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山东省恙虫病调查
目的了解山东省恙虫病流行特点.方法采用PCR技术及血清学等方法对山东地区人间和鼠间恙虫病感染情况进行流行病学调查.结果首次在黄河以北地区检出恙虫病感染鼠,感染率高达15.63%(PCR结果);从褐家鼠中检出恙虫病立克次体,血清学显示其感染率达10%;通过血清学检查还从大仓鼠中检出恙虫病立克次体抗体,其感染率达15.63%.除已证实的疫区外,还证实山东省潍坊、东营和菏泽3市存在恙虫病人间或鼠间感染.结论山东省广泛存在恙虫病疫区,黑线姬鼠为主要传染源,其血清学阳性率达19.46%,褐家鼠以及大仓鼠也有可能是本病的重要传染源.
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水体中轮状病毒实时荧光RT-PCR法检测
轮状病毒(Rotavitus,RV)是引起婴幼儿肠胃炎(腹泻)的主要病原体,全球每年约60万5岁以下儿童因轮状病毒感染引起急性腹泻而死亡,其中80%以上发生在发展中国家[1].轮状病毒随粪便排出体外后,容易进入水体并稳定存在[2],较低数量的病毒即可引发感染,所以轮状病毒污染的水体对公众健康构成严重威胁.为了有效防状病毒疫情,对常见水体进行轮状病毒监测和来源分析,本文拟通过实时荧光定量PCR技术和测序来快速检测水体中的轮状病毒.
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PCR技术检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素B基因
目的:金黄色葡萄球菌B型肠毒素是污染食品引起食物中毒的主要原因之一,针对进出口食品卫生监测的需要,研究一种简便、快速、准确的实验方法.方法:利用聚合酶链反应技术(PCR)采用特异的模板探针引物进行杂交,后通过电泳技术与阳性对照进行比对,来判断阴阳性结果.结果:本方法检出率高,每克样品中有4个金黄色葡萄球菌即可检出,24小时即可报告结果.结论:PCR方法检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素B基因快速、准确,检测周期短,既可提高检出率,又可节省检测时间.
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PCR技术快速检测空肠弯曲菌方法的建立
目的 建立空肠弯曲菌的快速检测方法 .方法 用PCR法扩增标本菌株中弯曲菌属16SrRNA片段、空肠弯曲菌MapA片段和结肠弯曲菌CeuE片段,通过电泳后对产物进行分析.结果 11份标本中有7份检出弯曲菌属16SrRNA片段,其中3份样品中检测到空肠弯曲菌MapA片段,4份样品中检测到结肠弯曲菌CeuE片段.结论 PCR技术可用于空肠弯曲菌的快速检测.
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多重PCR在沙门菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌感染诊断中的应用
现在全球常见的公共卫生问题中,食源性疾病排在首位,其主要原因是食品污染,主要病原菌有沙门菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌[1].因此,为了快速的、有效地检测出病原菌,减少或预防食源性疾病的发生,临床工作者和检疫部门研究出效率更高的多重PCR检测法.多重PCR检测法是一种更优于PCR的特殊技术,在同一体系中可以加入多种引物,并对多个待检基因进行扩增,检测多种病原体也只需一次PCR反应,因此,在鉴别诊断混合感染时多重PCR技术具有更加方便、快捷、高效率的优势[2].本文中,我们就多重PCR在沙门菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌感染诊断中的应用效果进行观察,并将结果总结报道如下.
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ELISA法和DNA荧光定量PCR法检测乙肝病毒的相关性研究
乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)DNA定量检测对乙型肝炎的诊断、抗病毒疗效观察及预后判断均具有重要意义.随着荧光定量(Fluorescent Quantitative,FQ)PCR技术的发展,由于其灵敏、快速、极低的假阴、假阳性率,该技术在临床上已被广泛应用于检测HBV-DNA,而酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中HBV免疫标志物(Hepatitis B Virus-Marker,HBV-M)仍旧是诊断乙型肝炎的常用方法.
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PCR技术诊断慢性前列腺炎30例报告
2007年1-12月,本文作者应用聚合酶链反应(PCR)对50例慢性前列腺炎患者病因进行检测,现报道如下.1资料与方法1.1一般资料慢性前列腺炎患者30例,年龄20~59岁,平均年龄29.5岁,病程3~14 d,均有会阴部疼痛不适,大部分患者有不同程度的尿频、尿急、尿痛、尿道不适感,部分患者排尿终末有白色分泌物流出.
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胃癌与p53基因相关性研究
目的:探讨抑癌基因p53的缺失与胃癌发生的关系.方法:利用PCR技术对42例胃癌术后标本进行检测,观察p53基因突变和缺失情况.结果:提示胃癌组织中存在p53基因缺失,且p53基因部分缺失和胃癌病人的性别、年龄及胃癌分化程度有关或很密切.结论:胃癌的发生与p53基因缺失密切相关.
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现代分子生物学与生物恐怖主义
分子生物学技术的快速发展,使制造新的药剂强有力的生物武器将成为可能,新研制的突变型保护抗原起保护作用,提供了新的疫苗研制,可代替新型更有效的防护方法,而引起机体保护性抗体反应.DNA基本技术,通过选择量化mRNA表达,PCR技术和纳米技术的应用,用来鉴别生物恐怖毒剂DNA序列,以防范生物恐怖主义袭击.
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MDR1基因全长序列真核表达载体的构建
目的构建MDR1基因全长序列真核表达栽体.方法采用PCR技术,扩增MDR1基因全长序列,并定向克隆入pcDNA3.1(+)质粒载体CMV启动子序列下游的BamH I和Xho I限制性内切酶酶切位点之间.结果重组体经转化E.ColiJM109后可大量扩增,提取该重组体进行限制性内切酶酶切分析,可见预期的目的片段和载体片段,并且以重组体为模板,用特异性引物可扩增出MDR1基因的1kb片段.结论成功地构建了MDR1基因全长序列真核表达载体,为进一步探讨MDR1基因表达产物的生物学活性以及临床检测、治疗等应用提供实验依据.
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血清Pre-S1蛋白检测的临床应用
目的:研究乙型肝炎(简称乙肝)病毒前S1抗原检测的临床应用.方法:用ELISA方法对230例患者血清进行乙肝两对半、前S1抗原检测,其中115例患者采用PCR法检测HBV-DNA.结果:HBeAg(-)156例中Pre-S1(+)检出率为18.3%(30/156),HBV-DNA(+)检出率为23.1%(36/156),(两者χ2=1.42,P>0.05).HBeAg(+)的74例中Pre-S1(+)检出率为79.7%(59/74),HBV-DNA(+)检出率为82.4%(61/74),(两者χ2=1.07,P>0.05).68例HBV-DNA(+)的乙肝患者中Pre-S1(+)55例,47例HBV-DNA(-)的患者中,Pre-S1(-)45例,(两者χ2=0.3,P>0.05).结论: HBeAg(-)的乙肝患者中有部分乙肝病毒在不断复制,Pre-S1抗原与HBV-DNA是协助诊断乙肝病毒复制的有用指标,在临床上有着十分重要的意义.
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肾细胞癌相关基因表达的研究
目的:探讨肾细胞癌相关基因CD31在肾癌的表达及其意义.方法:通过基因芯片技术,对111种人类肿瘤相关基因在肾细胞癌组织(实验组)和正常组织(对照组)的表达情况进行检测,从表达上调的多种基因中筛选表达显著上调的肾细胞癌相关基因,然后使用RT-PCR技术,对该基因在肾细胞癌组织和正常组织的差异性表达进行验证分析.结果:在111种人类肿瘤相关基因中,实验组较对照组表达上调2倍的39种基因中,基因CD31表达呈显著上调(实验组0.2323,对照组0.05439,两者比值为4.272).经RT-PCR实验验证,结果显示与基因芯片结果具有一致性,CD31在实验组与对照组的表达分别为0.00267和0.000178,经管家基因作内参校正后结果为,实验组1.41,对照组为0.356,实验组CD31表达较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01).结论:基因CD31在肾细胞癌组织表达明显上调,提示CD31可能系密切参与肾细胞癌发生、发展的一种相关基因,有望作为临床检测肾细胞癌的一种生物学标志.
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PCR技术诊断弓形虫病的研究进展
应用PCR技术对弓形虫病进行定性和定量研究是近年来弓形虫病诊断的一个重要研究领域.本文就PCR技术在弓形虫病诊断中所用的引物、PCR类型以及在各种类型弓形虫病的应用研究作一概述.
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脑炎156例临床诊断与病原学检测
脑炎是中枢神经系统常见的感染性疾病,根据不同的感染部位、不同的病原体及病损的程度进行临床分类,不同类型的感染早期临床表现不一,早期明确诊断是治疗的关键[1].因此,了解脑炎的临床特征及病原学,对提高临床早期诊断准确率和有效治疗尤为重要.本研究对156例脑炎患者,结合其临床表现,运用ELISA、PCR技术对患者的血清和脑脊液进行病毒特异性抗体检测,运用细菌、真菌培养技术对患者的脑脊液和血液进行病原体检测,现将结果报道如下.
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循环肿瘤DNA在结直肠癌临床诊疗中的应用及价值
循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)是由实体肿瘤细胞释放到循环系统中的基因组小片段,来源于机体内所有肿瘤部位,其携带的基因组信息与肿瘤组织具有良好的一致性,能克服常规肿瘤组织活检所无法突破的肿瘤异质性问题.通过外周血ctDNA检测可以进行肿瘤相关基因的遗传学和表观遗传学研究,如基因突变、异常扩增、杂合性缺失等,还可以进行定量,追踪机体内特异性基因的状态变化.ctDNA检测是一种新兴技术,相对于传统的肿瘤组织活检具有简单、易行、高重复性等优点,更易被患者接受.目前主要的技术及平台包括PCR技术和二代测序法,两者各有所长,根据不同时期不同需求可以进行调整.ctDNA检测在结直肠癌的早期诊断、疗效评估、动态监测、耐药评估以及个体化精准治疗中具有深远意义及临床价值.
关键词: 结直肠癌 循环肿瘤DNA(ctDNA) PCR技术 二代测序法 临床应用 -
实时荧光定量PCR检测泌尿生殖道感染患者沙眼衣原体的临床应用
沙眼衣原体(chlamydiatrachomatis,CT)是一种独立寄生于细胞内的微生物,含DNA和RNA,革兰染色阴性,只能在细胞内繁殖.CT是近年来常见的性传播疾病病原体之一,主要引起男女泌尿生殖道感染,因此也越来越受到人们的注意.随着荧光定量PCR技术的发展,该技术已广泛运用于临床.探讨PCR荧光定量技术在生殖道沙眼衣原体感染实验诊断中的实用价值.我们随机对2011年1月~3月来本院门诊治疗的600例泌尿生殖道感染沙眼衣原体状况进行了检测,现将其结果报告如下.
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利用PCR产物快速构建兔HPRT 基因无启动子打靶载体
目的 探讨构建兔HPRT基因打靶载体的方法,为下一步获得兔 HPRT基因敲除动物模型和转基因兔奠定基础.方法 首先在已经筛选到含有兔全长次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (Hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase,HPRT)基因BAC克隆(LBNL1-304M19)的基础上,利用Red重组系统,从此克隆上将一段12.5 kb无启动子的HPRT基因组片段克隆到pKS-质粒上,产生pKS-rHPRT质粒.然后基于pKS-rHPRT和pIGCN21质粒,通过PCR的方法获得两个不同的带有50 bp HPRT 基因同源序列的IRES-eGFPCre-Frt/Neo/Frt同源重组片段,终构建 HPRT 基因敲除打靶载体和无启动子基因敲入型打靶载体.结果 PCR、限制性内切酶及DNA序列测定,表明载体构建成功.结论 成功快速地构建了HPRT 基因敲除打靶载体和无启动子基因敲入型打靶载体.同时对利用同源重组技术敲除或插入DNA片段的效率进行了研究.
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应用PCR对病毒性心肌炎小鼠进行病原学诊断及其相关因素的研究
目的:研究用聚合酶链反应(PCR)技术测定病毒性心肌炎小鼠Coxsackie Virus B3 RNA(CVB-RNA)对病毒性心肌炎病毒病原的敏感性和可靠性。方法:对75只小鼠腹腔注射CVB3病毒后,做心肌病理检查和检验血液中CVB-RNA。结果:75只小鼠病理检查结果有心肌炎改变占85.3%,CVB-RNA阳性率为53.3%;CVB-RNA阳性率2周以内显著高于2周以后。结论:用PCR技术检测病毒性心肌炎血中CVB-RNA的敏感性与可靠性均较高,适用于病毒性心肌炎早期诊断。
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C端融合RGD三肽的重组L-门冬酰胺酶基因克隆、表达和对血液系统的影响
利用加端PCR技术构建asnB-RGD工程菌,获得C末端带有RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸,Arg-Gly-Asp)三肽的门冬酰胺酶(AnsB-RGD),以改进L-门冬酰胺酶的作用.以pUA18为模板,利用pUC18上游普适引物和根据L-门冬酰胺酶Ⅱ基因(ansB)C末端下游序列设计的引物来扩增目标基因.将目标基因连于pMD18-T载体,转化宿主菌JM109,筛选出的阳性克隆通过HindⅢ、NcoⅠ双酶切下目标基因连到含T7启动子的高效表达载体pET28a上,再转化BL21宿主菌.高效表达的工程菌摇瓶发酵,渗透休克法提取AnsB-RGD融合蛋白,12%的SDS-PAGE检测酶蛋白并考察酶的活力、特异性及其对血液系统的影响.2%琼脂糖凝胶电泳、DNA测序鉴定构建的pET28a-ansB-RGD工程菌,奈氏法、SDS-PAGE及免疫学方法检测AnsB-RGD融合蛋白.DNA序列分析证明RGD三肽已经连接在L-门冬酰胺酶的C末端,带有RGD三肽的融合蛋白仍然能与抗L-门冬酰胺酶的抗体结合,初步发现AnsB-RGD融合蛋白有促进血液凝固作用,但酶活力下降.
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E-cadherin在胃癌组织的表达及意义
研究认为胃癌的发生发展是一个多因素、多步骤、多基因参与的复杂病理过程[1].阐明其发生发展机制,对其检测及治疗有着重要作用.E-cadherin是一类介导上皮细胞间黏附维持组织结构完整性和极性的钙依赖性跨膜糖蛋白,与肿瘤侵袭转移关系密切,细胞间黏附的紊乱是肿瘤侵袭和转移的首要条件[2].本研究采用实时荧光定量PCR技术,通过在胃癌组织中检测E-cadherin的表达,探讨E-cadherin在胃癌发生发展过程中的作用.