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一氧化氮在肿瘤治疗中的研究进展
一氧化氮(nitric oxide,NO)是新近发现的一种小分子气体,化学性质极为活泼,具有显著的生物学活性.近来大量的研究表明,NO在机体抗肿瘤方面有十分重要的功能.本文就近年来NO在肿瘤治疗研究中的进展作一综述.一、NO的产生[1]:19 80年Furchgott和Iawadik研究证明乙酰胆碱(acetyl choline,Ach)的血管生物学效应时发现 ,Ach舒血管作用依赖于内皮细胞产生的一种内皮衍化松弛因子(endothelium derived re laxing factor,ERDF)进行调节.到1987年Palmer和Lgarro等证实EDRF与NO为同一种物质. 进一步研究表明,体内NO的产生是由一氧化氮合酶(NO synthase,NOS)催化L-精氨酸(L-Ar gining,L-Arg)与氧分子经多步氧化还原而生成的.NOS是NO合成过程中的关键酶,目前已知有三种异构体,分别为神经型(nNOS)、内皮型(eNOS)、及诱导型(iNOS).前两者为构成型 NOS(constitutive NOS,cNOS)活性依赖于钙/钙调蛋白(Ca2+/CaM)的调节.作用迅速短暂,巨噬细胞源性NOS为诱导型NOS(inducible NOS,iNOS)其活性取决于基因转录而不依赖于Ca2+/CaM,作用缓慢而持久,多种因素如细胞因子、细菌脂多糖(LPS)均可诱导产生高水平的NO.
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免疫球蛋白在结肠癌HT-29细胞中的表达及其生物学活性探讨
目的明确免疫球蛋白(Ig)在人大肠癌传代细胞系HT-29细胞中的表达情况,并探讨其对肿瘤细胞生物学活性的影响.方法用RT-PCR方法检测Ig重链可变区转录本在HT-29细胞中的表达,并构建含有HT-29特异的CDR3片段的反义重组载体,电穿孔法将其转染入HT-29细胞,观察其对HT-29细胞生长增殖及凋亡等基本生命活动的影响.结果在HT-29细胞内检测到人Ig重链转录本,且测序显示为单一性克隆;含有HT-29特异的CDR3片段的反义重组载体能够有效地抑制HT-29细胞Ig分子的表达,且能够有效的诱导细胞的凋亡(P<0.01)和生长抑制(P<0.05).结论肿瘤细胞来源的Ig可促进肿瘤细胞的生存和生长.
关键词: 免疫球蛋白(Ig) 人大肠癌传代细胞系HT-29 生物学活性 -
姜黄素防治皮肤癌的研究进展
姜黄是多年生姜科植物,主要生长于热带和亚热带地区,在亚洲国家如印度和中国广泛栽培.从中提取的姜黄素是其主要成分,常用来作为调味品和食物添色剂,同时具有多种生物学活性,如抗寄生虫、解痉、抗炎和抗氧化效应,抑制肿瘤的发生和生长,特别是姜黄素防治皮肤癌成为近年来国内外研究的热点.本文对姜黄素在肿瘤发生的不同阶段所发挥的抗癌机制研究进行综述.
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078 GM-CSF在鼻息肉中的表达
鼻息肉是鼻腔内多种细胞因子参与的持续性炎症反应,GM-CSF对维持嗜酸性粒细胞的生物学活性发挥重要作用,相关领域的研究有助于鼻息肉发病机制的探讨及鼻息肉的临床治疗。
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豚鼠鼻粘膜一氧化氮合酶表达
一氧化氮(nitric oxide, NO)是新近发现的一种具有多种而复杂生物学活性的小分子物质,是生物体内重要的信使分子和效应分子,参与体内众多的生理病理过程。NO具有松弛血管平滑肌、调节血液循环、抑制血小板聚集等作用,并被认为是一种重要的神经递质[1]。催化NO的生物合成酶称一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS),本检测旨在探索NOS在鼻粘膜上的分布及其生理学意义。 一、材料和方法 1.豚鼠12只,发育营养正常,雌雄不论,体重350 g左右(本校动物实验中心提供)。 2.制片:豚鼠灌注固定处死后,迅速取下双侧鼻甲粘膜,分别置入10%中性甲醛固定,1侧鼻粘膜6 h后移入15%蔗糖过夜,鼻粘膜包埋在OCT水溶性包埋剂中,做5 μm厚的冰冻切片;另1侧硅烷化载玻片行4 μm石蜡切片。 3.酶组织化学染色:冰冻切片过0.01 mol/L 的磷酸缓冲溶液(pH 7.4)后,待其干燥,加入含有0.8 g/L的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸钠(nicotinamide dinucleotide phosphate-Na4,NADPH-Na4, 美国Sigma公司)、0.6 g/L的硝基四氮醋蓝和0.3% Triton-X100的孵育液,置于37℃恒温箱内孵育1.5 h,显色后0.01 mol/L磷酸缓冲溶液冲洗3次,终止反应,常规酒精脱水、透明、封片。阴性对照:孵育液内不含NADPH-Na4。 4.内皮型NOS(endothelial NOS, eNOS)原位杂交检测步骤:采用eNOS原位杂交检测试剂盒(武汉博士德公司)。石蜡切片脱腊至水,蛋白酶K消化5 min,暴露mRNA核酸片段,cDNA双链探针变性后,每张切片加10 μL含地高辛标记探针的eNOS原位杂交液,湿盒中37℃杂交18 h,充分洗涤后,用免疫组化ABC法显示探针与鼻粘膜靶核酸形成的杂交体。阴性对照为省去滴加eNOS探针杂交液,其余方法和步骤不变。
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肿瘤坏死因子与眼部疾病
肿瘤坏死因子因具有广泛的生物学活性而日益受到人们的关注,它在眼部感染性疾病、免疫性疾病、肿瘤、组织损伤、角膜移植免疫排斥反应等许多方面起着重要的介质作用.本文就肿瘤坏死因子的研究进展、生物学作用以及在眼部疾病中的表达情况进行了综述.
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壳聚糖在口腔医学中的应用研究
壳聚糖是一种具有独特生物学活性的高分子化合物,对人体无毒副作用,为符合医学要求的生物性材料.壳聚糖可制成薄膜、凝胶,易于操作,有促进伤口愈合、引导骨形成等作用.作为来源方便的生物材料,近年来受到国、内外各学科的广泛重视,具有广阔的应用前景.本文专门介绍壳聚糖在口腔医学领域的研究进展,包括抑菌、抗附着、引导骨再生、药物缓释载体、充填材料等内容.并综述了壳聚糖在牙周病、牙体牙髓病、龋病防治、颌面修复等方面的应用研究.
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Phoenix脓肿根管渗出液中白细胞介素1β的检测及临床相关性
白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)作为一种多功能细胞因子,是重要的炎症介 质,具有广泛的生物学活性.我们采用ELISA法检测根尖周炎根管渗出液中IL-1β的含量, 并探讨其与根尖周炎的关系.
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Ceramicrete根管倒充填材料的生物学性能评估
目的 体外评估Ceramicrete根管倒充填材料的细胞毒性和生物学活性,以期为临床应用提供实验室基础.方法 采用甲基噻唑基四唑(MTT)实验评估Ceramicrete根管倒充填材料对大鼠成骨样细胞ROS 17/2.8的细胞毒性.透射电子显微镜观察不同阶段细胞超微结构的形态学变化.扫描电子显微镜观察Ceramicrete根管倒充填材料浸泡于模拟体液中24 h的形态学变化.结果 第1阶段ROS17/2.8细胞表现为重度毒性,细胞相对增值率为0.95%~2.45%;随后细胞毒性呈下降趋势,第2阶段为轻度毒性,细胞相对增值率为73.65% ~ 88.62%;第6阶段无细胞毒性,细胞相对增值率为91.53% ~ 97.25%.透射电镜下细胞的超微结构变化显示细胞损伤程度与MTT实验一致;扫描电镜下观察到在模拟体液中Ceramicrete倒充填材料表面有成簇的针状晶体生长.结论 Ceramicrete 根管倒充填材料具有良好的生物相容性和潜在的生物学活性.
关键词: 根管充填 细胞毒性试验 免疫 Ceramicrete 生物学活性 -
周期性张应力对人牙周膜细胞生物学活性的影响
目的:探讨周期性张应力对体外培养的人牙周膜细胞生物活性的影响.方法:对体外培养的人牙周膜细胞施加不同大小的周期性牵张力(6%、12%、20%细胞表面拉伸率),24h后检测其对细胞的总蛋白合成、ALP活性、Col-Ⅰ和OCN分泌的影响.实验结果用SPSS 13.0进行统计分析.结果:较小的牵张力对人牙周膜细胞生物活性无显著影响,随力值的增大,牵张力能够呈强度依赖性抑制人牙周膜细胞的活性,减少总蛋白合成及ALP活性,抑制Col-Ⅰ及OCN的分泌.结论:周期性张应力可以抑制人牙周膜细胞的生物学活性,并呈强度依赖性.
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心脏分子标志物脑钠肽和氨基末端脑钠肽前体与耐力运动研究进展
脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)和氨基末端脑钠肽前体(amino-terminal proBNP,NT-proBNP)是由BNP基因表达的两种产物,主要由心室肌细胞合成与分泌[1,2].BNP是一种强大的心血管活性物质,对心血管系统具有保护作用[3],然而NT-proBNP无生物学活性.起初BNP和NT-proBNP被认为是反映心脏功能的分子标志物,主要用于心脏功能障碍检测[4-8],近来发现ACS(acute coronary syndrome,急性冠状动脉综合征)等多种缺血性心肌病都可导致BNP和NT-proBNP的显著升高,BNP和NT-proBNP也可作为反映心肌损伤的分子标志物[9-13].
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运动与肝细胞凋亡研究进展
细胞凋亡(apoptosis)是一种生理性、程序性的细胞死亡过程.通过凋亡,体内失去生物学活性或无生理功能的细胞,如一些衰老、受损或癌变前的细胞以有序的方式被清除,从而维持组织中细胞生成与细胞死亡之间的平衡.细胞凋亡是广泛存在于组织细胞中的正常现象,属于一种机体的自主保护性反应.运动作为一种特殊刺激,可加速机体的物质代谢和能量代谢,并使机体处于缺血、缺氧状态,引起ATP减少、自由基增多、Ca2+浓度改变、线粒体结构及功能变化等,导致细胞启动细胞凋亡.目前,细胞凋亡在运动医学研究领域备受关注.探讨运动状态下的肝细胞凋亡对于揭示细胞凋亡与运动性疲劳之间的关系,为运动训练提供科学的理论依据,以及预防和治疗运动性急慢性肝病有重要的实际意义.
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纤溶酶及其衍生物溶栓研究进展
当前批准使用的溶栓药物均为纤溶酶原激活剂,其应用受到出血并发症和血栓部位纤溶酶原含量不足的限制。而纤溶酶可被α2-抗纤溶酶迅速中和,避免了出血风险。随着导管输送技术的应用,纤溶酶特有的生化性质使其成为安全有效的直接溶栓药物,小纤溶酶、Δ-纤溶酶、微小纤溶酶等纤溶酶衍生物在临床前及临床试验中亦表现出较高的溶栓效率和较好的止血安全性。本文将对纤溶酶及其衍生物在生化性质、临床前和临床研究等方面取得的进展进行综述。
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天然免疫分子抗菌肽的研究进展
生物体健康生存的第一成分,在生物界中广泛分布.抗菌肽是一类理化性质稳定、生物活性多样、抗菌谱广的小分子肽.对一些抗药、耐药菌群有显著作用,其本身不易产生耐药性.也正是基于这一点,使得抗菌肽在目前的医药研发中占有重要地位.
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重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白质控方法和标准的研究
目的建立重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白质控方法和质量标准.方法用中和TNF-α生物学活性的方法测定重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白效价,用胰蛋白酶酶切分析肽图,用ELISA方法分别测定蛋白A、残留宿主细胞蛋白残留量和重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白含量.结果建立了重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的生物学活性、肽图分析、残留蛋白A等质控方法和质量标准.结论建立的方法和质量标准已用于重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白产品的检定.
关键词: 重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白 质控 质量标准 生物学活性 -
肿瘤治疗性多肽疫苗--重组人纽表位肽12质控方法的研究
目的建立重组人纽表位肽12质控方法和检定规程.方法采用FVB/N转neu基因小鼠,以ELISA法检测给约后小鼠的抗体阳转百分率评价其生物学活性,用胃蛋白酶酶切分析肽图,用SEC-HPLC法测定抗原含量.结果与结论建立了重组人纽表位肽12的生物学活性、肽图分析、抗原含量测定等质控方法及检定规程,并已用于重组人纽表位肽12产品的检定.
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重组人内皮抑素的质控方法研究
目的通过研究并建立重组人内皮抑素质量控制方法.方法用内皮细胞迁移法测定内皮抑素的生物学活性;胰酶消化法测定肽图;分别用非还原型SDS-PAGE和RP-HPLC法测定样品的纯度;其余项目按<中国生物制品规程>2000年版进行测定.结果建立了内皮抑素的活性测定方法,应用该方法测定3批内皮抑素比活性分别为1.45×106, 1.57×106和2.73×106 u*mg-1蛋白,肽图测定结果显示3批样品批间一致,SDS-PAGE纯度和RP-HPLC纯度均大于99%,其余各项指标均符合规定.结论建立的方法可有效地控制内皮抑素制品的质量.
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多肽调控因子AcSDKP的生物学活性及构效关系研究进展
AcSDKP是从胎牛骨髓中提取的一种以细胞生长抑制作用为主的多功能生理调控因子,不仅具有抑制造血干细胞生长的生物学功能,对淋巴细胞、肝细胞、肾间质成纤维细胞及心肌成纤维细胞等多种细胞均有增殖抑制作用.同时还能介导血管的生成,对生殖系统也有明显刺激作用,可促进精子生成.本文就AcSDKP的多种生物学活性及新研究进展作一综述.
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重组人组织激肽释放酶结合蛋白的高密度毕赤酵母表达、纯化和生物学活性
研究重组人组织激肽释放酶结合蛋白(rHKal)的高密度毕赤酵母表达、纯化以及生物学活性.以质粒pPIC9-Kal/GS1 15 (His4)转化毕赤酵母细胞,在7.5L培养罐内高密度细胞发酵,以1%~2%的甲醇诱导表达rHKal.发酵上清液经疏水层析、亲和层析和凝胶层析分离rHKal.通过MTT及小管形成实验评价rHKal对HUVEC的生物学活性.收获发酵上清液内rHKal的表达水平为50 mg·L-1,纯化后rHKal原液的纯度达98%以上.rHKal对HUVEC的增殖抑制活性呈剂量依赖性,但对其小管形成抑制作用的量效关系呈U型曲线.rHKal 具有新生血管形成抑制活性,本研究为rHKal的生产提供了有效方法.
关键词: 组织激肽释放酶结合蛋白 高密度发酵 纯化 生物学活性 -
基于报告基因的抗CD20单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立
利用Jurkat/NFAT-luc+ FcγRⅢa转基因细胞系作为效应细胞,WIL2-S细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BioGloTM Luciferase Assay System)进行抗CD20单抗的ADCC生物学活性检测,并对实验条件进行优化及方法学验证.结果显示抗CD20单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(X/C)B]+D.方法经优化确定靶细胞为WIL2-S细胞,抗体稀释浓度为18 000 ng·mL-1,1:5倍的稀释倍数,效靶比为6∶1,诱导时间为6h.该方法具有良好的专属性,8次独立实验的回归分析、线性及平行性均通过统计学检验;4个不同稀释组回收率样本经3次测定,相对效价分别为(44.39±3.93)%、(72.74±2.78)%、(128.28±7.01)%和(168.19±2.70)%,变异系数均小于10%,对应回收率分别为(88.78±7.85)%、(96.99±3.70)%、(102.63±5.61)%和(112.12±1.80)%.本研究利用转基因细胞法成功建立抗CD20单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗CD20单抗ADCC生物学活性的常规检测方法.
关键词: 抗CD20单克隆抗体 ADCC 生物学活性