚待更多病例标本和实验研究.
-
新生儿窒息时脑脊液酶活性变化及意义
新生儿窒息的病情及预后与脑损伤的程度有关,脑脊液(CSF)中酶活性的变化可作为评价脑损伤的重要指标之一.虽有作者测定神经系统疾病CSF某些酶的变化,但对其价值评价不一[1,2].我科自1998年3月~2000年3月对收治的89例新生儿窒息患儿开展了CSF肌酸磷酸激酶(CPK)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)活性测定,探讨其酶的活性变化以及与病情的关系,现报告如下.
-
重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子活性测定标准品的研制
目的:建立效价测定用的重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)国家标准品.方法:标准品按WHO有关要求进行制备、分装、冻干、检测,用GM-CSF国际标准品为标准进行协作标定.结果:冻干重组GM-CSF标准品经检测外观,无菌实验合格,水分为0.93%,加速热稳定实验表明其生物学活性在温度为-20℃,4℃和25℃,37℃条件下23个月保持稳定.该标准品经3家实验室协作标定共21次测定,几何平均效价为1.77×105 IU/支.实验均数的95%可信区间为(1.64~1.90)×105IU/支,单次实验的95%参考值范围为(1.23~2.34)×105 IU/支,平均可信限率为6.962%.结论:该批重组GM-CSF国家标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品使用,效价定为1.8×105 IU/支,编号为98/01.
-
降纤酶生产过程中测活方法探讨
降纤酶是从尖吻蝮蛇毒纯化的蛋白水解酶。酶的活力是衡量酶制剂水平的一个重要指标,它所处环境的酸碱性、离子强度、温度、金属离子等对其活性有很大的影响。部颁标准的降纤酶测活方法是针对原料药及制剂的,它们纯度高,一般为冻干品且含盐分少,可用合适pH及离子浓度的缓冲液溶解,因而能在降纤酶适测活环境中进行测定。然而,在从尖吻蝮蛇毒纯化降纤酶的过程中,由于工艺的需要[1],所用的各种层析缓冲液中含有不同浓度的盐,酸碱度也与测活系统不一样。高浓度的盐与偏酸、偏碱都影响降纤酶的活性测定,甚至出现与客观事实相反的结果,给纯化工作造成误导。
-
血清(浆)酶传统活性测定存在的问题及酶蛋白测定的意义
血清(浆)酶少数是分泌入血的具有生理作用的酶,多数是逸入血中的不发挥生理作用的酶.其含量因产量、细胞破坏或通透性改变、排泄状况、活化物或抑制物(指活性)而改变.从临床应用目的考虑,前者应测活性,后者应着重测酶蛋白量.但因条件(技术等)所限,目前对后者普遍应用测活性法.血中酶活性变化分为酶蛋白和酶活性同步变化及酶蛋白未变而酶活性变化两种情况.因下述原因,酶活性常不能正确反映酶蛋白含量.
-
日本血吸虫潜在药物靶点β-碳酸酐酶的表达与鉴定
目的 原核表达日本血吸虫(Schistosoma japonicum)潜在的药物靶点β-碳酸酐酶(β-CA)并测定其催化活性.方法 根据β-CA保守序列,在日本血吸虫基因组中鉴定β-CA序列,核酸序列全合成后将其导入原核表达系统进行融合表达.SDS-PAGE及Western blotting鉴定表达蛋白后,采用Ni亲和层析方法纯化目的蛋白,并测定碳酸酐酶活性.结果 cDNA序列Sjp_0056790.1具有β-CAs的保守序列;成功将该核酸序列导入重组表达载体pET-32a(+)-SjaCA中;SDS-PAGE和Western blotting检测结果显示融合蛋白分子量大小约为38 kDa;碳酸酐酶活性测定结果显示该蛋白具有碳酸酐酶活性,且该活性受乙酰唑胺抑制.结论 Sjp_0056790.1编码日本血吸虫β-CA,本研究成功表达了具有催化活性的日本血吸虫的β-CA,为后续的药物筛选奠定了基础.
关键词: 日本血吸虫 β-碳酸酐酶(β-CA) 药物靶点 表达 活性测定 -
乌苏里蝮蛇毒一种C-型凝集素相关蛋白的分离、纯化及活性测定
目的 从乌苏里蝮蛇蛇毒中分离纯化得到具有促凝血活性的C-型凝集素相关蛋白.方法 利用IDASepharose FF亲和色谱作为独立的蛋白分离纯化手段,并且结合Sephadex G-100,Sephadex G-50凝胶过滤色谱从乌苏里蝮蛇蛇毒中分离得到一个新的蛋白组分.结果 该组分经还原和非还原SDS-PAGE电泳鉴定结果显示为均一的单一条带,即C-型凝集素相关蛋白,相对分子质量约为15.7 kD.结论 经过一系列的分离和纯化,能够从乌苏里蝮蛇蛇毒中提取到C-型凝集素相关蛋白组分.
关键词: 乌苏里蝮蛇蛇毒 C-型凝集素相关蛋白(CLRPs) 分离纯化 活性测定 -
纳豆激酶体外活性测定及影响因素考察
目的 建立纳豆激酶(NK)体外活性测定方法,考察影响因素.方法 采用对甲基苯磺酰-L-精氨酸甲酯(TAME)作为底物,用变色酸反应显色,在574nm波长处比色测定酶活性.结果 NK在0.05~0.25mg/mL浓度范围内具有良好的线性关系;NK在pH8.0,4℃,活性保持久.结论 TAME法测定NK活性操作简便,可较准确测定NK体外活性.温度、pH、某些溶剂对NK的活性有影响.
关键词: 纳豆激酶 甲基笨磺酰-L-精氨酸甲酯 活性测定 -
纳豆激酶抗凝血作用的研究
目的研究纳豆激酶(NK)的活性和抗凝血作用.方法采用纤维蛋白平板法测定NK的活性;采用试管法测定家兔全血凝固时间、血浆复钙时间、凝血酶时间、大鼠凝血活酶时间、凝血酶引起的纤维蛋白凝固时间;采用Quick法测定大鼠凝血酶原时间.结果固体粉末NK的活性为565 510 U/g,是尿激酶的3.13倍;液体NK的活性为15 234 U/ml;NK能显著延长家兔全血凝固时间、血浆复钙时间、凝血酶时间、大鼠凝血活酶时间、凝血酶引起的纤维蛋白凝固时间、大鼠凝血酶原时间.结论NK对凝血过程的三阶段都有影响.
-
重组人红细胞生成素体内外活性检测方法的比较
目的对重组人红细胞生成素(rhEPO)体内外活性测定结果进行比较,说明体内外活性测定对rhEPO质量控制的意义.方法采用59Fe摄入法、网织红细胞法和ELISA法测定rhEPO制品的体内外生物学活性.结果 59 Fe 摄入法和网织红细胞法测定结果一致,与rhEPO唾液酸含量具有相关性.当rhEPO唾液酸含量较低时,ELISA法与体内活性测定结果有较大差异.结论 rhEPO体内外活性测定方法可以相互补充,均是保证rhEPO质量不可缺少的质控手段.
-
一种促肝细胞生长因子活性测定方法
目的 建立一种新的促肝细胞生长因子(HGF)活 性测定 方法。方法 用原位灌流胶原酶制备大鼠肝细胞,经1.5 h预培 养,将HGF加至培养上清,再经 1.5 h孵育后,用溴化四唑蓝(MTT)比色法 测定细胞存活和增殖率。结果 571~ 1 142 μg/m1 HGF显著 提高细 胞存活和增殖率,1 142 μg/m1 HGF使A比值(AHGF/A对照)大 于 2。结论 此方法省时、稳定、重现性好,适用于HGF活性 测定。
-
E花环法测定胸腺肽活性的剂量效应
目的研究胸腺肽活性的一种测定方法.方法采用猪胸腺T细胞脱E受体玫瑰花结试验测定胸腺肽制剂活性,不同的加样量观察花环率的变化.结果花环率与胸腺肽刺激剂量存在非线性关系,20~200 μg/ml浓度的胸腺肽与T细胞温浴对花环形成效果较好.结论胸腺肽的活性测定应作不同浓度刺激,浓度过低花环率提高不明显,浓度过高反而抑制花环的形成.
-
TDG变体的构建、表达、纯化及其DNA修复功能研究
目的:研究DNA错配修复蛋白 mTDG截短变体修复G:U错配的生物活性.方法:通过PCR扩增得到mTDG的C-端截短变体mTDG(1-279)基因片段,用Nde Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切并回收,然后插入双酶切过的原核表达载体pET28a(+),得到pET28a-mTDG(1-279)重组质粒.将重组质粒转化表达菌株BL21(DE3),经IPTG诱导表达,过Ni+柱纯化得到His- mTDG(1-279)融合蛋白.后通过TDG体外测活试验,测试mTDG(1-279)蛋白对G:U错配的修复活性.结果:mTDG(1-279)蛋白获得了表达和分离纯化,且体外测活实验表明mTDG(1-279)蛋白具有良好的G:U错配修复活性.结论:mTDG(1-279)蛋白依然具有修复G:U错配的生物活性,为进一步研究其活性结构域等结构与功能关系奠定了基础.
-
天蚕素A-蛙皮肽杂合肽基因的表达及产物抗菌活性测定
目的研究天蚕素A-蛙皮肽杂合肽基因[CA(1~8)-MA(1~12)]抗菌肽的抗菌活性.方法将天蚕素A-蛙皮肽杂合肽基因抗菌肽的人工基因克隆到具有自切割功能的表达载体pTYB12上,并在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中进行表达;表达产物用几丁质树脂进行了亲和吸附,自切割后洗脱得到抗菌肽,进行透析以去除盐类物质,后用大肠杆菌与金黄色葡萄球菌进行活性检测.结果天蚕素A-蛙皮肽杂合肽[CA(1~8)-MA(1~12)]对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌均有一定的抗菌活性.结论天蚕素A-蛙皮肽杂合肽具有抗菌活性,其抑瘤活性的研究还有待于进一步研究.
-
人胰淀素类似物普兰林肽体外活性测定方法的建立
建立体外人胰淀素类似物普兰林肽活性测定的方法,为普兰林肽及其制剂的质量控制提供可靠的细胞检测方法.将L6细胞培养并分化成有明显肌管的成熟骨骼肌细胞,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD)检测普兰林肽对高糖培养环境下骨骼肌细胞葡萄糖吸收的影响.结果显示,在1×10-9~1×10-5 mol/L的浓度范围内,普兰林肽能显著增加分化后的L6细胞的糖吸收量,在16h达到大值.普兰林肽浓度的负对数(x)与细胞糖吸收增加量(y)间呈现出良好的线性关系(y=-4.750x+ 59.54,R2 =0.991 9).应用本实验建立的方法检测了市售普兰林肽醋酸盐注射剂的活性,结果显示1×10-6、1×10-7和1×10-8 mol/L的普兰林肽注射剂作用于分化的L6细胞16h,细胞的糖吸收增加率为(61.89±9.54)%,(43.68±10.06)%和(33.30±13.03)%(P<0.01);与单用胰岛素组对比,普兰林肽与胰岛素联合使用能显著提高分化后的L6细胞的糖吸收量(P<0.05),与普兰林肽注射剂的临床使用结果一致.本实验为普兰林肽的活性测定提供了一种稳定可靠的细胞替代模型.
-
蚕豆病21例临床分析
现对我院近5年来收治的蚕豆病21例进行临床分析,报告如下.1.临床资料蚕豆病患儿21例,男19例,女2例,年龄14月~5岁均于食蚕豆后数小时至3天内入院,父亲为本地人,患儿均以急性血管内溶血起病,面色苍白、酱油样尿、贫血,其中中度贫血15例,重度贫血6例,巩膜轻度黄染,网织红细胞升高,2例肾功能轻度升高,Coombs试验(-),外周血涂片未见球形红细胞增多症,Ham试验(-),高铁血红蛋白还原试验均降低,部分病人做红细胞G-6-PD活性测定降低.
-
Caspase 3在大肠杆菌E.coli BL21中表达和活性的研究
目的:研究凋亡蛋白酶Caspase 3在大肠杆菌中的表达及活性. 方法:用PCR法扩增出Caspase 3基因cDNA,然后插入pCMV-Myc载体,扩增后克隆至表达载体pGEX-6p,使用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导Caspase 3蛋白的表达;应用SDS-PAGE和Western blot法鉴定其性质. 结果:经测定诱导3h后Caspase 3活性高. 结论:可在大肠杆菌E.coli BL21中诱导表达出有活性的Caspase 3,为研究其在细胞凋亡中的作用奠定了基础.
-
血清GPDA活性测定对胃癌的诊断价值
1966年Hopsu-Havu和Glenner发现了一种新的二肽氨基肽酶,即甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶( Glycyl-Proline Dipeptidyl Aminopeptidase, GPDA). GPDA不仅存在于鼠肝和鼠肾中,而且存在于人体唾液腺、颌下腺等组织及唾液、血液中[1,2],具有水解位于肽链N-末端的甘氨酰脯氨酸和其它氨基酸之间肽链的作用,GPDA活力在肝脏疾病时增高,而胃癌时减低[3].本文采用全自动生化分析仪动力学法测定胃癌患者血清中的GPDA活性,以进一步探讨血清GPDA活性测定对胃癌的诊断价值.