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供体特异性输血与嵌合体发生及肾移植急性排斥反应的关系
目的:研究供体特异性输血(DST)患者末梢血中嵌合体的发生及其与肾移植急性排斥反应的关系.方法:肾移植患者60例,分为:A组,未行DST的尸体肾移植35例(2 or 3 HLA-mismatched);B组,未行DST的活体肾移植3例,HLA配型各位点无错配;C组,术前行DST的活体肾移植22例(1 or 2 HLA-mismatched),利用PCR-SSP法检测患者末梢血中的HLA-DRB1基因.结果:A组12例(34.3%)、B组3例(100%)、C组19例(86.3%)发现了供体的HLA-DRB1基因,证实有嵌合体发生.在34例有嵌合体发生的病例中14例(41.2%)、26例无嵌合体存在的病例中有10例(38.5%)发生过急性排斥反应,但两组间比较差异无显著性(P＞0.05),同时排斥反应发生的频率、次数比较差异也无显著性(P＞0.05).另外,C组病例中嵌合体现象消失,PCR-SSP检测转为阴性时未见排斥反应病例发生.结论:DST有利于促进嵌合体的形成,嵌合体现象与急性排斥反应间无相关性,不能以嵌合体现象的有无作为诊断急性排斥反应的依据.
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023 供体骨髓输注在肾脏移植耐受中的疗效和机制
同种移植免疫耐受的诱导和维持是控制移植后排斥反应,提高移植物存活的关键.动物实验及临床资料表明:骨髓输注具有诱导免疫耐受的作用,其机制包括诱导T细胞无能,克隆清除,提供可溶性HLA抗原、抑制细胞及否决细胞,调节细胞表面分子及细胞因子,促进嵌合体的形成.因此,供体骨髓输注在诱导移植免疫耐受中具有相当的应用前景.
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先天性嵌合体的形成与临床
嵌合体是指同一个体中同时存在两个或多个不同细胞系的现象,在人类中比较罕见,一般是由于观察到血型或者性染色体异常才发现此种现象.目前,已陆续发现了多种类型的嵌合体,对其临床与实验室的研究取得了初步进展,但对于嵌合体的认识,特别是对其形成机制了解得尚不充分.该文中,回顾了以往文献对先天性嵌合体案例的报道及相关研究,并在其基础上总结了嵌合体的类型、形成机制、检测方法及诊断策略,以期进一步促进嵌合体的相关研究.
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简并寡核苷酸引物PCR在荧光原位杂交检测染色体微缺失综合征中的应用
目的 优化荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)所需探针的制备工作,应用FISH检测染色体7q1 1.2、15q11.2以及22q1 1.2缺失.方法 采用简并寡核苷酸引物聚合酶链式反应(degenerate oligonucleotide primed PCR,DOP-PCR)的方法,扩增人工细菌染色体(bacterial artificial chromosome,BAC) DNA,通过切口平移对扩增的DNA进行间接标记,使用制备好的探针检测染色体微缺失.结果 DOP-PCR方法得到的BAC-DNA扩增产物,经标记后用于FISH,可以观察到清晰且背景低的信号;FISH结果确认了1例染色体7q11.2微缺失嵌合体、1例染色体15q11.2缺失.结论 经过优化的实验方法能够快速制备探针,节约抽提BAC-DNA所需的时间,可以应用于FISH以检测微缺失综合征.
关键词： 简并寡核苷酸引物聚合酶链反应 荧光原位杂交 微缺失综合征 嵌合体 -
登革热疫苗的前景
本文介绍了登革热的流行病学、发病机理以及登革热疫苗的研制状况和未来发展方向.
关键词： 登革出血热/登革热休克综合征 登革热疫苗 嵌合体 -
显微注射技术的改进和用灵长类间充质干细胞制备嵌合体小鼠
显微注射法制备嵌合体动物,早在Gardner[1,2]1968年报道,他们将小鼠胚胎泡内细胞群细胞注射入另一种毛色基因不同的小鼠胚泡中,获得毛色混杂的嵌合鼠.随后,显微注射法逐步发展起来,上世纪90年代起,主要通过转入外源基因的小鼠ES细胞(embryonic stem cell)显微注射,制备嵌合体,进而获得转基因小鼠.但对成体干细胞在异种动物内的嵌合报道不多.Harder[3,4]等将人脐带血来源的造血干细胞注射到小鼠胚泡中,发现在成年小鼠造血系统中有人的细胞嵌合.我们改进了显微注射技术,并通过该技术探讨了灵长类动物骨髓来源间充质干细胞的嵌合体构建,建立了干细胞在体内分化技术平台.
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髓腔内骨髓移植诱导异基因小鼠皮肤移植耐受的研究
探讨髓腔内骨髓移植(IBM-BMT)对异基因小鼠皮肤移植耐受的诱导效果.受鼠为雌性C57BL/6(H-2b,B6)小鼠,于第0天接受60Co γ射线全身照射(TBI),4 h内输注雄性BALB/c(H-2d)小鼠来源的骨髓细胞(BMC),2 d后腹腔注射环磷酰胺(CTX).通过皮肤移植、混合淋巴细胞反应(MLR)检测耐受状态,并通过骨髓染色体分析了解BMC的植入程度.结果显示,接受IBM-BMT的B6小鼠对BALB/c小鼠的皮肤移植物平均存活时间(MST)超过300 d,显著长于其余两组(P＜0.001);MLR结果证明,实验组B6小鼠获得供体特异性耐受,在耐受小鼠骨髓中可检测到一定比例的Y染色体存在.以上表明髓腔内骨髓移植可以保证异基因骨髓细胞的植入并形成混合嵌合状态,从而有效地诱导免疫耐受.
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抗TCRαβ单抗联合供体骨髓细胞输注诱导小鼠皮肤移植耐受的研究
探讨抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注方法对同种异基因小鼠皮肤移植耐受诱导的促进作用.第0天,C57BL/6(H-2b, B6)小鼠尾静脉注入2×108 BALB/c(H-2d, B/c)来源的骨髓细胞,同时腹腔注射抗TCRαβ单克隆抗体500 μg;第6天进行皮肤移植;在不同的时间对B6小鼠进行迟发型超敏反应(DTH)、混合淋巴细胞反应(MLR)等耐受状态进行检测,并进行MLR的IL-2逆转实验、过继转移实验和嵌合状态分析以初步探讨耐受形成机制.结果显示,经抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注处理的B6小鼠的供体皮肤移植物平均存活50.4 d,显著长于其他各组(P<0.001).相对于正常对照组小鼠,耐受B6小鼠在DTH和MLR中均表现出显著的低反应性(P<0.001).IL-2逆转实验结果表明克隆无能参与了移植耐受的形成.体内、外过继转移实验均显示耐受B6小鼠脾细胞中存在抑制细胞活性.嵌合体检查结果表明在耐受B6小鼠的胸腺和脾脏中均形成了混合嵌合体,在皮肤移植后第15、30和70天时脾脏内供体来源嵌合体水平依次为15.86%,10.57%和1.77%,胸腺中依次为 8.19%,5.72%和1.87%,嵌合体水平随时间而下降.这些表明,抗TCRαβ单抗联合大剂量供体骨髓细胞输注可以在异基因成年小鼠间成功地诱导出皮肤移植物的长期耐受.多种耐受机制,包括克隆无能、抑制细胞、嵌合体的形成及维持等都参与了耐受的形成.
关键词： 移植耐受 嵌合体 骨髓细胞 抗TCRαβ单克隆抗体 -
异基因嵌合体与移植耐受关系的研究Ⅱ.成年小鼠联体共生诱导耐受的机制
将BALB/c(H-2d)小鼠及C57BL/6(H-2b,B6)小鼠的脾细胞分别经尾静脉注射给对方,2d后再分别腹腔注射环磷酰胺(CY)150mg/kg,CY注射后1d对BALB/c及B6小鼠进行联体(parabiosis),1周后分开并进行相互间的植皮.发现BALB/c小鼠对B6小鼠的皮肤耐受期明显延长(MST=25.7d),但是B6对BALB/c小鼠的皮肤耐受期无明显延长(MST=11.9d).利用流式细胞仪分析技术(FACS)分别对上述处理的BALB/c及B6小鼠在联体分开后的第1天和第30天进行胸腺及脾脏嵌合程度的检查,发现皮肤耐受期与嵌合程度不呈正相关.对联体后耐受的BALB/c小鼠进行体内和体外细胞转移实验,均未显示耐受小鼠脾细胞中存在抑制细胞活性.在耐受BALB/c→B6小鼠的单向混合淋巴细胞反应(MLR)体系中加入外源IL-2可以部分反转耐受BALB/c小鼠脾细胞的增殖反应,表明本实验诱导耐受的机制可能与克隆不应答(clonalanergy)有关.
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血细胞嵌合体与移植耐受
新概念的提出和新技术的应用是促进科学发展的主要推动力。1943年Medawar阐明了器官移植排斥的免疫机制，开辟了临床器官移植的新领域；近半个世纪以来，由于组织配型以及强力免疫抑制药物的发明和应用，器官移植已成为临床治疗各种终末器官功能衰竭的主要方法。
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供体脾细胞输注维持异种移植耐受的研究
目前,异种移植是领域的热点,但要在临床开展它,必先克服异种间强烈排斥反应[1],免疫抑制剂使排斥反应大大减弱,但存在并发症,需诱导一种持久稳定无需药物的造血干细胞嵌合体维持异种抗原特异耐受来解决排斥反应.
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复杂性嵌合体Klinefelter综合征合并代谢综合征一例
报道一例染色体类型为46,XY/47,XXY/48,XXXY嵌合体同时合并代谢综合征的Klinefelter综合征患者.
关键词： Klinefelter综合征 代谢综合征 嵌合体 -
英夫利西治疗克罗恩病的推荐方案
克罗恩病(CD)的传统治疗在疗效及不良反应方面存在不少问题.英夫利西(infliximab)商品名类克(Remicade),是一种抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)人鼠嵌合体IgG1单克隆抗体,通过拮抗CD免疫炎性反应发病通路中起关键作用的前炎性反应因子TNF-α而起治疗作用.英夫利西是经美国食品药品管理局(FDA)批准正式用于CD治疗的首个新型.生物制剂,至今在世界各地已应用近10年,我国国家食品药品监督管理局(SFDA)于2007年正式批准该药在我国上市.
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45,X/46,XY染色体嵌合体2例临床特点分析
外周血染色体核型异常和Y染色体AZF基因缺失是引起男性不育的重要原因,患者多表现为无精子症、少精子症及性分化异常等[1].染色体异常中45, X/46, XY嵌合体属性染色体发育异常,在不孕不育患者中有较高的发生率.45, X/46, XY嵌合体表现特征复杂,对患者性别、性腺发育及生育方面存在较大的影响,因此,对于45, X/46, XY嵌合体临床表型及细胞遗传学分析有助于诊断病因,并为后期治疗提供合理的指导方案.
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探讨青少年克氏综合症生育力保存的可行性
在无精症患者中克氏综合症是常见的染色体异常，而睾丸活检取精成功率随年龄增加或睾酮治疗后而下降。因此，在青少年克氏综合症患者青春期刚启动或睾酮治疗前是否能够增加睾丸活检取精成功率？作者回顾性分析8例15~17岁的克氏综合症患者（47, XXY），其中有一例为嵌合体47, XXY/46, XY。这些患者首先进行精液分析，如果为无精子，则至少间隔3个月复查1~2次精液分析，如果仍为无精子则考虑双侧睾丸活检及睾丸组织冷冻保存，并且在睾丸活检之前心理学医师将与患者确认进行生育力保存。结果只有1例嵌合体在精液中发现少量精子并进行4次精液冷冻保存，另外7例均为无精子，其中有5例同意进行睾丸活检，2例拒绝。在5例进行睾丸开放活检患者中，有1例发现有精子，另有1例发现有长形精子细胞和Ⅰ型精母细胞，均进行冷冻保存。后作者认为在青少年克氏综合症患者的精液或睾丸组织中也是可以获得精子的。并且睾丸组织中可能含有精原细胞、不完全分化的生精细胞和精子细胞。然而在进行睾丸活检前可能需要花费几个月的时间与患者及其父母进行沟通。此外，考虑在青春期刚启动后进行生育力保存的原因一方面是因为可以获取精液进行检查，另一方面患者已成熟可以考虑生育力保存以便孕育后代或面对睾丸活检失败的现实。
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环磷酰胺联合照射后半相合淋巴细胞对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用
目的:观察不同剂量环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)预处理联合5 Gy60Co照射的半相合淋巴细胞输注(haploidentical lymphocyte infusion,HLI)对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用.方法:以皮下接种Hepa1-6肝癌细胞的BABL/c×C57BL杂交F1代雌性小鼠(表型为H_2h/d)为受鼠,以BALB/c×C3H杂交F1代雌性小鼠(表型为H_2d/k)为MHC半相合的供者,分PBS组、CTX 80 mg/kg+5 Gy照射HLI组、CTX 200 mg/kg+5 Gy照射HLI组、CTX 300 mg/kg+5 Gy照射HLI组、5Gy照射HLI组,每组5只小鼠；观察各组小鼠瘤块生长和大小,检测受鼠体内的嵌合状态及移植物抗宿主病(graft-versus host disease,GVHD)的发病情况.结果:80、200 mg CTX联合HLI组小鼠瘤体积小于PBS组[(1.25±0.24)、(1.38±0.31)vs(2.03±0.24) cm3,P＜0.01],小鼠生存时间显著长于PBS组[48 d(39 d,55 d)、40 d(35 d,48 d) vs35 d(18 d,39 d),P＜0.05]；80mg CTX联合HLI组的抑瘤作用强于单纯HLI组[(1.25±0.24)vs (1.76±0.40) cm3,P ＜0.05]；300 mg CTX联合HLI组和单纯HLI组无明显抑瘤作用.各治疗组小鼠均未出现GVHD.80、200 mg CTX联合HLI组小鼠嵌合度低于300 mg CTX联合HLI组,且消失时间明显早于后者.结论:低剂量CTX联合输注经照射的半相合供者淋巴细胞可获得较好的抗小鼠肝癌移植瘤的作用,CTX剂量增加后抗肿瘤作用并未增强.
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Klinefelter综合征(47,XXY)1例报告
Klinefelter综合征,又称曲细精管发育不全症,是男性性腺机能减退常见的原因和男性不育症常见的遗传学病因之一.典型的Klinefelter综合征核型为47, XXY,存在一个额外的X染色体,有些核型为XXXY、XXXXY、XXYY或为XXYY染色体嵌合体等被认为是这一综合征的变异形式.我科收治47, XXY 1例,现报告如下.
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延长溶栓药物半衰期的策略研究
血栓性疾病是近年来人类健康的头号杀手,其临床治疗一直备受关注.以溶栓药物为基础的溶栓疗法虽可以有效治疗血栓性疾病,但存在药物半衰期短和给药频繁等问题.延长药物半衰期对将来溶栓药物的发展尤为重要.本文系统分析现有溶栓药物半衰期的影响因素和相应的解决策略,为将来的药物改造提供一定的理论指导.
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小剂量FK506作用下同种脾组织移植诱导大鼠原位肝移植术后免疫耐受的机制
目的:观察小剂量FK506作用下同种脾组织移植对大鼠肝移植术后免疫耐受的影响,探讨其可能的机制.方法:实验分5组(每组大鼠8只),同种肝移植组(A组)以纯系雄性Lewis大鼠为供体、雌性BN大鼠为受体进行同种原位肝移植;同种肝移植+小剂量FK506治疗组(B组)于肝移植术后口服途径给予小剂量FK506(0.25 mg/kg);同种肝脾联合移植组(C组)于肝移植同时移植供体脾脏;同种肝脾联合移植+小剂量FK506治疗组(D组)于肝脾联合移植后口服途径给予小剂量FK506;异体脾组织移植组(E组)于同种原位肝移植同时移植第三品系大鼠脾脏组织,术后进行小剂量FK506治疗.观察各组的存活期,并分析受体脾脏T淋巴细胞对同种抗原的反应性、嵌合体的形成情况以及肝脏病理变化.结果:与其他各组相比,C组大鼠的存活期明显延长;其受体T细胞同种抗原反应性明显降低;受体脾脏中供体阳性细胞明显升高(P＜0.01),且在60 d后受体脾脏中供体阳性细胞仍然较高;肝脏病理分析也未见明显排斥反应.结论:小剂量FK506作用下同种脾脏移植能明显诱导受体大鼠原位肝移植术后嵌合体的形成,降低受体T细胞对同种抗原的反应性,促进免疫耐受.
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条件培养液改进小鼠胚胎干细胞嵌合体制备效率的观察
目的:探讨如何通过改善小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)的培养条件来维持其未分化状态,提高嵌合体的制备效率.方法:以普通ES细胞培养液为对照,以TX-WES培养液为ES细胞条件培养液分别对15代以上的未工程化ES细胞和糖皮质激素受体(GR)工程化ES细胞进行培养并筛选,通过囊胚注射制作嵌合体来比较2种不同培养液培养ES细胞后嵌合体制备效率的差别.结果:未工程化ES细胞以普通培养液培养其嵌合率为25.0%,以TX WES培养液培养其嵌合率提高到53.8%(P＜ 0.05);GR工程化ES细胞以普通培养液培养其嵌合率为15.0%,以TX-WES培养液培养其嵌合率提高到52.3%(P＜0.05).结论:应用TX-WES培养液改善小鼠ES细胞的培养条件可提高嵌合体的制备效率,该方法为基因剔除小鼠研究的顺利开展奠定了良好的基础.
