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反义bcl-2寡核苷酸对半乳糖诱导的晶状体上皮细胞中Bcl-2蛋白及细胞周期的影响
目的:探讨反义bcl-2寡核苷酸(bcl-2 ASODN)对半乳糖诱导的兔晶状体中Bcl-2蛋白表达及细胞周期的影响.方法:人工合成与bcl-2基因翻译起始区序列互补的寡核苷酸并磷酸化修饰,用半乳糖和bcl-2 ASODN处理体外培养的兔晶状体,流式细胞术检测bcl-2 ASODN对半乳糖诱导的LEC中Bcl-2蛋白表达水平及细胞周期的影响.结果:5.0～15.0μmol/L反义bcl-2寡核苷酸能下调半乳糖诱导的晶状体上皮细胞中Bcl-2蛋白的表达,荧光强度从158.70±2.14降至113.94±2.88,同时可降低S期细胞数,从20.60%降至0.67%.结论:bcl-2 ASODN能抑制半乳糖诱导的晶状体中Bcl-2蛋白的表达水平,阻止细胞进入S期,抑制细胞增殖.
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反义bcl-2寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞的抑制作用
目的:探讨反义bcl-2寡核苷酸(bcl-2 ASODN)对半乳糖诱导的兔晶体上皮细胞(LEC)生长的影响. 方法:人工合成与bcl-2基因翻译起始区序列互补的寡核苷酸,用半乳糖和反义寡核苷酸处理培养的晶体上皮细胞,应用细胞计数法和MTT法观察反义bcl-2寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞增殖的影响. 结果:2.5～10.0 μmol/L反义bcl-2寡核苷酸能抑制半乳糖诱导的晶体上皮细胞的增殖,10.0 μmol/L时作用较显著. 结论:反义bcl-2寡核苷酸对半乳糖诱导的白内障晶体上皮细胞的生长增殖有抑制作用.
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c-myc ASODN对半乳糖诱导的晶状体上皮细胞中c-Myc蛋白表达及细胞周期的影响
目的:探讨反义c-myc寡核苷酸(c-myc ASODN)对半乳糖诱导的兔晶状体上皮细胞(LEC)中c-Myc蛋白表达及细胞周期的影响.方法:人工合成与c-myc基因第二外显子翻译起始区序列互补的寡核苷酸并磷酸化修饰,用半乳糖和c-myc ASODN处理体外培养的兔晶状体,流式细胞术检测c-myc ASODN对半乳糖诱导的LEC中c-Myc蛋白表达水平及细胞周期的影响.结果:2.5～15.0 μmol/L c-myc ASODN能下调半乳糖诱导的晶状体上皮细胞中c-Myc蛋白的表达,荧光强度从214.7±0.6降至90.5±8.4,其作用有剂量依赖性(r=-0.983,P<0.01),同时可降低S期细胞数,从5.54降至4.59.结论:c-myc ASODN能抑制半乳糖诱导的晶体上皮细胞中c-Myc蛋白的表达水平;阻止细胞进入S期,抑制细胞增殖.
关键词： 反义c-myc寡核苷酸 半乳糖 晶状体上皮细胞 -
肝细胞移植对大鼠实验性肝衰竭的疗效研究
目的探讨同种异体肝细胞经腹腔、门静脉移植对D-氨基半乳糖(D-gal)诱导的急性肝衰竭大鼠的治疗作用. 方法采用D-gal诱导大鼠急性肝衰竭,诱导后60 h,分4组进行治疗实验,Ⅰ组:经门静脉移植2×107肝细胞,同时肌注环孢霉素A(CsA) 10 mg*kg-1;Ⅱ组:经门静脉注射生理盐水1 mL,同时肌注CsA 10 mg*kg-1;Ⅲ组:经腹腔移植4×107肝细胞;Ⅳ组:经腹腔注射生理盐水2 mL,观察大鼠的存活率、肝脏功能、病理变化. 结果Ⅰ组大鼠存活率与Ⅱ组无明显差异(42% vs 37%, P＞0.05),肝脏功能、病理无明显改善. Ⅲ组大鼠存活率显著高于Ⅳ组(75% vs 33%, P＜0.05),肝脏功能、病理均有部分改善. 结论经腹腔移植同种异体肝细胞可明显改善D-gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率,部分改善肝功能、病理;经门静脉移植同种异体肝细胞不能改善D-gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率、肝脏功能及病理改变.
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龙胆苦甙抗鼠肝损伤的作用
目的研究中药秦艽(Gentiana macrophylla,Pall)提取物龙胆苦甙(gentiopicroside,GPS)对化学性及免疫性肝损伤的保护作用.方法采用CCl4,TAA(thioe thanolamine),D-Gal急性肝损伤、CCl4慢性肝损伤及豚鼠同种免疫性肝损伤模型.各模型设正常对照组、药物模型组、阳性对照组和2或3个给药组.每组按下列要求分别造模:用CCl4小鼠为10 mL@L-1的豆油液,20 mL@kg-1,大鼠为400mL@L-1的豆油液,3 mL@kg-1;用TAA小鼠为50 mg@kg-1;用D-Gal大鼠为160 mL@L-1水溶液,5 mL@kg-1;各组均采用ip.以GPS小鼠150,75,37.5 mg@kg-1,大鼠120,60,30mg@kg-1,豚鼠120,48 mg@kg-1,肌肉给药治疗,测定其血清中ALT,AST变化,以及肝脏形态学改变,评价GPS对各种肝损伤的治疗效果并初步探讨其作用机制.结果 GPS可明显降低多种急性肝损伤和慢性肝损伤动物的血清转氨酶.使肝组织的片状坏死、肿胀及脂肪变性,有不同程度的减轻,且可促进肝脏的蛋白质合成.结论GPS对多种肝损伤有一定的保护作用.
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二苯乙烯苷对D-半乳糖衰老模型小鼠衰老指征的影响
目的:探讨二苯乙烯苷对D-半乳糖所致亚急性衰老的影响.方法:将174只小鼠随机分为三组,即对照组、衰老模型组和二苯乙烯苷组,分别给予生理盐水、D-半乳糖和D-半乳糖+二苯乙烯苷,六周后部分小鼠测定游泳时间,耐缺氧、耐寒和耐高温能力.另一部分小鼠测定不同组织脂褐素(LPF)、Na+/K+-ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量.测定二苯乙烯苷对人红细胞膜的MDA的生成量的影响.结果:二苯乙烯苷明显延长游泳时间、耐缺氧和耐高温能力,二苯乙烯苷可降低小鼠脑组织LPF含量,升高心肌Na+/K+-ATP酶和肝脏SOD活性.二苯乙烯苷可减少邻苯三酚所致的人红细胞膜MDA的生成.结论:二苯乙烯苷具有抗衰老作用,其机制是通过多种途径而实现的.
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高脂血症对大鼠半乳糖性白内障的影响
目的 探讨高脂血症(HLP)对大鼠半乳糖性白内障发病过程的影响.方法 40只大鼠随机分为单纯HLP组、HLP-白内障模型组、白内障模型组和正常对照组,裂隙灯下观察晶状体混浊情况,分光光度计检测各组晶状体还原性谷胱甘肽、丙二醛的表达.结果裂隙灯下观察到第3～9天HLP-白内障组大鼠白内障发生率高于白内障模型组大鼠.半乳糖球后注射15d后每组随机选取10眼进行紫外分光光度计法检测,HLP-白内障组还原性谷胱甘肽含量低于白内障模型组,丙二醛含量高于白内障模型组.结论 HLP一定程度上促进了半乳糖性白内障的发病,其机制有可能为参与晶状体氧化应激反应.
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寿尔智含药血清对D-半乳糖所致AD模型大鼠神经递质受体通道电流的影响
1材料与方法1.1动物 非洲爪蟾(2～3岁),成年3月龄Wistar 大白鼠,购于湖北省医学科学院实验动物中心.1.2造膜方法 采用亚急性衰老模型造模方法,以D-半乳糖(D-gal)眼球后注射0.12mg.g-1(BW)日1次,连续42d[1].对照组以等体积生理盐水代替.全部实验动物喂养条件均相同.行为测验参考文献资料[2-3]采取一次性避暗回避试验和跳台试验.1.3试剂 改良Barth's液配方(mmol/L):NaCl成88;KCL 1;MgSO4 0.82;Ca(NO3)2 0.33;CaCL2 0.41;NaHCO3 2.4和HEPES 10,pH 7.5.任氏液配方(mmol/L)为:NaCl 115,KCl 1,CaCL2 1.8,HEPES 5,pH 7.3.总RNA及mRNA提取试剂盒为Promega产品,由武汉试剂公司提供.
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国内外吲哚青绿排泄试验的理论基础与使用现状
术前评价肝脏储备功能的试验,除Child分级外,还有半乳糖清除试验、利多卡因试验、咖啡因清除试验、氨基比林呼吸试验、吲哚青绿排泄试验[1]等,相比较而言,吲哚青绿排泄试验方法较为简单,试验耗时短,临床容易开展.下面就有关吲哚青绿排泄试验介绍如下.
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柱前衍生化反相高效液相色谱法定量测定重组人促卵泡激素中的单糖
目的:建立柱前衍生化反相高效液相色谱法定量测定重组人促卵泡激素(rhFSH)中的单糖.方法:采用20%TFA水解rhFBH,释放单糖,用邻氨基苯甲酸衍生化,采用反相高效液相色谱法测定.色谱柱为Jupiter C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相A为含0.15%正丁胺、0.25%磷酸、0.5%四氢呋喃的水溶液,流动相B为流动相A与乙腈比例为1∶1的溶液,梯度洗脱,流速0.85 mL·min-1;柱温30℃;荧光检测器:激发波长为230 nm,发射波长为425 nm.结果:葡萄糖胺、半乳糖、甘露糖、岩藻糖进样量分别在0.39～3.94 nmol(r=0.9994),0.29～5.85 nmol(r=0.9998),0.24～4.90 nmol(r=0.9998),0.05～1.03nmol(r=0.9996)范围内与峰面积呈良好的线性关系.平均加样回收率(n=9)分别为104.1%,104.2%,104.2%,98.0%;RSD分别为9.3%,1.8%,0.61%,6.0%.结论:该方法灵敏,专属性强,重复性好,可定量测定重组人促卵泡激素中的单糖.
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复方南板蓝根颗粒中多糖的含量测定及单糖组成分析
目的:测定复方南板蓝根颗粒中多糖的含量及其单糖组成.方法:采用硫酸-苯酚法测定多糖含量;测定条件:5％苯酚溶液1 mL,硫酸5 mL,检测波长490 nm.设计正交试验对该制剂中多糖全降解条件进行优化;以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为衍生试剂,采用毛细管区带电泳法,分析其单糖组成;电泳条件:未涂层弹性石英毛细管柱(52 cm×50 μm,有效长度43 cm),运行缓冲液40 mmol· L-1硼砂缓冲液(pH 10.1),检测波长245 nm,运行电压12 kV,进样量8cm×10s.结果:测得该制剂中多糖含量为1.708％～1.828％;多糖全降解的优条件为硫酸浓度0.75 mol·L-1,温度100℃,时间5h;其单糖组成为木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸.对所建立的毛细管区带电泳法进行方法学验证,结果显示其精密度RSD≤3.8％,重复性RSD≤5.5％,并且稳定性满足要求,回收率结果显示:半乳糖和半乳糖醛酸的平均回收率分别为99.7％～106.9％和94.8％～102.5％,其RSD分别为2.4％～4.9％和1.7％～4.6％.结论:本文为复方南板蓝根颗粒中多糖的测定及其质量标准的完善提供参考.
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HPLC法建立人参糖肽注射液特征图谱的研究
目的:建立人参糖肽注射液特征图谱.方法:通过对人参糖肽注射液中多糖1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化,采用高效液相色谱法进行组成糖分析.结果:人参糖肽注射液特定特征图谱由6个共有峰组成,为甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖.结论:高效液相色谱法建立多糖的特征图谱,操作方法简便,分离度高,重复性及稳定性良好,该结果可有效控制人参糖肽注射液的内在质量,同时可作为酸性杂多糖组成糖的测定方法.
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薄层色谱法分析不同虫草多糖的单糖组成
目的:比较不同种类及产地虫草多糖的单糖组成与比例.方法:采用纤维素薄层板,以乙酸乙酯-吡啶-醋酸-水(7.0∶3.0∶0.2∶1.4)为展开剂分离多糖水解后的单糖组分,苯胺-邻苯二甲酸显色后采用薄层扫描仪于410 nm波长下扫描定量.结果:6个单糖(半乳糖、葡萄糖、甘露糖、木糖、核糖和鼠李糖)线性关系良好(r＞0.995 7),检测限、定量限分别为0.02～0.10 μg和0.08～0.40 μg,方法具有良好的精密度、重复性和稳定性,RSD分别为3.1％～8.4％、2.3％～6.3％和0.66％～2.4％;平均回收率在94.0％和103.8％之间.不同种类虫草多糖均主要由半乳糖、葡萄糖和甘露糖组成,其中多数天然虫草及人工培养蛹虫草子实体样品中葡萄糖含量相对较高,葡萄糖与半乳糖含量的平均比值分别为5.2∶1和1.9∶1,葡萄糖与甘露糖含量的平均比值分别为16.9∶1和5.9∶1;不同人工发酵虫草菌粉样品中葡萄糖与半乳糖含量的平均比值为0.96∶1,葡萄糖与甘露糖含量的平均比值为2.0∶1;而古尼虫草、凉山虫草、亚香棒虫草、细虫草及蝉花样品中葡萄糖平均含量较低,葡萄糖与半乳糖含量的平均比值为0.31∶1,葡萄糖与甘露糖含量的平均比值为0.81∶1.结论:不同种类虫草多糖其单糖比例存在一定差异,此特征有利于对不同种类虫草质量的控制.
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卵巢早衰动物模型建立的研究进展
卵巢旱衰是由多种病因所致的卵巢功能衰竭,病理生理表现较复杂,根据病因可通过多种方式建立动物模型,如卵巢抗原免疫造模法、透明带免疫造模法、初生小鼠胸腺切除造模法、基因敲除造模法、半乳糖代谢造模法等.本文对卵巢早衰动物模型的多种造模法及其原理进行了文献综述.相对而言,半乳糖代谢造模法简单可靠,可以作为一种新的实验性模型,为解决卵巢早衰患者生育问题提供研究之手段.
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黄芪总甙延缓衰老的作用及其机制
目的:研究黄芪总甙(astragalosides,AST)延缓衰老的作用及其机制.方法:采用小鼠D-半乳糖(D-galactose,D-aal)人工衰老模型和自然衰老模型(17月龄),以小鼠协调运动、学习记忆、以及免疫功能作为指标,同步观察药物的作用.结果:AST(40mg@kg-1@d-1,ig,10周)可明显恢复D-gal衰老小鼠的协调运动和学习记忆功能,使其过低的ConA诱导脾淋巴细胞增殖反应及IL-2产生明显升高,但对LPS诱导B淋巴细胞增殖反应无明显影响.AST(40mg@kg-1@d-1,ig,3个月)对17月龄小鼠亦有类似作用.结论:AST对D-gal衰老小鼠和由中年期(14月龄)进入老前期(17月龄)小鼠的自然衰老进程均有明显的延缓作用,可能与其免疫调节作用有关.
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葛根素D-半乳糖诱导的小鼠记忆障碍的影响
目的:探讨葛根素对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆的影响及其作用机制.方法:用开场行为和Y-迷宫分别检测腹腔注射葛根素后D-半乳糖衰老模型小鼠自发活动和学习记忆行为的变化,然后用紫外分光光度计和荧光分光光度计分别检测衰老小鼠脑组织SOD、MDA以及脂褐素等生化指标.结果:葛根素60mg/kg可显著增加D-半乳糖致衰老小鼠在新异环境中的自发活动和探究行为,显著提高其学习记忆能力(记忆保持率从69%±9%提高到79%±6%);葛根素60mg/kg和30mg/kg均可以显著提高脑组织SOD的活性,从(12.1±2.9)提高到(14.9±2.1)和(15.5±2.7)U/g脑湿重,并使衰老小鼠脑内脂褐素含量明显下降,从(27±5)降到(20±4)和(20±4)μg/g脑湿重.结论:葛根素对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆减退有改善作用,这可能与其提高衰老小鼠脑组织抗氧化能力有关.
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SSF改善衰老小鼠记忆缺陷和神经、免疫系统的病理改变
目的:研究黄芩中有效成份SSF对衰老小鼠记忆障碍和神经、免疫系统病理改变的作用.方法:采用水迷宫行为实验法,检测SSF对衰老小鼠学习、记忆障碍的作用;大脑皮层光镜检测SSF对衰老小鼠神经病理改变的作用;胸腺和脾指数评价SSF对衰老小鼠免疫系统的作用;脑复康作对照药.结果:与盐水对照组相比,D-半乳糖(120 mg/kg,ip,47 d)使小鼠到达终点平台潜伏期和进入盲端的次数显著增加,大脑皮层细胞明显病理改变,脾指数减小.SSF(50,100和200 mg/kg,ig,47 d)和脑复康(200mg/kg,ig,47 d)均可改善D-半乳糖引起小鼠记忆障碍和神经、免疫系统异常改变.结论:SSF能改善D-半乳糖引起小鼠学习记忆障碍和神经、免疫系统的病理改变.
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hUCMSCs对D-半乳糖致衰老小鼠心脏保护作用
目的 探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)对D-半乳糖(D-gal)诱导的衰老小鼠的心脏保护作用及其可能的机制.方法 将24只8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组 、模型组和干细胞组,每组8只.对照组颈背部皮下注射灭菌注射用水(5 mL·kg-1·d-1)8周,模型组和干细胞组颈背部皮下注射D-gal(150 mg·kg-1·d-1)8周,至D-gal注射第5周和第7周时,干细胞组分别尾静脉注射1×106个hUCMSCs,对照组和模型组尾静脉注射1×PBS(每只0.2 mL).采用苏木精-伊红染色观察心肌组织病理改变,Western Blot检测热休克蛋白70(HSP70)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平,RT-PCR检测炎症小体相关基因NOD样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素1β(IL-1β)mRNA的表达.结果 病理学检查显示,模型组出现心肌组织退行性改变,而对照组和干细胞组无相应改变.模型组心肌组织HSP70和VEGF蛋白表达较对照组显著下降,干细胞组HSP70和VEGF蛋白表达较模型组显著升高(F=9.76、43.87,P<0.05).模型组心肌组织中炎症小体相关基因NLRP3、IL-18、IL-1βmRNA表达较对照组显著增加,干细胞组心肌组织中炎症小体相关基因表达较模型组显著下降(F=30.04~44.45,P<0.05).结论 hUCMSCs能有效缓解D-gal诱导的心脏老化,其机制可能与促进血管新生和抑制NLRP3炎症小体通路有关.
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外源性雌激素对大鼠认知障碍的治疗作用
①目的了解补充外源性雌激素对大鼠认知障碍的治疗作用.②方法健康雌性Wistar大鼠16只,随机分为4组,每组4只.认知障碍模型组(模型组):应用鹅膏蕈氨酸(IBA)一次性微量(1μL)注入大鼠Mey-nert核,同时应用D-半乳糖(48mg/kg)皮下注射.认知障碍治疗组(治疗组):按模型组方法制作认知障碍模型,在应用IBA后7d应用苯甲酸雌二醇(1mg/kg)和黄体酮(10 mg/kg)治疗,每7d皮下注射1次,共150d.假手术组:按模型组方法制备模型,用人工脑脊液替代IBA,生理盐水替代D-半乳糖.正常对照组:不应用任何药物.用MG2迷宫观察各组大鼠学习记忆成绩,苏木精-伊红染色观察大鼠脑组织形态变化.③结果应用IBA和D-半乳糖150d后.模型组大鼠学习记忆能力较其他组明显低下(F=8.392,P＜0.01),其电击次数(25.50±12.39)明显高于治疗组(3.80士3.83)、假手术组(5.50±7.55)和对照组(2.25±4.50)(q=5.261～6.116,P均＜0.05);而治疗组与假手术组和对照组比较差异无显著性(q=0.429,0.471,P均＞0.05).光镜下模型组海马皮质单个视野中锥体细胞计数(3.25±2.60)明显少于治疗组(15.00±6.35)和对照组(17.85±11.19)(t=3.513,2.544,P均＜0.05);而治疗组与假手术组(14.20±12.78)和对照组比较差异无显著性(t=0.120,0.450,P均＞0.05).模型组大鼠海马AlzheimerⅡ型细胞增多.④结论雌激素补充治疗能有效防治大鼠认知功能障碍.
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奶粉宝宝,小心乳糖不耐受
乳糖是存在于牛奶和其他奶制品中的主要糖类,宝宝乳糖不耐受是指宝宝体内无法产生足够的消化乳糖所需的乳糖酶.因无法把乳糖分解成葡萄糖及半乳糖,以致肠内堆积大量短键脂肪酸及氢气,因而造成胃肠问题.对于小宝宝来说,人体乳糖酵素是在断奶期才逐渐下降;因此,婴幼儿喝牛奶多半不会腹泻.但也有一些宝宝是先天性乳糖酵素缺乏.
