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凝血酶活性两种测定方法的比较
凝血酶是从猪血或牛血中提取的凝血酶原,经激活后而成凝血酶.凝血酶活性测定常用的底物有纤维蛋白原[1]、健康人血浆 [2]等,亦有报道用NPGB滴定法[3]测定其活性的.<中国药典>规定用纤维蛋白原(以下简称纤原)作为其活性测定的底物,但纤原存在来源不便,价格较贵等缺点.
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基质金属蛋白酶及其抑制剂的活性测定方法
基质金属蛋白酶在肿瘤细胞的侵袭和转移过程中起重要作用,并与一系列的病理过程紧密相关.在体外测定基质金属蛋白酶的活性水平,对恶性肿瘤的诊断和预防具有重要意义,同时为小分子基质金属蛋白酶抑制剂的活性筛选提供有益的依据.主要的活性测定方法有化学法、酶谱法、免疫分析法、荧光底物法、高通量筛选法.对这些测定方法的原理、操作及优缺点进行了介绍及比较.
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血脂康抑制HMG-CoA还原酶活性的定量测定研究
目的:建立血脂康的活性测定方法,用于血脂康的质量控制研究.方法:建立3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoA还原酶)酶促反应,即HMG-CoA还原酶量为3.125×10-4U,烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)量为160 nmol·L-1,羟甲基戊二酸单酰辅酶A (HMG-CoA)量为5 nmol· L-,反应时间为50 min的反应体系,加入洛伐他汀酸系列工作溶液,采用LC-MS/MS方法测定体系中产物甲羟戊酸的量,计算抑制率,得到洛伐他汀酸浓度-抑制率曲线.将血脂康样品溶液加入到酶促反应体系中,根据抑制率计算血脂康活性成分的含量.结果:洛伐他汀酸浓度为10~500 ng·mL-1范围内抑制效应显著,质量控制样品的准确度和精密度范围分别为95.28% ~ 101.53%,7.08%~10.51%;平均加样回收率为100.25%,RSD为2.27%.检测得到3批血脂康胶囊活性成分的含量以洛伐他汀酸计分别为每粒4.86,4.71和4.56 mg.结论:建立的方法精密度好,准确度高,可用于血脂康胶囊的生物活性测定.酶法测定结果显著高于HPLC法的测得值,推测血脂康中可能有其他成份在同时发挥抑制HMG-CoA还原酶的作用.本研究结果对血脂康的质量控制具有指导意义.
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复方曲肽注射液活性测定方法的研究
目的:研究复方曲肽注射液活性测定方法.方法:通过体外血小板聚集试验确定其活性限值测定法.结果:通过对复方曲肽注射液不同体积以及不同批次血小板聚集试验显示此方法重复性差、限值制定较难,无法寻找一个统一的标准来衡量其抑制血小板聚集功能.结论:应用血小板聚集试验考察复方曲肽注射液活性测定方法欠妥,建议进一步探索更好的方法检验产品活性.
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肝病患者血清脯氨酸肽酶活性测定的临床意义
目的:探讨脯氨酸肽酶(PLD)在各种肝脏疾病中的临床诊断应用价值。方法应用比色法和放免法检测PLD和透明质酸(HA)、胶原IV(IV-C)、层粘蛋白(LN)、ALT等各种生化指标,并进行相关分析。结果急性肝炎PLD除与ALT 变化基本一致外,与其它指标均无明显相关性。慢迁肝组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),但与急性肝炎慢活肝及肝纤维化和(或)肝硬化组比较差异均有统计学意义(P<0.01),慢活肝组PLD活性与ALT和HA基本一致,均明显升高;肝纤维化和/或肝硬化者PLD活性绝大多数升高,且与HA、IV-C和LN明显相关(P<0.01)。结论 PLD活性变化对急性肝炎、慢活肝和肝纤维化和(或)肝硬化活动期的诊断具有一定的参考价值。
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血清肌酸激酶活性测定和临床应用
肌酸激酶(creatine kinase,CK)是诊断急性心肌梗死(AMI)的重要酶学指标之一,也是反映神经肌肉损伤的敏感项目,对心肌和骨骼肌疾病的诊断、治疗和预后判断同样有重要的参考价值,目前在临床上已经得到广泛的应用.本文概括介绍CK的生理功能、临床应用情况、注意事项以及测定结果溯源等几个方面的内容.
关键词: 肌酸激酶(CK) 活性测定 急性心肌梗死(AMI) 临床应用 溯源 -
K562/A02耐药细胞NF-κB活性测定及葛根素部分逆转耐药效应的初步研究
白血病细胞的多药耐药(MDR)的产生是导致化疗失败的主要原因.目前发现MDR的产生机制是多因素的,且有不同的耐药表型.核转录因子Kappa B(NF-κB)在细胞增殖和凋亡中起关键调控作用.为明确NF-κB是否与细胞MDR产生有关及葛根素是否通过抑制NF-κB活性而逆转耐药,我们观察了慢性粒细胞白血病急变细胞株K562及其耐药细胞株K562/A02的NF-κB活性,P糖蛋白(P-gp)、耐药相关蛋白(MRP)表达情况,以及葛根素干预前后NF-κB活性,P-gp、MRP表达的变化,为揭示白血病细胞耐药机制,寻求有效的逆转耐药药物提供实验依据.
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结核性和恶性胸水多指标检测的意义
结核性和恶性胸水鉴别常较困难,治疗和预后也截然不同。我们于1996年4月-1999年10月对64例结核性和恶性胸水患者进行胸水pH值、腺苷脱氨酶(ADA)、癌胚抗原(CEA)及脱落细胞检测,分析如下。1 材料与方法1.1 病例选择 34例结核性胸水患者,男26例,女8例,年龄(54±36)岁,经痰涂片、胸部X线片检查及临床抗结核治疗有效并随访2~3个月胸水明显吸收而确诊。30例恶性胸水患者,男23例,女7例,年龄(71±59)岁,其中鳞癌20例,腺癌8例,胸膜间皮瘤2例,均经纤维支气管镜、胸膜活检、胸部CT检查证实。1.2 检测方法每位患者治疗前均抽胸水进行pH值、ADA、CEA,脱落细胞检测。pH值测定采用pH试纸,ADA活性测定采用比色法,CEA测定采用放免法,胸水离心沉淀作Giemsa染色进行脱落细胞检查。
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先天性凝血因子Ⅶ缺乏2例
例1,女,24岁.自幼常有自发性鼻出血,月经持续时间长,量多.近来频繁出血导致贫血而就诊.查体:发育正常,营养中等,神清合作,皮肤黏膜苍白,巩膜无黄染,浅表淋巴结无肿大,心肺正常,肝脾未触及,四肢无畸形.其祖父和外祖母系姑表兄妹,均无出血史.血常规:红细胞2.15×1012/L,血红蛋白70 g/L,白细胞6.3×109/L ,血小板170×109/L,凝血时间9分钟.活化部分凝血活酶时间31.8秒(正常对照31秒),凝血酶原消耗时间59秒(正常对照26秒),凝血酶原时间40秒(正常对照12秒),凝血酶原延长纠正试验:患者血浆加正常血浆为14秒,患者血浆加正常血清为16秒,患者血浆加正常吸附血浆为32秒.蝰蛇毒磷脂时间11秒(正常对照13秒),蝰蛇毒稀释时间13秒(正常对照13秒),蝰蛇毒复钙时间13秒(正常对照13秒).纤维蛋白原3.24 g/L.血小板聚集功能:二磷酸腺苷诱导的血小板聚集率为58.1%.因子Ⅶ活性测定12%.肝功能检查正常.
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049 根据痰液颜色判断气道中性粒细胞和炎症水平
就慢性支气管炎和支气管扩张患者痰液颜色与中性粒细胞炎症反应物,包括形成痰液绿色的绿过氧化特酶(MAO)水平的相关性进行了研究.方法经高分辨CT确诊的扭曲状或柱状支气管扩张患者14例,因吸烟引起慢性咳嗽、咳痰但不伴有支气管扩张的患者7例.2个月研究期内病情稳定.采取静脉血样每月1次,共4次,留取采血当天晨间4小时和第2~4次采血日前24小时痰液.痰液颜色根据标准色卡分为9级,0级为水样透明,8极为深绿色.MAO活性测定采用发光底物法.白细胞弹力酶的提纯和确定采用SDS丙烯酰胺琼酯泳和免疫印迹法.并测定痰液、组织蛋白酶、白介素8(IL-8)、白三烯B4(LTB4)、α1抗胰蛋白酶和分泌型蛋白酶抑制剂(SLPI)等.
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GST融合蛋白活性测定条件的优化
谷胱甘肽硫转移酶(GST,EC2.5.1.18)是一种广泛分布于动植物和微生物体内,具有多种生理功能的同工酶家族.在医学研究中,由于它是生物体内重要的解毒酶系,其在体内活性的高低与代谢环境致癌物和化疗药物能力之间的关系受到人们的关注[1].在基因工程研究中,GST的基因已被克隆和表达,GST可被作为一种融合表达蛋白来提高重组蛋白的可溶性表达,与GST融合的重组蛋白很容易利用GST标签,通过亲和层析进行纯化,所以各种带有GST标签的重组蛋白被大量表达.
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纳豆激酶研究进展
纳豆激酶(nattokinase)是一种在纳豆发酵过程中由纳豆菌(baciuus natto)或纳豆枯草杆菌(bacillus subtilis natto)产生的丝氨酸蛋白酶,它可分泌到细胞外.纳豆激酶具有很强的纤溶活性,不但能直接作用于纤溶蛋白,而且还能激活体内纤溶酶原,从而增加内源性纤溶酶的量与作用[1].人体内的血栓引发脉管栓塞、脑血栓中风、急性心肌梗死等严重的心血管疾病,尤其对中老年人的身体健康造成很大的危害,目前全世界血栓患者达1 500万,潜在的溶栓剂市场达20亿美元.但溶栓制剂,如尿激酶、链激酶、重组组织型纤溶酶原激活剂等存在半衰期短、副作用大、价格昂贵等缺点,难以成为适用的大众药品.而纳豆激酶具有安全性好,作用迅速,成本低,可由细菌发酵生产等优点,可用于开发新一代溶栓剂或保健食品[2],具有极为广阔的前景.本文对其研究进展综述如下.
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哮喘患儿细胞因子测定及临床意义
本文通过对血清可溶性白细胞介素a受体(SIL-2R)与肿瘤坏死细胞因子(TNF-a)的活性测定,来探讨在支气管哮喘患儿中的作用.现将结果报告如下.
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习惯性流产患者血清抑制补体活性的研究
目的研究习惯性流产患者血清抑制补体活性的作用及意义.方法将经典补体溶血实验进行改进,在原有反应体系中加入习惯性流产患者血清,测定并计算血清抑制补体活性的百分抑制率(Inhibition %),以反映该血清抑制补体科学研究性的程度.结果有习惯性流产史的非妊娠妇女血清抗补体百分抑制率Inhibition %[(9.7±2.9)%]低于正常对照经产非妊娠妇女[(13±3)%],两者统计学差异有显著性(P<0.001).结论习惯性流产患者抗补体作用较弱,可能是导致习惯性流产的免疫学病因之一,并提出可否采用脐血输注治疗习惯性流产的设想.
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尿海藻糖酶活性催化光度法测定
海藻糖酶(Trehalase,T,EC3.2.1.28)是许多动物体内存在的一种胞外酶.人海藻糖酶仅产生于肾小管和小肠粘膜上皮细胞.由于尿海藻糖酶只特异性来源于损伤的近端肾小管上皮细胞,并且海藻糖酶在尿液中生理活性稳定,因此,尿海藻糖酶可作为一种较理想的反映近端肾小管损伤的标志物,其活性测定对于重金属盐中毒与药物的肾毒性、急慢性肾小球疾病以及肾小管-间质疾病等的诊断和病情监测具有重要应用价值[1-5].
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铅接触者尿γ-GT活性测定分析
铅可对人体的多个系统产生毒作用.许多研究表明:大剂量短期、低剂量长期接触铅均可以对肾脏造成损伤[1].尿酶的变化与肾损伤的关系一直受到人们的关注.有报道铅对肾脏造成的损害能引起尿γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性升高[2,3];但也有报道铅接触者尿γ-GT活性下降[4].为进一步探讨铅接触者尿γ-GT活性变化及其意义,对某蓄电池厂67名铅接触者进行血铅及尿γ-GT活性测定.现报告如下.
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细胞色素P450 2E1活性的测定方法
细胞色素P450(cytochrome P450)是主要的肝细胞Ⅰ相代谢酶之一,其亚家族细胞色素P450 2E1(CYP2E1)在外来化学物的代谢活化中起重要作用,CYP2E1活性的高低与毒物对机体的终毒性大小直接相关.多年来,体内CYP2E1活性的测定一直是国内外学者颇感棘手的问题.本文从体外、体内以及淋巴细胞中CYP2E1活性的测定等几方面对该问题进行综述.
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检验医学中测量不确定度评定的统计学剖析
测量不确定度是对测量结果可能误差的度量,定量地表示了测量结果的质量.近年来,随着检验医学的发展,ISO15189《医学实验室质量和能力的专用要求》中明确指出“必要且可能时,实验室应给出检验结果的不确定度[1]”,然而常规检测结果的不确定度很难表示,其评定已成为许多实验室医务工作者的一大难题.为此,本研究从统计学角度出发,剖析检验医学中测量不确定度评定步骤、不同统计学模型的测量不确定度计算公式及应用注意点,并通过血清样本乳酸脱氢酶(LDH)活性测定的具体实例加以应用.
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微量血清杀菌活性测定的临床应用
临床在抗菌素应用中,影响血药浓度存在一定的个体差异.应用血清杀菌活性测定 (SBA) 可确切地判断抗生素体内药效,因此,在抗生素应用时以 SBA 作为疗效监测手段,可提高临床疗效,减少副作用,为临床制定合理用药方案提供理论依据.笔者应用自行设计的微量 SBA 对28例应用抗生素的病人进行疗效监测,测定结果与临床疗效密切相关.现将材料与方法作一介绍.
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血清GPDA活性测定在胃癌诊断及治疗中的应用
甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(Glycy-Proline DipepidylAminpeptidase,GPDA)是HOPSU等人在鼠的肝肾中发现.胃癌患者血清中GPDA活性明显降低.本次实验测定胃癌术前、术后及正常人血清GPDA活性,进行比较,探讨血清GPDA活性测定在胃癌诊断、鉴别诊断及疗效观察中的使用价值.