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重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白的DDNA残留量检测
目的:重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhTrail)是一种治疗肿瘤的蛋白药物.其质量控制中,参照2005年<中华人民共和国药典>第三部规定,单支剂量的外源性DNA含量不应超过10ng.通过纯化,我们得到重组大肠杆菌表达的rhTrail蛋白,对其进行了DNA残留检测.方法:参照固相斑点杂交和地高辛核酸探针法,利用DNA地高辛标记和检测试剂盒,制备了地高辛标记宿主DNA探针,对三个rhTrail样品进行DNA残留检测.结果:杂交膜上,宿主DNA带显色,颜色按DNA上样量高低由深至浅,呈梯度差异,三个rhTrail蛋白样品的上样带颜色均较参比的宿主DNA100pg上样带颜色浅.结论:通过换算,三个样品单支剂量的DNA残留均低于10ng,符合DNAA残留要求.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 DNA残留 地高辛 固相斑点杂交法 -
宫颈病变组织中MEKK3和TRAIL表达的研究
目的 研究有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶(MEKK3)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)在宫颈病变组织中的表达及其相关性,分析其表达与宫颈癌临床病理特征及预后的关系.方法 利用组织芯片技术构建宫颈病变芯片,应用免疫组化En Vision法检测107例宫颈癌、86例宫颈上皮内瘤变(CIN)及35例慢性宫颈炎组织中MEKK3和TRAIL表达水平,同时随访3年以上宫颈癌患者44例,进行生存分析.结果 MEKK3在慢性宫颈炎、宫颈CIN和宫颈癌组织中阳性表达率逐渐升高(P＜0.05)；宫颈癌组织中TRAIL阳性表达率明显低于宫颈CIN和慢性宫颈炎组织(P＜0.05)；MEKK3阳性表达率在宫颈癌FIGO分期、浸润深度及淋巴结是否转移阳性率分别递增(均P＜0.05),而与患者年龄、组织学类型及分级无关(均P＞0.05)；TRAIL阳性表达率与宫颈癌组织学分级有关(P＜0.05),而与患者年龄、组织学类型、FIGO分期、浸润深度及淋巴结是否转移无关(均P＞0.05)；MEKK3和TRAIL表达呈负相关(P＜0.05); Log-rank分析结果提示MEKK3表达与生存有关(P＜0.05),而TRAIL表达与生存无关(P＞0.05).结论 MEKK3和TRAIL异常表达共同参与宫颈癌的发生发展过程,其阳性表达可作为宫颈癌早期诊断及评估生物学行为的分子标志物,MEKK3过表达预示宫颈癌患者不良预后.
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TRAIL对CIA小鼠脾细胞表达Th1/Th2细胞因子的影响
目的 观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( TRAIL)对胶原诱导型关节炎(CIA)小鼠的治疗效果,探讨TRAIL治疗类风湿性关节炎(RA)的可能机制.方法 牛Ⅱ型胶原蛋白加弗氏完全佐剂免疫DBA/1J小鼠建立CIA模型,采用重组腺相关病毒AAV-TRAIL关节腔内注射进行治疗.CBA和流式细胞术检测Th1/Th2细胞因子的分泌.结果 AAV-TRAIL可改善CIA小鼠的病情,减轻关节红肿.体外研究其机制发现Ⅱ型胶原可以增加Th1型细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2和Th2型细胞因子IL-4、IL-5的分泌,其中Th1型细胞因子的增加更为明显.而TRAIL则可显著抑制Ⅱ型胶原引起的Th1型细胞因子的上调,而对Th2型细胞因子的分泌没有影响.结论 TRAIL对CIA小鼠的治疗作用可能和TRAIL抑制Th1型细胞因子分泌相关.
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大鼠骨髓间充质干细胞旁分泌HGF上调肝星状细胞DR5及caspase-8的表达
目的 观察大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)旁分泌肝细胞生长因子(HGF)对肝星状细胞(HSCs)死亡受体-5(DR5)及caspase-8的影响.方法 应用6孔培养板建立双层细胞共培养体系,分A组:对照组；B组:共培养组；C组:TNF-α预处理组；D组:HGF-ShRNA干扰组.ELISA法检测上清液中HGF及TRAIL的浓度；Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡；荧光定量-PCR、Western blot分别检测DR5、caspase-8 mRNA和蛋白的表达.结果 1)TNF-α预处理组中HGF的浓度明显高于BMSCs组及对照组(P＜0.01)；BMSCs组中TRAIL的浓度明显高于其他3组(P＜0.01).2)TNF-α预处理组中HSCs凋亡率明显高于其他3组且呈时间依赖性(P＜0.01)；HGF-ShRNA干扰组中HSCs的凋亡率低于共培养组,高于对照组(P＜0.01).3)共培养组及TNF-α预处理组DR5、caspase-8 mRNA及蛋白表达量明显高于对照组及HGF-ShRNA干扰组(P＜0.01).结论 BMSCs旁分泌HGF能上调DR5及caspase-8的表达促进HSCs的凋亡.
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高血糖对小鼠卵母细胞Ca2+振荡和卵泡颗粒细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体表达的影响
目的 探讨高血糖对小鼠卵母细胞Ca2+振荡和卵泡颗粒细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达的影响.方法 出生后20d ICR雌鼠,用链脲酶素建立急性高血糖模型;高血糖模型雌鼠及正常雌鼠注射10IU/只孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)超排卵,注射hCG后0h、2h、6h和10h取生发泡(GV)期卵母细胞,双光子激光扫描共焦显微镜检测GV期卵母细胞的Ca2+振荡;hCG注射后6h、10h取卵丘-卵母细胞复合体(COC),利用免疫荧光、Western blotting检测TRAIL的表达.结果 1.高血糖组卵母细胞Ca2+振荡频率高于正常对照组,于hCG注射后2h、6h差异显著(P<0.05);2.免疫荧光、Western blotting蛋白半定量检测显示,高血糖组颗粒细胞TRAIL表达量高于正常对照组,于hCG注射后6h、10h差异有显著性(P<0.05).结论 高血糖加快小鼠未成熟卵母细胞Ca2+振荡的频率;高血糖促进小鼠卵泡颗粒细胞TRAIL的表达.
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甲状腺癌中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体的表达
目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体(TRAILR)在甲状腺癌中的表达及意义. 方法采用免疫组织化学方法,检测5例正常甲状腺、13例乳头状甲状腺癌、3例滤泡状甲状腺癌和12例甲状腺癌旁组织中TRAIL和TRAILR的表达和分布. 结果乳头状、滤泡状甲状腺癌组织和正常甲状腺组织中的甲状腺滤泡细胞均表达TRAIL和全部的TRAILR,其中诱捕受体TRAILR4在正常甲状腺组织和甲状腺癌旁组织表达较弱. 结论甲状腺癌组织中的甲状腺滤泡细胞表达TRAIL和全部的TRAILR,提示癌变的甲状腺滤泡细胞通过自身表达TRAIL,以自分泌或旁分泌的形式和其死亡受体TRAILR1、TRAILR2结合,诱导癌变的甲状腺滤泡细胞发生凋亡,诱捕受体TRAILR3、TRAILR4的存在也不能影响其对TRAIL诱导的细胞凋亡的敏感性.
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蛇床子素对TRAIL诱导白血病HL-60细胞凋亡的作用及其相关机制研究
目的:探讨蛇床子素(Osthole)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导白血病HL-60细胞凋亡的影响及其可能机制.方法:采用MTT法检测不同浓度Osthole和TRAIL单独及联合应用对HL-60细胞增殖的影响.选择低于半数抑制浓度(IC50)的100μmol/L的Osthole和40 ng/ml TRAIL单独或联合处理细胞,通过流式细胞术测定HL-60细胞凋亡和细胞线粒体膜电位(MMP)的变化,RT-PCR法检测BCL-2、BAX和DR5 mRNA的表达,用分光光度法检测Caspase-3、-8、-9活性变化.结果:100 μmol/L Osthole和40 ng/ml TRAIL联合处理HL-60细胞48 h,HⅡ-60细胞的凋亡率达(33.9±2.7)％,较单用Osthole、TRAIL均显著提高(P＜0.05),同时2者联合应用能增强降低MMP和BCL-2/BAX表达比值的效果,提高DR5的表达和Caspase-3、-8、-9活性.结论:Osthole能增强TRAIL诱导HL-60细胞凋亡的敏感性,其机制可能与其激活线粒体凋亡途径和上调DR5的表达密切相关.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 HL-60细胞 细胞凋亡 蛇床子素 -
2-DG增强TRAIL诱导白血病细胞HL-60凋亡的作用
本研究旨在探讨2-脱氧葡萄糖(2-DG)增强HL-60细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)敏感性的作用及其可能机制.采用MTT法检测不同浓度2-DG、TRAIL对HL-60细胞增殖的影响.选择低于半数抑制浓度(IC50)的10 mmol/L的2-DG和100 ng/ml的TRAIL单独或联合处理细胞,用PI单染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测RIP1、GRP78、PARP蛋白的表达,试剂盒检测caspase-3的活性变化.结果表明,2-DG(10mmol/L)与TRAIL(100 ng/ml)联合作用于HL-60细胞48 h的凋亡率为(45.1±4.3)％,较单用2-DG、TRAIL的凋亡率明显提高(P＜0.01),同时二者联合应用能增强GRP78蛋白的表达及caspase-3的活性,下调RIP1蛋白的表达.结论:2-DG能增强TRAIL诱导HL-60细胞的凋亡的敏感性,其机制可能是通过引起过度的内质网应激反应、下调RIP1蛋白的表达以及增加caspase-3的活性.
关键词： 白血病 2-脱氧葡萄糖 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 细胞凋亡 -
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达及意义
为了检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达,并探讨其在白血病治疗中的意义,采用RT-PCR方法及流式细胞术,对39例急性髓系白血病细胞(患者组)、18例完全缓解白血病细胞(缓解组)和21例正常人骨髓或外周血单个核细胞(对照组)表面TRAIL及其受体的表达进行检测.结果表明:①患者组和缓解组TRAIL、DR4和DR5表达高,而DcR1和DcR2表达低.②缓解组DR5的表达高于患者组.③患者组和缓解组DR5的表达均高于DR4.④患者组AML不同亚型表达TRAIL及其受体相似.结论:TRAIL及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达具有明显的差异性.DR5在TRAIL介导的急性髓系白血病细胞凋亡中起重要的作用.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 急性髓系白血病 基因表达 -
硼替佐米增加HL-60细胞对TRAIL的敏感性
本研究旨在探讨硼替佐米(bortezomib)是否可以增加HL-60细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的敏感性及其可能的作用机制.选择亚细胞毒浓度的硼替佐米与不同浓度的TRAIL联合处理HL-60细胞,用MTT法检测并绘制增殖抑制曲线,用Annexin V/Pl双染色流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-8的表达.结果表明,亚细胞毒浓度的硼替佐米与10 ng/ml的TRAIL联合作用于HL-60细胞时细胞凋亡率较单独应用TRAIL时增加,相应的caspase-8的表达也随之增加.结论:亚细胞毒浓度的硼替佐米可以增加HL-60细胞对TRAIL的敏感性,其机制可能与促进caspase-8表达有关.
关键词： 硼替佐米 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 白血病 细胞凋亡 -
TNF相关凋亡诱导配体联合阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡及其机制的研究
本研究探讨人重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(hrsTRAIL)单用或联合阿糖胞苷(Ara-C)诱导HL-60细胞凋亡作用及其机制.在体外以人类急性白血病细胞株HL-60为研究对象,分5组进行细胞培养:对照组、Ara-C组、rsTRAIL组、同时给药组(Ara-C+rSTRAIL)、先后给药组(Ara-C→rsllRAIL).采用MTT比色法测定细胞生长抑制率;应用Annexin V/PI染色和流式细胞术检测细胞凋亡率;使用流式细胞术检测不同浓度的Ara-C对细胞表面DR5表达水平的影响及rsTRAIL单药组、先后给药组细胞表面DR5表达水平和细胞内caspase-8活性.结果表明:rsTRAIL能抑制HL-60细胞生长并诱导HL-60细胞凋亡.先后给药组诱导HL-60细胞凋亡率大于同时给药组.先后给药组细胞表面DR5表达水平和细胞内caspase-8的活性高于rsTRAIL组.5 mg/L、10 mg/LAra-C作用于HL-60细胞24小时,其细胞表面DR5表达水平升高,大于对照组.结论:rsTRAIL抑制HL-60细胞生长,诱导HL-60细胞凋亡.Ara-C上调HL-60细胞表面DR5表达水平,增强rsTRAIL诱导HL-60细胞凋亡的作用.Ara-C和rsTRAIL联合用药时,在先加Ara-C、再加rsTRAIL组诱导HL-60细胞凋亡的效果比同时给药组效果好.其机制可能与Ara-C上调细胞表面DIL5表达水平和(或)增强细胞内caspase-8的活性有关.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 HL-60 凋亡 DR5受体 Caspase-8 -
TRAIL对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226黏附和凋亡的影响及其作用机制的初步探讨
本研究探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL对人多发性骨髓瘤细胞系RMPI8226的生长抑制作用,对细胞黏附和凋亡的影响及其作用机制.用MTT法检测TRALL对RPMI8226黏附功能和生长的影响:用An nexin Ⅴ/PI检测细胞凋亡;流式细胞学检测细胞表面黏附分子的表达;RT-PCR法测定凋亡相关基因表达水平和Western blot法检测凋亡相关蛋白表达.结果表明:TRAIL抑制RPMI8226细胞生长;可诱导RPMI8226细胞凋亡,并伴有抗凋亡基因Mcl-1、XIAP、cFLIP、CARP1、CARP2和Bcl-2 mRNA表达水平下降,促凋亡基因Bax mRNA表达水平升高;RPMI8226细胞内的凋亡执行蛋白caspase-3和NF-κB P65(RelA)表达水平随TRAIL浓度的增加而下降.此外,TRAIL明显上调了RPMI8226细胞表面黏附分子CXCR4的表达.结论TRAIL上调人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞表面的黏附分子CXCR4表达水平.TRAIL可诱导人多发性骨髓瘤细胞株RPMl8226凋亡.在一定的浓度范围内,TRAIL对人骨髓瘤细胞株RPMI8226的生长抑制呈时间-剂量依赖性.
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sDR5封闭TRAIL减少内毒素引起小鼠肝细胞凋亡
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)在内毒素诱导小鼠肝细胞凋亡中的作用.方法 内毒素作用于可溶性死亡受体-5(sDR5)封闭TRAIL的小鼠,不同时间检测小鼠血清中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氧酶(LDH)的含量;HE染色及Annexin V、PI双染法流式细胞术检测小鼠肝细胞凋亡;免疫组织化学法及流式细胞术检测小鼠肝细胞和肝细胞膜表面DR5的表达.结果 内毒素可以上调肝细胞DR5的表达.DR5封闭TRAIL可显著抑制内毒素引起的小鼠肝细胞凋亡和改善肝细胞损伤.结论 内毒素引起疾病过程中TRAIL起重要作用.
关键词： 内毒素 脂多糖 可溶性死亡受体5 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 肝细胞凋亡 -
c - FLIP 调节 TRAIL 诱导胃癌细胞凋亡敏感性的研究
目的：探讨凋亡抑制蛋白 c - FLIP 对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导胃癌细胞 SGC7901凋亡的影响。方法采用 RNAi 技术干扰 c - FLIP 的表达，MTT 法测定细胞活力、采用 Hoechst 33258染色及流式细胞仪检测细胞凋亡，定量 PCR 和 Western blot 法检测 c - FLIP，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8（caspase -8）的表达。结果特异性的 RNAi 能够显著抑制 c - FLIP mRNA 和蛋白的表达。单独使用不同浓度 TRAIL 处理 SGC7901细胞24 h 后，发现细胞的存活率有所降低，但没有显著差异。在干扰 c - FLIP 表达的同时用 TRAIL 100 ng/ ml 作用胃癌细胞 SGC7901不同时间（6 h，12 h，24 h），发现作用24 h 后，细胞的存活率为对照组的62.8%，显著降低（ P <0.05），而处理后不同时间的对照组细胞存活率无显著差异（ P >0.05）。凋亡实验显示在二者共同作用 SGC7901细胞24 h 后，能够促进细胞的凋亡。Western blot 结果显示二者共同作用24 h 后，c - FLIP 显著降低、caspase -8及激活型 caspase -8（p -18）的表达均显著升高。结论抑制 c - FLIP 的表达增强了 TRAIL 诱导胃癌细胞 SGC7901的凋亡。
关键词： 胃癌细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 c-FLIP 细胞凋亡 敏感性 -
立体定向血肿引流术治疗少量高血压脑出血的疗效及对血清sIL-2R、TRAIL表达的影响
目的 探讨立体定向血肿引流术治疗少量高血压脑出血的疗效,并分析其对患者血清可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达的影响.方法 回顾性选择2013年7月至2017年2月收治的少量高血压脑出血患者66例为观察组,另选择同期接受体检的45例健康志愿者为正常对照组.比较两组血清sIL-2R、TRAIL表达水平.依据治疗方法的不同将观察组分成手术组(n=33)与非手术组(n=33),比较其治疗前后sIL-2R、TRAIL水平及美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分情况.结果 观察组治疗前血清sIL-2R水平为(102.55±17.18) pg/ml,明显高于对照组血清sIL-2R(45.32±9.83)pg/ml(P＜0.05);观察组治疗前血清TRAIL水平为(3.35±0.86)pg/ml,明显高于对照组血清TRAIL(1.47±0.32) pg/ml(P＜0.05).治疗1个月后,手术组血清sIL-2R、TRAIL水平分别为(52.06±9.84) pg/ml、(1.91±0.28) pg/ml,均显著低于非手术组(P＜0.05).治疗14 d、治疗1个月后,手术组NIHSS评分分别为(8.7±0.6)分、(4.46±0.3)分,均显著低于非手术组(P＜0.05).结论 立体定向血肿引流术可有效降低少量高血压性脑出血患者血清sIL-2R、TRAIL的表达水平,促进患者神经功能恢复,值得临床应用及推广.
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DR5、DcR2在腰椎间盘中的表达及其意义
目的 观察DR5、DcR2在腰椎间盘组织中的表达分布及其意义.方法 采用免疫组化技术检测腰椎间盘突出症60例、正常成人腰椎间盘22个(8例);实时荧光定量RT-PCR技术检测腰椎间盘突出症30例、正常成人椎间盘9个(3例)中DR5和DcR2的表达.结果 免疫组化检测显示,腰椎间盘突出症患者DR5细胞阳性率为41.60%;正常腰椎间盘组细胞阳性率为26.09%,两者间的差异有非常高度显著性意义(P=0.001);DR5mRNA定量分析进一步支持免疫组化结果(P=0.025).DcR2蛋白和mRNA表达两组间的差异无显著性意义.结论 腰椎间盘组织中存在DR5/TRAIL诱导的凋亡途径.
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乙肝肝硬化患者血清sTRAIL水平与Child-Pugh分级的关系
目的:探讨乙肝肝硬化患者血清sTRAIL水平与Child-Pugh分级和肝脏纤维化指标的关系.方法:选取96例乙肝肝硬化患者作为观察组并按Child-Pugh分级,另选36例正常人作为对照组,采用ELISA检测其血清sTRAIL水平,并同时检测肝纤标志物HA、PⅢNP及肝功能.结果:观察组患者sTRAIL水平明显高于正常对照组(P＜0.05),sTRAIL水平随Child-Pugh分级的增高而逐渐升高(P＜0.05),与HA、PⅢNP水平成正相关,r值分别为0.623(P＜0.05),0.314(P＜0.05).结论:观察组患者血清sTRAIL水平与肝硬化严重程度有一定的相关性,与HA、PⅢNP联合检测对评估肝硬化的病情判断及无创诊断有一定意义.
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TRAIL及其受体与HBV相关慢性肝病相关性的研究进展
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis inducing ligand, TRAIL）归属于肿瘤坏死因子超家族，与死亡受体结合后，激活caspase瀑布样级联反应，可诱导肿瘤细胞、转化细胞及病毒感染细胞发生凋亡，而对正常组织及细胞无凋亡诱导作用。TRAIL及其受体通过与HBV、细胞因子等的相互作用，在HBV相关慢性肝病的发病机制中发挥着重要作用。此外，体内TRAIL表达还与慢性乙型病毒性肝炎患者抗病毒治疗存在一定的关联性。本文对TRAIL及其受体与HBV相关慢性肝病的相关性进行综述，为进一步明确两者间的关系提供理论依据。
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 HBV 慢性肝病 -
外周血单个核细胞TRAIL mRNA和血清sTRAIL水平与HBV感染肝损伤的相关性
目的:探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC s)肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)mRNA及血清可溶性TRAIL(sTRAIL)水平与HBV感染肝损伤的关系.方法:采用TaqMan实时荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)检测58例慢性肝炎患者外周血PBMCs中TRAIL mRNA水平,采用夹心酶联免疫吸附法分析其血清sTRAIL水平,同时与血清HBV DNA滴度和肝功能相关指标,进行相关性分析.结果:除轻度慢性乙肝外,其他各型慢性乙型肝炎患者血清sTRAIL水平均显著低于健康对照组(t=2.91,P＜0.05),各型慢性乙肝之间无显著性差异,与白蛋白(ALB)呈显著正相关(r=0.426,P＜0.05),与TBIL、ALT及HBV DNA滴度无相关性.各型慢性乙肝患者PBMCs中TRAIL mRNA水平显著高于健康对照组(t=28.31,P＜0.001),与肝功能指标及血清HBVDNA滴度无相关性.结论:血清sTRAIL水平降低与肝损伤相关,提示单个核细胞膜结合型TRAIL增高与肝损害及乙肝病程迁延不愈有关.
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FADD,Caspase-8的表达缺失在肝细胞癌TRAIL耐受机制中的作用
目的:探讨FADD和Caspase-8表达缺失在肝细胞癌TRAIL耐受机制中的作用.方法:免疫组织化学方法检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中FADD蛋白的表达,原位杂交方法检测H C C中Caspase-8的表达,并结合临床资料进行分析.采用TRAIL联合应用亚毒性剂量的化疗药及细胞因子,观察其对于肝癌细胞株(HepG2、SMMC-7721)的胞毒作用,荧光分光光度计检测Caspase-8活性变化,Western blot检测FADD表达的变化.结果:60例HCC中FADD阳性率,显著低于癌旁肝组织FADD阳性率(25% vs 70%,P<0.01);HCC中33例Caspase-8表达阳性率,低于癌旁组织阳性率(19/20,95%).亚毒性剂量的化疗药(丝裂霉素、5-氟尿嘧啶、放线菌素D)可显著增强TRAIL的细胞毒活性,治疗后Caspase-8活性及FADD表达量显著增高.结论:HCC中FADD、Caspase-8的表达下调可能参与TRAIL耐受的机制,化疗药物可通过上调FADD的表达、增强Caspase-8活性来加强TRAIL的抗癌作用.
