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转基因食品检测技术探讨
转基因技术通过修饰改造生物DNA成分,对生物体遗传性状进行改变,得到营养价值、性状及品质符合目标的食品。不同转基因食品检测技术有各自不足及特点,结合检测目标及内容,合理选择检测技术,提高检测准确性及高效性,指导检测工作顺利实施。转基因食品蛋白质检测及核酸检测技术为以下研究的重点。
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核酸检测技术在蝇类、蜚蠊携带病原体检测中的应用
蝇类、蜚蠊是国境口岸出入境交通工具中常见的医学媒介生物,可机械性或生物性传播多种病原体,对人类健康构成威胁.对蝇类、蜚蠊携带病原体情况进行监测检测,可保障口岸卫生安全、降低传染病在国境口岸间传播的风险.随着分子生物学研究的进展,核酸检测技术被越来越多地应用于媒介生物领域的研究中.本文就核酸检测技术在蝇类、蜚蠊携带病原体检测中的应用进行综述.
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PCR技术在血吸虫感染检测中的应用
血吸虫病目前仍是一种严重危害人类健康的寄生虫病.多聚酶链反应(PCR)是分子生物学技术检测DNA灵敏的方法之一,在近期血吸虫病检测与诊断研究中的应用越来越多.虽然各研究所用PCR技术的检测标本、靶基因选择各异.诊断效率也不尽相同,但是PCR作为一种高特异性敏感性检测方法,与其他检测方法相比仍颇具优势.本文综述了PCR技术在血吸虫感染检测中的应用情况.
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重庆地区动物携带Nipah病毒和Hendra病毒的检测
目的 本研究拟建立一步法实时RT-PCR检测Nipah病毒(Nipah virus,NiV)和Hen-dra病毒(Hendra virus,HeV)的方法 ,对采集自中国重庆地区动物外周血样本进行NiV和HeV检测,以获得我国重庆地区的NiV和HeV的病毒流行病学资料.方法 2007年6月起至2008年6月,采集自重庆地区饲养的猪外周血标本580份、奶牛外周血标本250份、山羊外周血标本180份,密度梯度离心法分离外周血淋巴细胞,Trizol法提取细胞总RNA.用已建立的NiV和HeV一步法实时RT-PCR检测方法 ,对RNA样本进行NiV和HeV检测.对阳性样本进行PCR产物序列鉴定及序列分析等研究,在可能的情况下进行病毒分离培养,并提交流行病学调查报告.结果 对采集自中国重庆地区饲养的3种动物的样本进行NiV和HeV核酸检测,成功进行了一步法实时RT-PCR反应,所有样本荧光扩增曲线均无Takeoff点,曲线平坦,判为阴性结果 .结论 初步流行病学研究提示我国重庆地区饲养的动物猪、牛、羊中NiV和HeV未发现阳性.
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基因诊断技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用
近年来,由于人口流动普遍增加、人体免疫缺陷病毒(HIV)与结核分枝杆菌(结核菌)伴发感染以及耐药菌株的出现等原因,使结核病发生率有上升趋势,全球结核病防治面临新的挑战.鉴于近年来核酸检测技术广泛应用于结核杆菌耐药性检测,综述如下.
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乙型和丙型肝炎病毒核酸检测技术及进展
近年来,病毒性肝炎的实验室诊断领域取得了飞速的进展,新方法、新技术的出现提高了对病毒检测的灵敏度和准确度,使病毒性肝炎的诊断和治疗水平上了一个新的台阶.病毒性肝炎NAT分为两大类,即病毒核酸载量的检测和病毒基因型/基因突变检测.鉴于甲型、丁型和戊型肝炎病毒的检测主要以血清学检测为主,本文主要介绍乙型肝炎与丙型肝炎NAT的主要技术及进展.
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原料血浆病原体核酸检测技术应用的现状与思考
病原体核酸扩增检测技术泛指以扩增DNA或RNA为手段达到筛查病原体目的的检测技术,如聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)、依赖核酸序列的扩增(Nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)、转录介导的扩增系统(Transcript-mediated amplification ,TMA)等.现有资料表明,采用核酸检测技术可以明显缩短血浆感染病毒阳转前的潜伏期(窗口期)的检出期限,降低血源性病毒的传播危险.目前,核酸检测技术已经在欧美国家广泛用于血液和原料血浆的病原体筛查.我国血液制品技术管理部门从2002年开始,先后进行了原料血浆核酸检测的方法学研究和超过4万份取自不同地区样本的病原体筛查,并根据国家食品药品监管机构的要求拟定了相关技术文件;同时,国内已有部分血液制品生产企业开始采用核酸检测技术进行原料血浆的病原体筛查.
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结核分支杆菌的耐药性分析
目前,全世界已有近20亿人口受到结核分支杆菌的感染,结核患者约2000万人,每年新发患者约800~1000万人[1].近年来,由于人口流动普遍增加、人类免疫缺陷病毒(HIV)与结核分支杆菌伴发感染以及耐药菌株的出现等原因,使结核杆菌感染和结核病发生率有上升趋势,给全球结核病防治提出了新的挑战.及时诊断并检测分离株的耐药性对治疗结核非常重要.但结核分支杆菌生长十分缓慢,传统的检测方法往往需要7~10d后才能确定其耐药性.近年来,核酸检测技术被广泛应用于结核杆菌耐药性的分析,综述如下.
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血液核酸检测技术
核酸检测技术(nucleic acid test,NAT)是一种新兴的献血者血液传染病检测技术,在许多发达国家和地区已普遍应用于献血者血液筛检.本文从NAT检测的必要性、血液NAT检测技术简介、目前已商品化的NAT检测试剂情况等方面进行综述,并探讨我国血液NAT检测的可能发展趋势及需注意的问题.
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核酸检测技术在国内外血液筛检中的应用
核酸检测技术(nueleic acid test,NAT)是一种新兴的血液传染病检测方法.研究表明.混合血样NAT检测可将HBV、HCV和HIV感染的平均"窗口期"缩短9、59和11d[1,2];此外NAT还可检测出因病毒变异、免疫沉默性感染、人工操作错误等原因而漏检的污染血液.
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丙型肝炎病毒实验室检测技术进展
分子生物学技术是临床诊断和治疗监测慢性丙型肝炎病毒( HCV)感染的常用手段。这些技术可以检测和定量病毒核酸并且分析核酸序列,确定HCV的基因型和亚型,识别病毒的耐药突变位点。实时荧光技术,由于敏感性高,特异性好,已广泛应用于HCV感染的临床诊断和治疗监测;下一代基因测序技术可明显提高测序深度,但目前多限于科学研究。该文回顾性分析了用于 HCV 感染诊断的实验室检测技术。
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核酸检测技术与酶联免疫检测技术在血液筛检中的初步应用比较分析
目的 对比核酸检测技术与酶联免疫检测技术在血液筛检中的初步应用.方法 收集10000份无偿献血者血液标本作为测试对象,制作成三管标本,均在4小时内进行离心处理,实施酶联免疫检测技术和核酸检测技术.结果 10000份血液标本中,NAT(+)为61份,NAT(-)为9939份,EIA(+)为57份,EIA(-)为9943份,其中5份为EIA(-)NAT(+),且均HBV DNA定量检测,可发现大部分结果<3.0×104拷贝/ml,且经NAT试剂再次检测后,仍为阳性.结论 核酸检测技术在血液筛检中诊断价值性更高,能够提高HBV检测灵敏度.
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面对基因诊断技术发展的挑战
近十年来,以DNA分析为基础的基因(核酸)诊断技术已逐步成为实验诊断的常规技术而广泛应用于临床各学科领域,包括遗传学、肿瘤学、传染病学、血液学、输血和免疫学等方面.核酸检测技术的快速发展和疾病基因组研究信息日新月异,并由此带来的巨大产业前景和社会需求,使我国医药卫生工作者、从事诊断产业人士和相关行业及政府管理部门面临全面挑战,不得不认真思考对策.
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溶血、脂肪血及保存条件对HBV DNA、HIV RNA核酸检测的影响
目的 研究溶血、脂肪血、不同保存温度和保存时间对血液HIV RNA、HBV DNA核酸检测(NAT)的影响.方法 应用罗氏MPX V2.0试剂,分别于4℃、25℃、37℃及-30℃下进行保存的12~30倍试剂检测下限(LOD)浓度的HIV RNA、HBV DNA标本,对所有标本于4 h、1 d、2 d、3 d、1周及4周后,采用6混样模式进行NAT检测;对含终浓度为2~5倍LOD的HIV RNA、HBV DNA标本的6组溶血标准样本[血红蛋白(Hb)浓度分别为97、34、17、8、5及3 g/L]、5组脂肪血标准[三酰甘油(TG)浓度分别为7.93、3.80、2.63、1.83及1.49 mmol/L]、1组无溶血正常三酰甘油浓度(Hb及TG浓度分别为0 g/L、0.95 mmol/L)的对照样本进行NAT检测.结果 在25℃及以下温度保存4 h至4周,HIV RNA、HBV DNA检测循环阈值(Ct值)差异均无统计学意义(P>0.05),HBV DNA在37℃条件下保存,3 d及1周检测Ct值分别与4 h、1 d、2 d比较差异有统计学意义(P<0.05);Hb浓度为97 g/L时HBV DNA和HIV RNA均未能被检出,当Hb浓度<34 g/L时,HBV DNA、HIV RNA检测Ct值分别与其对照组相比较差异无统计学意义(P>0.05);TG≤7.93 mmol/L时,HIV RNA、HBV DNA各组检测Ct值与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 使用罗氏MPX V2.0试剂检测的HIV RNA、HBV DNA标本,在25℃及以下长可以放置4周;Hb<34 g/L以及TG≤7.93 mmol/L时,对罗氏MPX V2.0试剂检测HIV RNA、HBV DNA没有显著性影响.
关键词: 血液保存 因素分析 统计学 乙肝病毒脱氧核糖核酸 人类免疫缺陷病毒核糖核酸 核酸检测技术 CT值 溶血 脂肪血 -
以GoldVieW和EB检测PCR产物敏感性的观察
聚合酶链反应(PCR)是公认的一种简便、准确的核酸检测技术,它的检测依赖于显示DNA的染色方法.荧光测定法是测定DNA浓度敏感的分子技术之一[1].作者对琼脂糖凝胶电泳GoldView染色及EB染色检测人4-1BBL(h4-1BBL)的效果进行了比较研究,旨在寻求一种敏感、安全、便捷的PCR产物检测方法.
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新的诊断技术在肝病中的应用
近年来,人们运用诊断技术,特别是分子生物学技术诊断肝脏疾病.现就一些新的核酸检测技术、肝活检技术和血清标记物的临床应用做一总结.
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男男性行为者及其他高危人群的无偿献血知信行调查
加强血液安全管理,预防医源性传播一直是艾滋病防治工作的重点.20世纪90年代河南等地有偿供血造成大量农民感染艾滋病[1],自<献血法>颁布实施以来,积极推动无偿献血工作.近年来,随着无偿献血队伍的不断扩大,男男性行为者(MSM)等艾滋病高危人群也纷纷加入到献血队伍中,林云明报道台州市在无偿献血人群中查出的艾滋病病毒(HIV)阳性者中36.8%通过同性感染[2],目前核酸检测技术还不能完全解决窗口期问题[3],因此无偿献血面临着新的考验.
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核酸检测技术在血液筛查中的应用进展
血清学酶联免疫吸附法( ELISA)检测技术作为国家规定的血液筛查标准方法,在阻断输血相关传染性疾病的传播中发挥着重要作用,但ELISA技术本身的固有缺陷却成为进一步提高临床用血安全的障碍,主要由病毒感染者存在较长的"窗口期"导致.在目前使用的ELISA检测试剂的条件下,HBsAg、丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)及人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)的平均"窗口期"分别约为59、82及22d;而采用核酸检测技术(NAT),乙型肝炎病毒(HBV)、HCV及HIV的平均"窗口期"可分别缩短至49、9及10d.NAT检测与ELISA检测在方法学和临床意义上各具特色,NAT检测几乎不受ELISA检测制约因素的影响,故两种检测技术存在良好的互补性.卫生部于2010年3月在全国范围开始推广血站NAT试点工作,本文就近年来国内外NAT在血液筛查中的应用情况进行总结分析.
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31例乙型肝炎病毒核酸检测阳性献血者跟踪调查
目的 了解扬州地区无偿献血者乙型肝炎病毒核酸检测阳性献血者的跟踪调查情况.方法 对22518例献血者先经ELISA法两次检测及NAT一次检测;对本血站HBsAg ELISA法双试剂阴性或单试剂阳性而NAT检测为阳性的标本,再送江苏省血液中心进行罗氏核酸检测和乙肝“两对半”跟踪检测.对ELISA法HBsAg双试剂阴性核酸检测阳性献血者6个月后再进行跟踪检测.结果 ELISA法双试剂阴性标本中上海科华NAT检测为阳性26例,占0.12%;OBI感染22例,HBV窗口感染期4例.OBI献血者的血液学特征以HBcAb为主,占100.0%,其次为HBeAb,占63.6%.31例送检标本乙肝“两对半”均出现HBsA g、HBsAb、HBeAb、HbcAb单项或合并阳性.结论 核酸检测能够在一定程度上弥补ELISA方法学的局限性,有效缩短窗口期,减少漏检的发生,降低经输血途径传播疾病的风险,从而确保血液质量和输血安全.
关键词: 乙型肝炎病毒表面抗原 核酸检测技术 酶联免疫法 隐匿性乙型肝炎病毒感染 -
临床输血中输血感染控制技术的发展
HIV、HBV和HCV是临床输血中面临的主要病原体.为防止HIV、HBV及HCV传播,国内外针对如何快速、准确、无遗漏地筛查出病原体,已开展了大量研究工作.本文就目前临床为减少输血相关性疾病的发生、所采用的检验手段和技术进行了总结:HBsAg、抗-HCV和抗-HIV的血清学检测;核酸检测技术在血液检验方面的应用,以及上述方法的优、缺点等.同时,对血液筛查检测新技术的研究和开发,也做了相应的归纳和展望.