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炙甘草汤含药血清对兔心肌细胞动作电位的影响
目的:用血清药理学的方法研究炙甘草汤含药血清对兔心肌细胞动作电位的影响.方法:进行单个心室肌细胞的分离和膜片钳全细胞记录,实验分为对照组、空白血清组及5%、10%、20%、40%含药血清组,分别以普通细胞外液及加入上述浓度血清的细胞外液进行灌流,检测各组对动作电位的影响.结果:空白血清组对动作电位各参数均无明显影响(P＞0.05);含药血清各组对APA均无明显影响,但可延长APD,5%、10%、20%、40%含药血清分别将APD50从198.8±35.9ms延长至352.7±39.2ms、430.1±28.8ms、521.2±35.3ms、539.3±26.8ms,将APD90从340.1±32.9ms延长至447.1±26.8ms、526.0±39.4ms、595.7±53.3ms、624.3±54.0ms.结论:炙甘草汤含药血清可延长APD,且呈浓度依赖性作用增强,这可能就是炙甘草汤抗心律失常作用的机理之一.
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小红参含药血清对链球菌抗原刺激小鼠的免疫药理学研究
目的利用血清药理学实验方法,评价小红参含药血清对链球菌抗原刺激小鼠的免疫药理学效应,初步探讨小红参治疗银屑病的作用机制.方法利用β溶血型链球菌的超声破碎抗原为刺激物,观察小红参含药血清对链球菌致敏小鼠脾脏淋巴细胞的增殖活性,以及对小鼠腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮(NO)的影响.结果醇提物各剂量组以及水提物高剂量组与空白血清组比较有显著性差异,均对链球菌抗原致敏小鼠的T淋巴细胞增殖具有抑制作用.醇提物高、中剂量组以及水提物高剂量组与空白血清组比较有显著性差异,均能抑制链球菌抗原致敏小鼠的腹腔巨噬细胞N0的分泌水平.结论小红参含药血清能够明显抑制T淋巴细胞对链球菌抗原的增殖作用;小红参含药血清可以抑制链球菌抗原诱导的小鼠腹腔巨噬细胞N0的分泌.
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补肾冲剂体外抗乙型肝炎病毒作用研究
目的:研究中药复方补肾冲剂体外抗HBV活性.方法:采用血清药理学方法,在HBV的体外细胞培养系统中(2.2.1 5细胞)进行补肾冲剂抗HBV作用观察,含药鸭血清中的细胞培养上清中HBsAg/HBeAg检测采用ELISA法,MTT法测定细胞存活率,并计算ID50、CD50和TI.结果:补肾冲剂在佳鸭血清添加量(40μL)的浓度下,当鸭血清添加量分别为20%、40%、60%、80%时对HBsAg分泌的抑制率分别是19%、40%、68%、89%,治疗指数为2.31,对HBeAg分泌的抑制率分别是17%、28%、48%、70%,治疗指数为2.45.结论:补肾冲剂可能有一定的体外抗HBV活性.
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升降散散剂抗流感病毒作用的实验研究
目的观察升降散散剂的抗流感病毒作用.方法设计了升降散药血清对流感病毒感染鸡胚的作用实验和升降散散剂对流感病毒感染小鼠作用的实验.结果升降散药血清能抑制流感病毒在鸡胚内增殖,升降散散剂能减轻肺病变.结论升降散散剂具有明显抗病毒作用.
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甘肃产华中五味子对成骨细胞成骨能力的影响
目的 探讨甘肃产华中五味子对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响.方法 采用血清药理学方法 ,对体外培养的大鼠成骨细胞以MTT法进行细胞增殖测定、以PNPP法测定碱性磷酸酶(ALP)活性、以茜素红染色进行矿化结节计数.结果 培养48 h的10%、15%和培养72 h的5%、10%华中五味子75%醇提取物血清组的细胞增殖速度较对照组快(P<0.05或P<0.01):培养48 h的10%、15%和培养72 h的10%华中五味子75%醇提取物血清组的ALP活性较对照组增加(P<0.05);培养2周的矿化结节计数显示,10%华中五味子75%醇提取物血清组多于对照组(P<0.01).结论 甘肃产华中五味子75%醇提取物对体外大鼠成骨细胞的增殖和分化具有促进作用.
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愈银方含药血清对角质形成细胞增殖与凋亡的影响
目的:探讨愈银方对角质形成细胞株C0LO-16增殖及凋亡的调节作用.方法:利用体外细胞培养技术、MTT法、流式细胞仪、荧光显微镜技术检测愈银方的大鼠含药血清对COLO-16细胞株增殖及凋亡的影响.结果:愈银方含药血清对C0L0-16细胞株增殖的抑制作用与浓度呈一定的关系,浓度越高则抑制作用越强.含药血清的浓度为10%、20%;设相应的正常大鼠血清浓度为对照组,培养48h后,C0L0-16细胞的凋亡率分别为12.93%、19.80%,正常对照组为3.71%、10.96%,两者相比差异显著.结论:抑制C0L0-16细胞株的增殖及诱导其凋亡可能是愈银方治疗银屑病的机理之一.
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方剂组织代谢药理学新假说
方剂药效学是方剂研究的核心之一,但其作用的确切成分不清、途径不明、靶点不定.目前,人们主要以血清药理学进行体外研究,虽取得一定的进展,但没有深入到病变靶组织.现代医学认为,药物的靶组织浓度与疗效密切相关.方剂中有效成分经过吸收进人血液后到达病变靶组织并发挥作用;因此,用组织代谢药理学的方法寻找方剂有效成分在体内的作用靶点,以阐明中药方剂的药效物质基础及其作用途径;结合中医学整体观,用整体分析方法研究方剂作用靶点,并提出方剂组织代谢药理学的新假说,以促进方剂药效物质基础和作用途径的研究.
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关于中药血清药理学方法的思考
中药血清药理学概念初由日本学者田代真一于1984年正式提出[1],作为一种新兴的实验技术和研究方法,其理论体系还有待完善.笔者对此提出一些个人观点.
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降酶合剂对内毒素刺激大鼠肝脏枯否细胞分泌IL-6、IL-8和TNF-α的影响
目的:研究中药复方降酶合剂对内毒素(LPS)刺激肝枯否细胞(KC)分泌细胞因子白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)是否具有调节作用.方法:利用血清药理学方法制备SD大鼠降酶合剂和联苯双酯的含药血清,分别以LPS和含药血清刺激SD大鼠KC,4h后吸取培养上清,采用ELISA夹心法检测其中细胞因子IL-6、IL-8和TNF-α水平.结果:培养细胞在加入LPS刺激后,上清中IL-6、IL-8和TNF-α浓度明显高于对照组(P＜0.01).而在加入降酶合剂后,上清中的IL-6、IL-8和TNF-α水平与未加降酶合剂者比较有明显下降(P＜0.01).结论:降酶合剂对慢性肝病患者降低ALT的作用可能与其通过对机体免疫机制的调节,降低IL-6、IL-8和TNF-α等细胞因子的产生有着密切的关系.
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黄连解毒汤抗肿瘤作用的实验研究
目的:研究黄连解毒汤的抗肿瘤作用.方法:采用H22小鼠肝癌实体瘤移植性肿瘤模型进行体内实验,通过检测抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数等指标观察黄连解毒汤的体内抑瘤作用及对免疫器官的影响.并运用血清药理学方法研究了对人结肠癌Swille,人肺腺癌SPC-A-1,人胃癌SGC-7901,人乳腺癌细胞MCF-7体外生长的抑制作用.结果:对荷瘤小鼠肝癌H22在体内有抗肿瘤活性,抑瘤率大、中、小剂量组分别为45.45%(P＜0.001),28.73%(P＜0.05),17.78%.含药血清在体外用MTr法测试结果显示,对4种人瘤株,大、中剂量组抑瘤作用均呈现极显著差异(P＜0.001).结论:黄连解毒汤对H22小鼠肝癌实体瘤有一定的体内抗肿瘤活性,并具剂量依赖性;其含药血清体外对4种人的肿瘤细胞也有一定抑制作用.
关键词： 黄连解毒汤 H22小鼠肝癌实体瘤 血清药理学 抗肿瘤作用 -
三七对高脂血清刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用
目的:考察三七对高脂血清刺激的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的影响,为评价三七的降血脂作用及其机制研究提供依据.方法:大鼠高脂血症模型给予不同剂量三七处理,2周后分离血清,分别以未处理组血清、各处理组血清刺激VSMC增殖,并采用MTT的测定A值,研究三七对高脂血清刺激的大鼠VSMC增殖的抑制作用.结果:与正常血清相比,高脂血清能显著促进VSMC的增殖(P＜0.05),而含三七的高脂血清对VSMC增殖的促进作用与高脂血清相比其作用明显减弱(P＜0.05).结论:三七对高脂血清刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用,该法可为降脂药物体外研究提供借鉴.
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复方斑蝥胶囊血清诱导人肝癌SMMC-7721细胞蛋白质组差异表达分析
目的:考察复方斑蝥胶囊血清对SMMC-7721细胞蛋白质组的影响,从分子水平探讨复方斑蝥胶囊的抗癌作用机制.方法:用血清药理学方法制备复方斑蝥胶囊血清并处理人肝癌SMMC-7721细胞,用双向电泳、图像分析、质谱鉴定等蛋白质组学技术测定复方斑蝥胶囊对癌细胞中有影响的蛋白质.结果:双向电泳分离到SMMC-7721细胞蛋白质组约450个点,其中47个点在对照组和实验组之间有2倍以上量变,质谱鉴定发现实验组出现膜联蛋白A5、热休克70×103蛋白表达显著上调,真核翻译起始因子5A和硫氧还蛋白过氧化酶2表达显著下调.结论:研究发现了4种与肿瘤的增殖、免疫、凋亡相关的差异表达蛋白质,为进一步研究复方斑蝥胶囊的作用机制提供了线索.血清药理学与蛋白质组学相结合能够有效地展示与药物作用相关的蛋白质,可以作为研究复方药理的一个初步技术平台.
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基于中药血清化学及血清药理学方法探讨香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤物质基础
目的:利用中药血清化学及血清药理学方法探讨香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤的物质基础.方法:测定和比较香青兰提取物及其灌胃给药前后大鼠空白血清和含药血清的HPLC,寻找香青兰入血成分；体外培养乳大鼠原代心肌细胞及H9c2细胞,用Na2S2O4或N2为缺氧剂建立缺氧/复氧损伤模型,以细胞活力、LDH释放量、T-SOD活力、MDA产量及细胞凋亡为指标,考察香青兰提取物及其含药血清、香青兰提取物不同给药剂量及不同给药时间段所采血清的处理物对细胞损伤的影响.结果:香青兰在血清中出现4个移行成分,其中3个为原型成分,1个可能为代谢产物；与模型组或空白血清组相比,香青兰提取物、含药血清及不同因素影响下的血清处理物显著降低缺氧/复氧心肌细胞LDH释放量和MDA产量(P＜0.05,P＜0.01),显著升高T-SOD及细胞活力(P＜0.05,P＜0.01),明显抑制细胞凋亡.结论:香青兰提取物4个入血成分可能为香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤的物质基础.
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疏肝健脾方药含药血清对LPS刺激下大鼠肝细胞炎症损伤及TLR4/p38MAPK信号通路影响的研究
目的:研究疏肝健脾方药含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下大鼠肝细胞炎症反应及TLR4(Toll样受体-4)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)信号通路的影响.方法:体外培养并鉴定SD大鼠肝细胞,制备疏肝健脾方药含药血清,对肝细胞进行疏肝健脾方药、p38MAPK抑制剂等药物干预,酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的表达,Western blot检测TLR4,p38MAPK,p-p38MAPK蛋白的表达.结果:可提取大鼠疏肝健脾方药含药或空白血清约2～3 mL,大鼠获得纯化后肝细胞1.5×108～2.0×108个,Typan blue染色测定细胞活力均在95％以上,免疫荧光法鉴定确定提取的为肝细胞.肝细胞培养上清的检测:LPS组较空白血清组IL-6,TNF-α水平均有显著升高(P＜0.01).与LPS组比较,药物干预组IL-6,TNF-α表达水平呈显著降低(P＜0.01).肝细胞的蛋白检测:与空白血清组比较,LPS组的p38MAPK,p-p38MAPK,TLR4蛋白表达均有显著升高(P＜0.01);与LPS组比较,SB239063能显著下调p38 MAPK的蛋白表达水平(P＜0.01),疏肝健脾组亦有下调,但无显著差异;疏肝健脾组,SB239063组的p-p38MAPK的蛋白表达水平均下调显著(P＜0.01);TLR4蛋白表达水平以疏肝健脾组下调具有显著性差异(P＜0.01),SB239063组下调无显著统计学差异.结论:疏肝健脾方药可能通过TLR4/p38MAPK信号通路调控大鼠肝细胞炎症损伤,含药血清可能是其重要的作用途径之一.
关键词： 疏肝健脾方药 肝细胞 炎症损伤 TLR4/p38MAPK信号通路 血清药理学 -
血清药物化学和血清药理学相结合的方法探讨麻黄附子细辛汤抗炎和免疫抑制的物质基础
利用中药血清药物化学及血清药理学相结合的方法探讨麻黄附子细辛汤抗炎和免疫抑制的物质基础.通过比较麻黄附子细辛汤、给药后含药血清和空白血清的LC-MS/MS图谱,寻找麻黄附子细辛汤的入血成分;ELISA法测定各时间点含药血清对抗原刺激RBL-2H3细胞释放组胺、氨基己糖苷酶的影响;MTT法测定各时间点含药血清对脂多糖诱导小鼠脾细胞增殖的影响;采用逐步回归的方法对麻黄附子细辛汤的各成分与药理指标进行相关性分析.结果显示,灌胃给予麻黄附子细辛汤后,从大鼠血清中发现32个成分,其中27个原型成分(10个来自麻黄,13个来自附子,4个来自细辛),其他5个未知成分.与空白血清相比,麻黄附子细辛汤各时间点含药血清均能降低抗原诱导RBL-2H3细胞释放组胺(P＜0.05);除麻黄附子细辛汤4h含药血清外,其余各时间点含药血清均能抑制抗原诱导的RBL-2H3细胞脱颗粒(P＜0.05);麻黄附子细辛汤15,30 min含药血清能显著抑制脂多糖诱导的小鼠脾细胞增殖(P＜0.05).血中移行成分的化学数据和药理指标组胺释放量、β-氨基已糖苷酶释放率以及脾细胞增殖抑制率进行回归分析,推测甲基伪麻黄碱、伪麻黄碱与抗原诱导RBL-2H3肥大细胞释放组胺密切相关;伪麻黄碱、次乌头原碱、甲基伪麻黄碱与抗原诱导RBL-2H3细胞释放β-氨基己糖苷酶密切相关;苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、14-苯甲酰-10-羟基-中乌头原碱、新乌头原碱与脂多糖诱导小鼠脾细胞增殖抑制密切相关.由此可见,甲基伪麻黄碱、伪麻黄碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、新乌头原碱等成分可能为麻黄附子细辛汤抗炎和免疫抑制的部分物质基础.
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固肾安胎中药对小鼠早期胚胎体外发育的影响
固肾安胎中药在助孕保胎方面有着良好的临床疗效,其中尤以寿胎丸为经典名方.本研究旨在通过采用血清药理学及胚胎体外培养的实验方法,动态观察配有各种含药血清的培养基中早期胚胎各期(2CE至囊胚)的发育率,研究单味固肾安胎中药及寿胎丸对早期胚胎发育的作用,以探讨固肾安胎中药对早期胚胎发育的影响及作用机制.
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血清药理学与药代动力学整合模型的复方鳖甲软肝片日服用次数合理性研究
该课题通过体外观察大鼠含药血清对肝星状细胞(HSC-T6)增殖的影响,结合复方鳖甲软肝片中芍药苷的药物代谢动力学模型,研究复方鳖甲软肝片合理的日服用次数.大鼠每日不同次数灌胃给药,分别于给药前及第1次给药后各时间点眼眶后静脉取血,用于测定大鼠含药血清对HSC-T6增殖的影响以及大鼠血浆中芍药苷的血药浓度.综合分析时量和时效关系,制定复方鳖甲软肝片用于慢性肝炎肝纤维化的合理的日服用次数.结果表明,复方鳖甲软肝片含药血清对HSC-T6抑制的效应与芍药苷血药浓度具有良好的相关性,每日给药2次组对HSC-T6抑制的效应动力学曲线下面积(AUC)及药代动力学AUC均高于每日给药1次组和3次组.因此,复方鳖甲软肝片用于慢性肝炎肝纤维化以每日服用2次为佳.
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ASO血瘀证血清对血管内皮细胞损伤的影响及桃红四物汤的调节作用
目的 探讨动脉硬化闭塞症(arteriosclerosis obliterans,ASO)血瘀证血清对血管内皮细胞损伤的影响及桃红四物汤的调节作用.方法 建立脐静脉内皮细胞培养体系,制成ASO血瘀证血清内皮细胞损伤模型,分别加入桃红四物汤低、中、高浓度大鼠含药血清,MTT法观察内皮细胞增殖活性,透射电镜观察内皮细胞超微结构,激光共聚焦显微镜观察细胞内钙离子浓度和细胞骨架的变化,酶联免疫吸附(ELISA)观察各组内皮细胞培养液上清中内皮素(ET)、一氧化氮(NO)和转化生长因子β1 (transforming growth factor β1,TGF-β1)的含量.结果 ASO血瘀证血清组内皮细胞增殖活性下降,细胞结构破坏明显,钙离子浓度升高,培养液中ET、NO及TGF-β1含量明显升高(P＜0.01),ET/NO比例失衡.与桃红四物汤含药血清共孵育后,内皮细胞增殖活性和细胞结构的损伤明显改善,ET、NO及TGF-β1水平下降(P ＜0.05,P＜0.01),ET/NO比例趋于正常.结论 桃红四物汤治疗血瘀证ASO的主要机制为改善血管内皮细胞的损伤和分泌功能失调.
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消瘤平移合剂含药血清诱导肝癌H-7402细胞凋亡的实验研究
目的：观察消瘤平移合剂含药血清对肝癌H-7402细胞凋亡的诱导作用。方法：运用血清药理学方法，选择不同浓度的含药血清与人肝癌H-7402细胞共同孵育，于不同时间观察，并与空白血清作对照。结果：消瘤平移合剂含药血清可显著抑制H-7402细胞的增长；H-7402细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变，流式细胞仪检测可见亚G1峰，凋亡呈含药血清浓度、时间依赖性特点，对照组及5%、10%含药血清作用24h，其凋亡率分别为0.49%、5.58%、8.46%，48h凋亡率分别为0.83%、11.58%、14.25%；bcl-2基因检测显示bcl-2基因表达受抑。结论：消瘤平移合剂可通过诱导肿瘤细胞凋亡，发挥其临床抗肿瘤、抗转移的作用。
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活血潜阳胶囊对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响
目的:观察活血潜阳胶囊对血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响.方法:贴块法行SD大鼠胸主动脉VSMC分离培养.倒置相差显微镜、透射电镜、α-SM-actin鉴定.以血清药理学方法进行实验,采用通法采集药物血清,10-6mol/L ATⅡ为刺激因子,卡托普利(Captopril)为对照,活血潜阳胶囊药物血清分为10%、7.5%、5%、2.5%共4个浓度.采用结晶紫染色法观察细胞生长曲线,测定氚标-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入量了解DNA合成的变化,并用透射电镜观察细胞超微结构的改变.结果:(1)经活血潜阳胶囊处理后,细胞增殖速度明显下降,生长曲线下移,3H-TdR掺入量减少,DNA合成明显受到抑制,其作用与Captopril相当,且在一定范围内有剂量依赖性.(2)活血潜阳胶囊可以改善ATⅡ引起的细胞超微结构改变,使VSMC仍保持收缩型的特征,与Captopril的作用相似.结论:活血潜阳胶囊能抑制ATⅡ引起的VSMC增生和结构改变,从细胞水平初步探讨了活血潜阳胶囊改善高血压血管重构的机理.
